专利名称：一种含丹参素、三七总皂苷和冰片的药物组合组及其制备和应用的制作方法
技术领域：
本发明属中药制药技术领域，具体涉及一种含丹参素、三七总皂苷和冰片的药物组合组及其制备和应用。这种药物组合物我们又称之为复方丹参冻干粉针剂。
背景技术：
冠心病、心绞痛在临床上是常见病、多发病，近年来，随着人们生活水平的提高，冠心病发病年龄有所提前，加上人口结构的老龄化，其发病率呈逐年上升的趋势，开发治疗心脑血管疾病的药物渐成研究的热点。越来越多的临床报道显示，中药在治疗冠心病、心绞痛方面具有良好的应用前景，特别是中药的副作用少，日益受到人们的喜爱。由丹参、三七和冰片组成的复方丹参制剂，临床上主要用于心血管疾病方面的治疗，具有较好的效果，如复方丹参滴丸在市场上销量一直很好。最新的文献报道由天津中医学院院长张伯礼教授领衔的“复方丹参方的药效物质及作用机制研究”，证实了复方丹参方多组分、多靶点治疗心血管病科学性。研究人员在保持中药原方配伍特点的同时，借鉴西药的分析方法，从该方剂的配伍配比、作用机制、药效物质等方面进行了系统研究。最终证实复方丹参方不仅具有抗心肌缺血作用，而且有增强缺血预适应效果，作用机制可能是扩张冠状动脉和激活内源性保护物质的释放；丹参的作用靶点侧重于血管，三七的作用靶点侧重于心肌，丹参与三七配伍后存在协同互补效应[复方丹参方作用机制已探明。现代中西医结合杂志2004，13(8)999]。
由丹参、三七、冰片三味药组成的复方丹参制剂在临床上有多种剂型，但只限于口服制剂[专利文献CN02158104.5]。对于复方丹参制剂的专利，对其固体剂型报道的较多，专利CN01136155.7和专利CN02158104.5分别公开了该复方制剂的固体剂型及其制备方法；专利CN01133333.2则公开了该复方制剂的缓释和控释剂型和制备方法；专利CN02157383、CN02157377、CN02157379、CN02157380、CN02157382则公开了包括复方丹参的整个固体剂型。申请号为CN98103032、CN02133724、CN02144600、CN031112650的专利文献中有复方丹参注射液的报道，但原料是由丹参和降香两味药组成。由三七或丹参单味药有效部位制成的注射制剂有较多报道。专利CN99106223公开了由三七总皂苷制成的注射剂。
丹参的水溶性有效成分药理作用强，其中包括丹参素和多种酚酸类成分。丹参素为咖啡酸的水解产物3，4二羟基苯基乳酸，迷迭香酸为咖啡酸与丹参素酯化缩合而成，原紫草酸由二分子的咖啡酸缩合，它进一步与一分子或两分子的丹参素进一步缩合，形成紫草酸和紫草酸乙，其它的寡聚咖啡酸类化合物结构中亦都含有丹参素的单元。这些丹酚酸类成分在提取、纯化的过程中很不稳定，在加热条件下就容易水解成为丹参素[陈彦，等。不同提取方法测定丹参药材中丹参素含量的比较研究。江苏中医药，2003，24(6)55]。在现有的丹参的制备工艺中，为了防止丹酚酸在提取过程中发生水解，采用了例如超声提取、旋转刮膜浓缩、聚酰胺除杂、大孔吸附树脂除杂、冷冻干燥等工艺，在制剂中还必须加入一些稳定剂，来防止在贮藏、运输过程中发生水解。这些措施，不但使得药物的制备过程非常繁琐，造成有效成分的损失，而且生产周期长，投资大，药物成本高。制成的药物，以丹酚酸为指标进行含量测定，也存在一定的困难；以丹酚酸含量为指标，其成分的少量水解，便会使药物中的丹酚酸类成分下降，使得药物含量不合格。所以现有的复方丹参注射液是以丹参素的含量为指标。但是，丹参素含量测定的结果并不能真实的反映出药物中最初的丹参素含量的高低，因而药品合格与否无法判断，从而在临床上给个体差异较大的患者的准确用药带来困难。剂量过大会引起患者的不良反应增加，剂量过小又达不到预期的治疗效果。史亦丽等和张建华等通过对市售的不同厂家和同一厂家的不同批号的8个复方丹参注射液中的丹参素进行了含量测定，结果样品间的丹参素含量有非常显著性的差异[史亦丽，等。复方丹参注射液的质量考核研究。中国药学杂志，2002，37(4)300；张建华，等。复方丹参注射液中丹参活性成份考察。浙江中医学院学报，2001，25(4)64]。不同厂家和同一厂家用相同的生产方法制备的复方丹参注射剂中丹参素的含量有如此大的差别，说明除了药材本身含量差异的原因之外，制剂所含成分的不稳定是含量差异显著的最大影响因素。因此，制备质量可控、疗效确切的丹参提取物非常重要。
