用于治疗癌症之皂甙或皂甙配基组合物的制作方法

专利名称：用于治疗癌症之皂甙或皂甙配基组合物的制作方法
发明之领域本项发明有关癌症治疗组合物，尤为具体地，本发明包括含有皂甙及皂甙配基之组合物在治疗癌症方面的应用。
发明之背景由于仍然存在研发新颖抗癌药物和药物组合物之需求，抗癌研究已经越来越多地转向从天然资源中发掘新颖抗癌药物以及从天然资源中发现和配制合成化合物。长久以来人参被视作滋补品，并且是良性的和安全的草药，人参中的许多成分已经被确定及分类为人参皂甙、碳水化合物、氮类化合物、溶脂性化合物、维他命和矿物质。从人参中萃取的皂甙，也称作人参皂甙，是人参中主要的活性成分。
一般而言，皂甙是由有糖和无糖部分组成。人参中之皂甙之骨干皂甙配基进一步分为三大类达玛烷系四萜化合物原人参二醇和原人参三醇，以及齐墩果酸。
去糖原人参三醇皂甙配基(aglycon protopanaxatriol，aPPT)具有下列结构 去糖原人参二醇皂甙配基(aglycon protopanaxadiol，aPPD)具有下列结构
超过25种达玛烷型皂甙已经从高丽人参中分离出来，只是各种皂甙留在边键糖的单糖的数量和种类不同。人参皂甙的命名为Rx是依据糖键在薄层式層层析盘中的机动性来命名的。例如已知的人参皂甙包括了那些从Ra开始至Rh的皂甙。最近又有三种通过热处理人参获得的新颖达玛烷型皂甙(Rk1，Rk2，Rk3)的报道(见see Park，I.H.(2002)Arch Pharm Res.25428-32)。
近几年，有关人参皂甙在癌症治疗应用上的有益作用已屡见报道。例如，美国专利申请09/910,887(公告号20030087835)和美国专利申请09/982,018(公告号20030087836)中披露的具有抗癌活性的新颖人参皂甙化合物。类似地，美国专利(Patent No.5,776,460)也披露了Rh2人参皂甙(Rh2[3-O-β-D-glucopyranosyl-20(s)-protopanaxadiol])具有抗癌活性。Rh2具有下列化学结构，其中“Glc”代表糖(glycon or glucose) 有文献报道过Rh2能够诱导癌症细胞的分化和凋亡(Kikuchi Y.et al.(1991)Anti-cancer Drugs.263-7；Lee KY et al.(1996)Cancer Lett.110193-200；Oh M et al.(1999)Int J Oncol.18869-75；Ota T et al.(1997)Life Sci.60PL39-88；Nakata H et al.(1998)Jpn J Cancer Res.89733-80；Kim H.Eet al.(1999)Life Sci.65PL33-80；Park JA et al.(1997)Cancer Lett.12173-81)；通过口饲Rh2能够抑制人类卵巢癌在裸鼠上的成长(Nakata H et al.(1998)Jpn J Cancer Res.89733-80)；在in vitro中Rh2与其他化疗药物组合使用时能够杀死多药耐药癌症细胞(U.S.Patent Application No.60/204,785)。已经研究发现人参皂甙Rg3[3-O-[β-D-葡萄吡喃糖(glucopyranosyl)(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖(glucopyranosyl)]-20(S)-原人参二醇(protopanaxadiol)]具有可以抑制不同癌症细胞的活性(Shinkai K et al(1996)Jpn J Cancer Res.87357-62)，包括在in vitro对人类前列腺癌细胞(Liu WK etal.(2000)Life Sci.67(11)1297-306)、在小鼠上的癌细胞肺转移(Iishi H etal.(1997)、以及大鼠上的癌细胞腹膜转移(Mochizuki M et al.(1995)Biol PharmBull.181197-202)。另外，美国专利申请(U.S.Patent Application No.09/957,082(公告号20030092638)披露了两种皂甙配基原人参二醇和原人参三醇在与其他化疗药物组合使用中，in vitro，能够增加多药耐药癌症细胞对化疗的敏感。
除了分离出来的具有抗癌活性的各种人参皂甙，在in vivo试验中，一些从人参中分离出来的齐墩果型五萜化合物也具有抗癌活性(Shibata，S.(2001)J.KoreanMed.Sci.，16 Suppl.S28-37)。
上述背景资料是基于申请人认为有可能与本发明有关之目的而提供的。任何前述信息无意，也不构成对抗本发明之先前技术。这里有关全部技术说明的出版物都将放在本项申请的参考目录中。
发明之摘要本发明的一个目标是为癌症治疗提供一种组合物以及该组合物在癌症的治疗中的应用。与本发明的一个方面相符，在此提供了一种具有抗癌活性的组合物，该组合物包含有两种或多种皂甙和/或皂甙配基的增强活性剂量。
与本发明的另一个方面相符，在此提供了一种用于癌症治疗之制药配方，该配方包含前述组合物的药学有效剂量及适合之载体。
与本发明的另一个方面相符，在此提供了一种用于癌症治疗之非制药配方，该配方包含前述组合物的药学有效剂量及适合之载体。
与本发明的另一个方面相符，在此提供了一种组合物的应用，将该组合物用于癌症患者的癌症治疗。
附图
简述图例1提供了用不同皂甙和皂甙配基以及本发明之一种组合物处理人类神经胶质瘤癌症细胞(U87)后，细胞的存活率的图示；图例2提供了用不同皂甙和皂甙配基以及本发明之一种组合物处理鼠类黑色素瘤癌症细胞(B16)后，细胞的存活率的图示；图例3提供了用不同皂甙和皂甙配基以及本发明之一种组合物处理人类乳腺癌细胞(MCF7)后，细胞的存活率的图示；图例4a提供了用本发明之组合物之不同剂量处理胰腺癌细胞(BXCP-3)后，细胞的存活率的图示；图例4b提供了用本发明之组合物之不同剂量处理胰腺癌细胞(CAPAN-1)后，细胞的存活率的图示；图例5显示用本发明之组合物之不同剂量在in vivo处理癌细胞的抑制作用。
发明的详细描述本发明是基于发现了使用包含有人参皂甙和皂甙配基的组合物与单独使用那些已知的具有抗癌活性的皂甙或皂甙配基相比较具有更强的细胞杀死效果，即将组合物用于处理癌症细胞时具有出乎意料之细胞杀死的增强效果。
