专利名称：利用血管破坏活性的分割剂量疗法的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种在诸如人类的温血动物体内产生血管破坏作用的方法，特别是治疗涉及固形肿瘤的癌症的方法，它包括以分割剂量的形式给药血管破坏剂。本发明尤其涉及所用血管破坏剂是ZD6126的方法。
正常的血管生成在包括胚胎发育、伤口愈合和雌性生殖功能的几种组成部分在内的各种过程中起到重要作用。不良的或病理的血管生成一向与包括糖尿性视网膜病、牛皮癣、癌症、类风湿性关节炎、粉瘤、卡波西肉瘤和血管瘤在内的病态相联系(Fan等人，1995，TrendsPharmacol.Sci.，1657～66；Folkman，1995，Nature Medicine127～31)。血管生成所形成的新血管系统是若干疾病的主要病理学特征(J.Folkman，New England Journal of Medicine 333，1757～1763(1995))。例如，固形肿瘤要生长，它就必须开发出自己的供血系统，这是其赖以获取氧气和营养素所不可或缺的基础；倘若供血被机械地切断，肿瘤将发生坏死。新血管形成也是牛皮癣皮肤损害、类风湿性关节炎患者关节中的侵入性血管翳以及动脉粥样硬化斑块的临床特征。视网膜新血管形成也是肌变性和糖尿性视网膜病的病理学特征。
通过破坏新生的血管内皮来逆转新血管形成，预期将具有有益的治疗效果。已发现了许多血管破坏剂(亦称血管靶向作用剂，例如combretastatin A4磷酸盐和Ajinomoto化合物AC-7700(Nihei Y.等人，Japanese Journal of Caneer Research，1999，90，1016～1025)。
现已发现，国际专利申请号PCT/GB98/01977(公开号WO99/02166)和国际专利申请号PCT/GB99/04436(公开号WO 00/40529)两篇文献所描述的三环化合物；以及国际专利申请号PCT/GB98/00099(公开号WO00/41669)所描述的芳族杂环化合物，与对各宿主种的正常、成熟的血管内皮相比，这些公开的化合物具有对新生的血管系统选择性破坏的效应。这是对于治疗与血管生成有关的疾病状态的一项宝贵性质。这些病态，如癌症、糖尿病、牛皮癣、类风湿性关节炎、卡波西肉瘤、血管瘤、急慢性肾病、粉瘤、动脉再狭窄、自身免疫疾病、急性炎、过多的瘢痕生成和粘连、子宫内膜异位、子宫机能障碍出血和伴随肾血管增生的眼疾等。
一种在PCT/GB98/01977(公开号WO 99/02166)中描述的化合物是N-乙酰colchinol-O-磷酸酯(亦称作(5S)-5-(乙酰氨基)-9，10，11-三甲氧基-6，7-二氢-5H-二苯并[a，x]环庚烯-3-基二氢磷酸酯；WO 99/02166的实施例1)，本文中称其为ZD6126。
据信，ZD6126可破坏新生的血管系统例如肿瘤血管，从而有效地逆转血管生成的过程，但这并不构成对本发明的限制。这可与其他已知抗血管生成剂相比，后者在血管系统一旦形成之后便不太有效了。
出乎意料的是，我们现发现，诸如ZD6126之类的血管破坏剂当以分割的剂量(亦称分剂量)给药时，可产生比该药剂单剂量给药时大的抗肿瘤效果。
本发明治疗方法的抗肿瘤效果包括但不限于抑制肿瘤生长、延缓肿瘤生长、肿瘤退化、肿瘤萎缩、延长停止治疗后肿瘤再生长的时间、减慢疾病进程。预期，当本发明治疗方法施用于温血动物，例如需要治疗涉及固形肿瘤的癌症患者时，所述治疗方法将产生效果，所述效果是按照例如抗肿瘤效果的大小、响应率、疾病进程和存活率当中一个或多个方面衡量的。