采用水提醇沉工艺除去丹参提取物中的杂质时，乙醇的浓度对于有效成分的含量也起者很重要的作用。乙醇浓度小，达不到醇沉的效果；但随着乙醇浓度的增大，提取液中丹参素的含量明显降低[李淑莉，等。不同浓度乙醇沉淀对丹参素回收率影响的研究。基层中药杂质，1995，9(1)21]。申请号为CN02144600、CN02133724、CN90107488的专利申请文献，在丹参提取物的制备工艺中，为了尽可能除去多的杂质，都采用高浓度的乙醇沉淀除杂的工艺，这会对丹参素的含量造成很大损失。
冰片为脂溶性成分，在注射液中的溶解度较小，也给制备成注射制剂带来困难。
在专利检索中未见有丹参、三七、冰片三味药组方的注射液，特别是冻干粉针剂的报道。冻干粉针剂具有起效迅速，稳定便于运输、贮存等优点，对于稳定性不好的丹参提取物更为适合。因此，进一步开发复方丹参制剂特别是其冻干粉针剂型，将会具有广阔的市场前景。
发明内容
本发明是对复方丹参片(见《药典》2000年版一部，国家药典委员会编)的剂型改进，目的在于提供一种起效迅速、剂型先进、制剂稳定、质量可控、用药安全的注射用复方丹参冻干粉针剂及其制备方法。本发明采用水提，碱水解、醋酸乙酯萃取的方法从丹参中提取以丹参素为主的有效成分；采用水提醇沉法、过大孔吸附树脂柱的方法从三七中提取和纯化三七总皂苷类有效成分；利用羟丙基β-环糊精(HP-β-CD)对处方中的冰片进行包合，解决了其在注射液水溶液中溶解难的问题，提高了制剂的质量和临床疗效。本发明的制备方法中还采用超滤法，保证了注射液的澄明度和热原合格，使注射剂的质量和疗效得到显著提高。
本发明通过以下技术方案实现一、工艺制法(1)原料药的处方为丹参400-500重量份，冰片6-10重量份，三七120-160重量份；(2)取丹参药材饮片粉碎，加6-10倍量的水煎煮2-4次，每次1-3小时，合并提取液过滤，滤液放冷，高速离心(15000rpm)，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液加入碱液调pH值9-11，煮沸0.5-3小时，放冷，冷藏(4℃)24小时后过滤，滤液用有机酸或无机酸调节pH值为2-3，用0.5～3倍的醋酸乙酯萃取3～9次，合并醋酸乙酯液，减压浓缩干燥，得到以丹参素为主要成分的丹参提取物。
(3)取三七药材饮片粉碎，用6-12倍量水煎煮提取1-3次，每次1-2小时，合并提取液过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.15-1.16，加乙醇使含醇量达60％-70％，静置后过滤，滤液加乙醇使含醇量达70％-85％，静置后过滤，滤液浓缩至无醇味，加水稀释(溶液∶药材为1∶1)，高速离心，上清液过已处理好的大孔吸附树脂柱，先用3-6倍柱体积的水洗脱，再用5-8倍柱体积的40％-80％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液回收至无醇味，浓缩，干燥，粉碎，得到以三七皂苷为主要成分的三七提取物。
(4)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液缓慢滴加到HP-β-CD饱和液中，并不停搅拌。加完后，50℃再继续搅拌3小时，冷藏过夜，滤过，沉淀低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物。
(4)取上述丹参提取物、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD液混合，加入冻干赋型剂，加注射用水至规定量，调节pH值至7.0-8.5，灌装，冷冻干燥，即得。
二、不同方法制备的丹参提取物中丹参素的含量比较1.仪器与试药 高效液相色谱仪包括LC-10ATvp型溶剂输送泵，SPD-10ATvp型紫外可见检测器(日本岛津公司)；N2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)；KQ3200型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，TGL-16G高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。色谱纯甲醇(北京化学试剂有效公司)；水为三蒸水(自制)；其它试剂均为分析纯。丹参素对照品(中国药品生物制品检定所)。
