生物素化十六糖，它们的制备方法及其用途的制作方法

专利名称：生物素化十六糖，它们的制备方法及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的合成生物素化十六糖，它们具有肝素抗凝血和抗血栓的药理活性。
肝素催化，特别通过抗凝血酶III(AT III)催化在凝血瀑布中所涉及两种酶的抑制作用，即因子Xa和因子IIa(或凝血酶)的抑制作用。这些低分子量肝素(HBPM)制剂含有由4-30个单糖形成的链，并且其性质是对因子Xa起作用比对凝血酶起作用更有选择性。
人们知道，因子Xa的抑制作用需要通过与抗凝血酶结合域(域-A)，将肝素与AT III固定在一起，还知道因子IIa(凝血酶)的抑制作用需要通过域-A与AT III固定在一起，以及通过不太确定的结合域(域-T)与凝血酶固定在一起。
已知相应于肝素域-A域的合成低聚糖。例如在专利EP 84999和EP 529 715中、在公开的专利申请WO 99/36428中以及在出版物《Bioorg.Med.Chem.》(1998)，6，第1509-1516页中描述了合成这些合成低聚糖。这些合成低聚糖具有通过AT III选择性地抑制凝血因子Xa而对凝血酶没有任何活性的性质。
曾在公开的专利申请WO 98/03554和WO 99/36443中描述了能通过AT III活化抑制凝血酶和因子Xa的合成低聚糖。
这些专利申请描述了具有生物活性的新的硫酸化和烷基化多糖衍生物。它们特别地是抗凝血和抗血栓的。特别地证明，这些硫酸化和烷基化多糖按照碳水化合物主链所带烷基和硫酸酯基团的排列而可以是强凝血和抗血栓的。更一般地，已发现通过制备多糖序列，有可能精确地控制GAGs类的活性，从而得到活性非常高的产品，它们具有肝素的抗凝血和抗血栓药理性质。与肝素相比，它们的优点是具有确定的结构、不与血小板因子4进行反应，即肝素血小板减少的原因。
但是，公开专利申请WO 98/03554和WO 99/36443与专利EP 529715描述的某些产品的人治疗用途可能显得有点复杂，如果这些产品的半衰期很长更是如此。在使用上述产品预防或治疗血栓形成方面，应该重建或保持血液的流动性，同时还要避免引起出血。
事实上，众所周知由于某种偶然的原因，病人在治疗时可能触发出血。病人接受抗血栓治疗时，也可能需要接受外科手术治疗。此外，在某些外科手术案例过程中，可能使用大剂量的抗凝血药，以防止血液凝结，并且在外科手术结束后还需要将它们中和。因此，为了在任何时间停止抗凝血药活性，有意义的是有可中和的抗血栓剂。但是，使用已知的肝素解毒剂或HBPM，其中包括硫酸鱼精蛋白，不可能很容易地中和上述已知的合成低聚糖。
本发明涉及新的合成生物素化十六糖，其结构与公开的专利申请WO 02/24754所描述的化合物类似。本发明的十六糖以及文件WO02/24754描述的某些化合物，通过“间隔体”—如本申请定义的式(T1)或(T2)的顺序—与生物素衍生物(六氢-2-氧代-1H-噻吩并[3，4-d]咪唑-4-戊酸)共价结合，因此具有在紧急情况下能迅速地被特定解毒剂中和的优点。这种特定的解毒剂是抗生物素蛋白(avidin)(《The MerckIndex》，第十二版，1996，M.N.920，第151-152页)或抗生蛋白链菌素(streptavidin)，这两种四聚蛋白质的质量分别等于约66000和60000Da，它们对生物素具有非常高的亲合性。
但是令人惊奇地，似乎将生物素衍生物与十六糖链连接起来的“间隔体”长度以及生物素在糖单元上的位置，是影响特定解毒剂(特别地，例如抗生物素蛋白)中和效率的因素。因此，由于受控大小的“间隔体”和生物素在糖单元上的位置，本发明的十六糖化合物具有用特定解毒剂中和的能力明显高于公开专利申请WO 02/24754所描述的那些化合物。
本发明的一个目的是下式I的生物素化十六糖 式中-T代表下式链T1或T2
-Biot代表基团 -R代表(C1-C6)烷氧基，特别地甲氧基，或-OSO3-基，-R1代表(C1-C6)烷氧基，特别地甲氧基，或-OSO3-基，-R2代表(C1-C6)烷氧基或-OSO3-基，-R3代表(C1-C6)烷氧基，特别地甲氧基，或-OSO3-基，或者R3构成-O-CH2-桥，-CH2-基团与在相同环上带有羧基官能团的碳原子连接起来，-Pe代表下式糖链 以及它们在药物上可接受的盐。
