新颖的鼠李糖乳杆菌菌株及其用于抑制黄嘌呤氧化酶及治疗痛风的代谢产物的制作方法
【技术领域】
[0001] 相关申请案的交叉引用
[0002] 本申请要求于2014年8月22日所提出的美国临时申请N062/040616号的权益。该申 请案的内容在此整体引用作为参考。
[0003] 本发明设及利用乳酸菌及其发酵代谢产物抑制黄嚷岭氧化酶活性技术领域。
【背景技术】
[0004] 尿酸是体内嚷岭代谢作用的最终产物。血中的高尿酸水平导致尿酸结晶的形成， 其沉积在关节、肾脏及其它器官。当血中尿酸浓度高于7毫克/分升时，即视为高尿酸血症。 [000引高尿酸血症是一种常见的代谢病症，它与痛风、高血压、屯、血管疾病、糖尿病及肾 脏疾病相关联。据1993年至2008年在台湾进行的一项流行病学调查显示，患有高尿酸血症 的男性与女性病患的百分比分别为21.6%与9.57%。
[0006] 黄嚷岭氧化酶是尿酸合成作用中的关键酶。因此，抑制黄嚷岭氧化酶活性可减少 尿酸的产生。诚然，黄嚷岭氧化酶抑制剂亦即尿酸酶可有效降低血中的尿酸浓度。但尿酸酶 并不是存在于人体内的一种酶。其通常W重组型哺乳动物蛋白的形式分离出来，通过静脉 注射的方式给药。因此，其生产成本可能昂贵，在给药上也可能困难。
[0007] 异嚷岭醇也是一种黄嚷岭氧化酶抑制剂。临床上用该化合物来降低血清尿酸水 平。然而，异嚷岭醇具有副作用，如过敏反应、胃肠不适、白血球减少症、血小板减少症、肝 炎、肾病及6-琉嚷岭中毒等，在上述的某些情况下甚至可能导致死亡。
[0008] 鉴于目前高尿酸血症疗法的缺点，许多生物制药公司将重屯、放在开发新的降尿酸 剂上。例如，Izumida等人(J.Ant化iotics，第50期第916-918页）指出已从海洋细菌澄黄农 杆菌(Agrobacterium aurantiacum)分离出可降低尿酸水平的化合物，其名称为径阿卡酬 (hydroxy曰k曰lone)O
[0009] 其它微生物物种也表现出降尿酸能力，其包含发酵乳杆菌化actobaci Ilus fermentum)、戊糖乳杆菌化actobaciIlus pentosus)、加氏乳杆菌化actobaciIlus gasseri)、口腔乳杆菌(XactobaciIlus oris)、长双歧杆菌（Bif idobacterium Iongum)、W 及酿酒酵母菌（Saccharomyces cereviSiae)的之菌株。具体参见美国专利申请案公开号 2010/0316618、2011/0014168及2013/0330299; W及欧洲专利申请案公开号2457576及 1649863。
[0010] 目前研发容易生产、给药安全、来自天然来源的新颖黄嚷岭氧化酶抑制剂仍然有 不少需求。
【发明内容】
[0011] 为了实现上述目的，本发明提供一种由乳酸菌所制备的黄嚷岭氧化酶抑制剂。
[0012] 本发明也提供一种用于抑制黄嚷玲氧化酶的方法。该方法包括下列步骤:在培养 基中培养鼠李糖乳杆菌化actobacillus rhamnosus)形成一种组合物，W及将黄嚷岭氧化 酶与组合物接触的步骤。
[0013] 本发明还公开一种用于降低个体的尿酸水平的方法，该方法包括在培养基中培养 鼠李糖乳杆菌W形成一种组合物，W及将该组合物给药于具有升高的尿酸水平的受试者的 步骤。给药量能有效降低尿酸水平。
[0014] 在本发明范围内还公开一种用于降低个体的尿酸水平的组合物的制备方法。该方 法将鼠李糖乳杆菌接种到培养基，并在培养基中培养鼠李糖乳杆菌，从而得到组合物。
