专利名称：应用促性腺激素释放激素的组合物和方法
背景技术：
促性腺激素释放激素(GnRH)的激动剂和拮抗剂被用来治疗包括月经前期综合征的良性妇科病症和雄性激素依赖性前列腺癌。GnRH也被称为促黄体激素释放激素。GnRH由垂体门脉系统中的下丘脑以脉冲方式分泌。因为激素只有分钟级的半衰期，因此垂体腺就暴露在脉冲波动的激素之中。这种暴露导致了促性腺激素，也就是促黄体生成素(LH)和促卵泡生成素(FSH)的分泌。在男性体内LH作用于睾丸间质细胞，刺激睾丸酮的分泌。FSH负责精子的产生。睾丸酮似乎对GnRH的分泌具有反馈抑制作用，可降低垂体对激素的敏感性。在女性体内，FSH作用于卵巢，刺激雌激素的分泌。LH在女性体内的主要作用是支持卵泡发育成熟，在卵泡周期的中期触发排卵。和睾丸酮一样，雌激素似乎能够反馈抑制GnRH的分泌和作用。
已经发现施用有效的GnRH激动剂会导致初期LH的突然上升和FSH释放，接下来垂体的GnRH受体全面下调。结果，不再释放LH和FSH，性激素在女性和男性体内分别降低到卵巢已切除水平和睾丸已切除或已阉割水平。GnRH激动剂的高剂量长效制剂的发展使得可以持续性抑制性类固醇激素的产生，方便药物的使用。
典型地，前列腺癌在最初期是雄性激素依赖性的，而在后期转变成雄性激素非依赖性的。已经以单独治疗或与其他治疗模式如手术、外部射线放射治疗、近距离放疗等一起使用的方式实施了多种消除雄性激素的治疗方法。口服高剂量半合成雌激素化合物二乙基己烯雌酚是最早期治疗前列腺癌的非手术选择之一。这种治疗在消退前列腺癌方面和睾丸切除术同样有效。然而不幸的是口服施用的高剂量雌激素化合物会导致包括水肿和深部静脉血栓形成的心血管并发症。当可以利用基本上不具有心血管毒性的GnRH激动剂和拮抗剂时，二乙基己烯雌酚治疗就被放弃了。
GnRH激动剂在临床诱导前列腺癌消退方面和治疗的金标准——睾丸切除术同样有效，但施用它们伴随有其他重要的毒性，包括有疲劳、体重增加、抑郁、骨丢失、贫血、肌肉萎缩、男子乳腺发育，热潮红，认知功能的丧失和高密度脂蛋白的减少。Hellerstedt和Pienta.CA Cancer J Clin 2002；52154-179。也许影响生存质量最严重的并发症是骨矿物质密度损耗和热潮红。
因为睾丸酮是男性体内循环的主要性激素，因此在很长时间里一直推测认为导致外科手术阉割男性或GnRH激动剂或拮抗剂治疗的前列腺癌病人的骨更新和骨矿物质密度损耗增加是由于这种激素的缺乏引起的。然而最近的观查研究令人惊讶地表明男性体内骨矿物质密度与雌激素水平的相关性比与雄性激素水平的相关性高。Khosla等.J Clin Endocrinol Metab 2002；871443-1450.一项介入研究表明雌激素补充给药疗法可以防止用GnRH激动剂治疗的老年男性体内出现的GnRH诱导的骨形成标记下降和骨吸收标记增加。Khosla等.J ClinEndocrinol Metab 2001；863555-3561。最后，另一项研究表明对芳香酶活性的特异性抑制也会导致骨吸收标记显著增加和骨形成标记下降。Taxel等.JClin Endocrinol Metab 2002；874907-4913。
发明概述本发明涉及包含有在至少大约一个月，优选至少两个月，更优选至少三个月的时间里能够以足以诱导和维持男性病人化学性阉割的速率释放GnRH组分的促性腺激素释放激素(这里简称为GnRH)组分的第一缓释制剂和能够维持所述期间血清水平，以足以减少通常由应用GnRH组分化学性阉割男性病人所引起的骨矿物质密度损耗增加和热潮红的雌激素组分的第二缓释制剂的组合物。
优选地，本发明组合物的第一缓释制剂以约10-1,000μg/天的速率释放GnRH组分。本发明的第二缓释制剂以包含至少第一起始阶段和第二阶段的曲线释放雌激素。在第一起始阶段的过程中，本发明的第二缓释制剂表现为起始爆发释放减弱。在第二阶段的过程中，第二缓释制剂以10-100μg雌二醇等价物/天的速率，优选以不超过大约50μg雌二醇等价物/天的速率释放雌激素组分。优选地，在第一起始阶段释放的雌激素组分不超过上述第二阶段中每天释放的雌激素组分上限的5倍，更优选地不超过3倍。
