一种嗜酸乳杆菌及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一株嗜酸乳杆菌，该菌株命名为嗜酸乳杆菌（Lactobacillus?acidophilus）La-P6，已于2013年10月14日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏管理中心，其保藏编号为CCTCC?NO:M2013474。本发明的嗜酸乳杆菌对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌具有很强的抑制能力，并且能够耐受一定浓度范围内的多种抗生素，可用作养殖动物的饮水添加剂或饲料添加剂。通过在饲料或饮水中添加嗜酸乳杆菌La-P6，能明显提高断奶仔猪的日增重，并且降低了料肉比，促进养殖动物的健康生长。
【专利说明】一种嗜酸乳杆菌及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于微生物筛选应用【技术领域】，具体涉及一种嗜酸乳杆菌及其应用。
【背景技术】
[0002]在养殖【技术领域】中，抗生素的使用能够有效地预防动物疾病，降低动物死亡率，减少肉品污染的风险。但是，其在动物饲料中的滥用造成动物性食品抗生素残留超标，使动物和人体存在对抗生素产生耐药性的风险。因此，抗生素在饲料中的应用就成为一个有争议的话题。欧盟自2006年起将全面禁止食品动物食用抗生素促生长饲料添加剂，而且，抗生素对动物和人类的健康造成的风险也已引起我国农业部门的重视。加强管理养殖环节抗生素的合理使用和畜禽食品中抗生素残留超标，成为食品安全领域关注的热点。
[0003]为了避免抗生素使用存在的风险，实现对饲料中抗生素的部分或全部替代，益生菌制剂的研究成为当前畜禽养殖的热点。
[0004]益生菌是动物肠道内的正常菌群，对动物体没有毒副作用。其附着在动物肠道内，一方面产生一些抑制病原菌生长的物质，另外在生长代谢过程中，可以分泌多种酶类，促进动物对饲料的消化吸收，提高料肉比，促进动物健康生长。因此益生菌制剂成为国内外业界研究的热点。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一株嗜酸乳杆菌及其在畜禽养殖中的应用，所述嗜酸乳杆菌筛选自健康仔猪的新鲜粪样，具有很强的抑制大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的能力，并且能与绝大部分抗生素在其安全用药范围内`一起添加到畜禽饲料或饮水中使用，从而减少抗生素的使用量。
[0006]本发明一方面提供了一株嗜酸乳杆菌，该菌株命名为嗜酸乳杆菌La_P6(Lactobacillus acidophilus La_P6),已于2013年10月14日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为CCTCC N0:M2013474o
[0007]本发明的嗜酸乳杆菌用作饲料添加剂。
[0008]本发明另一个方面提供了包含上述嗜酸乳杆菌的微生物制剂。
[0009]上述微生物制剂为嗜酸乳杆菌发酵菌液，活菌量为108_109CFU/mL。
[0010]上述微生物制剂可用作饲料添加剂，优选用作饮水添加剂。
[0011]本发明的嗜酸乳杆菌对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌具有很强的抑制能力，并且能够耐受一定浓度范围内的多种抗生素，可用作养殖动物的饮水添加剂或饲料添加剂。通过在饲料或饮水中添加嗜酸乳杆菌La_P6，能明显提高断奶仔猪的日增重，并且降低了料肉比，促进养殖动物的健康生长。
【专利附图】
【附图说明】
[0012]图1:本发明的嗜酸乳杆菌La_P6体外对抗生素的敏感性实验。【具体实施方式】
[0013]实施例1嗜酸乳杆菌La_P6分离筛选及鉴定:
[0014]1、乳酸菌初筛
[0015]收集青岛市平度养殖场健康仔猪新鲜粪样8份，分别称取5g加入45mL无菌水，制备成菌悬液，涂布于加0.5%碳酸钙的MRS平板上,37°C培养48h,分离培养有透明圈的菌株，获得56株乳酸菌。
[0016]2、抑菌型乳酸菌筛选
[0017]I)乳酸菌液制备:将初筛得到的56株乳酸菌接种于MRS液体培养基中，37°C静置培养48h ；
[0018]2)致病菌菌液制备:大肠杆菌(购自美国模式培养物集存库，菌株编号为ATCC25922)、沙门氏菌(购自美国模式培养物集存库，菌株编号为ATCC14028)和金黄色葡萄球菌(购自美国模式培养物集存库，菌株编号为ATCC6538)，将菌种接种于营养肉汤，37°C摇床培养过夜；
[0019]3)抑菌实验一双层平板，牛津杯法:每5mL灭菌营养琼脂培养基(50°C左右)加100 μ L致病菌菌液(菌量IO6数量级)，混匀后倾倒至营养琼脂平板做成双层平板，凝固后在培养基上放置牛津杯，向牛津杯中添加200 μ L培养好的乳酸菌菌液,待菌液扩散后放入37 °C培养箱中培养20h，观察抑菌圈直径；
[0020]选择抑菌圈明显的菌株作为待选菌株，进行抗生素耐受筛选。经过两次筛选，最终筛选得到I株对大肠杆菌(ATCC25922)、沙门氏菌(ATCC14028)，金黄色葡萄球菌(ATCC6538)生长抑制作用最明`显的菌株。
[0021]3、菌株鉴定
[0022]采用分子生物学的方法对筛选得到的菌株进行鉴定，测得其16s rDNA序列，在GenBank核酸数据库中进行blast比对,通过比对确认其为嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus),命名为嗜酸乳杆菌 La_P6 (Lactobacillus acidophilus La_P6),并于 2013年10月14日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCN0:M2013474。
[0023]实施例2:嗜酸乳杆菌La_P6抑菌实验
[0024]I)乳酸菌液制备:将嗜酸乳杆菌La_P6接种于MRS液体培养基中，37°C静置培养48h ；
[0025]2)致病菌菌液制备:大肠杆菌(ATCC25922)、沙门氏菌(ATCC14028)，金黄色葡萄球菌(ATCC6538 )，将菌种接种于营养肉汤，37 0C摇床培养过夜；
[0026]3)抑菌实验一双层平板，牛津杯法:每5mL灭菌营养琼脂培养基(50°C左右)加100 μ L致病菌菌液(菌量IO6数量级)，混匀后倾倒至营养琼脂平板做成双层平板，凝固后在培养基上放置牛津杯，向牛津杯中添加200 μ L培养好的嗜酸乳杆菌La_P6菌液,待菌液扩散后放入37 °C培养箱中培养20h，观察抑菌圈直径。
[0027]嗜酸乳杆菌La_P6对致病菌的抑制作用如下表所示:
[0028]
【权利要求】
1.一株嗜酸乳杆菌，其特征在于，所述的嗜酸乳杆菌的保藏编号为CCTCCN0:M2013474。
2.权利要求1所述的嗜酸乳杆菌在制备饲料添加剂中的应用。
3.—种微生物制剂，所述微生物制剂包含有权利要求1所述的嗜酸乳杆菌。
4.如权利要求3所述的微生物制剂，为嗜酸乳杆菌发酵菌液，其活菌量为IO8-1O9CFU/mLo
5.权利 要求3所述的微生物制剂作为饲料添加剂的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述的饲料添加剂为饮水添加剂。
【文档编号】C12R1/23GK103555634SQ201310557621
【公开日】2014年2月5日 申请日期:2013年11月11日 优先权日:2013年11月11日
【发明者】陈琳, 甄丽, 张霞 申请人:山东康地恩生物科技有限公司, 山东蔚蓝生物科技有限公司