因此本发明之组合物比单独使用组合物中任何一种成分具有更强的抗癌效用和力量。单独使用组合物中任何一种成分如果要达到这种程度的抗癌效用和力量，必须使用极高剂量，并且会导致难以接受之毒副作用。
定义除非另有规定，在此使用的所有技术与科学术语与对本发明所涉及先前技术拥有普通常识的人员通常理解的含义相同。
“萃取物”是指物理的或化学的方式从植物原料中萃取之组合物，包含有一种或多种皂甙和/或皂甙配基。对先前技术拥有普通常识的人员将根据在此提供之已知方法可以生产出萃取物，例如将一种溶媒使用于植物原料上。该萃取物可以是天然萃取物，也可能是部分纯化的萃取物。
“植物原料”是指从一种或一组植物中获取的一个或多个部分，包括但不限于叶子、花、根茎、种籽、茎干、浆果及类似物。
“天然萃取物”是指从一种处于天然的未加工状态的植物中获取的萃取物。“部分纯化”是指萃取物处于一种比天然萃取物含有较少蛋白质、核苷酸、脂质、碳水化合物、或其他天然存在于植物中的类似原料的状态。在本发明之组合物中使用的是部分纯化的萃取物。
“活性成分”是指组合物中那些具有抗癌活性的成分。本发明之组合物的活性成分包括皂甙和/或皂甙配基。
“皂甙”是指一种植物配糖类能够通过消化获得一个糖和皂甙配基的糖苷配基，皂甙也被称作“人参皂甙”。
“皂甙配基”是指皂甙中之无糖部分，通常是通过水解获得，并且具有复合萜类或类固醇结构。
“增强效果”，在就二种或多种活性成分的组合使用而言，是指二种或多种成分的组合活性超过每一成分单独使用时之活性。
“增强活性剂量/增强活性比例”是指本发明中一种成分之足以产生增强效果的剂量，例如在与本发明组合物的其他成分组合使用时的增强细胞杀死能力。
“功效”是指组合物或一种成分的杀死癌症细胞的效果。
“力量”指与使用剂量有关之组合物或一种成分的功效。
“多药抗药癌症)”，是指癌症或肿瘤细胞对治疗产生的一种原发的或获得的抵抗力。通常地，原发型多药抗药癌症被认为是未经治疗就对化学治疗没有反应的癌症；而继发型多药抗药癌症则是在治疗过程中产生了抗药性。此领域技术熟练人员所理解之“多药抗药癌症”是指以下几种机制所造成的抗药性减少药物的聚集(例如，通过P型蛋白质泵使得化学治疗的排泄激活，加速药物的代谢及药物代谢的其他改变、以及增加细胞修复药物损伤的能力。在本发明所指“抗药癌症”包括那些对一种或多种化疗药物产生耐药性，而与耐药机制无关。
“晚期癌症”，是指病人身上的开放癌症，这种开放癌症常常不限于局部，而且对局部治疗方法诸如手术或放射治疗没有反应。
“原发型癌症)”，是指初始肿瘤或原发性肿瘤，并且通常以其所患身体部位来命名。
“转移型癌症”，是指已经从一个原始部位(原发型癌症)扩散到其他部位(继发型癌症)的癌症类型。实际上所有癌症都可以发展成为转移型。因此本术语并不局限于任何一种特定的癌症种类。转移型癌症通常是耐药性的。
“复发型癌症”，是指被认为已经治愈或者病症缓解的癌症重新复发。癌症复发可出现在数周后、数月后、数年后、或许多年后。此领域技术熟练人员所理解之复发癌症是指原始治疗如化学治疗、反射治疗、手术治疗等未能去除或消灭的癌症细胞所引起的癌症。
皂甙和/或皂甙配基之组合物本发明提供了含有二种或多种皂甙和/或皂甙配基组合之组合物，用于癌症治疗。本发明之组合物可以包含，例如二种或多种皂甙、二种或多种皂甙配基、一种或多种皂甙与一种或多种皂甙配基。与本发明的一个方面相符，该组合物在与单独使用每一种成分相比较具有抑制癌症细胞生长的增强效果。组合物的这种增强效果可以是协同作用，也可以不是。
本发明之组合物之使用效果在与每一种成分单独使用时效果相比较至少增加了约5％。本发明之一个方面，组合物之使用效果在与每一种成分单独使用时效果相比较至少增加约10％。本发明之另一个方面，组合物之使用效果至少增加约15％。本发明之又一方面，组合物之使用效果至少增加约20％。本发明之其他方面，组合物之使用效果至少增加约23％、约25％、约27％和约30％。
组合物中使用制皂甙及皂甙配基是从人参植物中提取得来，适合的皂甙配基包括原人参二醇和原人参三醇。本发明之一个方面，组合物包含一种或多种的去糖原人参二醇皂甙配基(aPPD)和去糖原人参三醇皂甙配基(aPPT)。
从人参中提取的许多皂甙已经广为人知，并且适合用于本发明之组合物。皂甙可以是原人参二醇型皂甙、原人参三醇型皂甙。合适的皂甙举例包括但不限于Ra1，Ra2，Rb1，Rb2，Rb3，Rc，gluco-Rc，Rd，Re，Rf，20-gluco-Rf，Rg1，Rg2,Rg3，Rh1，Rh2，Rh4，notoginsenoside R1，koryoginsenoside R2，Rs1，Rs2，Q-R1和chikusetsusaponin V。此领域技术熟练人员将会了解到大多数的人参皂甙的自然形式是20S，在从植物原料中萃取加工时，可以获得20R型化合物。本发明中使用之皂甙包括20S和20R构造之皂甙。
在本发明之一方面，组合物包含一种或多种原人参二醇型皂甙和/或一种或多种原人参三醇型皂甙。在本发明之另一方面，组合物包含Rh2皂甙。在本发明之又一方面，组合物包含Rg3皂甙。在本发明之一特别方面，组合物包含从Rh2、aPPT、和aPPD组类选取的皂甙和/或皂甙配基之组合物。在本发明之另一特别方面，组合物包含从Rh2、Rg3、aPPT、和aPPD组类选取的皂甙和/或皂甙配基之组合物。组合物另外也可以包含少量一种或多种未知皂甙。
组合物包含的每一种成分之含量是不同的，大致在1％至90％(W/W)之间。在本发明之一方面，组合物中每种皂甙含量大致在1％至50％(W/W)之间，每种皂甙配基含量大致在5％至75％(W/W)之间。在本发明之另一方面，组合物中每种皂甙含量大致在5％至40％(W/W)之间，每种皂甙配基含量大致在10％至70％(W/W)之间。本发明之一个样板组合物含有1-90％(W/W)Rh2、1-90％(W/W)aPPT，、和1-90％(W/W)aPPD。在本发明之一个方面，组合物含有1-50％(W/W)Rh2、5-40％(W/W)aPPT、和5-75％(W/W)aPPD。在本发明之另一个方面，组合物含有5-40％(W/W)Rh2、10-35％(W/W)aPPT、和10-70％(W/W)aPPD。在本发明之又一个方面，组合物含有7-42％(W/W)Rh2、15-30％(W/W)aPPT、和40-70％(W/W)aPPD。
