专利名称：二氢黄酮类化合物在制备治疗心血管疾病药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及二氢黄酮类化合物在制备治疗和/或预防心血管疾病药物中的应用。
本发明还涉及包含所述二氢黄酮类化合物的药物组合物。
背景技术：
艾纳香(Blumea balsamifera(L.)DC)为菊科植物，又名大风艾、大艾，见载于《广西中药材标准》(1990年版)。艾纳香药材主要用途是提取冰片(Borneol)，也有少数传统中药复方以该药材或其挥发油入药。
现有技术中以艾纳香提取物入药的制剂，其活性化合物主要为成分为萜类物质的艾纳香油，如“咽立爽滴丸”、金健喉喷雾剂、赛霉安内服剂等。与艾纳香有关的文献报道，主要涉及植物栽培、植物成分等，药理学研究主要涉及肝保护作用。已公开的与艾纳香提取物有关的中国专利主要涉及咽喉疾病、皮肤烫伤、妇科疾病，如，200410034599(活血化瘀止血调经作用)；200410013042、200410013040、200410013041、200410013039、200410016005、03124605、03124594(妇科疾病)；97107723.1(治疗口腔和咽喉疾病)、98112092.X(治疗咽喉疾病)、94102037.1(专治各种皮肤烫伤以及多处皮肤疾患)；951100521.9(治疗骨质增生疾病)；另有部分已公开的中国专利涉及以艾纳香入药的中药复方制剂，如94114866.1(治疗烧伤、烫伤)等。此外，日本专利JP62087589涉及艾纳香所含的三种内酯类化合物Blumealactones A，B，C。
中国专利申请02134927.4(CN1403451A)中公开了艾纳香总黄酮提取物在制备抗心肌缺血及降血脂药物中的应用，但所述的艾纳香总黄酮提取物是中药有效部位，仅是以黄酮类化合物作为主要成分(或主要功效成分)，是多种成分的组合，而所述黄酮类化合物是指结构上属于黄酮类、黄酮醇类、二氢黄酮类、二氢黄酮醇类、花色素类、黄烷醇类、双苯吡酮类，异黄酮类、查尔酮类、二氢查尔酮类、橙酮类、高异黄酮类等的化合物，以及他们与单糖或寡糖形成的糖苷或其他形式的衍生物，而且，黄酮类化合物的总重量之和占提取物总重量的25～100％，故，该专利公开的艾纳香总黄酮提取物在制备抗心肌缺血及降血脂药物中的应用是多种黄酮提取物共同的作用，到底这种作用是由某种化合物产生还是多种化合物产生？各单体都有何种治疗作用？还有待深入研究。
本发明深入研究了从艾纳香中提取的二氢黄酮类化合物在制备治疗和/或预防心血管疾病药物中的应用。
发明内容
本发明的一个目的在于提供如式(I)所示的二氢黄酮类化合物在制备治疗和/或预防心血管疾病药物中的应用，该类化合物可以从植物艾纳香中分离得到。
本发明的还一个目的在于提供包含所述二氢黄酮类化合物的药物组合物。
根据本发明的一个方面，所述的二氢黄酮类化合物其结构如通式(I)所示 其中，R1为H或CH3；R2为H或CH3；R3为H或OH。
上述式(I)化合物可以从植物艾纳香中分离得到，本发明所述“艾纳香”是指菊科植物艾纳香(Blumea balsamifera(L.)DC)植株，优选其植株的地上部分，如干燥茎叶。
在上述通式(I)所示的化合物中，当式(I)中的R1为H，R2为CH3，R3为OH时，所述化合物的化学名称为3，3’，5，7-四羟基-4’-甲氧基-二氢黄酮(3，3’，5，7-tetrahydroxy-4’-methoxy-flavanone)，在本发明中将其命名为艾纳香甲素(其英文名“blumeatin A”、或其英文缩略词“Blu A”)，其结构如式(II)所示 当式(I)中的R1和R2均为CH3，R3为OH时，所述化合物的化学名称为3，3’，5-三羟基-4’，7-二甲氧基-二氢黄酮(3，3’，5-tetrahydroxy-4’，7-dimethoxy-flavanone)，在本发明中将其命名为艾纳香乙素(其英文名“blumeatin B”、或其英文缩略词“Blu B”)，其结构如式(III)所示 当式(I)中的R1为CH3，R2为H，R3为H时，所述化合物的化学名称为3’，4’，5-三羟基-7-甲氧基-二氢黄酮(3，4’，5-tetrahydroxy-7-dimethoxy-flavanone)，在本发明中将其命名为艾纳香丙素(其英文名“blumeatin C”、或其英文缩略词“Blu C”)，其结构如式(IV)所示 上述通式(I)所示的二氢黄酮类化合物可以通过本领域已知的常规植物化学分离纯化技术从植物艾纳香中分离获得。本领域内技术人员能够理解，这些化合物也可以通过化学合成的方法获得。