1号丹参提取物，100g丹参药材按专利CN95115854的方法制备；2号丹参提取物，100g丹参药材按专利CN98103032的方法制备；3号丹参提取物，100g丹参药材按本发明丹参提取物的制备方法制备；三份样品均由北京乾露春科技有限公司实验室提供。
2.色谱条件与系统适用性试验 色谱柱迪马公司C18柱(5μm，150mm×4.6mm，I.D)；流动相甲醇-5％乙酸(25∶75)；流速1.0ml/min；检测波长280nm。理论板数按丹参素峰记算应不低于3000。
3.对照品溶液制备 精密称取丹参素对照品5.0mg，置入10ml量瓶中，加入甲醇，超声使溶解，再加甲醇至刻度，摇匀，即得。
4.标准曲线制备 分别精密吸取上述对照品溶液1μl、2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、12μl，在上述测定条件下进样测定，结果丹参素在0.5μg～6.0μg范围内呈良好线性关系，回归方程为Y＝9726483X+3989，r＝0.9997。
5.供试品溶液的制备 精密称定各丹参提取物约10mg，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液离心(12000rpm)10min，上清液作为供试品溶液。
6.测定法 精密吸取供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，用标准曲线计算含量。结果见表1。
表1 不同方法制备的丹参提取物中丹参素含量比较样品编号 丹参素含量(％)1 4.462 6.723 28.57由以上测定结果可以看出，本发明的丹参提取物中的有效成分丹参素的含量，明显高于其它两种丹参提取物的含量，说明本发明的制备工艺更加合理，更加科学，更具有实际意义。
三、不同方法制备的丹参提取物的稳定性考察取不同方法制备的丹参提取物，用注射用水溶解，定容至等体积。在80℃的恒温水浴(温差±1℃)内加热放置2天。时间到后，立即取样，迅速以冰水浴冷却，依照上述方法测定丹参素的含量。结果见表2。
表2 不同方法制备的丹参提取物的稳定性考察丹参素含量(mg/ml)样品编号0天2天1 4.46 6.462 6.72 8.823 28.57 28.62
由以上检查结果可以看出，本发明丹参提取物的溶液中的丹参素的含量稳定，而其它方法制备的丹参提取物的丹参素的含量显著增加。说明本发明的制备工艺在制备的过程中已使有效成分基本上为丹参素，因而更易于质量控制、更易于临床用药。说明本制备方法更加合理，更加科学，更具有实际意义，完全符合注射制剂的要求。
四、本发明的丹参提取物中丹参素和三七提取物中三七总皂苷的含量测定五批丹参提取物和三七提取物由北京乾露春科技有限公司提供。丹参素的含量测定方法按照上述方法测定；三七总皂苷的含量测定方法按照参考文献[魏凤玲，等。三七总皂苷提取工艺优选。中国中药杂志，2000，25(12)722]中的三七总皂苷含量测定方法测定；结果见表3表3 五批提取物中的成分含量测定结果含量(w/w，％)批号丹参素三七总皂苷128.57 67.58226.75 56.34329.73 63.52427.28 57.63530.37 60.08由以上测定结果可以看出，本发明的丹参提取物中丹参素重量百分含量大于25％，三七提取物中三七总皂苷重量百分含量大于55％。
五、药理实施例1.对小鼠缺氧耐力的影响实验实验方法取健康昆明种小鼠30只，体重20～24g。随机分成对照组，复方丹参注射液组、本发明复方丹参冻干粉针组。每组10只，雌雄各半，分笼饲养。以人常规治疗剂量折算为小鼠的剂量。折算公式为待测动物试用剂量＝已知动物给药量×待测动物的体表面积比值/已知动物的体表面积比值。对照组给生理盐水，1次/d，连续7d。于末次给药后1h，将小鼠分别置于体积为150ml磨口瓶中，内放15g钠石灰，密闭观察其存活时间。结果见表4。