在本发明的不同实施方案中，组合物不局限于供参考的用于男性病人化学性阉割的组合物。其定义为包含在至少大约一个月的时期内能够以大约10-1000μg/天的平均速率释放GnRH组分的GnRH组分的第一缓释制剂和能够以包含上述至少第一起始阶段和第二阶段的曲线下在所述时间内释放雌激素组分的雌激素组分的第二缓释制剂。
在本发明的组合物中，第一缓释制剂的GnRH组分选自GnRH，GnRH激动剂，GnRH拮抗剂和它们的混合物。优选地，GnRH组分是从亮丙瑞林，戈舍瑞林，曲普瑞林，布舍瑞林，那法瑞林，地落瑞林，海斯瑞林，戈那瑞林和它们的盐，以及它们的混合物中选出的GnRH激动剂。
出现在第二缓释制剂中的雌激素组分选自氯烯雌酚，己二烯雌酚，二乙基己烯雌酚，二丙酸己烯雌酚，二乙基己烯雌酚单苄基醚，去氢马烯雌酮，去氢马烯雌酮硫酸盐，雌四醇，雌二醇，(3α，17β)-雌-4-烯-3，17-二醇，雌三醇，半琥珀酸雌三醇，雌酮，雌酮硫酸一钠，雌酮硫酸钾，乙炔雌二醇，磷雌酚四钠，己雌酚，羟雌酮二醋酸盐，美雌醇，松焦油，硫酸哌嗪雌酮，丙甲雌三烯，炔雌醚，三苯氧胺，脱瑞米酚，雷洛昔芬，拉索昔芬和它们的混合物。
在优选的组合物中，第一缓释制剂的GnRH组分是曲普瑞林或其盐，第二缓释制剂中的雌激素组分是雌二醇。在最优选的组合物中，第一缓释制剂的GnRH组分是以大约100μg/天速率释放的曲普瑞林或其盐，第二缓释制剂中的雌激素组分是在所述第二阶段中以大约25-50μg/天速率释放的雌二醇。
本发明进一步涉及一种治疗前列腺癌的方法，包括向前列腺癌病人施用包含有在至少大约一个月，优选至少两个月，更优选至少三个月的时间内能够以足以诱导和维持病人化学性阉割的速率释放GnRH组分的GnRH组分的第一缓释制剂和能够维持所述期间血清水平足以减少通常由应用GnRH组分化学性阉割男性病人所引起的骨矿物质密度损耗增加和热潮红的雌激素组分的第二缓释制剂的组合物。
给前列腺癌病人施用的组合物中的第一缓释制剂优选地以大约10-1,000μg/天的速率释放GnRH组分，第二缓释制剂以大约10-100μg/天的速率释放雌激素组分。最优选地，按照本发明的方法给前列腺癌病人施用的第二缓释制剂以包含上述至少第一起始阶段和第二阶段的曲线释放雌激素，其中第一起始阶段的爆发释放减弱。
按照本发明的方法施用的组合物中第一缓释制剂的GnRH组分选自GnRH，GnRH激动剂，GnRH拮抗剂和它们的混合物。优选地，GnRH组分是从亮丙瑞林、戈舍瑞林、曲普瑞林、布舍瑞林、那法瑞林、地落瑞林、海斯瑞林、戈那瑞林和它们的盐，以及它们的混合物中选出的GnRH激动剂。
出现在第二缓释制剂中的雌激素组分选自氯烯雌酚，己二烯雌酚，二乙基己烯雌酚，二丙酸己烯雌酚，二乙基己烯雌酚单苄基醚，去氢马烯雌酮，去氢马烯雌酮硫酸盐，雌四醇，雌二醇，(3α，17β)-雌-4-烯-3，17-二醇，雌三醇，半琥珀酸雌三醇，雌酮，雌酮硫酸一钠，雌酮硫酸钾，乙炔雌二醇，磷雌酚四钠，己雌酚，羟雌酮二醋酸盐，美雌醇，松焦油，硫酸哌嗪雌酮，丙甲雌三烯，炔雌醚，三苯氧胺，脱瑞米酚，雷洛昔芬，拉索昔芬和它们的混合物。
参照本发明的方法施用的优选组合物中，第一缓释制剂的GnRH组分是曲普瑞林或其盐，第二缓释制剂中的雌激素组分是雌二醇。在本发明方法所施用的最优选的组合物中，第一缓释制剂的GnRH组分是以大约100μg/天速率释放的曲普瑞林或其盐，第二缓释制剂中的雌激素组分是以大约25-50μg/天速率释放的雌二醇。本发明的组合物可以采用皮下，肌肉内或经皮途径给药。
发明详述本发明涉及一种新的组合物和利用这些组合物治疗激素反应性前列腺癌的用途，这种治疗不诱发以前文献中出现的激素消除治疗特有的严重副作用。本发明的组合物包含同时给病人施用的两种缓释制剂，第一种含有促性腺激素释放激素(GnRH)组分，第二种含有雌激素组分。可以在施用时或在制备时将两种制剂结合。典型地，本发明的缓释制剂在至少大约一个月的时期内有效。有效时间可长达一年。认为具有更长持续时间的制剂也在本发明的范围内。优选设计本发明组合物的治疗时间为一到三个月，一到三个月后再次施用该组合物。