在本发明的一个具体实施方式
中，所述二氢黄酮类化合物的制备方法包括下述步骤A、将艾纳香干燥、磨粉，用乙醇回流提取，得到乙醇提取液；B、将乙醇提取液顺次以氯仿和乙酸乙酯提取，得到氯仿提取物和乙酸乙酯提取物；C、将步骤B所得提取物经硅胶色谱柱反复层析，分离获得通式(I)所示的二氢黄酮类化合物。
所述心血管疾病主要包括与心肌缺血和血脂异常有关的疾病，例如心肌梗塞、心绞痛、高血压、动脉硬化、高脂血症及冠心病等。
所述冠心病是冠状动脉粥样硬化性心脏病的简称，也称缺血性心脏病。临床症状包括心绞痛、心律失常，急性心肌梗塞，心力衰竭和心脏骤停(猝死)等。
所述高脂血症包括原发或与其它病症并发的高脂血症。
药效学试验表明式(I)所示的二氢黄酮类化合物具有良好的抗心肌缺血和调血脂作用；且它们之间具有药效学协同作用。
根据本发明的还一个方面，本发明提供了一种用于治疗或预防人类疾病的药物组合物，其包含有效治疗量的通式(I)所示的二氢黄酮类化合物以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。
所述“有效治疗量”是指在该剂量下，本发明所述二氢黄酮类化合物能够改善或减轻疾病症状、或者能够抑制或阻断疾病发展。
本发明所述药物组合物可以是胃肠道内给药制剂，如口服给药制剂等。其中，口服固体制剂可以是片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、锭剂等。这些制剂中，除包括本发明之活性成分外，还可以任选含有药学上可接受的填充剂、助流剂、润滑剂、矫味剂、着色剂等。这些制剂还可以根据需要制备成缓释或控释制剂。口服液体制剂可以是溶液、混悬液、乳化液、酏剂等。胃肠道内给药制剂还可以是舌下片、栓剂等。
本发明组合物可以是胃肠外给药制剂。这些制剂可以是溶液、混悬液、乳化液等。它们可以通过静脉内、皮下、肌内途径给药。
对于本发明组合物的口服制剂如片剂、胶囊剂等，以活性成分计，其单位剂型中所述黄酮类化合物的剂量可以为5～1000mg。优选的，其单位剂型中所述黄酮类化合物的剂量为30～500mg。其可以每日给药一次和/或数次，每次给药一片(粒)和/或数片(粒)。
与现有技术相比，本发明首次发现二氢黄酮类化合物单体有良好的抗心肌缺血及降血脂作用，可以用于冠心病、高脂血症、动脉粥样硬化等心血管疾病的治疗和/或预防。
为了更好地理解本发明的本质，下面通过对本发明较佳实施方式的描述，详细说明但不限制本发明。
发明的
具体实施例方式
本发明所用的艾纳香药材购于药材公司，经鉴定为菊科植物艾纳香(Blumea balsamifera(L.)DC)的干燥茎叶。本发明所用的辅料及试剂如无特殊说明均为市售购买商品。
艾纳香甲素、乙素、丙素的分离和鉴定实施例11、提取和分离艾纳香药材(干燥茎叶)500g，磨粉，70％乙醇回流提取(7.5L×2)，合并提取液，顺次以氯仿和乙酸乙酯提取，回收溶剂，所得提取物经硅胶色谱柱反复层析。结果，从乙酸乙酯提取物中分离获得化合物II、III，从氯仿提取物中分离获得化合物II、IV。
2、鉴定化合物1(艾纳香甲素，Blu A)白色针晶。
元素分析元素分析，C58.18％；H5.22％，不含N，S，X。经验式C16H14O7(理论值C58.28％；H5.18％；O36.54％)，不饱和度9。
IR3451；3413(υO-H，s)，2944；2838(υC-H，m)，1649；1634(υC＝O，s)，1361(υC-OH，m)，1259(υC-O-C，s)，1161，1138(υC-H，s)，1086(υC-OH，s)，1027，997，975(δC-H，s)，839，836，798(δC-H，m)，811(δC-H，m)，766(δC-H，m).