本发明提供一种在诸如人类的温血动物中产生血管破坏效应的方法，其包括所述动物按分割剂量给药有效数量的血管破坏剂或其可药用盐。
本发明还提供一种治疗诸如人类的温血动物中涉及固形肿瘤的癌症的方法，它包括所述动物按分割剂量给药有效数量的血管破坏剂或其可药用盐。
本发明还提供一种在诸如人类的温血动物中产生血管破坏效应的方法，其包括所述动物按分割剂量给药有效数量的ZD6126或其可药用盐。 本发明还提供一种治疗诸如人类的温血动物中涉及固形肿瘤的癌症的方法，其包括所述动物按分割剂量给药有效数量ZD6126或其可药用盐。
本发明还提供一种在诸如人类的温血动物中产生血管破坏效应的方法，它包括所述动物按分割剂量给药有效数量血管破坏剂或其可药用盐，其中血管破坏剂或其可药用盐可随意地与可药用赋形剂或载体一起给药。
本发明还提供一种治疗诸如人类的温血动物中涉及固形肿瘤的癌症的方法，其包括所述动物按分割剂量给药有效数量血管破坏剂或其可药用盐，其中血管破坏剂或其可药用盐可随意地与可药用赋形剂或载体一起给药。
本发明还提供一种在诸如人类的温血动物中产生血管破坏效应的方法，其包括所述动物按分割剂量给药有效数量的ZD6126或其可药用盐，其中ZD6126或其可药用盐可随意地与可药用赋形剂或载体一起给药。
本发明还提供一种治疗诸如人类的温血动物中涉及固形肿瘤的癌症的方法，其包括所述动物按分割剂量给药有效数量的ZD6126或其可药用盐，其中ZD6126或其可药用盐可随意地与可药用赋形剂或载体一起给药。
本发明采用分割剂量诸如ZD6126之类的血管破坏剂的本发明治疗方法的效果，预期显著大于采用单一剂量诸如ZD6126之类的血管破坏剂的治疗方法。
本发明还提供一种药剂，它包含血管破坏剂或其可药用盐的两个或更多个剂量部分，它们合在一起组成按分割剂量给药的总日剂量，用于按该疗法治疗人或动物的方法中。
本发明还提供一种套药，它包含血管破坏剂或其可药用盐的两个或更多个剂量部分，它们合在一起组成按分割剂量给药的总日剂量。
本发明提供一种套药，它包含a)血管破坏剂或其可药用盐的两个或更多个剂量部分，它们合在一起组成总日剂量，作为按分割剂量给药的单位剂量形式；b)用于盛装所述剂量形式的容器。
本发明还提供一种套药，它包含a)血管破坏剂或其可药用盐的两个或更多个剂量部分，它们合在一起组成总日剂量，并连同可药用赋形剂或载体一起作为单位剂量形式；b)用于盛装所述剂量形式的容器。
本发明还提供一种血管破坏剂或其可药用盐在制造按分割剂量给药的药剂中的应用，以用于在诸如人类的温血动物中产生血管破坏效应。
本发明还提供一种血管破坏剂或其可药用盐在制造按分割剂量给药的药剂中的应用，以用于在诸如人类的温血动物中产生抗癌效果。
本发明还提供一种血管破坏剂或其可药用盐在制造按分割剂量给药的药剂中的应用，以用于在诸如人类的温血动物中产生抗肿瘤效果。
本发明还提供一种药剂，它包含ZD6126或其可药用盐的两个或更多个剂量部分，它们合在一起组成按分割剂量给药的总日剂量，以用于按该疗法治疗人或动物的方法中。
本发明还提供一种套药，它包含ZD6126或其可药用盐的两个或更多个剂量部分，它们合在一起组成按分割剂量给药的总日剂量。
本发明另一个方面，提供一种套药，它包含a)ZD6126或其可药用盐的两个或更多个剂量部分，它们合在一起组成总日剂量，作为按分割剂量给药的单位剂量形式；b)用于盛装所述剂量形式的容器。