本发明之组合物中使用的皂甙及皂甙配基经处理之人参提取物中单独或混合获得。许多皂甙和/或皂甙配基也可以商业获得(即从加拿大天马药业集团公司购买获得)，也可以通过广为此领域技术熟练人员所知之技术进行化学或生物合成法获得(例如参见Shibata，S.(2001)J.Korean Med.Sci.，16 Suppl.S28-37，及其他文献)。
本发明之组合物可以直接从部分纯化之植物萃取物来制备，即通过对其简单稀释至适当浓度，或者为调整活性成分比例至所要求之含量可以添加一种或多种皂甙和/或皂甙配基到植物萃取物中。或者，组合物也可以通过按照增强活性之比例混合二种或多种单独的皂甙和/或皂甙配基来进行制备获得。上述单独之皂甙和皂甙配基可以是完全纯化的或部分纯化的。
植物原料在本发明之一方面，皂甙和/或皂甙配基都是从植物原料中提取的。在本发明之另一方面，包含有增强活性比例之皂甙和/或皂甙配基的部分纯化之植物萃取物可以用来制备组合物。
与本发明相符，适合用来提取萃取物之植物原料是来源于人参类植物，包括但不限于下列种参类奥利斯参、羽叶三七参、人参、竹节参、三七参、峨眉三七、西洋参、屏边三七、三叶参、越南人参和薯蓣等。
可以用在本发明中之植物原料包括取自单个或一组植物上之一部位或多部位，包括但不限于叶子、根、种子、浆果、茎干和其他部位。正如此领域技术熟练人员所知的，植物萃取物之化学成分及效果因植物之生物气候年龄、收获原料之湿度比例、为萃取所选取植物之部位、以及萃取之方法。在已经公开技术中之方法，可以被此领域普通技术人员就应用来获取萃取物和控制萃取物之质量。
在本发明之一方面，从人参中提取之植物原料被用来萃取含有皂甙和/或皂甙配基之萃取物。在本发明之另一方面，植物原料是从北美参中提取。在本发明之又一方面，植物原料是从三七参中提取。
植物原料之预处理除了诸如植物之生物气候年龄之外，植物收获之地区和区域、收获植物之湿度比例、为萃取所选取植物之部位、以及萃取之方法，萃取物之化学成分也会因植物原料之预处理而受影响。例如，当植物受到挤压，一些生化过程被激活，除了已经说明过的基本产物外，合成产生出许多新的化合物。除了有害物质、发霉、以及其他致病之侵袭、挤压物还包括干燥、加热、水浸和机械损伤。挤压植物因此可以作为一种工具来增加一种或多种期望之化合物的含量。此领域技术熟练人员懂得将上述一种挤压物或多种不同的挤压物用于此目的。例如，可以通过添加植物在受到挤压时自然合成的化合物来增加机械损伤之效果。上述化合物包括茉莉酮酸。昆虫之口腔分泌物的类似物也可以用这种方式被用来增强植物对挤压物的反应。
在本发明之一方面，本发明之组合物是从植物原料萃取物中制备而成，前述植物原料是经过预先处理，例如在收集植物原料和萃取之前，用化学方式或机械损伤、干燥、加热、或冷却方式、或混合使用上述方式来挤压植物。
植物萃取物及活性成分之确认通过已知技术之标准方法来处理植物原料可以获得萃取物。有不同的方式来从植物原料中获得萃取物，选择何种方式是依据能萃取本发明之组合物所需要成分之方法的功能。获得萃取物之合适方法举例如下，包括但不限于水蒸馏法、直接蒸馏法、溶解提取法、以及微波处理法。
因此，例如，可以在水中煮开的方式来处理植物原料，成分因此释放到水中，再通过蒸馏和冷却获得这些成分。作为另一选择，植物原料也可以用蒸汽来处理，使得分子膜中之成分慢慢散出并与水蒸汽组成混合物组成混合物，蒸汽和成分然后可以通过浓缩后，获得萃取物。有机溶剂也可以被用来萃取活性成分。有机溶剂之非限制性例子包括甲醇、乙醇、乙烷、和二氯甲烷。作为水溶剂或有机溶剂之替代，微波可以被用来激活植物组织中的水分子，从而造成细胞破裂释放出存在于植物原料细胞组织外之化合物。
要确定萃取物中存在所需要之成分(即皂甙和/或皂甙配基)，可以运用已知技术中的不同的解析技术。例如，这些解析技术包括有机分子的色析法分离、或者是借助光谱技术(例如红外线、紫外线或核磁共振波谱)。
组合物抗癌活性之确定根据候选之组合物的制备，组合物的抗癌活性能够与单个成分之抗癌活性进行比较和测量。许多此领域技术人员熟知之试验方法可以被用来试验本发明之萃取物、组合物和配方之抗癌活性。
1)In vitro试验在初始确定本发明之组合物的效果时，可以运用in vitro试验技术。
例如，可以用MTT实验(assay for3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium bromide(MTT))来比较本发明之组合物与单个皂甙或皂甙配基对不同癌症细胞株的细胞毒素活性。该技术主要是，将癌症细胞种于96孔平底精密测试板上，在候选组合物中培养24小时，从测试板去除中间物并用MTT溶剂代替。经过分析测试板，从570nm之吸光率计算出每个装有癌症细胞测试版中经过组合物的处理后存活细胞的数量，并对未经处理之控制组、或单独使用组合物中一种成分来处理之控制组来进行比较。每种成分在各种浓度时的方法和标准偏差可以运用标准的统计学方法来进行计算。
另一种方法是，可以通过对肿瘤细胞独立生长的抑制能力的确定来测试组合物。细胞独立生长是在此领域里公认的较好的肿瘤基因学指示器指示器。一般来说，通过将一种适合之癌细胞株殖入软琼脂中，经过一个适当的孵化期来确定细胞被克隆出的数量，从而评估细胞独立生长。用候选组合物处理过细胞的生长率可以用来与经过适当控制处理的细胞(即是用皂甙和/或皂甙配基成分单独处理过的细胞)的生长率进行比较，以及与未经过处理细胞的生长率进行比较。
组合物之细胞毒性在in vitro实验中可以运用标准技术来测量。例如在in vitro实验中将人类主要的纤维原细胞用组合物来处理，然后通过运用标准的存活试验方法来做存活试验，并在随后的不同时间点进行测试，前述标准的存活试验法例如台盼蓝染色排除法。也可以通过试验来测试细胞合成其DNA的能力，例如，运用胸苷结合试验，以通过使用标准细胞检索试验结合荧光细胞检索器。
2)In vivo试验在In Vivo试验中，组合物抑制肿瘤生长和繁殖的能力可以通过适当的动物模型，运用此领域已知的标准技术方法来确定。(例如参见，Enna，et al.，CurrentProtocols in Pharmacology，J.Wiley & Sons，Inc.，New York，NY)。一般来说，现在使用筛选抗肿瘤化合物之动物模型是异种移植模型，通过这类模型将一种人类肿瘤移植在一种动物上。人类癌症的异种移植模型例子包括但不限于在肿瘤生长试验中将人类固体瘤通过皮下注射方式移植于小鼠、在肿瘤生长试验中将人类固体瘤通过脂肪注射方式同系移植于小鼠、在存活试验中用小鼠进行的淋巴瘤和白血病的试验模型、以及小鼠肺转移之试验模型。