第一缓释制剂包含一种GnRH组分。已经描述过多种抑制促性腺激素分泌，从而抑制男性雄性激素类和女性雌激素类的分泌的化合物。在男性体内雌激素来源于芳香酶反应的睾丸酮。GnRH组分既包含GnRH激动剂和拮抗剂，也包含GnRH本身。本发明的GnRH组分也可以由后面描述的化合物的混合物组成。GnRH拮抗剂通过与GnRH竞争垂体的GnRH受体而起作用。通常情况下，GnRH以脉冲方式被分泌。因为激素较高的更新变化，GnRH受体就暴露在发信号而释放的LH和FSH的波动性GnRH中。当高浓度的GnRH激动剂存在时，出现初期LH突然增高和FSH的释放后，GnRH受体下调和LH、FSH的释放降低导致信号通路被关闭。在几个星期的时间内，LH和FSH的释放完全被抑制。雌激素和睾丸酮浓度在女性和男性体内分别达到卵巢切除水平和睾丸切除或阉割水平。当雌激素和睾丸酮水平如此最低值时，对GnRH的反馈抑制不再出现。结果GnRH释放量达到最大。这种释放模式有助于维持GnRH受体的下调。已知的GnRH激动剂包括亮丙瑞林，戈舍瑞林，曲普瑞林，布舍瑞林，那法瑞林，地落瑞林，海斯特瑞林，戈那瑞林和它们的盐。一种已知的GnRH拮抗剂是阿巴瑞克。
已经研究出多种GnRH激动剂的缓释制剂，通过商业购买可获得这些制剂。可商业购买的GnRH激动剂的缓释制剂的实例包括Lake Forrest IL的TAP制药股份有限公司生产的长效黄体酮(Lupron Depot)3.75mg和长效黄体酮(LupronDepot)7.5mg。长效黄体酮(Lupron Depot)3.75mg包含3.75mg醋酸亮丙瑞林，0.65mg明胶，33.1mg DL-乳酸和羟乙酸共聚物，和6.6mgD-甘露醇。附随的稀释剂包含7.5mg羟甲基纤维素钠，75mg甘露醇，1.5mg聚山梨酯80，水，USP，和冰乙酸。缓释三个月的长效黄体酮Lupron Depot-3月22.5mg是一种给药间隔为三个月的肌肉注射制剂，含有22.5mg分散在聚丙交酯微球中的醋酸亮丙瑞林。美国专利No.4,728,721；4,849,228；5,330,767；5,476,663；5,480,656；5,575,987；5,631,020；5,643,607；5,716,640；5,814,342；5,823,997；5,980,488；6,036,976。醋酸亮丙瑞林的其他缓释制剂包括Atrix实验室研制的可缓释一个月的制剂Eligard和ALZA公司研制的缓释十二个月的制剂Viadur。3.6mg和10.8mg的Zoladex分别是可缓释一个月和三个月的由AstraZeneca销售的醋酸戈舍瑞林的长效制剂。Zoladex 3.6mg制剂中包含相当于13.3-14.3mg D，L-乳酸和羟乙酸共聚物中3.6mg戈舍瑞林的醋酸戈舍瑞林。Ferring公司和Ipsen-Beaufour分配的达必佳(Decapeptyl)是乙酸曲普瑞林或巴莫酸曲普瑞林的长效制剂。达必佳一月制剂包含3.75mg包裹在聚丙交酯-共-乙交酯微囊中的曲普瑞林。巴莫酸曲普瑞林的类似缓释制剂最近在德国被卫生当局批准，名称为Pamorelin。Pamorelin以持续一个月或三个月的缓释制剂形式存在(Pamorelin Depot 3.75mg，Pamorelin LA 11.25mg)。Pamorelin Depot 3.75mg是无菌冻干的生物降解微粒制剂，以含有巴莫酸曲普瑞林(3.75mg曲普瑞林肽)，170mg聚-d，1-聚丙交酯-共-乙交酯，85mg甘露醇，30mg羧甲基纤维素钠和2mg聚山梨酯80的单剂量药瓶形式提供。注射时将制剂混悬在2ml水中，肌肉内注射。Pamorelin LA 11.25mg是含有巴莫酸曲普瑞林(11.25mg曲普瑞林肽)，145mg聚-d，1-聚丙交酯-共-乙交酯，85mg甘露醇，30mg羧甲基纤维素钠和2mg聚山梨酯80的类似制剂。制剂被混悬在2ml水中，肌肉内注射。美国专利No.5,134,122，5,192,741和5,225,205描述了类似的制剂。这些专利在这里全部引入作为参考。
