酸奶发酵剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物领域，公开一种新型的抑菌性很好的植物乳杆菌及其应用。
【背景技术】
[0002] 植物乳杆菌(LactobaciIlus plantarum)是一类厌氧，不产孢子的革兰氏阳性菌， 菌体呈短杆状，在MRS琼脂平板培养基中呈乳白色不透明，圆形，光滑的菌落。植物乳杆菌与 人类的生活密切相关，被广泛用于乳制品、肉类、蔬菜以及果汁中，能通过胃肠道并定植于 肠道发挥益生作用。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种抑菌性能优良的植物乳杆菌。
[0004] 本发明从健康的妇女母乳中分离出植物乳杆菌，具有良好的益生性能，极强的抑 菌性，良好的耐酸耐胆盐性，耐胃肠液和抗药性;同时可以抑制致病菌对小肠结肠细胞的粘 附，从而使致病菌无法在小肠内定殖，减少肠炎疾病的发生，促进肠道健康，发挥益生菌的 优良性能。
[0005] 本发明抑菌植物乳杆菌WLPL04(Lactobacillus plantarum WLPL04)，于2015年8 月31日保藏在中国武汉武汉大学中国典型培养物保藏中心，编号:CCTCC NO:M 2015501。
[0006] 本发明抑菌植物乳杆菌WLPL04可以在MRS琼脂平板培养基上生长，为革兰氏阳性 杆菌，属于兼性厌氧生长，不产芽孢。为维持时间稳定地保存本发明植物乳杆菌的优良性 能，将其保存在含有15 %甘油的混合保存液中，于-80°C冻存，或将其保存在20 %的脱脂乳 中进行冻干保存。
[0007] 为了对微生物进行鉴定和分类，对本发明所述用植物乳杆菌进行了 16S rRNA碱基 序列分析，结果为，与植物乳杆菌标准菌株(Lactobacillus plantarum strain WCFS1)显 示出最高的同源性(99%)，显示出与植物乳杆菌最高的分子系统学上的亲缘关系。因此，将 此微生物鉴定为植物乳杆菌，并命名为植物乳杆菌WLPL04。于2015年8月31日保存于武汉市 中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC Ν0:Μ 2015501。植物乳杆菌WLPL04的测序结果 显示的碱基序列如下：
[0008] AGAGTTTGATCCTGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAACGAACTCTGGTATTGATT GGTGCTTGCATCATGATTTACATTTGAGTGAGTGGCGAACTGGTGAGTAACACGTGGGAAACCTGCCCAGAAGCGGG GGATAACACCTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAACAACTTGGACCGCATGGTCCGAGCTTGAAAGATGGCTTCGG CTATCACTTTTGGATGGTCCCGCGGCGTATTAGCTAGATGGTGGGGTAACGGCTCACCATGGCAATGATACGTAGCC GACCTGAGAGGGTAATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTT CCACAATGGACGAAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGGTTTCGGCTCGTAAAACTCTGTTGTTAA AGAAGAACATATCTGAGAGTAACTGTTCAGGTATTGACGGTATTTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGC AGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAAGTC TGATGTGAAAGCCTTCGGCTCAACCGAAGAAGTGCATCGGAAACTGGGAAACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAA CTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGA CGCTGAGGCTCGAAAGTATGGGTAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATACCGTAAACGATGAATGCTAAG TGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTG AAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCTACGCGAAGAACCTTA CCAGGTCTTGACATACTATGCAAATCTAAGAGATTAGACGTTCCCTTCGGGGACATGGATACAGGTGGTGCATGGTT GTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTATCAGTTGCCAGCATTAA GTTGGGCACTCTGGTGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATG ACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTTGCGAACTCGCGAGAGTAAGCTAATCTCTTAAAGCC ATTCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGC GGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCAAAGTCGGTGGGGTA ACCTTTTAGGAACCAGCCGCCTAAGGTGGGACAGATGATTAGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTAGGAGAACCT GCGGCTGGATCACCTo
[0009]
[0010] 本发明的植物乳杆菌WLPL04作为益生菌，不仅具有极强抑菌性，且有良好的耐酸 耐胆盐性，能抑制致病菌在肠道上的定殖，促进宿主健康。是一株性能优良的菌种。因此具 有很高的研究价值和应用价值。
[0011]进一步的，本发明公开了：
[0012] 酸奶发酵剂，其特征在于包括植物乳杆菌WLPL04;所述植物乳杆菌WLPL04于2015 年8月31日保藏在在中国典型培养物保藏中心，保藏编号:CCTCC NO:M 2015501。
[0013] 所述酸奶发酵剂，还包括保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌；按质量比植物乳杆菌 WLPL04:保加利亚乳杆菌:嗜热链球菌=1:2:3。
[0014] 利用本发明发酵剂制备酸奶，能改善酸奶的口感，抑制酵母和霉菌的生长，从而延 缓酸奶的变质。
[0015] -种酸奶的制备方法，包括如下步骤：
[0016]水化:将脱脂奶粉（l〇g)、鹿糖(6g)和水（100mL)混合，在40-50°C下水化45min;杀 菌:在65°C预热5min，然后在98°C下热处理1〇111；[11;冷却:室温下冷却至45°(3;接种:接种5区酸 奶发酵粉+Ig植物乳杆菌WLPL04冻干粉;所述酸奶发酵粉中含保加利亚乳杆菌冻干粉和嗜 热链球菌冻干粉，两者质量比例为2:3;所述植物乳杆菌WLPL04于2015年8月31日保藏在中 国典型培养物保藏中心，保藏编号:CCTCC Ν0:Μ 2015501;发酵:置于38°C发酵10小时。
[0017] 益生菌风味酸奶的制备工艺，包括如下步骤：
[0018] 1)将100g红枣汁或核桃汁或水蜜桃汁或草莓汁或花生乳与100g鲜牛奶混匀，加入 Hg的白砂糖进行调配、混匀；
[0019] 2)杀菌:将混合液加热至90°c-100°c，维持5-10min，杀死其中的有害微生物；
[0020] 3)接种:灭菌后的混合液冷却至40°C_45°C，在无菌条件下按IOg的菌种(按质量冻 干粉保加利亚乳杆菌:嗜热乳杆菌:植物乳杆菌WLPL04 = 2:3 :1 )，混合均匀;所述植物乳杆 菌WLPL04于2015年8月31日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO : M2015501；
[0021] 4)发酵:将装好的酸奶放入恒温箱，42°C下发酵7h，酸奶完全凝固时终止发酵；
[0022] 5)后熟:将发酵好的酸奶置于0°C_4°C环境中储藏24h即得终产品。
[0023] 所述红枣汁的制备:红枣预先煮好清洗干净去核，按质量红枣：水=1:1的比例投 入到榨汁机中榨汁，之后用纱布过滤，除去杂质和纤维素，红枣汁冷藏备用。
[0024]所述核桃汁的制备:选择质量较好的核桃仁放入150°C的烘箱中烘烤15_30min至 呈现暗红色、去除生异味、散发出焦香气为止，然后在7%氢氧化钠溶液中煮沸15min除去核 桃仁上的褐色皮层后待用;核桃仁放入榨汁机中，放入五倍质量的水，制备核桃汁。
[0025] 所述水蜜桃汁的制备:选择质量好的水蜜桃清洗干净去核，按质量水蜜桃:水=1: 1的比例投入到榨汁机中榨汁，之后用纱布过滤，除去杂质和纤维素，水蜜桃汁冷藏备用。
[0026] 所述草莓汁的制备:选择质量好的草莓清洗干净，按质量草莓:水=1:1的比例投 入到榨汁机中榨汁，之后用纱布过滤，除去杂质和纤维素，草莓汁冷藏备用。
[0027] 所述花生乳的制备:选择子粒饱满，新鲜的花生仁，剔除霉烂变质及其它杂质。置 于120°C烘箱，烘烤20min，产生花生香味并去皮。将去皮的花生仁在0.1 %的NaHCO3溶液中 浸泡Ih~2h，以去除