表4 对小鼠常压缺氧的影响(X±SD)组别鼠数(只)平均存活时间(min)对照组 10 16.44±2.57复方丹参注射液组 1026.85±2.25*本发明复方丹参冻干粉针剂组 10 30.94±3.245*#注与对照组比较*P＜0.001 ；与复方丹参注射液组比较#P＜0.05复方丹参注射液、本发明复方丹参冻干粉针剂均能提高小鼠常压缺氧耐力，平均存活时间比对照组显著延长(P＜0.01)；本发明复方丹参冻干粉针剂和复方丹参注射液相比，平均存活时间也有差异(P＜0.05)。说明复方丹参冻干粉针剂的作用强于复方丹参注射液。
2.对小鼠心肌缺氧的保护作用实验实验方法取健康昆明种小鼠30只，体重18～22g，随机分成3组，对照组，复方丹参注射液组、本发明复方丹参冻干粉针剂组。每组雌雄各半，分笼饲养。以人常规治疗剂量折算为小鼠的剂量。折算公式为待测动物试用剂量＝已知动物给药量×待测动物的体表面积比值/已知动物的体表面积比值。对照组给生理盐水，给药方法1次/d，连续6d。于末次给药后1h用乌拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉，背部固定，分离气管，以动脉夹夹闭气管，用心电仪观察心电，并用秒表记下小鼠夹闭气管后至心电消失的时间。结果见表5。
表5 对小鼠心肌缺氧的影响(X±SD)组别鼠数(只)平均存活时间(min)对照组105.83±0.64复方丹参注射液组 1010.52±0.87*本发明复方丹参冻干粉针剂组1012.14±0.74*#注与对照组比较*P＜0.001；与复方丹参注射液组比较#P＜0.05
复方丹参注射液、本发明复方丹参冻干粉针剂均能对小鼠心肌缺氧起保护作用，平均存活时间比对照组显著延长(P＜0.01)；本发明复方丹参冻干粉针剂和复方丹参注射液相比，平均存活时间也有差异(P＜0.05)。说明本发明复方丹参冻干粉针剂的药理作用强于复方丹参注射液。
3.对垂体后叶素所致大鼠缺血性心电图T波的影响取体重250～300g Wistar大鼠30只，雌雄各半，随机分为3组，每组10只，连续ip.给药7d。各组动物于末次给药30min后，腹腔注射25％乌拉坦0.4ml/100g麻醉，仰卧固定，标准电压1mv＝15mm，走纸速度50mm/s，记录II导联心电图。舌下静脉注射垂体后叶素0.75u/kg于5s内注射完。每30s记录一次心电图。大鼠静脉注射垂体后叶素1min内，大多数表现为心率减慢，T波高耸，ST段抬高等变化。分别观察用药前后30s、1min及50min上T波增殖的变化。结果见表6。
表6 对垂体后叶素所致大鼠缺血性心电图T波的影响。
鼠数T波增值(mV)组别(只)30s 1min5min生理盐水组 10 0.37±0.17 0.26±0.15 0.19±0.031复方丹参注射液组 10 0.25±0.07*0.17±0.06*0.092±0.014*本发明复方丹参冻干粉针剂组 10 0.21±0.06*# 0.13±0.04*# 0.063±0.018*#注与对照组比较*P＜0.01；与复方丹参注射液组比较#P＜0.05本发明复方丹参冻干粉针剂和复方丹参注射液均能显著降低30s、1min及5min时的T波增殖(P＜0.01)；本发明复方丹参冻干粉针剂和复方丹参注射液相比，降低的程度也有差异(P＜0.05)。说明本发明复方丹参冻干粉针剂的药理作用强于复方丹参注射液。
六、制备实施例实施例1(1)原料药的处方为丹参500g，冰片10g，三七160g；
(2)取丹参药材饮片粉碎，加10倍量的水煎煮4次，每次3小时，合并提取液过滤，滤液放冷，高速离心(15000rpm)，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液加入Na(OH)2碱液调pH值为9，煮沸3小时，放冷，冷藏(4℃)24小时后过滤，滤液用盐酸调节pH值为1，用3倍的醋酸乙酯萃取9次，合并醋酸乙酯液，减压浓缩干燥，得到以丹参素为主要成分的丹参提取物(经检测丹参素重量百分含量为28.57％)。
(3)取三七药材饮片粉碎，用12倍量水煎煮提取3次，每次2小时，合并提取液过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.15，加乙醇使含醇量达60％，静置后过滤，滤液加乙醇使含醇量达70％，静置后过滤，滤液浓缩至无醇味，加水稀释(溶液∶药材为1∶1)，高速离心，上清液过已处理好的D101型大孔吸附树脂柱，先用3倍柱体积的水洗脱，再用8倍柱体积的80％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液回收至无醇味，浓缩，干燥，粉碎，得到以三七皂苷为主要成分的三七提取物(经检测三七总皂苷重量百分含量为67.58％)。
