专利名称：一种食源性乳酸菌及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于微生物领域，具体地说，是关于一种食源性乳酸菌及其应用。
背景技术：
乳酸菌(Lactic acid bacteria, LAB)是指一类能够通过同型发酵或异型发酵而产生乳酸的细菌，一般呈革兰氏阳性，厌氧，无芽孢，耐酸。并不是严格意义上系统分类中的一科或一属，目前已发现的这一类菌在细菌分类学上至少包括8个属，如乳酸杆菌属、 双歧杆菌属、链球菌属、明串珠球菌属、肠球菌属、乳球菌属、肉食杆菌属、奇异菌属、片球菌属、气球菌属、漫游球菌属、李斯特氏菌属、芽孢乳杆菌属、芽孢杆菌属中的少数种、环丝茵属、丹毒丝菌属、孪生菌属和糖球菌属等。绝大多数为厌氧或兼性厌氧的化能异养菌，生长繁殖于厌氧或微耗氧、矿物质和有机营养物丰富的酸性环境中。在动物的消化道中含量较高，大约占正常菌群10%，是人和动物正常微生物群的组成部分，通常作为安全的益生菌剂添加到食物及动物饲料中，且乳酸菌的生态与正常微生物群的生态密切相关。近年来乳酸菌的特殊生理活性和营养功能，正日益引起人们的重视。乳酸菌能赋予食品柔和的酸味和香气，改善食品的品质和营养，具有抗菌、降低胆固醇、维持微生态环境、抗肿瘤、抗变异原和增强免疫力等重要生物学功能，在食品中被广泛应用。乳酸菌发酵的食品被公认为是功能性食品。乳酸菌被认为是最适合的食品天然防腐剂，其表现出来的抗菌活性也可防止微生物污染，其可产生一些天然的抗菌剂，包括有机酸(乳酸、乙酸、甲酸、苯乳酸、己酸)、二氧化碳、过氧化氢、双乙酰、乙醇和细菌素等。
发明内容
本申请的发明人在对臭豆腐卤液中的微生物多样性的研究过程中，分离得到了一种食源性乳酸菌，经鉴定为一种新的乳酸菌。因此，本发明的首要目的在于提供一种新的食源性乳酸菌。本发明的第二个目的在于提供所述食源性乳酸菌的应用。本发明的食源性乳酸菌的16S rRNA序列如SEQ NO 1所示。根据本发明的一个优选实施例，所述乳酸菌的保藏号为CCTCC NO :M2011381o根据本发明的一个优选实施例，所述乳酸菌可用于食品防腐。本发明不仅提供了一种新的食源性乳酸菌，而且该乳酸菌具有抑菌作用，因此可添加到食品中用作食品防腐剂。
图1为本发明获得的食源性乳酸菌的透射电镜图。图2为本发明获得的食源性乳酸菌与其他乳酸菌基于16S rRNA的进化树。
具体实施方式
以下通过具体实施例，对本发明做进一步详细说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。本发明所用的菌种为乳酸菌Lactobacillus radiumii S1L19，在2011年9月29 日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏号为CCTCC NO =M 2011381。以下实施例中所使用的MRS培养基的配方为胰酪胨1%，牛肉膏粉0.5%，酵母粉
0.4%,葡萄糖2%，乙酸钠0. 5 %，柠檬酸三胺0.2%，吐温800. 1 %，磷酸氢二钾0.2%，硫酸镁 0.02%，硫酸锰 0.005，pH 6.0。实施例1、食源性乳酸菌的分离和鉴定1.1、生长条件本申请的发明人在研究臭豆腐卤液微生物多样性时，分离得到一株食源性菌株， 对其生长条件进行测定，结果显示其在de Man-Rogosa-Sharpe (MRS)培养基上生长良好，生长温度范围为15 45°C，最适生长温度为30°C，生长pH范围为4. 0 8. 5。1.2、菌株形态观察1. 1中获得的菌株的形态，在30°C的条件下，于MRS培养基上培养4 后对该菌株进行透射电镜观察(放大倍数为10000)，结果如图1所示，细胞大小为(1.2
1.3) X (0. 6 0. 8) μ m,生长方式为单个、成对或者成串生长。1.3、碳源利用使用API 50CHL系统(BioM6rieuX，法国)对1. 1中获得的菌株的碳源利用情况进行测定，具体操作方法按照使用说明书。结果显示该菌株能够利用如下碳源L_阿拉伯糖，D-核糖，D-半乳糖，D-葡萄糖， D-果糖，D-麦芽糖，D-密二糖，D-蔗糖，D-松三糖，D-棉子糖，D-松二糖，甲基-α -D-吡喃葡萄糖苷，D-甘露糖(微弱利用)，D-乳糖(微弱利用)，葡萄糖酸(微弱利用)。该菌株不能利用如下碳源甘油，赤藻糖醇，D-阿拉伯糖，L-木糖，D-侧金盏花醇，甲基-β-D-吡喃木糖苷，L-山梨糖，L-鼠李糖，卫茅醇，肌醇，D-甘露醇，D-山梨醇，甲基-β -D-吡喃甘露糖醇，N-乙酰葡糖胺，熊果苷，水杨苷，D-纤维二糖，D-海藻糖，菊粉，糖原，木糖醇，苦杏仁苷，β -龙胆二糖，D-来苏糖，D-塔格糖，D-岩藻糖，L-岩藻糖，D-阿拉伯糖醇，L-阿拉伯糖醇，5-酮基葡萄糖酸钾和2-酮基葡萄糖酸钾。1. 4、16S rRNA 测序将1. 1中获得的菌株进行16S rRNA测序，将其序列与相关种属的16SrRNA进行比对，采用邻位相连法(neighbor-joining)绘制进化树，结果如图2所示。其中，本发明的菌株与其他乳酸菌的16S rRNA的同源性分别为L. senioris JCM 17472(96. 5%