UV-VIS用乙醇、0.1mol/L NaOH、0.1mol/L HCl三种溶剂配制样品溶液。测定数据如表1所示。
表1 化合物1的紫外光谱
1H-NMR3.78(3H，s)，4.51-4.54(1H，m，)，5.03(1H，d，11.2Hz)，5.81(1H，d，6.2Hz)，5.87(1H，d，1.9Hz)，5.92(1H，d，1.9Hz)，6.87(1H，d，8.0Hz)，6.47(1H，d，7.0Hz)，6.94(1H，s)，9.08(1，s)，10.85(1，s)，11.95(1，s)；13C-NMR71.56(C-3)，82.83(C-2)，95.02(C-6)，96.02(C-8)，100.50(C-4)，111.71(C-5’)，115.10(C-6’)，119.26(C-2’)，129.73(C-1’)，146.20(C-3’)，147.98(C-4’)，162.52(C-7)，163.34(C-9)，166.83(C-5)，197.78(C-4)。
MS317(M+1)。
根据以上数据鉴定该化合物为3，3’，5，7-四羟基-4’-甲氧基-二氢黄酮。将其命名为艾纳香甲素(Blumeatin A，Blu A)。其结构式为
化合物2(艾纳香乙素，Blu B)白色针状晶体。
m.p.180～182℃；EI-MS333(M+1)；UV(CH3OH，λmax，nm)289；1H NMR(DMSO，δ)11.82(1H，s，C5-OH)；8.91(1H，s，C3’-OH)；9.23(1H，s，C3’-OH)；6.92(1H，s，C2’)；6.91(1H，d，J＝8Hz，C6’)；6.88(1H，d，J＝8Hz，C5’-H)；6.09(1H，d，J＝2Hz，C8-H)；6.06(1H，d，J＝2Hz，C6-H)；5.74(1H，d，J＝2Hz，3-OH)；5.06(1H，dd，J＝11Hz，J＝2Hz，C3-OH)；4.52(1H，d，J＝11Hz，C3-H)3.78(6H，S，2×OCH3)。
根据以上数据鉴定该化合物为3，3’，5-三羟基-4’，7-甲氧基-二氢黄酮，本发明称其为艾纳香乙素(Blumeatin B，Blu B)。其结构式为 化合物3(艾纳香丙素，Blu C)白色针状晶体。
m.p.218℃；EI-MS303(M+1)；UV(CH3OH，λmax，nm)289；1H NMR(DMSO，δ)12.08(1H，s，C5-OH)；8.97(1H，s，C4’-OH)；8.91(1H，s，C3’-OH)；6.88(1H，s，C2’-H)；6.74(2H，s，C5’-H，6’-H)；6.06(2H，s，C6-H，C8-H)；5.43(1H，dd，J＝12.5，4Hz，C2-H)；3.78(3H，s，OCH3)；3.20(1H，dd，J＝17.5，12.5Hz，C3-H)；2.71(1H，dd，J＝17.5，4Hz，C3-H)。
根据以上数据鉴定该化合物为3’，4’，5-三羟基-7-甲氧基-二氢黄酮，本发明称其为艾纳香丙素(Blumeatin C，Blu C)。其结构式为 药效学实验实施例2Blu A、B、C对冠脉结扎所致大鼠心肌缺血的影响1、试验材料1)试验样品Blu A，Blu B，Blu C光谱纯，均按实施例1的方法分离纯化自艾纳香药材。
2)试验动物SD大鼠购于广东省医学实验动物中心
2、试验方法SD大鼠，连续灌胃给药3天，每天两次。实验分组和各组动物给药剂量见表7。NS即生理盐水。末次给药后30min，将动物麻醉，开胸结扎冠状动脉左降支，记录II导联心电图。2小时后取心脏，染色，观察心肌梗死区域大小。
3、试验结果(1)Blu A、B、C对冠脉结扎大鼠心电图的影响结果如表2所示。实验结果表明Blu A、B、C均具有抑制冠脉结扎所致大鼠心电图ST段升高的作用，说明这些试验样品均具有抗冠脉结扎所致心肌缺血作用。
表2 大鼠冠脉结扎后不同时间点心电图ST段电位(mV，n＝6，X±SD)
*p＜0.05，**p＜0.01样品试验组与NS组比较(t-test)。
(2)Blu A、B、C对冠脉结扎大鼠心肌梗死区域面积的影响结果如表3所示。实验结果表明Blu A、B、C均显著减少缺血坏死区面积，进一步证实这些试验样品均具有抗心肌缺血作用；在药效强度方面，其强弱顺序与上述对心电图的影响基本一致，即，Blu A、B、C。
表3 各组大鼠冠状动脉结扎后心肌梗死区域面积比(n＝6，X±SD)
**p＜0.01与NS组比较(t-test)实施例3Blu A、B、C对异常血脂的调节作用1、试验材料试验样品和试验动物及其来源同实施例2。
2、实验方法