在本发明的组合物中也可以使用GnRH，GnRH激动剂，GnRH拮抗剂或它们的混合物的相似的缓释制剂。这些缓释制剂以除上述商业制剂中存在的聚丙交酯-乙交酯共聚物以外的可生物降解的和/或生物相容性聚合物为基础，这些聚合物包括乙烯醋酸乙烯酯，聚酐类，聚乙醇酸，胶原，聚原酯类和聚乳酸。这些聚合物和其他聚合物，以及用这些聚合物制备合适剂型的方法都是本领域熟练技术人员公知的。
本发明的第一缓释制剂优选是巴莫酸曲普瑞林的长效制剂，例如Pamorelin制剂，也可以使用GnRH激动剂或GnRH拮抗剂或GnRH本身的其他缓释制剂。任何以足以引起GnRH受体下调和降低女性体内性激素浓度达到卵巢切除水平和男性体内性激素浓度达到睾丸切除或阉割水平的速率持续释放GnRH激动剂或GnRH拮抗剂或GnRH的长效制剂都适于本发明。但精确的释放速率随所使用的GnRH激动剂(包括GnRH)或GnRH拮抗剂的特性，制剂的特性和给药模式而发生变化，合适的第一缓释制剂将以大约10-1,000μg/天的速率释放GnRH激动剂或拮抗剂。
GnRH激动剂或拮抗剂从第一缓释制剂中的释放将产生用GnRH激动剂或拮抗剂治疗时出现的公知的副作用。为了对抗这些副作用，特别是在前列腺癌病人中出现的骨矿物质密度损耗和热潮红，本发明的组合物还含有一种释放雌激素组分的第二缓释制剂。观察到的研究表明如果血清可生物利用的雌二醇水平为大约11pg/ml或高于11pg/ml，男性体内的骨矿物质密度损耗就不会发生。Khosia等.J Clin Endocrinol Metab 2002；871443-1450。考虑到老年男性体内性激素结合蛋白水平增高，相应地确定最小总血清雌二醇水平为大约30pg/ml。
由第二缓释制剂递送的雌激素组分既包含天然化合物，也包含合成化合物。优选的雌激素组分是雌二醇(化学名称β-雌-1，3，5(10)三烯-3，17-二醇；CAS RN50-28-2)。可用于本发明的其他雌激素组分的实例包括氯烯雌酚，己二烯雌酚，二乙基己烯雌酚，二丙酸己烯雌酚，二乙基己烯雌酚单苄基醚，去氢马烯雌酮，去氢马烯雌酮硫酸盐，雌四醇，雌三醇，半琥珀酸雌三醇，雌酮，雌酮硫酸一钠，雌酮硫酸钾，乙炔雌二醇，磷雌酚四钠，己雌酚，羟雌酮二醋酸盐，美雌醇，松焦油，硫酸哌嗪雌酮，丙甲雌三烯，炔雌醚，三苯氧胺和它们的混合物。由于这些雌激素组分的效能和药代动力学特性存在很大的不同，这些雌激素组分的用量和要达到的浓度也明显不同。为了本发明的目的，用雌激素组分的雌二醇等价量和浓度来定义它们的浓度和量。等价意味着取得的期望生物效应相似，例如使正在进行激素消除治疗的前列腺癌病人的骨矿物质密度损耗降低和/或使热潮红的频率和严重性下降的效果相似。
附加的雌激素组分包括选择性雌激素受体调节剂(SERM)，例如他莫昔芬，托瑞米芬，雷洛昔芬，替勃龙和拉索昔芬。Riggs & Hartman.2003.N Engl JMed 348，618-629.Ke等.2001.J Bone Miner Res 16，765-773.由于这些组分具有选择性，因此在本发明的第二缓释制剂中使用它们只能够产生应用雌激素时所产生的部分，而不是全部有益效果。例如，可以期望雷洛昔芬，托瑞米芬，他莫昔芬减慢骨吸收，但它们不能减少(有可能增强)热潮红发生的频率和严重性。雌激素组分也包括专利申请PCT/US02/18544中描述的被称为ANGELS的化合物(非健豪宁(non-genotropic)类雌激素样信号通路活化剂)。ANGELS化合物是能够模拟雌激素和雄激素的非健豪宁效应而实质上不产生健豪宁效应的小分子。优选的ANGELS化合物是(3α，17β)-雌-4-烯-3，17-二醇(CAS RN35950-87-9)，在小鼠模型中显示其可以逆转骨损耗。Kousteni et al2002.Science 298，843-846.