这些多糖部分是由未烷基化和/或部分和/或完全烷基化的单糖单元构成的。烷基化或未烷基化单元可以沿着该链分散，或者相反地，它们可以分成烷基化或未烷基化糖域组。
在本说明书中，曾选择L-艾杜糖醛酸表示为1C4构象，D-葡萄糖醛酸表示为4C1构象，但应该指出，一般而言单糖单元在溶液中的构象是变动的。
因此，L-艾杜糖醛酸可以是4C12S0或4C1构象。
本发明包括呈其酸形式或其在药物上可接受盐的其中任何一种形式的十六糖。在酸形式中，-COO-和-SO3-官能团分别呈-COOH和-SO3H形式。
本发明多糖在药物上可接受的盐应该理解是，其中一个或多个COO-和/或-SO3-官能团与在药物上可接受的阳离子以离子方式结合的多糖。本发明的优选的盐是其阳离子选自碱金属阳离子的盐，更优选地是其阳离子为Na+或K+的盐。
上式I化合物还包括其中一个或多个氢或碳原子已用其放射性同位素(例如氚或14C)取代的化合物。这样一些标记化合物在调查、代谢或药物动力学研究中，在生物化学试验中作为配位体是有用的。
在本发明范围内，应该理解-(C1-C6)烷氧基-O-烷基，该烷基基团是1-6个碳原子链的直链或支链的饱和脂族基。作为烷基实例，可以列举甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基。作为(C1-C6)烷氧基实例，可以列举甲氧基、乙氧基，-“间隔体(spacer)”T下式T1或T2链 -生物素化衍生物 这些生物素衍生物可在市场上买到(《Pierce》目录1999-2000，第62-81页)。
根据其中一个优选方面，本发明涉及通式I的生物素化十六糖，式中-R代表甲氧基或-OSO3-基，-R1代表甲氧基，-R2代表-OSO3-基，-R3代表甲氧基。
根据另一个特别优选的方面，本发明涉及下述生物素化十六糖·甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-[N-(6-生物素酰胺己酰基)]-2-脱氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-3-O-甲基-2，6-二-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，钠盐·甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-[N-(6-生物素酰胺己酰基)]-2-脱氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基-糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，钠盐就其原理来说，本发明化合物的制备方法使用二糖或低聚糖基本合成子，该合成子根据前面文献中所描述的方法进行制备。特别参考专利或专利申请EP 300 099、EP 529 715、EP 621 282和EP 649 854，以及C.van Boeckel和M.Petitou撰写的文件，《Angew.Chem.Int.Ed.Engl.》，(1993)，32，第1671-1690页。然后将这些合成子彼此偶联起来，以得到完全被保护的本发明多糖等效物。这个保护等效物再转化成本发明的化合物。
前面提到的其中一个基本合成子含有特别被保护的官能团，该官能团能允许接下来加入生物素或生物素衍生物，例如呈叠氮基团形式的潜在胺官能团或呈N-苯二甲酰亚氨基形式的保护官能团。
在上述的偶联反应中，在异头碳上活化“供体”二糖或低聚糖，与含有游离羟基的“受体”二糖或低聚糖进行反应。
本发明涉及式I化合物的制备方法，其特征在于-在第一步中，得到期望式I十六糖的完全被保护的等效物，它含有被保护的五糖前体，特别带有适当被保护的胺官能团，以便在后面加入生物素或生物素衍生物。该保护五糖前体本身通过多糖域Pe的保护前体延长；-在第二步中，使这些带负电荷的基团加入和/或解掩蔽；-在第三步中，使胺官能团去保护，然后加入生物素或生物素衍生物。
根据这些描述的方法，特别在公开专利申请WO 98/03554和WO99/36443以及该文献(前面引用的)中描述的方法，合成接枝生物素或生物素衍生物的五糖。
