嗜酸乳杆菌制剂及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及嗜酸乳杆菌制剂及其应用，具体设及嗜酸乳杆菌作为主要活性成份制 成微生态制剂，及该微生态制剂在治疗相关疾病中的应用，属于生物药领域。
【背景技术】
[0002] 嗜酸乳杆菌在预防和治疗疾病方面发挥越来越重要的作用，但目前已经上市的含 有嗜酸乳杆菌的产品效果不理想，因此筛选高效嗜酸乳杆菌菌种是目前亟需解决的问题， 尤其筛选到具有显著抗过敏作用的嗜酸乳杆菌菌种。
[0003] 近年来，过敏疾病的发生率呈上升趋势，根据世界卫生组织的数据，目前全球有 22 %的人患过敏性疾病，并且发病率迅猛增长，截止到2015年，全球已有40-50 %的人患有 过敏症，WK)已把过敏性疾病列为21世纪需要重点研究和防治的Ξ大疾病之一。据统计我国 过敏性疾病的发病率高达37.3%，主要影响人群为婴幼儿。
[0004] 寻找有效的过敏防治措施迫在眉睫。目前针对治疗过敏性疾病比较普遍的方法是 使用药物治疗。如组胺括抗剂，可通过堵塞组胺感受器来抑制组胺反应，W及类固醇和抑制 肥大细胞释放发炎物质的药物、气管扩张剂药物等。但是运类药物仅提供暂时的症状缓解， 无法真正改变过敏免疫反应，治标不治本。
[000引然而并不是所有的益生菌株都有抗过敏的作用。Taylor等将将患有过敏性疾病孕 妇的新生儿分成两组，在出生后6个月内，每天服用嗜酸性乳酸杆菌或安慰剂，结果6个月时 两组婴儿的特异性皮炎发病率没有差别，提示该试验使用的嗜酸性乳酸杆菌并不会降低特 异性皮炎发病率（Taylor AL，Dunstan JA，Prescott SL，et al.Probiotic supplementationfor the first 6months of life falls to reduce the risk of atopic dermatitis and increases the risk of allergen sensitization in high- risk children.a randomized controlled trial.J Allergy Clin Inlmunol，2007，119 (1): 184-191.)。一项随机对照研究给予经吸入过敏原诱导哮喘的青少年和成年人服用含 有嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌的奶制品，结果显示哮喘的临床症状、肺功能和炎症的实验室 标记物相对于对照组均没有发生改变（Wheeler JG，aiema SJ，Bogle ML，et al. Immune and clinical impact of Lactobacillus acidophilus on asthma.Ann Allergy Asthma Immunol ,1997,79(3):229-233.)。说明只有某些乳酸菌菌株有抗过敏的免疫作用。本发明 嗜酸乳杆菌微生态制剂防治过敏等疾病疗效显著，并可作为药品、保健品、食品、兽药和饲 料添加剂等应用，社会意义巨大，且未见相关研究报道，特申请此发明专利。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种微生态制剂，该微生态制剂的活性成分为嗜酸乳杆菌 DH213，保藏编号CGMCC No. 11228,该微生态制剂具有预防或治疗机体过敏反应等作用。
[0007] 根据菌株的菌落、菌体形态特征，leSrDNA序列分析及API细菌鉴定系统分析结果 来确认菌株在分类学地位，发现编号DH213的菌株为嗜酸乳杆菌;该株菌在形态学及一般性 质上的特征如下：
[000引 1、菌体或菌落形态
[0009] 菌体形态:菌体在显微镜下呈短杆状，两端为圆形，长1.5-6微米，宽0.6-0.9微米， W单个、成双或短链排列。不运动，无鞭毛，无芽抱，革兰氏染色阳性。
[0010] 菌落形态：固体培养基上菌落形态通常较粗糖，用显微镜观察显示为缠绕或微毛 丝状物，从菌堆中屯、放射出来，深层菌落呈放射或分枝的不规则形状，无色素。
[0011] 2、生理生化特征：
[0012] 最适生长溫度为35-38 °C，20 °C W下不生长，兼性厌氧。菌株的最适生长pH值5.5- 6.0，耐酸性强。不具有致病性，不产毒素。
[0013] 在糖发酵中，苦杏仁巧、纤维二糖、屯叶巧、果糖、半乳糖、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘 露糖、水杨巧、薦糖均能被发酵;不能发酵阿拉伯糖、葡糖酸盐、甘露醇、松Ξ糖、鼠李糖、核 糖、山梨醇、木糖;精氨酸水解不产NH3,发酵葡萄糖不产气，接触酶阴性。
[0014] 本微生态制剂制成固体组合物包含的总活菌数不低于IX 10化FU/g，一般在IX 109C即/gW上，最高可达到1X i〇iic即/g或1X i〇iic即/gW上；制成液体组合物包含的总活 菌数不能低于1 X 10化FU/mL，一般在1 X 10化FU/mLW上，最高可达到1 X l〇iiCFU/mL或1 X l〇iiC即/血W上。
[0015] 本微生态制剂可用于预防或治疗机体过敏反应等多种人体疾病，进一步治疗湿 疹、过敏性鼻炎、异位性皮炎、过敏性哮喘或食物过敏等疾病。
[0016] 本微生态制剂可制成药品组合物、保健品、食品、兽药或饲料添加剂等。
[0017] 本微生态制剂所述嗜酸乳杆菌指活的生物个体。
【具体实施方式】
[0018] 制备例说明：运里通过嗜酸乳杆菌DH213保藏编号CGMCC No. 11228散剂为例进行 具体说明，其他嗜酸乳杆菌菌种制剂的制备方法本领域技术人员通过本实施例很容易掌 握，其他剂型的制备方法本领域技术人员通过本实施很容易掌握，在此不再一一叙述说明。 制备方法并不局限于本发明实施例所述，公知的能够达到制备目的的方法均可W，实施例 的制备说明只是对本发明的说明，并不是对本发明保护范围的限制。
[0019] 制备实施例嗜酸乳杆菌散剂的制备
[0020] 1菌粉的制备和菌种的鉴定
[0021 ]用无菌容器收集自然排出的新鲜粪便5-lOg，迅速放入厌氧罐中，带回实验室进行 菌种分离。取粪便样品1.5g，用15mlPBS缓冲液悬浮混匀，400g离屯、5min收集上清浊液，再加 入适量PBS缓冲液8000g离屯、lOmin，收集上清浊液，即得到供试样品。吸取1ml上浊液加入一 支装有9mlPBS稀释液(含有5%山-半脫氨酸）的试管中满旋混匀，作为10-2稀释液，用同样方 法稀释至1〇-3，分别取粪便原液、1〇-2稀释液、1〇-3稀释液各0.1ml涂布于MRS平板上，置于37 °C恒溫培养箱中培养24小时后，选择培养基上菌落形态较为粗糖的菌落，接种于MRS液体培 养基中，37°C培养24h后，将所得培养液离屯、（12000rpm)分离出菌体后，将菌体冷冻真空干 燥，调制出干燥菌粉，活菌数均为IX 109CFU/gW上。同时对菌株展开生理