例如，组合物可以用小鼠进行固体瘤in vivo试验来测试，在试验首日小鼠是经双向皮下嫁接了30至60毫克的肿瘤片段。载有肿瘤之动物在进行不同处理和控制之前先行混合。在处理晚期肿瘤的试验中，将肿瘤发展到预期的尺寸，将那些肿瘤未达到足够发展的小鼠除去。经选择的动物然后随机分配成处理组和控制组。为分离对肿瘤特定效果中的细胞毒素效果，为带有肿瘤之小鼠也可以与带有肿瘤之小鼠进行相同的处理。依据肿瘤种类之不同，在肿瘤嫁接后3至22天开始进行化疗，并对每天其进行观察。本发明之组合物可以用例如灌服丸药的方式给动物用药。不同的动物组类每周称量体重3至4次直到或的失重之最大量，此后各组的体重称量至少每周进行一次直到试验结束。
肿瘤大小每周测量2至3次直到肿瘤达到预定之大小和/或预定之重量、或直到动物死亡，如果这发生在肿瘤达到预定大小和/或预定之重量之前。然后将动物解剖进行组织分析，测量肿瘤之大小和/或增值情况。
为研究组合物对白血病之效果，动物被嫁接上一定数量的癌症细胞，然后通过与控制组比较处理小鼠的生存时间的增加来确定其抗肿瘤活性。
为研究本发明之组合物对肿瘤转移的效果，先将肿瘤细胞在ex vivo用组合物处理，然后注射入适当的用与实验之动物，经过一个适当之期限来观察肿瘤细胞从注射处扩散。
In vivo，组合物之细胞毒性效果可以通过测量组合物在处理过程中对动物体重的影响、通过进行血液病学的分析、以及在解刨动物进行肝脏酶分析时来评估组合物之细胞毒性效果。
图表一人类癌症异种移植物举例
组合物之治疗应用本发明之组合物适用于治疗患有癌症之患者。
可以用本发明之组合物来治疗和稳定的癌症种类包括但不限于白血病、癌科、腺体癌、黑色素瘤和恶性肉瘤。癌科、腺体癌、黑色素瘤和恶性肉瘤通常也被称为“固体瘤”，经常与固体瘤并发的癌症包括但不限于下列癌症脑、乳腺、子宫颈、大肠、头颈、肾脏、肺、卵巢、胰腺、前列腺、胃和子宫部位的癌症、非小细胞肺癌和结肠直肠癌。
“白血病”在此是泛指组成血液器官之恶性疾病。白血病之特性表现在白血球以及它们在血液和骨髓中的前体的异常繁殖和生长，也包括诸如红白血病的其他影响红血球细胞生长的恶性血液细胞疾病。白血病通常在临床上按照下列基本来分类(1)疾病之持续时间和特性--急性或慢性；(2)涉及细胞之种类--骨髓细胞、淋巴细胞lymphoid或单核细胞；以及(3)血液中变态细胞数目之增长或非增长。例如白血病包括下列种类急性非淋巴球白血病、慢性淋巴球白血病、急性髓细胞性白血病、慢性粒细胞白血病、急性早幼粒细胞性白血病、成人淋巴性白血病、非白血性白血病、非白血白血病、嗜碱性白血病、母细胞白血病、牛白血病、慢性粒细胞性白血病、良性皮肤淋巴组织增生、胚胎细胞白血病、嗜曙红细胞白血病、格罗斯白血病、毛细胞性白血病、血胚细胞白血病、原血细胞白血病、组织细胞白血病、干细胞白血病、急性单核细胞白血病、白细胞减少白血病、淋巴性白血病、淋巴母细胞白血病、淋巴细胞性白血病、成淋巴白血病、淋巴组织白血病、淋巴肉瘤细胞白血病、柱状细胞白血病、巨核细胞白血病、微体细胞白血病、单核细胞白血病、成髓细胞白血病、粒细胞白血病、髓性细胞白血病、粒-单核细胞白血病、内格利白血病、浆细胞白血病、浆细胞白血病、早幼粒细胞性白血病、多形核细胞白血病、希林氏白血病、亚白血病的白血病、以及未分化细胞白血病。
“肉瘤”通常指起源于如肌肉、骨骼、软骨或脂肪连接组织之肿瘤，并且由类似胚胎连接组织之物质组成，常常由与紧密地植入纤维状体或均质体细胞组成。肉瘤包括下列种类肉瘤包括软组织肉瘤、软骨肉瘤、纤维肉瘤、淋巴肉瘤、黑素肉瘤、粘液肉瘤、骨肉瘤、阿贝迈斯肉瘤、脂肪肉瘤、脂肪肉瘤、腺泡状软组织肉瘤、成釉细胞肉瘤、葡萄状肉瘤、绿色肉瘤、绒毛膜癌、胚胎性肉瘤、韦尔姆斯肉瘤、子宫内膜肉瘤、基质肉瘤、尤文氏肉瘤、筋膜肉瘤、纤维原细胞肉瘤、巨细胞肉瘤、髓细胞肉瘤、何杰金氏肉瘤、自发性多发性出血肉瘤、B型细胞免疫母细胞肉瘤、淋巴肉瘤(lymphoma)，T型细胞免疫母细胞肉瘤、杰森氏肉瘤、卡波西氏瘤、库普弗细胞肉瘤、血管肉瘤、白色肉瘤、恶性间质肉瘤、骨旁肉瘤、鲁斯氏肉瘤、浆液性肉瘤、滑膜肉瘤、以及毛细管扩张型肉瘤。
“黑色素瘤”指起源于皮肤和其他器官黑色素系统之肿瘤。黑色素瘤包括下列种类肢端黑色素瘤、无色素性黑色素瘤、良性幼年黑素瘤，克劳德曼黑色素瘤、S91黑色素瘤、哈-帕二氏黑素瘤、幼年黑素瘤、恶性小痣黑色素瘤、恶性黑色素瘤、结状恶性黑瘤、指甲下黑色素瘤以及浅表扩散性黑素瘤。
“癌科”是泛指恶性生长使得上皮细胞侵蚀组织表面并造成转移。例如癌科的例子包括下列癌种腺泡癌、葡萄状腺癌、囊腺癌、淋巴腺囊癌、腺瘤癌、肾上腺皮质癌、肺泡癌、肺泡细胞癌、基细胞癌、基底细胞癌、基底癌、基底鳞状细胞癌、支气管肺泡癌、支气管癌、支气管原癌、脑型癌、胆管细胞癌、绒膜癌、节肠直肠癌、胶体癌、黑头癌、子宫癌、粉刺癌、柱状癌、柱状细胞癌、管道癌、硬癌、胚细胞癌、类脑癌、表皮癌、上皮膜癌、外生性癌、纤维癌、胶状癌、凝胶状癌、巨细胞癌、巨细胞癌、腺体癌、粒层细胞癌、发基质癌、血样癌、肝细胞癌、许特莱细胞腺癌、透明癌、婴儿胚细胞癌、子宫颈原位癌、表皮癌、上皮癌、克鲁肯伯格氏癌、库尔持斯基细胞癌、大细胞癌、豆状癌、豆状细胞癌、脂肪癌、淋巴癌、髓癌、骨髓癌、黑色素癌、胎块癌、涎腺粘液腺癌、粘液腺癌、粘液细胞癌、涎腺粘液囊肿癌、粘膜癌、粘液癌、多发性粘液癌、鼻咽癌、燕麦细胞癌、非小细胞癌、骨化性癌、骨癌、乳头癌、汇管区癌、浸润前癌、刺细胞癌、果肉状癌、肾细胞癌癌、储备细胞癌、肉瘤癌、施乃德瑞癌、硬癌、阴囊癌、印戒细胞癌、单细胞癌、小细胞癌、沙兰诺癌、球形细胞癌、梭型细胞癌、海绵体癌、鳞状癌、鳞状细胞癌、线状癌、毛细血管癌、毛细血管扩张癌、过渡期细胞癌、结节性癌、突起癌、疣癌、以及绒毛癌。
“癌科”也包括腺癌。腺癌是起源于制造具有腺体功能(分泌腺)器官的细胞，或起源于摆列内空内脏器官如胃肠管或支气管epithelia)的细胞。癌科之举例包括但不限于乳腺癌、肺癌、胰腺癌和前列腺癌。
本发明所应用之癌症还包括，何杰金氏症、非何杰金氏淋巴肿瘤、多种骨髓瘤、神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤、原发型血小板增多症、原发型巨型蛋白球症、小细胞肺肿瘤、原发型脑瘤、恶性胰腺癌、恶性良性肿瘤、膀胱癌、皮肤癌前病变、神经胶质瘤、睾丸癌、食道癌、泌尿生殖管道癌症、恶性血钙过多症、子宫内膜瘤、肾上腺皮质癌、间质瘤和成神经管细胞瘤。