SD大鼠在实验环境下喂普通饲料1周，眼眦采血，测血脂作为正常值。正常对照组喂普通饲料，高脂对照组喂高脂饲料，实验组喂高脂饲料同时给药，给药2周后摘眼球取血，测定各项指标。
3、实验结果Blu A、B、C高脂饲料所致大鼠高血脂的影响如表4所示。实验结果表明Blu A、B、C均有一定的调血脂作用。
表4 大鼠高血脂模型各组降脂实验结果(n＝10)
*p＜0.05，**p＜0.01样品试验组与空白对照组比较(t-test)含Blu A、B、C的药物组合物的制备原料来源Blu A，Blu B，Blu C光谱纯，均分离纯化自艾纳香药材。
实施例4片剂的制备I、处方主药 60g淀粉 50g糊精 60g蔗糖 10g硬脂酸镁 2g制成 1000片注处方中的主药为Blu A或Blu B或Blu CII、制法Blu A或Blu B或Blu C以合适的药筛过筛并与蔗糖、淀粉混合直至形成均一的混合物。加入适量的水并将粉末制粒。干燥后，将此颗粒过筛并与其余赋形剂混合。然后将所得颗粒压制成所需形状的片剂。其它含量的片剂可以通过改变活性化合物和赋形剂的比例或压片重量而制备。
实施例5胶囊剂的制备I、处方主药 60g乳糖 60g糊精 15g淀粉(120目) 45g3％HPMC 适量制成 1000粒注处方中的主药为Blu A或Blu B或Blu CII、制法Blu A或Blu B或Blu C过80目筛，与淀粉、乳糖、糊精按等量倍增法混合均匀，加入预先配好的HPMC溶液制成软材，20目筛制粒，60℃干燥约30分钟，18目筛整粒，装胶囊。
实施例6注射液的制备I、处方主药 25g硫柳汞 0.01g吐温-801.5g氯化钠 3g羧甲基纤维素钠(30-60cpa·s)5g注射用水加至 1000ml注处方中的主药为Blu A或Blu B或Blu CII、制法硫柳汞加于50％量的注射用水中，加羧甲基纤维素钠，溶解后用200目尼龙网滤过，密闭备用。氯化钠溶于适量注射用水中，4号垂熔漏斗滤过后，加入预热硫柳汞溶液及吐温-80搅匀，加热使沸腾，加入BluA或BluB或BluC，混匀，取出冷至室温，加注射用水调至总体积，垂熔漏斗滤过，分装(5ml/支)，灭菌。
以上对本发明的详细描述并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变和变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求所定义的范围。
权利要求
1.式(I)所示的二氢黄酮类化合物在制备治疗和/或预防心血管疾病药物中的应用 其中，R1为H或CH3；R2为H或CH3；R3为H或OH。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于式(I)中的R1为H，R2为CH3，R3为OH；结构如式(II)所示
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于式(I)中的R1和R2均为CH3，R3为OH；结构如式(III)所示
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于式(I)中的R1为CH3，R2为H，R3为H；结构如式(IV)所示
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述心血管疾病包括心肌梗塞、心绞痛、高血压、动脉硬化、高脂血症以及冠心病。
6.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述二氢黄酮类化合物从植物艾纳香(Blumea balsamifera(L.)DC)中分离得到。
7.一种药物组合物，其特征在于包含有效治疗量的式(I)所示的二氢黄酮类化合物；以及药学上可接受的载体和/或赋形剂； 其中，R1为H或CH3；R2为H或CH3；R3为H或OH。。
8.权利要求7所述的药物组合物，其特征在于其单位剂型中所述二氢黄酮类化合物的剂量为5～1000mg。
9.权利要求8所述的药物组合物，其特征在于其单位剂型中所述二氢黄酮类化合物的剂量为30～500mg。
全文摘要
本发明涉及通式(I)所示的二氢黄酮类化合物在治疗和/或预防心血管疾病药物中的应用，其中，R
文档编号A61P9/00GK1923191SQ20051009364
公开日2007年3月7日 申请日期2005年8月31日 优先权日2005年8月31日
发明者赵金华, 康晖, 姚光辉, 曾伟珍, 刘小柔, 李靖, 冯汉林, 于琳 申请人:深圳海王药业有限公司