L. diolivorans JCM 12183(96. 5 % ), L. parafarraginis JCM 14109(96. 4 % )、 L. hilgardii ATCC 8290(96. 3% ) ,L. rapi DSM 19907(96. 3% ) 因此，本发明获得的菌株与其他乳酸菌有很高的亲缘性，但与已知乳酸菌都不相同。1. 5、产物鉴定以葡萄糖为底物，使用D-/L-乳酸测定试剂盒(R-BiopharmAG，德国)测定1. 1中获得的菌株的降解产物，具体操作方法按照使用说明书。结果显示，其产物中包含D型和L 型乳酸。
综上所述，可鉴定本发明获得的菌株为一株新的乳酸菌，将其命名为 Lactobacillus radiumii S1L19，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO =M 2011381。实施例2、食源性乳酸菌的生物活性2. 1、发酵挑取食源性乳酸菌Lactobacillus radiumii CCTCC NO :M 2011381 单菌落，接种至3ml de Man-Rogosa-Sharpe (MRS)培养基，在30°C，200rpm的条件下，摇床培养22小时。将发酵液于4°C，12000rpm离心10分钟，取上清液，用无菌0. 22 μ m滤器过滤除菌，放置于-20°C冰箱中待用。2. 2、生物活性测定本发明的食源性乳酸菌Lactobacillusradiumii CCTCC NO :M 2011381 的生物活性测定采用双层琼脂扩散法，具体测定方法如下取甘油管保藏的指示菌金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性菌)和埃希氏大肠杆菌(革兰氏阴性菌)各50 μ 1，接种至:3ml Luria-Bertani (LB)培养基，在37°C，200rpm的条件下， 摇床培养16小时。将无菌蓝色枪头倒置，然后均勻地放置在凝固的1.5%的琼脂上。取 20ml融化并冷却至约55°C的LB培养基，加入50 μ 1过夜培养的金黄色葡萄球菌或埃希氏大肠杆菌的菌液，混勻后加到放置有枪头的1. 5%的琼脂上，待其冷却，拔出枪头。在每个孔中加入200μ1 3. 1 中获得的食源性乳酸菌Lactobacillus radiumii CCTCC NO :M 2011381 发酵液，于37°C培养10小时后观察结果。结果显示，本发明的食源性乳酸菌Lactobacillusradiumii CCTCC NO :M2011381 的发酵液能够抑制金黄色葡萄球菌和埃希氏大肠杆菌的生长，对两种指示菌都能产生 2.0 2. 5厘米的抑菌圈。本发明的食源性乳酸菌Lactobacillusradiumii CCTCC NO :M 2011381 对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有良好的抑菌效果，而且该乳酸菌分离自食品，因此可添加到食品中用作食品防腐剂，这对于本领域的技术人员来说是显而易见的。
权利要求
1.一种食源性乳酸菌，其特征在于，所述乳酸菌的16S rRNA序列如SEQ N0:1所示。
2.如权利要求1所述的乳酸菌，其特征在于，所述乳酸菌的保藏号为CCTCCNO =M 2011381。
3.如权利要求1或2所述的乳酸菌的应用，其特征在于，用于食品防腐。
全文摘要
本发明公开了一种新的食源性乳酸菌菌株Lactobacillus radiumii CCTCC NOM2011381，该乳酸菌对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有良好的抑菌作用，可添加到食品中用作食品防腐剂。
文档编号C12R1/225GK102559561SQ201210044449
公开日2012年7月11日 申请日期2012年2月24日 优先权日2012年2月24日
发明者孙贵朋, 谢静莉, 雷晓, 魏东芝 申请人:华东理工大学