本发明还提供一种套药，它包含a)ZD6126或其可药用盐的两个或更多个剂量部分，它们合在一起组成总日剂量，并连同可药用赋形剂或载体一起作为单位剂量形式；b)用于盛装所述剂量形式的容器。
本发明还提供ZD6126或其可药用盐在制造按分割剂量给药的药剂中的应用，以用于在诸如人类的温血动物中产生血管破坏效应。
本发明还提供ZD6126或其可药用盐在制造按分割剂量给药的药剂中的应用，以用于在诸如人类的温血动物中产生抗癌效果。
本发明还提供ZD6126或其可药用盐在制造按分割剂量给药的药剂中的应用，以用于在诸如人类的温血动物中产生抗肿瘤效果。
血管破坏剂(VDA)是能破坏血管系统，特别是新形成的血管系统如肿瘤血管系统的药剂。
优选的VDA是在国际专利申请号PCT/GB98/01977(公开号WO99/02166)中描述的那些，在此将该文献全部公开内容收作参考。
另一些优选的VDA是在国际专利申请号PCT/GB99/04436(公开号WO 00/40529)中描述的那些，在此将该文献全部公开内容收作参考。
另一些优选的VDA是在国际专利申请号PCT/GB98/00099(公开号WO 00/41669)中描述的那些，在此将该文献全部公开内容收作参考。
另一种VDA是combretastatin A4磷酸酯。
另一种VDA是Ajinomoto化合物AC-7700(Nihei Y.等人，JapaneseJournal of Cancer Research，1999，90，1016～1025)。
特别优选的VDA是ZD6126。
血管破坏剂可采取适合口服的形式，例如作成片剂和胶囊，采取鼻子给药或吸入给药，例如作成粉末或溶液，用于非经肠的注射(包括静脉、皮下、肌肉、血管内注射或输注)，例如作成无菌溶液、悬浮体、乳剂，用于局部给药，如作成软膏或乳膏，用于直肠给药，如作成栓剂，或者给药路线可以是直接注射到肿瘤内或者区域递送或局部递送。本发明另一实施方案中，治疗方法的VDA可经内腔镜、气管内、内伤处、经皮、静脉内、皮下、腹膜内或瘤内给药。VDA可采取药物组合物的形式，其中VDA或其可药用盐与一种可药用赋形剂或载体成为整体。一般地，这里所述组合物可按传统方式采用传统赋形剂制备。本发明的组合物以单位剂量形式供使用比较有利。
分割剂量，亦称分剂量，是指任何一天(例如从子夜到中午的一个24h周期)内要给诸如人的温血动物给药的总剂量，被分割成两个或更多个该总剂量的部分，这些部分在给药时，每个部分之间的时间间隔从大于约0到约10h，优选约1h～约6h，更优选约2h～约4h。总剂量的各个部分可大致相等或不等。优选的是，总剂量分割成两个大致相等或不等的部分。剂量之间的时间间隔例如可选自约1h、约1.5h、约2h、约2.5h、约3h、约3.5h、约4h、约4.5h、约5h、约5.5h和约6h。剂量之间的时间间隔可以是从大于0到600min之间的任何分钟数(包括非整数)，优选介于45～375min，包括两端。若按2个以上的剂量给药，则每剂量之间的时间间隔可大致相等或不等。
优选的是，两个剂量按照二者之间的时间间隔从大于或等于1h到小于6h来给药。
更优选，两个剂量按照二者之间的时间间隔大于或等于2h并小于5h来给药。
更进一步优选，两个剂量按照二者之间的时间间隔大于或等于2h并小于或等于4h来给药。
特别优选，总剂量分割成两个可大致相等或不等的份，剂量之间的时间间隔从或等于约2h到小于或等于约4h。
更特别优选是，总剂量分割成两个可大致相等的份，剂量之间的时间间隔大于或等于约2h并小于或等于约4h。
