专利名称：一种从银杏叶中提取萜类内酯的方法及其得到的产品的制作方法
专利说明一种从银杏叶中提取萜类内酯的方法及其得到的产品 本发明涉及一种从银杏叶中提取银杏萜类内酯的方法，具体地，本发明涉及一种采用醇提取，树脂富集的方法，以及采用这种方法获得的高白果内酯含量的产品及其应用。银杏萜内酯是从银杏叶中发现的具有特殊结构的二萜内酯和倍半萜内酯。目前，已从银杏叶中分离出银杏内酯(Ginkgolide)A、银杏内酯B、银杏内酯C、银杏内酯M、银杏内酯J及白果内酯(Bilobalide)。这是当今医药界所公认的一种最有应用前景的特异有效的血小板活化因子(PAF)受体的拮抗剂，其专一性高。最新药理研究结果证明银杏萜内酯对缺血损伤和中枢神经系统具有保护作用。
人们很早从银杏叶中分离得到了银杏萜内酯，也研究了银杏各内酯的化学结构，证实了银杏萜内酯分子具有复杂的立体结构，其人工合成难度很大。人们已发现，银杏叶是提取银杏萜内酯化合物的主要工业生产原料。
自60年代以来，银杏萜内酯的分离提取方法已有文献报道。但由于银杏叶中这类化合物含量很低，且具有特定结构，提取分离步骤烦琐，费时，得率低。目前，国外一般采用有机溶剂多级萃取与硅藻土、硅胶吸附-洗脱或活性炭吸附-洗脱与醋酸铅沉淀法相结合的提取方法(参见日本公开特许公报，平3-24084(1991)，平3-264533(1991))，但用此方法最终生产的产品中白果内酯含量仅为3％左右。在国内近几年银杏萜内酯的分离提取方法也有报道(参见张迪清、何照范著，银杏叶资源化学研究，中国轻工业出版社，1998年8月第1版，第129页)。其大致工序为银杏叶经浸提后，浸提液通过氧化铝柱，再经萃取，通过硅胶柱与过活性炭柱，其溶液进行结晶得到其产品，但这种工艺繁琐费时，且所用的氧化铝、硅胶及活性炭不易回收，成本较高，且内酯损失严重，得率仅为0.4％左右。因此，仍需要一种成本低廉，环境污染小的方法，采用这种方法可获得高内酯含量的产品。发明目的本发明提供一种从银杏叶中提取银杏萜类内酯的方法。本发明涉及采用所述方法，其中包括用醇提取银杏叶，其提取液经大孔吸附树脂富集，再经乙酸乙酯萃取纯化，得到白果内酯含量达到20％以上，总内酯50％以上的产品。与现有技术比较，本发明的生产方法具有成本低廉，产品白果内酯含量高的优点，因此这种方法特别适合于工业化大规模生产。
本发明的另一个目的是采用上述方法所制得的产品。
本发明还有一个目的是采用上述方法获得的产品在治疗老年痴呆症、心脑血管疾病中的应用。
技术方案本发明所涉及的银杏叶为高等植物，种子植物门，裸子植物亚门，银杏科GinKgo aceae，银杏GinKgo biloba L(落叶乔木)，在七、八月份采摘的绿色叶经干燥后所得。
本发明的方法包括以下各工艺步骤(一)将干燥的银杏叶粉碎至片，置于回流提取罐内，加浓度40-60体积％乙醇，其乙醇溶液用量是以重量计为生药量的5-10倍，在温度75-85℃下回流提取3-5次，每次1-3小时，每次提取后需过滤，这些滤液合并得到提取液。
(二)所述的提取液在≤-0.065Mpa压力下减压浓缩，回收其乙醇，这种浓缩直至得到无醇的浓缩液。
(三)加去离子水返溶上述的浓缩液，返溶的溶液量一般是以重量计为生药量的6-10倍，返溶得到的溶液静置、过滤。
(四)过滤后得到的药液以每小时1-1.5倍柱体积的流速通过非极性类大孔树脂柱进行吸附，生药量与树脂用量的重量比＝1∶0.8-2.0，该树脂由河北沧州宝恩化工厂有限公司生产。吸附后用1-4倍柱体积去离子水冲洗，然后，先用约2-6倍柱体积约10-20体积％乙醇水溶液洗脱，弃去洗脱液，再用2-5倍柱体积60体积％乙醇水溶液洗脱，收集这种洗脱液。
(五)将收集的洗脱液在≤-0.065Mpa压力下减压浓缩至无醇的浸膏，然后加入乙酸乙酯萃取2-5次，加入乙酸乙酯总量为以生药量计0.5-1.0倍体积，合并乙酸乙酯萃取液，再用无机或有机钠盐溶液洗涤或不洗涤。所述的无机酸钠盐是亚硫酸氢钠、硝酸钠、磷酸二氢钠等，所述的有机酸钠盐是醋酸钠、柠檬酸钠、草酸钠等。
(六)乙酸乙酯萃取液在-0.04Mpa--0.06Mpa压力下减压浓缩至浸膏，然后经过真空干燥，所得到的干燥物粉碎至细粉即得到本发明的最终产品。
(七)检测最终产品中银杏萜内酯含量。
本发明银杏产品检测方法如下色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以正丙醇-四氢呋喃-水混合物(以体积计，1∶15∶84)为流动相；用蒸发光散射检测器检测；理论板数按白果内酯峰计算应不低于2500；白果内酯与银杏内酯C峰的分离度应大于1.5。
对照品溶液的制备分别精密称取白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C对照品适量，加甲醇制成每1ml各含2mg、1mg、1mg、1mg的混合溶液即得。
供试品溶液的制备精密称取本发明产品约20mg，加甲醇溶解并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液10μl、15μl，供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C的含量，即得。
有益效果与现有技术比较，本发明的方法具有以下有益效果①工序简单，产品成本低廉，容易实行规模化大生产。