已经公知雌激素会增加心血管事件，特别是水肿和深部静脉血栓形成发生的概率。这种认识是口服己烯雌酚(diethylstilbesterone)实施GnRH激动剂治疗被放弃的一个主要原因。对绝经妇女的雌激素替补疗法进行了类似的观察。尽管把雌激素的给药途径从口服改为胃肠外给药可以使雌激素对前列腺癌病人的毒性减轻到一定程度，仍然存在与高剂量雌激素给药相关的显著的剩余风险。
为了有效对抗GnRH给药的不利副作用而不增加与高水平雌激素相关的风险，第二缓释制剂以计算后的较低速率释放雌激素组分，此速率只足以提供相当于约30pg/ml雌二醇的血清雌激素水平。由于个体之间的生物学差异，第二缓释制剂给药所达到的实际血清雌二醇或雌二醇等价物水平可以在大约10pg/ml和50pg/ml之间变化。
然而，缓释制剂的缺点之一是它们几乎不可避免地表现出以双峰动力学形式释放药物，即药物释放包含起始爆发释放和紧接着的释放速率非常低的延长缓释相。这种释放曲线足以劝阻大家为了本发明的目的而考虑使用这种制剂。
令人惊讶地发现本发明组合物中的一些第二缓释制剂显示出一种接近单峰的释放曲线。对于一种给定的雌激素组分，通过在包埋这种组分的生物降解性聚合材料和制备制剂的条件之间选择合适的折衷方案可以实现这一目的。已经证明可以提供合适剂型的聚合材料之一是聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)，优选两种共聚物之间的比例在85∶15和40∶60之间的材料，例如比例为50∶50或65∶35的材料。优选的合适剂型是微球形式，制备微球的方法之一是专业人员熟知的乳化/溶剂提取法。任选地将从不同批次中获得的至少两种缓释制剂混合有助于使释放曲线变平滑。
因此，由于药物从第二缓释制剂中的释放不存在重要的起始爆发释改，雌激素的浓度永远不会大大超出目标水平。计算出的雌激素组分的理想释放速率相当于约25μg雌二醇/天(清除率x期望的血清水平或增高的血清水平)。在施用第二缓释制剂给药后的前几天雌激素组分的最大释放速率相当于75μg雌二醇/天。对第二缓释制剂释放特征的严格限定使与高水平雌激素相关的风险保持在最低水平。
可以在给药时或在制备时将本发明组合物中的两种缓释制剂，即含有促性腺激素释放激素(GnRH)的第一种缓释制剂和含有雌激素组分的第二种缓释制剂结合。可以以固体形式，例如以冷冻干燥制剂的形式保存分开的或结合的制剂。
本发明的组合物在已经重组成可注射制剂后，单次肌肉内，例如臀部注射给药。
典型地，本发明的缓释制剂在至少大约一个月的时间里，优选至少两个月，更优选至少三个月的时间里有效。优选设计本发明组合物的治疗时间是一到三个月，一到三个月后该组合物再次给药。
在下面的实施例和附图中详细描述了本发明的组合物和其特性，其中-
图1表示从实施例1中获得的制剂(方块)和从实施例2中获得的制剂(圆)的雌二醇动力学曲线；-图2表示从实施例3中获得的组合制剂的雌二醇动力学曲线(菱形)和曲普瑞林动力学曲线(方块)；和-图3表示作对照的长效曲普瑞林制剂(方块)和从实施例3获得的组合制剂的曲普瑞林动力学曲线(菱形)。
实施例1在至少一个月的时间内释放曲普瑞林和雌二醇的组合物的制备1.曲普瑞林制剂按照美国专利No.5,134,122实施例1描述的方法获得这种制剂。
2.包埋在PLGA微球中的雌二醇制剂磁性搅拌下于40℃混合160g PVA(聚乙烯醇)和7840g MilliQ水制备水相(溶液A)。接着在磁性搅拌下将4.9g的50∶50聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)聚合物(特性粘度(iv)＝0.42dl/g)溶解在50g醋酸乙酯中制备有机相(溶液B)。将100mg雌二醇溶解在800μl DMSO(二甲亚砜)中(溶液C)。
将溶液B和溶液C混合在一起，以5ml/分钟的速率将获得的溶液抽吸到匀浆器中。以750ml/分钟的速率将溶液A并行抽吸到匀浆器中。转子的转速是5000rpm，这一过程持续约10分钟。
所获得的混悬液经1.2μm过滤，通过过滤，水洗，接着冻干回收颗粒。核芯负载量是1.50％，平均粒径D(v，0.5)是18.9μm。
实施例4中报道了单次肌肉内注射所获得的制剂后大鼠内雌二醇血清释放。
实施例2在至少一个月的时间内释放曲普瑞林和雌二醇的组合物的制备1.曲普端林制剂按照美国专利No.5,134,122实施例1中描述的方法获得这种制剂。
2.包埋在PLGA微球中的雌二醇制剂磁性搅拌下于40℃混合80g PVA(聚乙烯醇)和3920g MilliQ水制备水相(溶液A)。接着在磁性搅拌下将4.5g的65∶35聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)聚合物(特性粘度(iv)＝0.62dl/g)溶解在25g醋酸乙酯中制备有机相(溶液B)。将92mg雌二醇溶解在800μl DMSO(二甲亚砜)中(溶液C)。