为避免疑问，在时间间隔的描述中，术语“约(大致)”是指给定的时间加或减15min，譬如，约1h是指45～75min，约1.5h是指75～105min。其他地方，术语“约”则具有其一般字典的含义。
ZD6126通常由温血动物按照每平方米动物体面积10～500mg的单位剂量给药，例如，对人，按约0.3～15mg/kg。在例如0.3～15mg/kg，优选0.5～5mg/kg范围的单位剂量属本发明考虑的范围，并且这是正常情况下的治疗有效剂量。单位剂量形式，例如片剂和胶囊，通常将包含例如25～250mg活性成分。优选采用0.5～5mg/kg的日剂量。
如上所述，特定疾病状态的治疗或预防处置所要求的总日剂量的大小必然随着所处理的宿主、给药路线和被处理疾病的严重性而有所不同。因此，最佳剂量可由治疗特定患者的医生来确定。例如，可能必须或希望减少上面提到的处理剂量以便减少毒性。
如同这里规定的本发明处理方法可作为唯一的治疗措施来实施，或者可除了按分割剂量给药血管破坏剂之外还涉及一种或两种其他物质和/或处理。此种联合疗法可采用同时、顺次或分别给药个别处理成分的方式来实现。在医疗肿瘤学领域，通常的做法是采用不同治疗形式的组合来治疗每个癌症患者。在医疗肿瘤学中，除了按分割剂量给药VDA之外的此种联合治疗的其他成分可以是，手术、放疗和化疗。化疗可包括以下治疗剂类别(i)抗血管生成剂(例如，罗喹美克(linomide)、整合蛋白αvβ3功能的抑制剂、angiostatin、endostatin、丙亚胺、沙利度胺)，并包括血管内皮生长因素(VEGF)受体酪氨酸激酶抑制剂(RTKI)(例如，国际专利申请公开号WO97/22596、WO 97/30035、WO 97/32856和WO 98/13354中描述的那些，这些文献的全部公开内容并入本文作为参考，还有，例如国际专利申请公开号WO 00/47212中公开的那些，该文献的全部公开内容并入本文作为参考)；(ii)细胞抑制剂，如雌激素拮抗剂(例如，他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、iodoxyfene)、孕激素类药(例如，醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制剂(例如，anastrozole、letrazole、vorazole、exemestane)、抗孕激素、抗雄激素(例如，氟他胺、尼鲁米特、bicalutamide、醋酸环丙孕酮)、LHRH促效药和拮抗药(例如，醋酸戈含瑞林、luprolide)、睾丸激素5α-二氢还原酶的抑制剂(例如，非那司提)、抗入侵剂(例如，金属蛋白酶抑制剂如marimastat和尿激酶纤溶酶原活化剂受体功能的抑制剂)和生长因子功能抑制剂(此种生长因子包括例如表皮生长因子、血小板衍生生长因子和肝细胞生长因子，此种抑制剂包括生长因子抗体、生长因子受体抗体、酪氨酸激酶抑制剂和丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂)；(iii)生物响应调节剂(例如，干扰素)；(iv)抗体(例如，edrecolomab)；以及(v)抗增生/抗肿瘤药物及其组合，应用在医疗肿瘤学中，如抗代谢剂(例如，抗叶酸素，如氨甲喋呤、氟嘧啶，如5-氟尿嘧啶、嘌呤和腺苷类似物、阿糖胞苷)；抗肿瘤抗体(例如，蒽环，如阿霉素、柔红霉素、表柔比星和丝裂霉素-C、更生霉素、光辉霉素)；铂衍生物(例如，顺铂、卡铂)；烷基化剂(例如，氮芥、美法仑、苯丁酸氮芥、白消安、环磷酰胺、异环磷酰胺、亚硝基脲、噻替哌；抗有丝分裂剂(例如，长春花-生物碱，如长春新碱，和taxoids，如红杉醇、taxotere)；酶(例如天冬酰胺酶)；胸苷酸合成酶抑制剂(例如raltitrexed)；topisomer酶抑制剂(例如，表鬼臼脂素，如依托泊苷和替尼泊甙、安吖啶、topotecan、irinotecan)。