在本发明之一方面，应用本发明之组合物用于治疗和稳定之癌症选自下列组类中胰腺癌、肺癌、胃癌、食道癌、结肠和直肠癌)、脑癌、卵巢癌、肝癌)、肾癌、喉癌、骨癌、多种骨髓瘤、黑色素瘤)、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、子宫体癌症、口腔癌、甲状腺癌、子宫颈癌、睾丸癌、非何杰金氏淋巴肿瘤、白血病、何杰金氏症、皮肤癌、和软组织癌。
本发明之组合物也可以应用于治疗和稳定晚期和/或转移癌症，包括上述癌症之晚期和/或转移阶段。这些癌症通常都是耐药性的。本发明之组合物也可以应用于治疗复发或难以控制之前述癌种。
本发明所应用之癌症还包括，例如，不同组织和/或器官之原发和转移之多药耐药癌症，包括但不限于发病于肌肉、骨骼或连接组织、皮肤、脑、肺、性器官、淋巴或肾脏系统、乳腺或血细胞、肝脏、消化道、胰腺和甲状腺或肾上腺管等部位之癌症，包括固体瘤、卵巢癌、乳腺癌、脑癌、前列腺癌、结肠癌、胃癌、肾癌或睾丸癌、卡尔波西肉瘤、胆管瘤、绒膜瘤、神经母细胞瘤、威尔姆氏瘤、何杰金氏症、黑色素瘤、多种骨髓瘤、淋巴白血病、和急性或慢性粒细胞淋巴瘤。
癌症耐药性之产生是癌症治疗的一大难题。围绕脑药性这一问题的传统方法之一是通过运用多种药物的不同活性机制和细胞毒性潜力来进行混合化疗。一种具有克服多药耐药能力之药物可以作为化疗药物单独使用或者是与其他药物组合使用。这种将一种药物与化疗混合使用的潜在益处可以使用毒性较小的化合物、节约费用、或的增强效果来减少治疗次数。
通过将本发明之组合物与一种或多种化疗药物协同使用，本发明意图作为混合化疗之一部分来应用于患有多药耐药癌症之患者。因此，在治疗癌症时，本发明之组合物既能够单独使用，也可以与其他具有药物活性之化疗药物协同使用。
药学配方本发明之组合物可以通过与合适的药理学可接载体、稀释剂、赋形剂或介质结合组成药学配方进行用药。该药学配方也可以包含一种或多种化学治疗药物组成，用来对某对象进行同时用药。
本发明的药学配方可以通过吸入、或者喷射、或者通过直肠的剂量单位配方，使用传统无毒的药学可接受载体、辅助剂和介质进行口服用药、局部用药、注射用药。在此的注射用药包括皮下注射、静脉注射、肌肉注射)、腹膜注射或输液技术。药学配方可以是适合口服使用的形式，例如，以药片、片剂、止咳糖、水性或油性悬浮液、可分散粉末或颗粒、乳剂、硬或软胶囊、或者糖浆或口服液。拟口服使用的药学配方可以按照已为药物生产领域所知的方法进行制备，为了制备即的精致和可口，也可以从甜味剂、调味剂、色素和防腐剂)组类中选取一种或多种的药物进行制备。含有活性成份的药片与适当的无毒的药学可接受赋形剂混合，例如包括诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或者磷酸钠的惰性稀释液、诸如玉米淀粉、或褐藻酸的粒化和分裂药物、诸如淀粉、白明胶或阿拉伯胶的粘合药物、和诸如硬脂酸镁、硬脂酸或云母的润滑药物。药片可以是未加涂层的，或者是用已知技术进行药片涂层用来延迟其在胃肠道中的消化和吸收，从而提供持久的相同治疗。例如，可以使用甘油单硬脂酸盐或甘油复硬脂酸盐作为缓释物质。
拟口服使用的药学配方也可以是硬白明胶质胶囊形式，其中活性成分与诸如碳酸钙、磷酸钙或者高岭土的惰性固体稀释剂混合。拟口服使用的药物组合物药学配方也可以是软白明胶质胶囊形式，其活性成分与水或诸如花生油、液体石蜡油或橄榄油的油介质混合。
水性悬浮液含有活性化合物并与适合的赋形剂混合，这类赋形剂包括诸如钠羧甲基纤维素、甲基纤维素、氢丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶等悬浮药物、诸如天然磷脂的分散剂或润湿剂，例如卵磷脂、或者诸如聚氧乙烯硬脂酸盐的环氧烷烃与脂肪酸的浓缩产品、或者如的氧化乙烯与长键脂族酒精的浓缩产品、或者如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸盐的氧化乙烯与从脂肪酸和己糖醇中提取的单硅酯的浓缩产品、或者如聚氧乙烯山梨聚糖单油酸盐的氧化乙烯与从脂肪酸和己糖醇酐中提取的单硅酯的浓缩产品。水性悬浮液可以含有一种或多种如乙荃或对羟基苯甲酸酯)的防腐剂、一种或多种色素药物、一种或多种调味药物或者是一种或多种如蔗糖或糖精的甜味剂。
油性悬浮液可以通过在诸如花生油、橄榄油、芝麻油、椰子油的蔬菜油或诸如液体石蜡油的矿物质油中悬置活性成分来制备。油性悬浮液可以含有如蜂蜡、硬石蜡或者鲸蜡醇的增稠剂。前述的那些甜味剂和/或调味剂的加入可以增加口服组合物的可口度。这些药物组合物可以通过添加如抗坏血酸维生素C的抗氧化剂来防腐保存。适合制备水性悬浮液的分散粉末和颗粒通过添加水，使得活性化合物与分散剂或润湿剂、悬浮药物和一种或多种防腐剂混合制备而成。合适的分散剂或润湿剂是指上面提到的药物举例。额外的如甜味剂、调味剂和色素类赋形剂也可以添加其中。
本发明的药学配方也可以是油-水乳液形式。油的部分可以是诸如花生油、橄榄油的蔬菜油或诸如液体石蜡油的矿物质油、或者是这些油的混合。合适的乳化药物可以是如黄蓍胶和阿拉伯树胶的天然树脂、可以是如大豆、卵磷脂的天然磷脂、从脂肪酸和己糖醇酐中提取的硅酯或单硅酯，如山梨聚糖单油酸盐、以及上述单硅酯与如聚氧乙烯山梨聚糖单油酸盐的氧化乙烯的浓缩产品。乳状液也可以含有甜味剂和调味剂。
糖浆和口服液可以是由诸如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖的甜味剂制备而成。该组合物可以含有镇痛剂、防腐剂、和/或调味剂和色素。
药学配方可以是以无菌的可注射水性或油性悬浮液的形式制备。该悬浮液可以根据已知技术通过使用合适的分散剂或润湿剂以及前面提及的悬浮药物来制备。无菌注射制备物可以是来源于无毒可接受的稀释液或溶剂的无菌注射溶液或悬浮液，例如1，3-丁二醇溶液。可利用的可接受介质和溶剂包括但不限于下列水、复方氯化钠注射液、乳酸林格氏液和等渗亚氯酸钠溶液。其他的举例还有传统上用来作为溶液或悬浮液介质的无菌不易挥发的油液，以及不同的刺激性小的不易挥发的油液如合成甘油单酯或甘油二酯。另外，诸如油酸的脂肪酸也可用于可注射组合物的制备。其他药学配方及组合物的制备方法在此领域的先前技术中是已知的和被描述过的，例如已经在Williams & Wilkins，Philidelphia，PA(2000)出版的，由Gennaro，A.，Lippincott所著的《RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy》(原来被称作“Remingtons Pharmaceutical Sciences”)描述过。