②整个工艺中白果内酯几乎不损失，最终产品中的白果内酯含量高，白果内酯含量达到20％以上，总内酯50％以上。
③产品中无银杏酚酸残留。
④本发明方法中使用的有机溶剂少，对环境没有造成污染。
具体实施方式实施例1100kg粉碎的银杏叶(其水含量小于10重量％)用50体积％乙醇700L在回流提取罐中，加热到温度80℃，回流提取2小时，提取完后过滤，再加入50体积％乙醇水溶液提取二次，每次400L，在温度80℃下提取2小时，过滤的滤液合并得到提取液。用外循环蒸发器在压力≤-0.065Mpa下浓缩所述的提取液，直至得到无醇的浓缩液，然后加去离子水至600L，冷却至室温，再放置6小时，过滤。滤液以2L/min速度通过100kg HPD-100大孔树脂柱进行吸附，该树脂由河北沧州宝恩化工厂有限公司生产，进完料液后，静置10min，先用去离子水200L以流速2L/min冲洗，然后用400L 20体积％乙醇洗脱，这种洗脱液弃去，紧跟用60体积％乙醇400L过柱，出口液颜色变深时开始收集，直至无色停止，收集的洗脱液在压力≤-0.065Mpa下浓缩直到比重为1.14，用乙酸乙酯萃取三次，每次加入量分别为30L、30L、20L，合并三次乙酸乙酯萃取液，这种合并的萃取液再浓缩至比重为1.16，放入真空干燥箱干燥至干，得到本发明的萜内酯产物0.612kg，其分析结果见下表1。
实施例2在回流提取罐中，100kg粉碎成片状的银杏叶加45体积％乙醇650L，加热到85℃，回流提取2小时，过滤，再加入45体积％乙醇提取二次，加入量依次为450L，350L，在85℃下提取2小时，过滤，合并提取液。用外循环蒸发器在压力≤-0.065Mpa下浓缩提取液至300L，加去离子水至600L后，冷却至室温后，放置6小时，过滤。滤液以3L/min速度过100kg HPD-100大孔树脂柱，进完料液后，静置10min，加去离子水300L过柱(流速2L/min)，再用400L 15体积％乙醇过柱，出口流出液弃去，紧跟60体积％乙醇400L过柱，出口液颜色变深时开始收集，直至无色停止收集。洗脱液用外循环蒸发器在压力≤-0.065Mpa下回收乙醇后浓缩至20L，加水至50L，分三次加入乙酸乙酯萃取，加入量分别为30L、30L、15L，合并三次乙酸乙酯液，加4重量％醋酸钠溶液50L洗涤，分层后取乙酸乙酯萃取液，再在压力≤-0.065Mpa下浓缩至比重为1.16，放入真空干燥箱干燥至干，得萜内酯0.589kg，其产品分析结果列于下表。
最终产品检测结果
权利要求
1.一种从银杏叶中提取银杏萜类内酯的方法，其特征在于该方法包括下述步骤A、将粉碎的干银杏叶，用浓度40-60体积％乙醇，在温度75-85℃下回流提取得到提取液，B、所述的提取液减压浓缩，直至得到无醇的浓缩液，C、加去离子水返溶所述的浓缩液，返溶的溶液量一般是以重量计为生药量的6-10倍，得到的溶液静置、过滤，D、过滤后得到的药液用非极性类型大孔树脂柱进行吸附，生药量与树脂用量重量比＝1∶0.8-2.0，然后，先用约2-6倍柱体积约20体积％乙醇水溶液洗脱，弃去洗脱液，再用2-5倍柱体积60体积％乙醇水溶液洗脱，收集这种洗脱液，E、将收集的洗脱液在≤-0.065Mpa压力下减压浓缩直到得到浸膏，然后用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取液，再用无机或有机钠盐溶液洗涤或不洗涤，F、洗涤或不洗涤的乙酸乙酯萃取液在-0.04Mpa--0.06Mpa压力下减压浓缩至浸膏，然后经过真空干燥，得到本发明的最终产品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的回流提取进行3-5次，每次1-3小时。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的提取液在≤-0.065Mpa压力下进行减压浓缩。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在大孔树脂吸附后用去离子水冲洗。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于使用以生药量计0.5-0.8倍体积的乙酸乙酯萃取。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于真空干燥物粉碎至80目以上。
7.根据权利要求1-6中任一权利要求所述方法得到的产品，其特征在于白果内酯含量高于20％，总内酯含量高于50％。
8.根据权利要求1-6中任一权利要求所述方法得到的产品在治疗老年痴呆症、心脑血管疾病中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种从银杏叶中提取银杏萜类内酯的方法，本发明还涉及一种采用醇提取，树脂富集的方法获得高白果内酯含量的产品。本发明生产方法的成本低廉，环境污染小，因此这种方法特别适合于工业化大规模生产，采用这种方法可获得白果内酯含量高的产品。这种产品可以用于治疗老年痴呆病、心脑血管疾病等。
文档编号A61P9/10GK1530363SQ0311974
公开日2004年9月22日 申请日期2003年3月11日 优先权日2003年3月11日
发明者戴百雄, 宫庭, 钱军, 张金陵 申请人:随州三江源药业有限公司