在-10°c至-2°c粉碎至粒径在1. 2mmW下；添加构杞 重量2-5倍的亚硫酸钢水溶液，控制溶液的抑为3-5,添加混合物重量0. 3-0. 6%的复合 酶，所述复合酶由酸性果胶酶、纤维素酶和葡聚糖酶组成，酸性果胶酶、纤维素酶和葡聚糖 酶的重量比为2. 5:1: (1-1. 5)，酶解溫度为45-55°C，酶解时间为2-化；之后将抑值调整为 5. 0-5. 6,溫度升到50-60°C，同时添加混合物重量0. 2-0. 6%的果胶酶和0. 2-0. 5%的蛋白 酶，作用时间为2. 5-化；酶解液在5-10°C过滤；滤液喷雾干燥后粉碎过60目筛，即得构杞 酶解粉。
[0021] 所述酸角主要指酸角果肉，也可W包括酸角叶，酸角果肉需煮熟后干燥粉碎。
[0022] 本发明所述饲料添加剂的制备方法如下：
[0023] 将酸角果肉煮熟后（或煮熟后与酸角叶混合）干燥粉碎过60目筛，甘草、鱼腥草 和蒲公英分别干燥粉碎过60目筛，再与通过上述方法制得的海洋红酵母发酵培养物、淫羊 蕾提取物和构杞酶解粉按比例混合均匀即可。 W24] 本发明提供的一株用于饲料添加剂的海洋红酵母WYN1，属于红酵母属 巧hodotorula)，所述菌株已于2014年11月25日保藏于中国典型培养物保藏中屯、（地址： 中国.武汉.武汉大学，邮编430072)，保藏编号为：CCTCCNO:M2014592,分类命名：海洋 红酵母WYN1 巧hodotorulasp.WYN1)。
[00巧]本发明饲料添加剂产品在一般畜禽和水产饲料中均可W添加使用，尤其在猪饲料 中使用效果最佳，添加量W饲料重量1-5%。为宜。
[0026] 有益效果：
[0027] 本发明利用从海洋环境中分离获得的一株既能高产类胡萝h素又能富集铜的海 洋红酵母WYN1，通过静止培养方法有效的提高了酵母中类胡萝h素产量和铜含量。采用 本发明方法发酵培养海洋红酵母WYNl，其生物量、类胡萝h素产量及胞内铜含量分别达到 27g/LW上、35-40mg/L和7240-8000yg/g干菌。研发中，发明人意外发现低溫静止培养可 W有效提高胡萝h和铜含量，是本发明的重要成果。
[0028] 本发明所述海洋红酵母WYN1作为饲料添加剂应用于饲料中，可W提供类胡萝h 素、B族维生素和铜离子，其高效的富铜能力良好地取代了常规饲料中使用的无机铜离子， 稳定性好，易于饲料长期有效胆存和运输，与饲粮中其它组分配伍性好，吸收率高，排泄率 低，环境污染小，改善动物肤质和毛色，强化饲料的营养价值。
[0029] 本发明对淫羊蕾的提取方法简单彻底，极大节省了乙醇用量和提取时间，并且保 证了提取物中淫羊蕾巧和黄酬等有效成分含量。
[0030] 本发明通过科学复配，将具有富铜能力和高产类胡萝h素的海洋红酵母菌与多种 中草药成分实现了有机组合，可W有效降低抗生素类药物在饲养动物中的使用量，提高猪 肉制品的安全性，提高饲料利用效率，增强猪的机体免疫力，调节肠道健康，改善猪的代谢 机能和繁殖能力，提高饲养效益。
【具体实施方式】
[0031] 下面通过具体的实施方案叙述本发明方法。除非特别说明，本发明中所用的技术 手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发 明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背 离本发明实质和范围的前提下，对运些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改 动也属于本发明的保护范围。 阳0巧实施例1 :海洋红酵母菌WYN1的获得及耐铜能力驯化
[0033] (1)将从黄海海边采集新鲜的海邮、海星、海藻等生物样本，置于无菌的YEPD培养 基中，挑取红色或粉红色圆形菌落，进一步纯化培养。根据各菌种类胡萝h素的积累量，筛 选类胡萝h素产量高的菌种。其中类胡萝h素产量较高的海洋红酵母WYN1，细胞为卵圆形， 没有假菌丝；在海水配置的YEPD培养基上形成红色菌落，表面光滑，边缘整齐；在产抱培养 基上不产子囊抱子，多边芽殖，无掷抱子；不发酵糖，不形成类淀粉化合物，不同化肌醇。根 据上述特点，初步确定属于红酵母属烟lodotorula)。斜面保存于冰箱中。