非药学配方非药学配方是指无须经过管理药品及生物制品的政府机构，如美国的食品及药品管理局(FDA)，的预先批准就可以进入市场的配方。此领域熟练人员会知道一种配方既可以以药学配方存在，也可以以非药学配方存在。例如，一种植物配方可以被视为既是药学配方也是非药学配方。非药学配方可以按照前述药学配方同样之方法、形式以及药学可接受媒介或载体来配制。
非药学配方可以是下列形式，如天然药物组合物、食品、健康食品、天然保健产品、功能性食品、营养补充剂、食品补充剂、草药补充剂、草药、另类疗法药物、以及自然疗法产品。
在此披露的非药学配方作为代表性的可以是药片、胶囊、或油膏形式。用药方式与剂量方案根据本发明，为治疗癌症向用药对象施以含有本发明之组合物或配方的治疗有效剂量。该组合物或配方可以按照传统的化学治疗方式用药。
本发明之组合物的施用剂量是依据治疗的癌症种类、癌症患者病情、以及治疗对象的大小，熟练的从业人员对此能够容易地做出决定。然而，在治疗不同种类癌症时，可按照此领域已知的技术，根据实际情况来决定药物施用剂量以及用药频率。
例如，组合物中每种成分的治疗有效剂量可以是在每公斤体重每天0.01毫克至1000毫克之间。在本发明之一方面，组合物含有Rh2的治疗有效剂量在每公斤体重每天0.01毫克至1000毫克之间。在本发明之另一方面，组合物含有去糖人参三醇的治疗有效剂量在每公斤体重每天0.01毫克至1000毫克之间。在本发明之又一方面，组合物含有去糖人参二醇的治疗有效剂量在每公斤体重每天0.01毫克至1000毫克之间。
药物组件本发明另外还可以提供含有以药学配方形式之本发明组合物之治疗组件(therapeutic kits)，用于癌症治疗。组件的单个部件将包装在分开的容器中，与这些容器一起，有按监管药物及生物产品的生产、使用或销售的政府机构规定格式的说明，其反映该政府机构对人类用药的生产、使用或销售的批准。
当药物组件的部件是一种或多种液体溶液时，该液体溶液可以是水性溶液，如无菌水溶液。在此情况下的灌装方式可以是吸入器、注射器、吸液管、眼点滴器、或其他类似器械，组合物可以经由这些器械给对象使用药物。
药物组件的部件也可以是干燥的或冻干的形式，并且药物组件可以额外地包含适当的溶剂来使冻干的部件还原。本发明的药物组件也可以包含向用药对象辅助用药的器材，而与容器的种类和数量无关。该器材可以是吸入器、注射器、吸液管、镊子、量匙、眼点滴器、或其他任何医学准用的用药器械。
进一步地，药物组件在向用药对象施用药物时，还可以包含一种或多种其他化学治疗药物来与本发明之组合物组合使用。
为便于更好地理解本项发明，在此举出了下列实例。这些所列举的实例应被理解为仅作为解释说明之目的，因此，无论如何这些实例不应限制本项发明的范围。
实施例含有Rh2、去糖原人参三醇(aPPT)和去糖原人参二醇(aPPD)之组合物与每种单个成分的抗癌效果进行了比较。组合物按照下列剂各种成分之比例进行制备(％W/W)组合物(1)组合物(2)组合物(3)Rh2 7.3％ 14.3％41.2％aPPT26.3％16.5％17.6％aPPD66.4％69.2％41.2％合计100％ 100％ 100％组合物的制备制备含有从选自亚洲人参、西洋参和三七参等植物中提取的Rh2、原人参二醇aPPD和原人参三醇aPPT皂甙及皂甙配基，或者含有从其它植物中提取的皂甙培基的组合物，可以按照下列的工艺流程和步骤来完成A.将人参皂甙提取物与水混合；B.(1)将人参皂甙提取物和水与一种短键(1-5个碳)的碱性金属乙醇溶液或一种氢氧乙醇溶液混合来产生混合物；和(2)将获得的混合物放入反应釜中使得该混合物能够在摄氏240℃至300℃之间的高温和3.5至8.4MPa个大气压的高压下进行化学反应；或者C.(1)也可以选择，将人参皂甙提取物与乙醇混合；(2)将人参皂甙提取物和乙醇与碱性金属乙醇溶液混合产生一种混合物；和(3)将获得的混合物放入反应釜中使得该混合物能够在摄氏240℃至300℃之间的高温和3.5至8.4MPa个大气压的高压下进行化学反应；D.在反应完成后，从乙醇混合物中的人参皂甙与/或皂甙配基的混合物中收集到中间产品。
使用标准微培养四唑分析法(MTT)进行细胞毒性测量(Alley，M C et al，CancerResearch 48589-601，1988)。指数增长的肿瘤细胞(包括多药抗药性细胞株)的培养，用来进行微滴量盘培养。细胞按照每孔1.2×103个细胞培殖于96孔盘中，在37℃温度中培养过夜。然后加入测试的化合物。细胞接受24小时处理。按照已知技术的标准做法，加入MTT试验染料(MTT dye)(3-(4，5-二甲噻唑dimethylthiazol-2-y1)-2，5-联二苯四唑溴化盐水diphenyltetrazolium bromidein saline)，确定每孔的细胞存活数。
实施例1含有Rh2、去糖原人参三醇(aPPT)和去糖原人参二醇(aPPD)之组合物处理人类神经胶质瘤U87细胞之增强效果单独使用不同剂量之Rh2、去糖原人参三醇(aPPT)和去糖原人参二醇(aPPD)来处理人类神经胶质瘤细胞(U87)。相同地，使用不同剂量之含有Rh2、去糖原人参三醇(aPPT)和去糖原人参二醇(aPPD)皂甙和皂甙培基之组合物来处理人类神经胶质瘤细胞(U87)。在本实施例中使用之组合物1具有下列化学组份7.3％的Rh2、26.3％的aPPT、以及66.4％的aPPD(％W/W)。按照MTT标准做法处理24小时后确定细胞存活数。
图例1显示了组合物1对处理人类神经胶质瘤(U87)的增强效果。如图例所示，15μg/mL的组合物1杀死近于100％(99％)的癌症细胞，而同时相似剂量的单个成分Rh2、去糖原人参三醇(aPPT)和去糖原人参二醇(aPPD)却只能分别杀死64％、29％、和52％的癌症细胞。本实施例之结果表明，与单独使用每一种单个成分的相同剂量相比较，组合物更有效果和力量。