当VDA为ZD6126时，其用于药物组合物中的盐将是其可药用盐，但其他盐也可用于生产ZD6126及其可药用盐。此类盐可由提供可药用阳离子的无机或有机碱来生成。由无机或有机碱生成的此类盐包括，例如碱金属盐，例如，钠盐或钾盐、碱土金属盐如钙盐或镁盐、铵盐或者例如由甲铵、二甲胺、三甲胺、哌啶、吗啉或三-(3-羟乙基)胺得到的盐。
ZD6126可按下列方法制备。
N-乙酰colchinol(30.0g，83.9mmol)在惰性气氛下溶解在乙腈中，然后通过针筒加入1，2，3-三唑(14.6g，212.4mmol)。加入二叔丁基二乙基氨基亚磷酸酯(37.7g，151.4mmol)，反应混合物在约20℃搅拌至完全生成中间体亚磷酸酯。在约10℃加入氢过氧化枯烯(24.4g，159.2mmol)，反应混合物搅拌至完全氧化。加入乙酸丁酯(50mL)和氢氧化钠溶液(250mL，1M)，反应混合物搅拌并去掉水相。以氢氧化钠溶液(2×250ml，1M)和饱和氯化钠溶液洗涤有机溶液。在约15℃加入三氟乙酸(95.3g，836mmol)。反应混合物在大气压压力下蒸馏，在室温下ZD6126发生结晶，并被离析出来。
细胞存活试验按分割剂量给药的ZD6126活性可通过以下细胞存活试验展示。
活体细胞的存活率是采用切除试验(D J Chaplin等人，19189～196(1999))测定的。
在下面的试验a)和b)每一个中，肿瘤细胞的存活率按如下方法进行测定治疗以后约18h，切除肿瘤，称重，并在37℃下、在含有1mg/ml链霉蛋白酶、0.5mg/ml DNA酶和0.5mg/ml胶原酶的酶混合物中解聚1h。用血球仪对排除锥虫蓝的细胞计数，存活的细胞按适当浓度接种，以便在孵化后产生约50个菌落/培养皿。采用25,000/ml浓度的强烈照射的喂养细胞(V79细胞)来支持存活的CaNT细胞的生长。计算出每克肿瘤的存活分数的数据。
a)CaNT肿瘤模型剂量间隔的效应在雌性CBA老鼠的鼠科腺癌CaNT肿瘤模型(Hill，S.A等人，Int.J.Cancer 63，119～123，1995)中，与ZD6126按单一剂量给药相比，以肿瘤细胞存活分数衡量，按分割剂量给药ZD6126，改善了抗肿瘤效果。参见
图1。
方法单一剂量ZD6126按照200mg单一剂量向腹膜内给药，其中，加入少量的1％碳酸钠，以促进ZD6126的溶解。
分割剂量ZD6126采用100mg/kg ZD6126的分剂量法给药，随后是一段时间间隔，然后再给药100mg/kg ZD6126；各个剂量是向腹膜内以加入到1％的少量碳酸钠的盐水中的形式给药的，以促进ZD6126的溶解。
采用的时间间隔是1、2、3、4和6h。
每克肿瘤的存活分数按如上所述测定，并标绘在图1中。
100mg/ml的两个剂量，中间相隔2、3或4h，在该模型中比单～200mg/kg剂量明显有效。
b)CaNT肿瘤模型剂量间隔和分剂量比例的影响在雌性CBA老鼠的鼠科腺癌CaNT肿瘤模型(Hill，S.A等人，Int.J.Cancer，63，119～123，1995)中，与ZD6126按单一剂量给药相比，以肿瘤细胞存活分数衡量，按2h间隔分割剂量给药ZD6126，改善了抗肿瘤效果。效果改善的程度随着第一和第二剂量在给定总剂量中的比例不同而不同。参见图2。