(4)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液缓慢滴加到HP-β-CD饱和液中，并不停搅拌。加完后，50℃再继续搅拌3小时，冷藏过夜，滤过，沉淀低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物。
(5)取上述丹参提取物、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD液混合，加入甘露醇，加注射用水至1000ml，调节pH值至8.5，灌装，冷冻干燥，即得复方丹参冻干粉针剂500瓶。
实施例2(1)原料药的处方为丹参400g，冰片6g，三七120g；
(2)取丹参药材饮片粉碎，加6倍量的水煎煮2次，每次1小时，合并提取液过滤，滤液放冷，高速离心(15000rpm)，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液加入NaCO3碱液调pH值11，煮沸0.5小时，放冷，冷藏(4℃)24小时后过滤，滤液用硫酸调节pH值为3，用0.5倍的醋酸乙酯萃取3次，合并醋酸乙酯液，减压浓缩干燥，得到以丹参素为主要成分的丹参提取物(经检测丹参素重量百分含量为26.75％)。
(3)取三七药材饮片粉碎，用6倍量水煎煮提取1次，每次1小时，合并提取液过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.16，加乙醇使含醇量达70％，静置后过滤，滤液加乙醇使含醇量达85％，静置后过滤，滤液浓缩至无醇味，加水稀释(溶液∶药材为1∶1)，高速离心，上清液过已处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱，先用6倍柱体积的水洗脱，再用5倍柱体积的40％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液回收至无醇味，浓缩，干燥，粉碎，得到以三七皂苷为主要成分的三七提取物(经检测三七总皂苷重量百分含量为56.34％)。
(4)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液缓慢滴加到HP-β-CD饱和液中，并不停搅拌。加完后，50℃再继续搅拌3小时，冷藏过夜，滤过，沉淀低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物。
(5)取上述丹参提取物、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD液混合，加入乳糖和葡聚糖，加注射用水至1000ml，调节pH值至7.0，灌装，冷冻干燥，即得复方丹参冻干粉针剂500瓶。
实施例3(1)原料药的处方为丹参450g，冰片8g，三七141g；
(2)取丹参药材饮片粉碎，加8倍量的水煎煮3次，每次2小时，合并提取液过滤，滤液放冷，高速离心(15000rpm)，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液加入Ca(OH)2碱液调pH值为10，煮沸2小时，放冷，冷藏(4℃)24小时后过滤，滤液用磷酸调节pH值为2，用1.5倍的醋酸乙酯萃取7次，合并醋酸乙酯液，减压浓缩干燥，得到以丹参素为主要成分的丹参提取物(经检测丹参素重量百分含量为29.73％)。
(3)取三七药材饮片粉碎，用8倍量水煎煮提取2次，每次2小时，合并提取液过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.15，加乙醇使含醇量达65％，静置后过滤，滤液加乙醇使含醇量达80％，静置后过滤，滤液浓缩至无醇味，加水稀释(溶液∶药材为1∶1)，高速离心，上清液过已处理好的D101型大孔吸附树脂柱，先用4倍柱体积的水洗脱，再用6倍柱体积的70％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液回收至无醇味，浓缩，干燥，粉碎，得到以三七皂苷为主要成分的三七提取物(经检测三七总皂苷重量百分含量为63.52％)。