实施例2含有Rh2、去糖原人参三醇(aPPT)和去糖原人参二醇(aPPD)之组合物处理鼠类黑色素瘤B16细胞之增强效果单独使用不同剂量之Rh2、去糖原人参三醇(aPPT)和去糖原人参二醇(aPPD)鼠类黑色素瘤B16细胞。相同地，使用不同剂量之含有Rh2、去糖原人参三醇(aPPT)和去糖原人参二醇(aPPD)皂甙和皂甙培基之组合物来处理鼠类黑色素瘤B16细胞。在本实施例中使用之组合物2具有下列化学组份14.3％的Rh2、16.5％的aPPT、以及69.2％的aPPD(％W/W)。按照MTT标准做法处理24小时后确定细胞存活数。
图例2显示了组合物2对处理鼠类黑色素瘤B16细胞的增强效果。如图例所示，10μg/mL的组合物2杀死近于81％的癌症细胞，而同时相似剂量的单个成分Rh2、去糖原人参三醇(aPPT)和去糖原人参二醇(aPPD)却只能分别杀死56％、47％、和44％的癌症细胞。本实施例之结果表明，与单独使用每一种单个成分的相同剂量相相比较，组合物更有效果和力量。
实施例3含有Rh2、去糖原人参三醇(aPPT)和去糖原人参二醇(aPPD)之组合物处理人类乳腺癌细胞MCF7之增强效果单独使用不同剂量之Rh2、去糖原人参三醇(aPPT)和去糖原人参二醇(aPPD)人类乳腺癌细胞MCF7。相同地，使用不同剂量之含有Rh2、去糖原人参三醇(aPPT)和去糖原人参二醇(aPPD)皂甙和皂甙培基之组合物来处理人类乳腺癌细胞MCF7。在本实施例中使用之组合物3具有下列化学组份41.2％的Rh2、17.6％的aPPT、以及41.2％的aPPD(％W/W)。按照MTT标准做法处理24小时后确定细胞存活数。
图例3显示了组合物3对处理人类乳腺癌细胞MCF7的增强效果。如图例所示，15μg/mL的组合物3杀死近于92％的癌症细胞，而同时相似剂量的单个成分Rh2、去糖原人参三醇(aPPT)和去糖原人参二醇(aPPD)却只能分别杀死68％、68％、和69％的癌症细胞。本实施例之结果表明，与单独使用每一种单个成分的相同剂量相相比较，组合物更有效果和力量。
实施例3含有Rh2、去糖原人参三醇(aPPT)和去糖原人参二醇(aPPD)之组合物处理多药耐药/晚期癌症细胞之效果用含有Rh2、去糖原人参三醇(aPPT)和去糖原人参二醇(aPPD)皂甙和皂甙配基的组合物来处理具有耐药性的胰腺癌症细胞(BXCP-3)和(CAPAN-1)。在本实施例中使用之组合物1具有下列化学组份7.3％的Rh2、26.3％的aPPT、以及66.4％的aPPD(％W/W)。按照MTT标准做法处理24小时后确定细胞存活数。
图例4a显示了不同剂量之组合物1对处理有耐药性的胰腺癌症细胞(BXCP-3)的效果。图例4b显示了不同剂量之组合物1对处理有耐药性的胰腺癌症细胞(CAPAN-1)的效果。如图例所示，组合物1对两种癌症细胞都有杀死效果。
实施例5含有Rh2、去糖原人参三醇(aPPT)和去糖原人参二醇(aPPD)之组合物对不同癌症细胞之抗癌效果组合物1之抑制不同种类癌症细胞的效果显示在下列图表中
实施例6组合物4在In Vivo对不同癌症细胞之抑制效果组合物4之各种成分含量Rh 28％Rg3 2％皂甙配基70％未知人参皂甙20％的抗癌活性在体抗癌活性在In Vivo试验中也得到了证实。脑瘤细胞被种植于大鼠大脑中，在种植后第10天肿瘤已经形成的情况下，口饲三个剂量的组合物4。如图5所示，在2个5天的组合物4治疗之后，治疗组和对照组PBS(生理盐水)动物的存活率有显著的差异。尤其是在以25mg/kg和50mg/kg处理的动物中，40％的大鼠存活期超过42天，而对照组的动物平均存活期仅18天。尸检表明，多于50％的存活动物的肿瘤完全消退。
实施例7组合物4之毒理学概述对组合物4进行了标准急性和慢性毒性实验。在急毒实验中，大鼠一次性口服4,000mg/kg组合物4，服药后三十分钟内动物出现闭眼、安静、活动减少、嗜睡，这些症状在四小时之内消失。动物的活动、进食、进水也恢复正常，没有一个动物在给药后七天内死亡。动物尸检结果显示心、肝、脾、肺、肾、胃、肠无异常。在慢毒实验中，动物分为高、中、低剂量三组，分别口服333.3mg/kg、131.0mg/kg和51.5mg/kg组合物4，每日给药，持续八周。给药结束后观查两周。结果如下在高剂量组给药后24小时内有一过性前列腺肿大(肿大程度187％)，一过性卵巢肿大(肿大程度124％)，在中剂量组也发现一过性前列腺肿大(肿大程度156％)，但是连续给药两周之后肿大消失。另外，一些轻微的毒性反应也只在高剂量组内才能观察到，包括给药第三至四周内嗜睡以及给药末期(4-9周)时的体重稍减(无统计学显著意义，P＞0.05)，血常规以及器官组织学检查在高中低3组内均未发现异常。
组合物4的急性毒理实验结果概要如下I.血管激惹实验兔子(日本大耳兔)经耳静脉注射科尔兴#2，每日一次，连续7天，每次注射量5ml/kg，(1mg/ml)。在注射部位无可见变化。组织切片的显微镜检查没有发现注射部位静脉郁血、水肿或炎性细胞浸润等现象。
结论组合物4不对血管造成刺激作用。
II.内毒素测验用Limulus Amebocyte(LAL)干扰实验法来测定组合物4的内毒素水平。所用的LAL检验可以测定到的最小内毒素水平是0.125EU/ml-0.25EU/ml。在组合物4稀释倍数分别为1mg/ml，0.5mg/ml，0.25mg/ml以及0.125mg/ml的情况下，均没有检测出内毒素干扰。
结论1mg组合物4的内毒素水平小于1EU。
III.溶血实验实验兔子的全血与不同稀释度的组合物4混合，用分光光度计测量其上层清液在545nM波长下的吸光率，由此来决定溶血性，以生理盐水稀释组合物4(组合物4∶生理盐水＝1∶3)，最终浓度(1mg/ml)造成的溶血性反应小于1％(正常值＜5％)。未经稀释的组合物4(4mg/ml)则有轻度溶血(51％)。
结论在组合物4用生理盐水1∶3稀释的情况下，无溶血反应。
IV.过敏实验过敏实验用豚鼠进行。腹膜注射0.5ml组合物4，隔日一次，一共6日(3次注射)。另外，同一豚鼠在第14天和第21天时分别静脉注射1ml组合物4。每次注射后的15分钟内观察典型的过敏反应，包括咳嗽、皮肤反应、呼吸反应等等。
结论组合物4不引起过敏反应。
V.组合物4的半数致死量(LD50)五组小鼠静脉注射5种不同剂量的组合物4(浓度从85.5mg/kg到160.0mg/kg)。注射后动物被观察7天，以Bliss方法测试半数致死量(LD50)。在136mg/kg和160mg/kg的浓度下，动物出现严重的毒性反应和死亡。减低浓度明显地减低毒性反应。空白溶剂实验发现溶剂本身具有同样的半数致死浓度，证明组合物4毒性完全由溶剂的毒性导致。