糖苷键供体低聚糖与糖苷键受体低聚糖偶联，得到其尺寸等于两个反应物种尺寸之和的另一种低聚糖时，按照本技术领域的技术人员熟知的反应，采用低聚糖类(G.J.Boons，《四面体》(Tetrahedron)，(1996)，52，第1095-1121页，WO 98/03554和WO 99/36443)或一种低聚糖的合成方法，合成得到Pe的前体多糖部分。重复这个顺序直到得到式I化合物。根据本技术领域的技术人员所熟知的规则，希望最终化合物的电荷性质和分布决定了在合成各个步骤中使用化学实体的性质。例如可参考C.van Boeckel和M.Petitou，《Angew.Chem.Int.Ed.Engl.》，(1993)，32，第1671-1690页，或参考H.Paulsen，“选择性化学合成复合低聚糖的进展”，《Angew.Chem.Int.Ed.Engl.》，(1982)，21，第155-173页。
采用下述系列反应，使用完全被保护的多糖前体，得到本发明的化合物-将这些醇官能团转化成O-磺基团，再除去在主链制备过程中使用的保护基团，使这些羧酸去保护，然后
-然后加入这些磺基基团，-使能够加入生物素或生物素衍生物的胺官能团去保护，-通过通常的氨基/酸偶联反应加入生物素衍生物。
采用低聚糖合成技术领域的技术人员已知的各种策略，可以自然地制备本发明的化合物。
前面描述的方法是本发明的优选方法。但是，采用例如在《单糖，其化学和在天然产物中的作用》(Monosaccharides，Their chemistryand their roles in natural products)，P.M.Collins和R.J.Ferrier，J.Wiley & Sons，(1995)，和在iG.J.Boons，《四面体》，(1996)，52，第1095-1121页中所述糖化学的其它熟知方法，可以制备式I化合物。
因此，使用在C.van Boeckel，M.Petitou，《Angew.Chem.Int.Ed.Engl.》，(1993)，32，第1671-1690页出版物中所描述方式的二糖合成子可以得到这些五糖Pe。
式I化合物制备方法中使用的保护基团是糖化学中普遍使用的保护基团，例如在《有机合成中的保护基团》(Protective Groups inOrganic Synthesis)(1981)，T.W.Greene，John Wiley & Sons，New York中描述的保护基团。
这些保护基团例如有利地选自乙酰基、卤甲基、苯甲酰基、乙酰丙酸基(levulinyl)、苄基、取代苄基，任选地取代三苯甲基、四氢吡喃基、烯丙基、戊烯基、叔丁基二甲基甲硅烷基(tBDMS)或三甲基甲硅烷基乙基。
这些活化基团是例如根据G.J.Boons，《四面体》，(1996)，52，第1095-1121页在糖化学中通常使用的活化基团。例如，这些活化基团选自亚胺酯、硫苷、戊烯基苷、黄原酸盐、亚磷酸盐或卤化物。
至于生物素衍生物与低聚糖的连接方式和生物素衍生物的性质，化学文献提供了有可能通过本技术领域的技术人员所熟知的几组保护基团能够使用的其它可能性。优选地应使用胺官能团、硫醇官能团、羧酸官能团或醛官能团，该官能团应与含有活化酯、马来酰亚胺、碘乙酰基或伯胺类反应基团的生物素衍生物进行反应，这个反应可按照文献(Savage等人，《亲和素-生物素化学手册》(Avidin-BiotinChemistryA Handbook)；(1992)，Pierce Chemical Company)所描述的条件进行。
上述方法能够得到呈盐形式的本发明化合物。为了得到这些相应的酸，让呈盐形式的本发明化合物与酸型阳离子交换树脂进行接触。
然后，呈酸形式的本发明化合物可以用碱进行中和，得到期望的盐。为了制备式I化合物的盐，可以使用任何的无机或有机碱，得到在药物上可接受的盐与式I化合物。作为碱，优选地使用氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙和氢氧化镁。式I化合物的钠盐和钙盐是优选的盐。
本发明的化合物是生物化学和药理学研究的主题。
1.抗-因子IIa活性和抗-因子Xa活性的测定如Herbert等人，《Thromb Haemost.》，(2001)，85(5)，第852-60页所描述的，借助于其抗-因子IIa活性和抗-因子Xa活性测定本发明化合物的循环活性。本发明的化合物通过鼠的静脉内(IV)或皮下(SC)途径给药。IV注射抗生物素蛋白导致大大降低本发明化合物的循环浓度(70％以上)。
例如，在IV注射100nmol/kg后实施例1化合物的循环浓度降低88％(通过抗-因子Xa活性测定的降低)，IV给药抗生物素蛋白(10mg/kg/625nmol/kg)后2分钟降低91％(通过抗-因子IIa活性测定的降低)。
