15°C环境下维持30分钟，进行高溫灭菌，然后进行分装。
[0011] 实施例2: 步骤1:制备酵母菌种液： 种液罐扩大培养基:YTO液体培养基，其质量百分数为1%酵母提取物，2%蛋白腺，2%葡萄 糖，2%琼脂，其余为水，将YTO液体培养基放入0.5M3种子罐内，115°C的50分钟高溫灭菌;无 菌操作条件下将1.5公斤酵母菌干菌粉溶于3倍的无菌水中，形成菌液，将所述的菌液装入 血清瓶并接种到0.5M 3种子罐，在30°C下通入无菌压缩空气，通气量为O . 3立方米/分钟，培 养30 h，待菌体生长至对数期末期时停止培养，重复上述步骤可制得所需质量的酵母菌液 的种液； 步骤2:制备乳酸菌种液： 种液罐扩大培养基:麦芽复合汁增菌培养基，其质量百分数为10%麦芽汁，0.5%大豆蛋 白腺，0.5%酵母膏，1%牛肉膏，0.2% K2HPO4,其余为水，将麦芽复合汁增菌培养基放入0.5M3 种子罐内，115°C的50分钟高溫灭菌;无菌操作条件下将1.5公斤乳酸菌的干菌粉溶于3倍的 无菌水中，菌液装入血清瓶并接种到O . 5M3种子罐，37°C恒溫静置培养36 h，待菌体生长至 对数期末期时停止培养，可重复上述步骤可制得所需乳酸菌的种液;所述的步骤2中的乳酸 菌为0.2公斤双歧杆菌，0.3公斤地衣芽抱杆菌，1公斤嗜热链球菌。
[0012] 步骤3:培养发酵液： 先将质量比为190:5:2:1:2:1000的雜猴桃:番茄:哈密瓜:桃:苹果:水混合打碎过滤取 滤液，用所述滤液制成培养基，在115°C下高溫灭菌30-50分钟，将所述培养基加入发酵罐 中，然后按质量为所述滤液的10%的接种量接种步骤1制得的酵母菌的种液，在28°C的溫度 下培养48h，所述的发酵罐的体积为V立方米，通气量为0.6V立方米/分钟，揽拌转速120 rpm/min;然后按质量为所述滤液的5%-10%的接种量接种步骤2制得的乳酸菌种液，在37°C 的溫度下继续培养7d(静置培养，无揽拌，让罐保持正压W防染菌）至发酵结束，得到发酵 液； 步骤4:将发酵液离屯、处理获得酵素原液： 将步骤3得到的发酵液导入离屯、机，经6000 rpm离屯、lOmin，所得上清液即为酵素原液； 步骤5: 将质量比为:蛹虫草提取物:酵素原液=45:1000的蛹虫草提取物和步骤4得到的酵素原 液混合，在115°C环境下维持50分钟，进行高溫灭菌，然后进行分装。
[0013] 抗疲劳效果： 采用饲喂法饲喂昆明小鼠，每天WO. lmL/20g的体积给予蛹虫草酵素受试物，阴性对照 组给予等体积纯水，连续30d后，参照卫生部《保健食品检验与评价技术规范-2003》中缓解 体力疲劳功能实验的检验方法对受试小鼠的负重游泳时间、血清尿素、肝糖原进行检测，取 平均值。试验数据见表1。
[0014]
表1 :缓解体力疲劳功能实验表 试验证明：蛹虫草酵素受试物能明显对抗疲劳，增强肌肉耐力，抵抗运动性疲劳，对抗 疲劳，增强精力、体力，改善贫血症状。使肤色看起来更年轻，精气神更足。
[0015] W上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术 人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本 发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，运些变 化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其 等同物界定。
【主权项】
1. 一种抗疲劳的蛹虫草猕猴桃酵素的制备方法，其特征是:所需步骤如下： 步骤1:制备酵母菌种液： 种液罐扩大培养基:YPD液体培养基，其质量百分数为1%酵母提取物，2%蛋白胨，2%葡萄 糖，2%琼脂，其余为水，将YH)液体培养基放入0.5M3种子罐内，115°C的30-50分钟高温灭菌； 无菌操作条件下将1.5公斤酵母菌干菌粉溶于3倍的无菌水中，形成菌液，将所述的菌液装 入血清瓶并接种到0.5M 3种子罐，在28-30°C下通入无菌压缩空气，通气量为0.2-0.3立方 米/分钟，培养20-30 h，待菌体生长至对数期末期时停止培养，重复上述步骤可制得所需质 量的酵母菌液的种液； 步骤2:制备乳酸菌种液： 种液罐扩大培养基:麦芽复合汁增菌培养基，其质量百分数为10%麦芽汁，0.5%大豆蛋 白胨，0.5%酵母膏，1%牛肉膏，0.2% K2HP〇4,其余为水，将麦芽复合汁增菌培养基放入0.5M3 种子罐内，115°C的30-50分钟高温灭菌;无菌操作条件下将1.5公斤乳酸菌的干菌粉溶于3 倍的无菌水中，菌液装入血清瓶并接种到0.5M 3种子罐，37°C恒温静置培养24-36 h，待菌体 生长至对数期末期时停止培养，可重复上述步骤可制得所需乳酸菌的种液； 步骤3:培养发酵液： 先将质量比为190:5:2:1:2:1000的猕猴桃:番茄:哈密瓜:桃:苹果:水混合打碎过滤取 滤液，用所述滤液制成培养基，在115°C下高温灭菌30-50分钟，将所述培养基加入发酵罐 中，然后按质量为所述滤液的5%_10%的接种量接种步骤1制得的酵母菌的种液，在28°C的温 度下培养48h，所述的发酵罐的体积为V立方米，通气量为(0.4-0.6)V立方米/分钟，搅拌转 速100-120 rpm/min;然后按质量为所述滤液的5%-10%的接种量接种步骤2制得的乳酸菌种 液，在37°C的温度下继续培养5-7d至发酵结束，得到发酵液； 步骤4:将发酵液离心处理获得酵素原液： 将步骤3得到的发酵液导入离心机，经6000 rpm离心10min，所得上清液即为酵素原液； 步骤5: 将质量比为:蛹虫草提取物:酵素原液=45:1000的蛹虫草提取物和步骤4得到的酵素原 液混合，在115°C环境下维持30-50分钟，进行高温灭菌，然后进行分装。2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征是:所述的步骤2中的乳酸菌为0.2公斤双歧 杆菌，0.3公斤地衣芽孢杆菌，1公斤嗜热链球菌。
【专利摘要】本发明所采用的技术解决方案是一种抗疲劳的蛹虫草猕猴桃酵素的制备方法，所需步骤如下：步骤1：制备酵母菌种液；步骤2：制备乳酸菌种液；步骤3：培养发酵液；步骤4：将发酵液离心处理获得酵素原液；步骤5：将质量比为：蛹虫草提取物：酵素原液=45:1000的蛹虫草提取物和步骤4得到的酵素原液混合，在115℃环境下维持30-50分钟，进行高温灭菌，然后进行分装。
【IPC分类】A23L19/00, A23L33/135
【公开号】CN105533523
【申请号】CN201510865215
【发明人】不公告发明人
【申请人】沈阳园康天然生物科技有限公司
【公开日】2016年5月4日
【申请日】2015年12月1日