结论组合物4的LD50是121.9mg/kg，95％置信度为105.0-141.6mg/kg之间。
实施例8非正式的临床观察一个非正式一期临床试验在辽宁省中医研究所完成。对40例不同类型的恶性实质性肿瘤的病人进行了组合物4的非正式的一期临床观察。所有的病人或者经一线抗瘤药治疗失败，或者拒绝常规治疗。参与临床观察的癌症病人的患有下列癌症种类肺癌(10例)、肝癌(6例)、乳腺癌(5例)、肠道癌(4例)、子宫癌(3例)、胰腺癌(2例)、鼻喉癌(1例)、食道癌(1例)、胆管癌(1例)、胃癌(1例)、睾丸癌(1例)、肾癌(1例)、膀胱癌(1例)、尿道癌(1例)、口腔癌(1例)、以及肝硬化(1例)。40例病人的平均年龄是56.1±11.5岁。用200毫克/天的组合物4口服剂型治疗，平均疗程53.7±25.4天。对组合物4毒性的主要观察指标是噁心、呕吐、胃炎、脱发、神经系统症状以及皮肤异常。没有一例病人发现以上症状。因此其临床毒性为零级。
虽然该临床试验的目的主要是毒性观察，而不是疗效观察。但是对疗效的初步观察结果令人鼓舞。据报告，75％的病人经组合物4治疗后，临床症状显示在不同程度上有所改进，一些病人的肿瘤明显减少。
病例病例1女，58岁，下胆管癌(3.0×2.6cm)
症状体重锐减，恶心、晕玄、疲劳、上腹部疼痛、黄疸等。
治疗114天，每天200mg改善肿瘤大小缩至1.8×1.4cm，所有上述症状消失，自我感觉良好。
病例2女，74岁，食道癌(伞状)，长6.0cm(X光图像)症状吞咽困难、疼痛，消瘦，经常打嗝治疗110天，每天200mg改善肿瘤大小缩至1.5cm，吞咽无困难，打嗝次数大减，不再疼痛，自我感觉良好。
病例3男，66岁，胰腺癌4.5×4.5×3.7cm症状疲劳，晕玄、上腹部及肝区痛，GPT、GOT和血糖高治疗90天，每天200mg改善很少疼痛，GPT、GOT、血糖指标均恢复正常尽管在此披露了本发明的不同方面，根据本领域熟练技术人员的共知常识，可以在本发明的范围内做许多改变与修改。此类修改不应被视作超出本发明之范围，并且所有对本领域熟练技术人员而言是显而易见之修改都将包括在下列权利请求中。
权利要求
1.一种包含有二种或多种皂甙、二种或多种皂甙配基、或一种或多种皂甙与一种或多种皂甙配基组合的增强活性剂量的组合物，该组合物具有抗癌活性。
2.依据权利请求1，组合物中所指皂甙和皂甙配基是选自含有Rh2、去糖原人参三醇、和去糖原人参二醇的组类。
3.依据权利请求2，组合物含有Rh2、去糖原人参三醇和去糖原人参二醇在1-90％之间。
4.依据权利请求3，组合物含有1-50％的Rh2、5-40％的去糖原人参三醇和5-75％的去糖原人参二醇。
5.依据权利请求4，组合物含有5-40％的Rh2、5-40％的去糖原人参三醇和10-70％的去糖原人参二醇。
6.依据权利请求1，其中所指一种或多种皂甙和皂甙配基是从植物原料中萃取的。
7.依据权利请求6，其中所指植物原料是来源于一种或多种人参植物。
8.依据权利请求7，其中所指植物是亚洲人参。
9.依据权利请求7，其中所指植物是北美人参。
10.依据权利请求7，其中所指植物是三七人参。
11.依据权利请求1，其中所指一种或多种皂甙和皂甙配基是合成的。
12.一种治疗癌症的药学配方，包含有依据权利请求1中组合物的治疗有效剂量和药学可接受之载体。
13.一种治疗癌症的非药学配方，包含有依据权利请求1中组合物的治疗有效剂量和药学可接受之载体。
14.依据权利请求12和13，其中的配方是可口服形式。
15.依据权利请求12和13，其中的配方是可注射形式。
16.依据权利请求12和13，其中的配方是可外用形式。
17.依据权利请求12和13，其中的治疗有效剂量之Rh2为每公斤体重每天剂量在0.01毫克至1000毫克之间。
18.依据权利请求12和13，其中的治疗有效剂量之去糖人参三醇为每公斤体重每天剂量在0.01毫克至1000毫克之间。
19.依据权利请求12和13，其中的治疗有效剂量之去糖人参二醇为每公斤体重每天剂量在0.01毫克至1000毫克之间。
20.依据权利请求1所指之组合物应用于治疗癌症患者。
21.依据权利请求20，其中所指的癌症是选自含有下列癌症的组类中神经胶质瘤、黑色素瘤、乳腺癌、胰腺癌、脑瘤、胃肠道系统癌症、前列腺癌和肺癌。
22.依据权利请求20，其中所指的癌症是选自含有下列癌症的组类中胃癌、食道癌、结肠和直肠癌、卵巢癌、肝癌、肾癌、喉癌、骨癌、多种骨髓瘤、膀胱癌、子宫体癌症、口腔癌、甲状腺癌、子宫颈癌、睾丸癌、非何杰金氏淋巴肿瘤、白血病、何杰金氏症、皮肤癌和软组织癌。
23.依据权利请求20，其中所指的癌症是多药耐药癌症。
24.依据权利请求23，其中所指的多药耐药癌症是选自含有下列癌症的原发癌症组类中发病于肌肉、骨骼或连接组织、皮肤、脑、肺、性器官、淋巴或肾脏系统、乳腺或血细胞、肝脏、消化道、胰腺和甲状腺或肾上腺管等部位之癌症，包括固体瘤、卵巢癌、乳腺癌、脑癌、前列腺癌、结肠癌、胃癌、肾癌或睾丸癌、卡伯西肉瘤、胆管瘤、绒膜瘤、神经母细胞瘤、维尔姆斯瘤、何杰金氏症、黑色素瘤、多种骨髓瘤、淋巴白血病和急性或慢性粒细胞淋巴瘤。
25.依据权利请求23，其中所指的多药耐药癌症是选自含有下列癌症的复发癌症组类中胰腺癌、肺癌、胃癌、食道癌、结肠和直肠癌、脑癌、卵巢癌、肝癌、肾癌、喉癌、骨癌、多种骨髓瘤、黑色素瘤、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、子宫体癌症、口腔癌、甲状腺癌、子宫颈癌、睾丸癌、非何杰金氏淋巴肿瘤、白血病、何杰金氏症、皮肤癌和软组织癌。
26.依据权利请求20至25任何一项请求之应用，其中所指组合物用来与一种或多种化疗药物组合使用。
27.依据权利请求20至25任何一项请求之应用，其中所指组合物应用于治疗癌症患者。
28.依据权利请求1组合物之应用于癌症治疗药物的生产制造。
29.一种用于治疗癌症之药物组件，该组件包含有权利请求1所指之组合物和一种或多种容器。
全文摘要
本发明提供用于治疗癌症之组合物包含有二种或多种皂甙和/或皂甙配基。组合物相比较每个单个成分具有更强的抗癌活性。本发明也提供了包含用于治疗癌症之组合物的药学和非药学配方，以及包含这种组合物或配方的药学组件。
文档编号A61P35/00GK1771042SQ03819192
公开日2006年5月10日 申请日期2003年6月11日 优先权日2002年6月11日
发明者黄冬 申请人:博新药业有限公司