将溶液B和溶液C混合在一起，以5ml/分钟的速率将获得的溶液抽吸到匀浆器中。以630ml/分钟的速率将溶液A并行抽吸到入匀浆器中。转子的转速是5000rpm，这一过程持续约6分钟。
所获得的混悬液经1.2μm过滤，通过过滤，水洗，接着冻干回收颗粒。核芯负载量是1.60％，平均粒径D(v，0.5)是32.2μm。
实施例4中报道了单次肌肉内注射所获得的制剂后大鼠内雌二醇血清释放。
实施例3在至少三个月的时间里释放曲普瑞林和雌二醇的组合物的制备1.曲普瑞林制剂按照下面的方法制备巴莫酸曲普瑞林微粒制剂。
室温下将大约12wt％的巴莫酸曲普瑞林与大约88wt％的75∶25的PLGA在球磨机中混合。将获得的混合物进行适当的均质化处理后在温度达到大约110℃进行挤压之前进行逐步压缩，同时逐步加热。挤出物被切割成小丸后在大约-100℃的温度下研磨。180μm以下筛分研磨后所获得的微粒。
2.雌二醇制剂如下制备雌二醇和特性粘度为0.42dl/g的PLGA 50/50的微球制剂(制剂1)。
磁性搅拌下于40℃混合160g PVA(聚乙烯醇)和7840g MilliQ水制备水相(溶液A)，接着在磁性搅拌下将4.9g的50∶50聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)聚合物(特性粘度(iv)＝0.42dl/g)溶解在50g醋酸乙酯中制备有机相(溶液B)。将100mg雌二醇溶解在800μl DMSO(二甲亚砜)中(溶液C)。
混合溶液B和溶液C，以5ml/分钟的速率将该溶液抽吸到匀浆器中。以750ml/分钟的速率将溶液A并行抽吸到匀浆器中。转子的转速是5000rpm，这一过程持续约10分钟。
所获得的混悬液经1.2μm过滤，通过过滤，用水洗，接着冻干回收颗粒。核芯负载量是1.50％，平均粒径D(v，0.5)是18.9μm。
按照下面的方法制备雌二醇和特性粘度为0.6dl/g的PLGA 85/15的微球制剂(制剂2)。
磁性搅拌下于40℃混合160g PVA(聚乙烯醇)和7840g MilliQ水制备水相(溶液A)，接着在磁性搅拌下将4.65g的85∶15聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)聚合物(特性粘度(iv)＝0.6dl/g)溶解在50g醋酸乙酯中制备有机相(溶液B)。将350mg雌二醇溶解在2500μl DMSO(二甲亚砜)中(溶液C)。
混合溶液B和溶液C，以5ml/分钟的速率将该溶液抽吸到匀浆器中。以750ml/分钟的速率将溶液A并行抽吸到匀浆器中。转子的转速是5500rpm，这一过程持续约10分钟。
所获得的混悬液经1.2μm过滤，通过过滤，用水洗，接着冻干回收颗粒。核芯负载量是6.04％，平均粒径D(v，0.5)是18.4μm。
3.曲普瑞林和雌二醇组合制剂使雌二醇微球制剂1和2的比例分别为75∶25，雌二醇剂量为3mg，曲普瑞林剂量为12mg，在玻璃药瓶中混合这些制剂。最后冻干这些混合物(在加入包含甘露醇，羧甲基纤维素钠和Tween 80的冻干介质后)。
实施例4中报道了单一肌肉内注射所获得的制剂后大鼠内血清雌二醇和曲普瑞林血清释放。
实施例4药代动力学研究这个实验研究的目的是追踪研究单次肌肉内注射雌二醇/曲普瑞林制剂后大鼠内雌二醇和/或曲普瑞林的血清释放。
1.动物和制剂的给药轻度乙醚麻醉睾丸切除雄性Sprague Dawley大白鼠大腿后部肌肉内注射(i.m.)雌二醇和或曲普瑞林制剂。每组研究六只动物。在注射制剂的前一天(第0天)收集参考血样。每次注射(雌二醇剂量为0.75到2.25mg/kg之间和/或曲普瑞林剂量为9mg/kg)都在第1天的T0时间进行。这被认为是采集血样的参考时间。
2.采集血样在第一天收集两份血样，注射后1小时(T0+1h00)收集第一份，注射后6小时(T0+6h00)收集第二份。在随后的时间里，也就是从第2天到第42天的时间里，在同一时间，即所选择的T0时间收集血样。收集所有组的血样直到第42天。对于用三个月制剂治疗的动物还应每周另外采集血样直到第91天。在每一个时间点，用血细胞容量计毛细管从后眶窦(retro-orbital sinus)(右眼或左眼)中收集大约1.5ml血液。
3.检测分析用放射免疫分析法(RIA)测定处理动物血清中的血清雌二醇和/或曲普瑞林。
4.结果4.1实施例1和实施例2中得到的雌二醇制剂图1报告了大鼠血清中实施例1的制剂(方块)和实施例2的制剂(圆)中雌二醇释放的动力学曲线。