方法单一剂量ZD6126按照200mg单一剂量向腹膜内给药，其中，加入少量的1％碳酸钠，以促进ZD6126的溶解。
分割剂量ZD6126采用如下分剂量法给药i)25mg/kg ZD6126，随后是2h间隔，再给药175mg/kg ZD6126；ii)50mg/kg ZD6126，随后是2h间隔，再给药150mg/kg ZD6126；
iii)100mg/kg ZD6126，随后是2h间隔，再给药100mg/kgZD6126；iv)150mg/kg ZD6126，随后是2h间隔，再给药50mg/kg ZD6126；v)175mg/kg ZD6126，随后是2h间隔，再给药25mg/kg ZD6126。
所有剂量都是向腹膜内，以在加入1％的少量碳酸钠的盐水中的形式给药的，以促进ZD6126的溶解。
分割剂量ZD6126的给药与单一剂量200mg/kg ZD6126的给药相比，以肿瘤细胞的存活分数衡量，前者的抗肿瘤效果更好。此种效果的改善当分割剂量ZD6126按照上面的i)、iii)或iv)给药时是显著的。最佳效果是在等分剂量的情况下看到的，即，按照上面的iii)给药。
权利要求
1.在诸如人类的温血动物中产生血管破坏效应的方法，它包括所述动物按分割剂量给药有效数量的血管破坏剂或其可药用盐。
2.根据权利要求1的方法，其中血管破坏剂的总剂量分割为大致相等或不等的两份，且二剂量之间的时间间隔大于或等于约2h但小于或等于约4h。
3.在诸如人类的温血动物中产生血管破坏效应的方法，它包括所述动物按分割剂量给药有效数量的ZD6126或其可药用盐。
4.根据权利要求3的方法，其中ZD6126的总剂量分割为大致相等或不等的两份，且二剂量之间的时间间隔大于或等于约2h但小于或等于约4h。
5.根据权利要求3的方法，其中ZD6126的总剂量分割为大致相等的两份，且二剂量之间的时间间隔大于或等于约2h但小于或等于约4h。
6.药剂，其中包含血管破坏剂或其可药用盐的二个或更多个剂量部分，且这些剂量部分合在一起组成按分割剂量给药的总日剂量，用于人或动物体的治疗方法中。
7.根据权利要求6的药剂，其中血管破坏剂是ZD6126。
8.套药，其中包含血管破坏剂或其可药用盐的二个或更多个剂量部分，它们合在一起组成按分割剂量给药的总日剂量。
9.根据权利要求8的套药，其中血管破坏剂是ZD6126。
10.套药，其中包含a)血管破坏剂或其可药用盐的二个或更多个剂量部分，它们合在一起组成总日剂量，作为按分割剂量给药的单位剂量形式；b)用于盛装所述剂量形式的容器。
11.根据权利要求10的套药，其中血管破坏剂是ZD6126。
12.血管破坏剂或其可药用盐在制造按分割剂量给药的药剂中的应用，以便用于在诸如人类的温血动物中产生血管破坏效应。
13.ZD6126或其可药用盐在制造按分割剂量给药的药剂中的应用，以便用于在诸如人类的温血动物中产生血管破坏效应。
全文摘要
本发明涉及一种血管破坏剂或其可药用盐在制造按分割剂量给药的药剂中的应用，以便用于在诸如人之类的温血动物中产生血管破坏效应。具体地说，该血管破坏剂是ZD6126，或其可药用盐。本发明还涉及采用分割剂量的血管破坏剂的治疗方法。
文档编号A61P13/12GK1422157SQ0180766
公开日2003年6月4日 申请日期2001年3月27日 优先权日2000年3月31日
发明者P·D·戴维斯 申请人:安吉奥金尼药品有限公司