(4)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液缓慢滴加到HP-β-CD饱和液中，并不停搅拌。加完后，50℃再继续搅拌3小时，冷藏过夜，滤过，沉淀低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物。
(5)取上述丹参提取物、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD液混合，加入聚乙烯吡咯烷酮和葡萄糖和果糖，加注射用水至1000ml，调节pH值至7.5，灌装，冷冻干燥，即得复方丹参冻干粉针剂500瓶。
实施例4(1)原料药的处方为丹参430g，冰片9g，三七130g；
(2)取丹参药材饮片粉碎，加9倍量的水煎煮3次，每次3小时，合并提取液过滤，滤液放冷，高速离心(15000rpm)，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液加入KOH碱液调pH值为10，煮沸1小时，放冷，冷藏(4℃)24小时后过滤，滤液用醋酸调节pH值为1，用2.5倍的醋酸乙酯萃取4次，合并醋酸乙酯液，减压浓缩干燥，得到以丹参素为主要成分的丹参提取物(经检测丹参素重量百分含量为27.28％)。
(3)取三七药材饮片粉碎，用10倍量水煎煮提取3次，每次1小时，合并提取液过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.15，加乙醇使含醇量达68％，静置后过滤，滤液加乙醇使含醇量达73％，静置后过滤，滤液浓缩至无醇味，加水稀释(溶液∶药材为1∶1)，高速离心，上清液过已处理好的AB-8型大孔吸附树脂柱，先用5倍柱体积的水洗脱，再用5倍柱体积的50％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液回收至无醇味，浓缩，干燥，粉碎，得到以三七皂苷为主要成分的三七提取物(经检测三七总皂苷重量百分含量为57.63％)。
(4)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液缓慢滴加到HP-β-CD饱和液中，并不停搅拌。加完后，50℃再继续搅拌3小时，冷藏过夜，滤过，沉淀低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物。
(5)取上述丹参提取物、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD液混合，加入乳糖和右旋果糖和葡聚糖，加注射用水至1000ml，调节pH值至8.0，灌装，冷冻干燥，即得。
实施例5(1)原料药的处方为丹参480g，冰片7g，三七150g；(2)取丹参药材饮片粉碎，加7倍量的水煎煮2次，每次2小时，合并提取液过滤，滤液放冷，高速离心(15000rpm)，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液加入CaCO3和KCO3碱液调pH值为9，煮沸2.5小时，放冷，冷藏(4℃)24小时后过滤，滤液用冰醋酸调节pH值为2，用1倍的醋酸乙酯萃取6次，合并醋酸乙酯液，减压浓缩干燥，得到以丹参素为主要成分的丹参提取物(经检测丹参素重量百分含量为30.37％)。
(3)取三七药材饮片粉碎，用9倍量水煎煮提取2次，每次2小时，合并提取液过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.16，加乙醇使含醇量达63％，静置后过滤，滤液加乙醇使含醇量达77％，静置后过滤，滤液浓缩至无醇味，加水稀释(溶液∶药材为1∶1)，高速离心，上清液过已处理好的NKA型大孔吸附树脂柱，先用5倍柱体积的水洗脱，再用7倍柱体积的60％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液回收至无醇味，浓缩，干燥，粉碎，得到以三七皂苷为主要成分的三七提取物(经检测三七总皂苷重量百分含量为60.08％)。