[0034] (2)海洋红酵母WYN1的发酵培养
[0035] 将菌种转接到斜面培养基上活化，28°C培养24h后，接种于液体种子培养基中， 28°(：振荡培养3化得种子液，按10%接种量接入装有6〇1111^发酵培养基的25〇1111^=角瓶中， 28°C，振荡培养48h(摇床转速为18化/min)。发酵培养基组成为葡萄糖2%，蛋白腺1%， 酵母膏1%，硫酸儀0.02%，憐酸二氨钟0. 15%，盐度20。28°C摇床培养48h，转速为18化/ min〇
[0036] 做耐铜能力驯化
[0037] 将海洋红酵母菌WYN1接种于铜离子含量为50mg/L(硫酸铜配置）培养基中，置于 28°C，180r/min恒溫摇床上震荡培养2地。然后从该培养物中取3ml发酵物接种到不含铜 的麦芽汁培养基中，培养2地。反复培养几代，使酵母在含铜的培养基中生长稳定，且数量不 再增多时，再逐步提高培养基的铜浓度。如此反复便可使得酵母菌能够适应铜离子含量为 300mg/l的环境，获得了耐铜的特性。本发明经过对海洋红酵母进行耐铜能力驯化后，能有 效地提高细胞生物量、类胡萝h素的产量及酵母的富铜能力。
[0038] (4)细胞生物量的测定
[0039] 将发酵液3000r/min离屯、lOmin，弃上清液，菌体经无菌水洗2~3次后再次离屯、， 所得菌体置于6(TC烘箱中干燥至恒重，准确称重。 W40] 巧）类胡萝h素的提取：
[0041] 将Ig干菌体放入100血S角瓶中，加入5血3mol/L的盐酸室溫浸泡比，沸水浴 4min，迅速冷却，300化/min离屯、15min沉淀为细胞残渣，用丙酬定容至20血萃取，得类胡萝 h素浸提液。
[0042] (6)类胡萝h素的测定
[0043] 将提取液适当稀释后，用722型分光光度计在475nm条件下测定光吸收值。按下 式计算类胡萝h素含量：
[0044]
[0045] 式中：AAm。,为475nm波长处的吸光度；D为测定试样时的稀释倍数；V为丙酬用量 (mL) ;0. 16为类胡萝h素的克分子消光系数；W为红酵母菌体干重（g)。
[0046] (7)酵母含铜量测定
[0047] 用原子吸收法测定。 柳4引 （8)菌种保藏
[0049] 将上述经过驯化的富铜海洋红酵母WYN1保藏于中国典型培养物保藏中屯、，保藏 编号为：CCTCCNO:M2014592。
[0050] 实施例2 :(对比试验）海洋红酵母WYNl高产类胡萝h素的发酵条件研究
[0051] 发酵培养基组成：葡萄糖2. 5 %，蛋白腺2. 5 %，硫酸儀0. 02 %，憐酸二氨钟 0. 15%，铜含量300mg/L(硫酸铜配置），氯化钢20%，其余为水；初始抑为8,接种量10%， 摇床转速为18化/min, 28°C培养24小时后，溫度调整为30°C，抑调整为5,补加一次氮源， 即再按照2. 5%的添加量添加蛋白腺，继续发酵2地。采用上述方法发酵培养海洋红酵母 WYN1，其生物量、类胡萝h素产量及胞内铜含量分别为27. 52g/L、25. 12mg/L和6240yg/g 干菌。
[0052] 实施例3 :饲料添加剂及其制备
[0053] 饲料添加剂的重量份数组成如下：
[0054] 淫羊蕾提取物10,海洋红酵母发酵培养物15,构杞酶解粉6,甘草5,酸角5,鱼腥草 2,蒲公英3 ;所述海洋红酵母保藏编号为CCTCCNO:M2014592。 阳化5] 所述淫羊蕾提取物的制备方法如下：
[0056] 淫羊蕾粉碎过40-50目筛后，添加淫羊蕾8倍重量的50%乙醇溶液，室溫条件下用 50曲Z超声波辅助提取2次，每次30min，过滤得乙醇提取液，提取后的残渣中添加8倍重量 热水，80°C煎煮比，过滤后溶液与乙醇提取液混合，直火加热浓缩提取液，喷雾干燥，粉碎过 60目筛，即得淫羊蕾提取物。
[0057] 所述构杞酶解粉的制备方法如下：
[0058] 构杞冲洗后迅速冷冻至-20°C至-40°C;升华干燥，真空度400-500Pa，溫度-10°C 至-0°c，干燥到水分<12%