[0015] 本发明进一步公开一种用于降低个体的尿酸水平的组合物。该组合物包括鼠李糖 乳杆菌的代谢产物。
[0016] 本发明的一个或多个实施方案的细节阐述于本说明书和W下的实施例中。发明的 其他特征，目的和有益效果能从几个实施例的详细描述W及权利要求书中毫无疑问的得 出。本文引用的所有出版物和专利文献都W整体引用的形式并入，作为参考资料。
【具体实施方式】
[0017] 如上面所述，本发明公开了一种通过施用含有鼠李糖乳杆菌的组合物来降低个体 的尿酸水平的方法。在一个具体的实施方案中，鼠李糖乳杆菌是鼠李糖乳杆菌121，其保藏 登记号为DSM28876。
[0018] 在一个实施方案中，受试者是高尿酸血症。在另一个实施方案中，受试者患有痛 风。
[0019] 如上文所述的方法包括在培养基中培养鼠李糖乳杆菌形成组合物的步驟。所述培 养基可W是，但不限于MRS肉汤培养基、牛奶及果汁。在具体的实施方案中，所述培养基是葡 萄汁、芒果汁或柳澄汁。在一具体的实施方案中，该方法包括在培养后同时在施用该组合物 前从上述培养基中移除鼠李糖乳杆菌的步驟。
[0020] 上述的组合物可W通过局部或全身给药，其途径包括但不限于肌内，皮内，静脉 内，皮下，腹胺内，鼻内，口服，粘胺，和外部。
[0021 ]根据给药途径，该组合物可W配制成各种形式，例如，该组合物可W是液体溶液、 悬浮液、乳剂，糖浆，片剂，丸剂，胶囊，缓释制剂，粉末、颗粒，安飯，注射剂，输液，试剂盒，软 膏，洗剂，擦剂，乳膏，或它们的组合。该组合物可W进行灭菌或与药学上可接受的载体或赋 形剂混合。
[0022] 本文用的术语"载体"或"赋形剂"指任何物质，其本身并不是治疗剂，其是作为一 种载体、稀释剂、佐剂或工具，（i)用于递送治疗剂至一个体，（ii)用于添加至制剂中W改良 其操作或储存特性，及/或（iii)促进单位剂量组合物形成能分立的物质，例如适合于供口 服给药的胶囊或片剂。
[0023] 适合在制备药学制剂或食品的领域中的载体或赋形剂是公知的。作为示例而非限 审Ij，载体或赋形剂可包括缓冲剂、稀释剂、崩解剂、结合剂（b i n d i n g a g e n t)、粘合剂 (a化esive)、润湿剂、聚合物、润滑剂、助流剂(glidant)、添加W隐藏或抵消一不愉快之味 道或气味的物质、香料(flavors)、染料、芳香剂、W及添加W改善该组合物的外观的物质。
[0024] 可接受的载体或赋形剂包括巧樣酸盐缓冲液、憐酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液、碳酸 氨盐缓冲液、硬脂酸、硬脂酸儀、氧化儀、憐酸和硫酸的钢盐及巧盐、碳酸儀、滑石、明胶、阿 拉伯树胶、藻酸钢、果胶、糊精、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、薦糖、淀粉、纤维素材料(例如烧 酸纤维素醋和纤维素烷基醋）、低烙点蜡可可脂、氨基酸、尿素、醇类、抗坏血酸、憐脂、蛋白 质（例如血清白蛋白）、乙二胺四乙酸化DTA)、二甲亚讽(DMSO)、氯化钢或者其他盐类、脂质 体、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油、聚合物（例如聚乙締化咯晚酬、聚乙締醇及聚乙二醇），W及 其它药学上可接受的材料。该载体不会破坏治疗剂的药学活性，且当施用足够递送一治疗 量的药剂的剂量时是无毒性的。