(4)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液缓慢滴加到HP-β-CD饱和液中，并不停搅拌。加完后，50℃再继续搅拌3小时，冷藏过夜，滤过，沉淀低温干燥，得冰片HP-β-CD包合物。
(5)取上述丹参提取物、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD液混合，加入甘露醇和乳糖，加注射用水至1000ml，调节pH值至7.2，灌装，冷冻干燥，即得复方丹参冻干粉针剂500瓶。
权利要求
1.一种含丹参素、三七总皂苷和冰片的药物组合组，其特征在于它是由丹参提取物、三七提取物和冰片的羟丙基β-环糊精包合物以及药用辅料制备而成的；其特征还在于丹参提取物中丹参素重量百分含量大于或等于25％，三七提取物中三七总皂苷重量百分含量大于或等于55％。
2.根据权利要求1所述的药物组合物为冻干粉针剂。
3.一种含丹参素、三七总皂苷和冰片的药物组合组的制备方法，其特征包括以下步骤(1)原料药的处方为丹参400-500重量份，冰片6-10重量份，三七120-160重量份；(2)取丹参药材饮片粉碎，加6-10倍量的水煎煮2-4次，每次1-3小时，合并提取液过滤，滤液放冷，以15000转/分离心，离心液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，滤液加入碱液调pH值9-11，煮沸0.5-3小时，放冷，冷藏(4℃)24小时后过滤，滤液用有机酸或无机酸调节pH值为2-3，用0.5～3倍的醋酸乙酯萃取3～9次，合并醋酸乙酯液，减压浓缩干燥，得到以丹参素为主要成分的丹参提取物。(3)取三七药材饮片粉碎，用6-12倍量水煎煮提取1-3次，每次1-2小时，合并提取液过滤，滤液50℃浓缩至相对密度为1.15-1.16，加乙醇使含醇量达60％-70％，静置后过滤，滤液加乙醇使含醇量达70％-85％，静置后过滤，滤液浓缩至无醇味，加水稀释(溶液∶药材为1∶1)，高速离心，上清液过已处理好的大孔吸附树脂柱，先用3-6倍柱体积的水洗脱，再用5-8倍柱体积的40％-80％的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液回收至无醇味，浓缩，干燥，粉碎，得到以三七皂苷为主要成分的三七提取物。(4)冰片用无水乙醇溶解成近饱和液备用；另取HP-β-CD加注射用水制成饱和溶液，将冰片乙醇液缓慢滴加到HP-β-CD饱和液中，并不停搅拌。加完后，50℃再继续搅拌3小时，冷藏过夜，滤过，去沉淀，得冰片HP-β-CD包合物。(5)取上述丹参提取物、三七提取物加注射用水溶解，滤过，滤液用截留分子量为5000的超滤膜超滤，超滤液与冰片HP-β-CD液混合，加入冻干赋型剂，加注射用水至规定量，调节pH值至7.0-8.5，灌装，冻冷干燥，即得。
4.根据权利要求3所述的碱液是氢氧化钠、碳酸钠、氢氧化钙、碳酸钙、氢氧化钾、碳酸钾等无机碱的水溶液。
5.根据权利要求3所述的大孔吸附树脂可以是非极性或弱极性的大孔吸附树脂。
6.根据权利要求3所述的冻干赋形剂是甘露醇、葡聚糖、葡萄糖、果糖、右旋果糖、聚乙烯吡咯烷酮和乳糖中的一种、两种或几种的混合物。
全文摘要
本发明公开了一种含丹参素、三七总皂苷和冰片的药物组合物及其制备和应用。它是由以丹参素为主要有效成分的丹参提取物、以三七总皂苷为主要有效部位的三七提取物和冰片的羟丙基β－环糊精包合物以及药用辅料组成的复方丹参冻干粉针剂。本发明采用水提、超滤、碱水解、醋酸乙酯萃取相结合的方法从丹参中提取以丹参素为主的有效成分；采用水提醇沉法、过大孔树脂柱的方法从三七中提取和纯化三七总皂苷类有效成分；利用羟丙基β－环糊精(HP－β－CD)对处方中的冰片进行包合，解决了其在注射液水溶液中溶解难的问题，提高了制剂的质量和临床疗效。本发明用于预防和治疗心脑血管疾病。含量测定和药理实验表明，本发明复方丹参冻干粉针剂具有有效成分含量高，疗效显著的特点。
文档编号A61P9/10GK1586492SQ200410071050
公开日2005年3月2日 申请日期2004年7月28日 优先权日2004年7月28日
发明者张正生 申请人:张正生