该曲线显示分别与实施例1和实施例2的制剂相对应的爆发性释放水平分别为450pmol/I和470pmol/I，而两种制剂的坪值都大约为100pmoles/l左右。所获得的比例为4.5-4.7。在爆发性释放后血清雌二醇水平开始下降直到第7天到第32天达到坪值。接着雌二醇的释放从第32天开始下降。
预计在人的实验中将获得类似的动力学曲线。
4.2实施例3中获得的雌二醇和曲普瑞林的组合制剂图2报告了在单次肌肉内注射制剂后84天的时间里大鼠血清中实施例3的组合制剂释放雌二醇的动力学曲线(菱形)和曲普瑞林释放的动力学曲线(方块)在注射制剂后立即观察到血清雌二醇爆发性释放达到588pmol/l。接着雌二醇水平迅速下降在第7天到第28天维持坪值(90和130pmo/l之间)。从第35天开始可观察到雌二醇水平有小幅增长(从190pmol/l增长到第56天的234pmol/l)，接下来第84天雌二醇水平开始下降。在第91天仍可观察到45pmol/l的水平。这些结果表明该制剂随着相对起始爆发性释放，能够在血清中诱导雌二醇均匀释放。
图3报告了在肌肉内注射对照曲普瑞林制剂(只有曲普瑞林)(方块)和实施例3的雌二醇和曲普瑞林组合制剂(菱形)后大鼠血清内比较的血清曲普瑞林释放曲线。
与三个月的曲普瑞林相比，雌二醇和曲普瑞林的组合不会改变血清曲普瑞林的释放，因为两者的曲普瑞林血清曲线是相似的。
实施例5临床试验因前列腺癌接受GnRH激动剂治疗的男人中，通过缓释曲普瑞林制剂(只有曲普瑞林)和实施例3的雌二醇+曲普瑞林组合制剂给药，进行分别比较治疗对骨矿物质密度、热潮红、睾丸酮血清水平和前列腺特异性抗原的作用的研究。
140名患有未发生骨转移的晚期前列腺癌的男性被随机分组，每隔12个星期或者单独注射11.25mg巴莫酸曲普瑞林缓释制剂(对照)或者注射11.25mg巴莫酸曲普瑞林和3mg雌二醇的组合制剂(实施例3的组合物)，两种治疗方式都是肌肉内注射缓释(PLGA)制剂，每组70名病人。随访这些病人48周。
为了防止因为钙或维生素D不足导致骨丢失，所有的病人在药物治疗研究前一个月开始补充钙和维生素D。
在开始时和48周时测定骨矿物质密度(BMD)。利用病人日志在开始时和每月测定热潮红发生频率和严重性。在开始时和有规律间隔测定血清睾丸酮和前列腺特异性抗原(PSA)水平。
结果骨矿物质密度在单独供给曲普瑞林组，48周时腰椎BMD下降2.8％，整个髋部BMD下降3.3％，而接受曲普瑞林+雌二醇治疗组在两个位点BMD都只下降0.5％。
曲普瑞林+雌二醇和只施用曲普瑞林组在48周后骨丢失的平均差在腰椎为2.3％，在整个髋部为2.8％(有显著统计学意义)，从基线变化的标准偏差为4.4。
热潮红两组接受治疗的病人中有75％都经历了热潮红。每天热潮红发生的平均次数在单用曲普瑞林组为7，曲普瑞林+雌二醇组为5。基于视觉模拟评分尺(从1到10)，热潮红的平均严重性在单用曲普瑞林组为6.5，曲普瑞林+雌二醇组为4.5。
血清睾丸酮水平在第29天达到阉割水平(血清睾丸酮≤1.735nmol/L)的病人平均百分比在单用曲普瑞林组为95.3％，曲普瑞林+雌二醇组为96.1％。在第29天和第336天之间维持阉割水平的病人平均百分比在单用曲普瑞林组为98.2％，曲普瑞林+雌二醇组为98.5％。两组之间的平均差不具有显著性意义。
血清PSA水平在单用曲普瑞林组平均PSA浓度从开始的46.8μg/L下降到1.3μg/L，在曲普瑞林+雌二醇组PSA浓度从基线的45.0μg/L下降到1.2μg/L。两组之间的平均差不具有显著性意义。
权利要求
1.一种组合物，包括在至少大约一个月的时期内能够以足以诱导和维持男性病人化学性阉割的速率释放促性腺激素释放激素组分的促性腺激素释放激素组分的缓释制剂，和能够维持所述期间血清水平以足以减少通常由应用促性腺激素释放激素组分化学性阉割男性病人所引起的增加的骨矿物质密度损耗或热潮红的雌激素组分的缓释制剂。
2.按照权利要求1的组合物，其中促性腺激素释放激素组分的缓释制剂以大约10-1,000μg/天的速率释放促性腺激素释放激素组分。
3.按照权利要求1的组合物，其中缓释制剂以包含至少第一起始阶段和第二阶段的曲线释放雌激素组分，雌激素组分在所述第二阶段的过程中以大约10-100μg雌二醇等价物/天的速率释放，在所述第一起始阶段的过程中释放的雌激素组分不超过所述第二阶段期间发生的每天释放的雌激素组分的5倍。
4.一种组合物，包括在至少大约一个月的时期内能够以大约10-1,000μg/天的平均速率释放促性腺激素释放激素组分的促性腺激素释放激素组分的缓释制剂和能够以包含至少第一起始阶段和第二阶段的曲线释放雌激素组分的雌激素缓释制剂，雌激素组分在所述第二阶段的过程中以大约10-100μg雌二醇等价物/天的速率释放，在所述第一起始阶段释放的雌激素组分不超过所述第二阶段期间发生的每天释放的雌激素组分上限的5倍。