[0025] 组合物的给药量是对降低受试对象的尿酸水平有效的用量。本领域搁熟的技术人 员很容易通过，例如计算受试对象血液中尿酸浓度的变化确定有效用量。
[0026] 上述用于抑制黃嚷岭氧化酶的方法包括在培养基中培养鼠李糖乳杆菌形成组合 物的步骤。在一个较佳的实施方案中，该鼠李糖乳杆菌是鼠李糖乳杆菌121，其保藏登记号 为DSM 28876。
[0027] 上述培养基可W是，但不限于MRS肉汤培养基、牛奶及果汁。在一个具体的实施方 案中，该培养基是葡萄汁、芒果汁或柳澄汁。在一个具体的实施方案中，上述方法包括将组 合物冷冻干燥形成粉末的步骤。
[0028] 上述用于抑制黃嚷岭氧化酶的方法还包括将黄嚷岭氧化酶和上述组合物接触的 步骤。在一个实施方案中，该接触步骤可在体外进行。例如，将黄嚷岭氧化酶制剂和组合物 仪器放置在容器中。在一个具体的实施方案中，接触步骤通过具有黄嚷岭氧化酶的受试者 口服组合物实现。
[0029] 上面概述的是一种用于降低个体的尿酸水平的组合物的制备方法。组合物通过先 在培养基上接种鼠李糖乳杆菌制备。在一个具体的实施方案中，该鼠李糖乳杆菌是鼠李糖 乳杆菌121，其保藏登记号为DSM 28876。
[0030] 上述用于接种鼠李糖乳杆菌的培养基可W是，但不限于MRS肉汤培养基、牛奶及果 汁。在某些实施方案中，该培养基是葡萄汁、芒果汁或柳澄汁。
[0031] 将鼠李糖乳杆菌接种到培养基后进行培养，得到用于降低个体的尿酸水平的组合 物。培养步骤可W在37°C溫度下进行。此外，培养步骤可在兼性厌氧条件下进行。在一个实 施方案中，培养时间为2天。
[0032] 通过在培养基中培养鼠李糖乳杆菌而获得的组合物可通过下列方法灭菌，其包括 但不限于己氏灭菌、福射、高压灭菌或过滤。例如，组合物可通过一个0.2皿的过滤器进行过 滤杀菌、在一个具体的优选的实施方案中，杀菌的液体培养基首先经过滤和离屯、W除去细 菌，然后再浓缩。
[0033] 用于降低个体的尿酸水平的组合物的制备方法可包括从组合物中去除鼠李糖乳 杆菌的步骤。鼠李糖乳杆菌在被去除之前，具有Ix IO8至Ix IO9个细胞/ml的细胞密度。在一 个优选的实施方案中，在鼠李糖乳杆菌去除之前，鼠李糖乳杆菌的细胞密度为1 X IO9个细 胞/ml。
[0034] 在其他实施方案中，上述方法包括冷冻干燥组合物形成粉末的步骤。
[0035] 如上述用于降低个体的尿酸水平的组合物包括鼠李糖乳杆菌的代谢产物。代谢产 物是一种黄嚷岭氧化酶活性的抑制剂。在一个具体的实施方案中，该代谢产物可W是保藏 登记号为DSM 28876的鼠李糖乳杆菌121的代谢产物。
[0036] 在一个实施方案中，组合物可W是鼠李糖乳杆菌粉末。在另一个替代实施方案中， 组合物中没有鼠李糖乳杆菌。
[0037] 在另一个实施方案中，除了鼠李糖乳杆菌的代谢产物之外，组合物可包括益生微 生物，其包括但不限于，乳杆菌属菌株化a Ctobacillus spp.)、双歧杆菌属菌株 (Bifidobacterium spp.) W及酵母属菌株（Saccharomyces spp.)。例如，发酵乳杆菌、戊糖 乳杆菌、加氏乳杆菌、口腔乳杆菌、长双岐杆菌W及酿酒酵母菌中的一种或多种可被包括在 该组合物中。
[0038] 该组合物还可W含有一种或多种食品成分，例如着色剂，酸度调节剂，抗结块剂， 抗氧化剂，填充剂，载体，乳化剂，增味剂