5.按照前面任意一项权利要求的组合物，其中促性腺激素释放激素组分选自促性腺激素释放激素，促性腺激素释效激素激动剂，促性腺激素释放激素拮抗剂和它们的混合物。
6.如权利要求1，2，3或4的组合物，其中促性腺激素释放激素组分是从亮丙瑞林，戈舍瑞林，曲普瑞林，布舍瑞林，那法瑞林，地落瑞林，海斯特瑞林，戈那瑞林，和它们的盐，以及它们的混合物中选出的促性腺激素释放激素激动剂。
7.如权利要求1，2，3或4的组合物，其中雌激素组分选自氯烯雌酚，己二烯雌酚，二乙基己烯雌酚，二丙酸己烯雌酚，二乙基己烯雌酚单苄基醚，去氢马烯雌酮，去氢马烯雌酮硫酸盐，雌四醇，雌二醇，(3α，17β)-雌-4-烯-3，17-二醇，雌三醇，半琥珀酸雌三醇，雌酮，雌酮硫酸一钠，雌酮硫酸钾，乙炔雌二醇，磷雌酚四钠，己雌酚，羟雌酮二醋酸盐，美雌醇，松焦油，硫酸哌嗪雌酮，丙甲雌三烯，炔雌醚，三苯氧胺，脱瑞米酚，雷洛昔芬，拉索昔芬和它们的混合物。
8.如权利要求1，2，3或4的组合物，其中促性腺激素释放激素组分是曲普瑞林或其盐，且雌激素组分是雌二醇。
9.权利要求8的组合物，其中曲普瑞林或曲普瑞林盐以大约100μg/天的速率释放，且雌二醇以大约25-50μg/天的速率释放。
10.一种治疗前列腺癌的方法，包括向患有前列腺癌的病人施用在至少大约一个月的时期内能够以足以诱导和维持病人化学性阉割的速率释放促性腺激素释放激素组分的促性腺激素释放激素组分的缓释制剂，和同时给病人施用能够维持所述期间血清水平以足以减少通常由应用促性腺激素释放激素组分化学性阉割男性病人所引起的增加的骨矿物质密度损耗和热潮红的雌激素组分的缓释制剂。
11.一种治疗前列腺癌的方法，包括向患有前列腺癌的病人施用在至少大约一个月的时期内能够以大约10-1,000μg/天的平均速率释放促性腺激素释放激素组分的促性腺激素释放激素组分的缓释制剂，和同时给病人施用能够以包含至少第一起始阶段和第二阶段的曲线释放雌激素组分的雌激素组分缓释制剂，雌激素组分在所述第二阶段过程中以大约10-100μg雌二醇等价物/天的速率释放，在所述第一起始阶段释放的雌激素组分不超过所述第二阶段期间发生的每天释放的雌激素组分上限的5倍。
12.一种治疗前列腺癌的方法，包括向患有前列腺癌的病人施用在至少大约一个月的时期内能够以大约10-1,000μg/天的平均速率释放促性腺激素释放激素组分的促性腺激素释放激素组分的缓释制剂，和同时给病人施用能够以包含至少第一起始阶段和第二阶段的曲线释放雌激素组分的雌激素组分缓释制剂，雌激素组分在所述第二阶段过程中以大约10-100μg雌二醇等价物/天的速率释放，在所述第一起始阶段释放的雌激素组分不超过所述第二阶段期间发生的每天释放的雌激素组分上限的5倍。
13.如权利要求10，11或12的方法，其中促性腺激素释放激素组分选自促性腺激素释放激素，促性腺素释放激素激动剂，促性腺激素释放激素拮抗剂和它们的混合物。
14.如权利要求10，11或12的方法，其中促性腺激素释放激素组分是从亮丙瑞林，戈舍瑞林，曲普瑞林，布舍瑞林，那法瑞林，地落瑞林，海斯特瑞林，戈那瑞林，和它们的盐，以及它们的混合物中选出的促性腺激素释放激素激动剂。
15.如权利要求10，11或12的方法，其中雌激素组分选自氯烯雌酚，己二烯雌酚，二乙基己烯雌酚，二丙酸己烯雌酚，二乙基己烯雌酚单苄基醚，去氢马烯雌酮，去氢马烯雌酮硫酸盐，雌四醇，雌二醇，(3α，17β)-雌-4-烯-3，17-二醇，雌三醇，半琥珀酸雌三醇，雌酮，雌酮硫酸一钠，雌酮硫酸钾，乙炔雌二醇，磷雌酚四钠，己雌酚，羟雌酮二醋酸盐，美雌醇，松焦油，硫酸哌嗪雌酮，丙甲雌三烯，炔雌醚，三苯氧胺，脱瑞米酚，雷洛昔芬，拉索昔芬和它们的混合物。
16.如权利要求10，11或12的方法，其中促性腺激素释放激素组分是曲普瑞林或其盐，且雌激素组分是雌二醇。
17.权利要求16的方法，其中曲普瑞林或曲普瑞林盐以大约100μg/天的速率释放，且雌二醇以大约25-50μg/天的速率释放。
18.如权利要求10，11或12的方法，其中该组合物通过皮下、肌肉内或经皮途径给药。
全文摘要
本发明涉及包含两种缓释制剂的组合物，第一种能够释放促性腺激素释放激素组分，第二种能够释放雌激素组分。本发明的组合物可以用于前列腺癌的改进性雄性激素消除治疗，在治疗的过程中通过维持较低的足够的雌激素水平来最小化骨矿物质密度损耗和热潮红发生的频率及严重性。
文档编号A61K31/565GK1780634SQ200480011409
公开日2006年5月31日 申请日期2004年4月30日 优先权日2003年4月30日
发明者H·珀切特, F·海姆加特纳, C·科迪, B·杜克雷 申请人:德比奥法姆股份有限公司