实施例2的化合物的循环浓度在IV注射100nmol/kg后降低76％(通过抗-因子Xa活性测定的降低)，IV给药抗生物素蛋白(10mg/kg/625nmol/kg)后5分钟降低89％(通过抗-因子IIa活性测定的降低)。
SC给药实施例1和2的化合物时，观察到这两种活性的相当的抑制作用2.总抗血栓活性测量与用抗生物素蛋白中和如Herbert等人，《血液》(Blood)，(1998)，91，第4197-4205页所描述的，采用静脉血栓模型研究了本发明化合物的总抗血栓活性及其中和，这个模型由注射组织因子，接着鼠的腔静脉血流停滞构成。
a)总抗血栓活性测量本发明的化合物是强血栓形成抑制剂(IC50值小于50nM)。
例如，实施例1和2表明，在其IV给药后采用模型的IC50值分别是3和9.9nM。
例如，通过IV注射3mg/kg/208nmol/kg抗生物素蛋白，由于实施例1化合物(浓度30nmol/kg)而抑制血栓重量回到对照水平。
b)抗生物素蛋白的中和鼠的流血试验通过鼠的流血试验评定本发明化合物的效果(Herbert等人，《血液》，(1998)，91，第4197-4205页)。在这些动物模型中，这些化合物具有高抗凝血活性，从而增加了流血时间。该抗生物素蛋白中和了本发明化合物对流血的作用。
例如，通过IV给药抗生物素蛋白(3mg/kg；208nmol/kg)，30nmol/kg实施例1的化合物诱发鼠的流血时间回到对照水平。
例如，通过IV给药抗生物素蛋白(10mg/kg；625nmol/kg)，100nmol/kg实施例2的化合物诱发鼠的流血时间回到对照水平。
因此，本发明还有一个目的是使用抗生物素蛋白或抗生蛋白链菌素的方法，其特征在于它能够中和本发明的多糖。抗生物素蛋白或抗生蛋白链菌素可以用于制备中和本发明多糖的药物。
由于其生物化学和药物活性，本发明的低聚糖构成了非常有意义的药物。它们的毒性与这种用途完全相容。它们还非常稳定，因此特别适合构成药物特殊产品的活性组分。
它们可以用于特别当心血管和脑血管系统障碍，如与动脉粥样硬化和糖尿病有关的血栓栓塞，像不稳定型心绞痛、中风、血管成形术后再狭窄、血栓和动脉内膜切除术、血管内假体插入；或与溶栓后的再血栓形成、梗塞、缺血性痴呆、外周动脉病、血液透析、心房纤维性颤动相关的血栓塞障碍时，或使用主动脉-冠状搭桥的血管假体时出现凝血系统稳定性改变所造成的各种病理学。此外，这些产品还可用于治疗或预防静脉源血栓塞病症，例如肺栓塞。它们可用于预防或治疗所观察到的血栓性并发症，例如在外科手术后，由细菌、病毒或酶活化剂诱发的肿瘤生长或凝血失常。在插入假体而使用它们的情况下，本发明化合物能覆盖假体，因此使它们变得可血相容的。特别地，它们可以固定在血管内假体(支架)上。在这种情况中，如EP 649 854所描述的，它们可以任选地通过在非还原或还原端部加入适当的臂进行化学改性。
使用多孔气囊(ballonnets poreux)进行动脉内膜切除术时，本发明的化合物还可以用作辅药(adjuvants)。
本发明化合物可以用于制备治疗上述疾病的药品。
因此，根据本发明的另一个方面，本发明的目的是药物组合物，它含有作为活性组分的本发明的合成多糖或一种它们在药物上可接受的盐，任选地与一种或多种惰性或合适赋形剂并用。
所述的赋形剂根据期望的药物剂型和给药方式进行选择口服、舌下、皮下、肌内、静脉内、经皮、经粘膜、局部或直肠。
该活性组分还可呈与环糊精的配合物剂型，环糊精例如是α、β或γ-环糊精、2-羟丙基-β-环糊精或甲基-β-环糊精。
通过含有该活性组分的气囊或通过往血管内加入血管内扩充药，也可以释放其活性组分。因而不影响该活性组分的药理效率。
在每个剂量单位中，该活性组分的量适合于设想的日剂量，以便获得期望的预防或治疗效果。每个剂量单位可以含有0.1-100mg，优选地0.5-50mg活性组分。采用静脉内推注或滴注，使用1-1000mg剂量的抗生物素蛋白或抗生蛋白链菌素可以中和这些抗凝血化合物剂量。
本发明的化合物还可以与一种或多种用于期望治疗的其他活性组分并用，这些组分例如是抗血栓药、抗凝血药、抗血小板聚集药，例如像双嘧达莫、阿司匹林、噻氯匹定、氯吡格雷或糖蛋白IIb/IIIa复合拮抗剂。
下述方法、制剂和流程图说明了用于得到本发明多糖的各种中间体的合成。下述十六糖合成实施例说明但不限制本发明。
使用下述缩写Bn苄基；Bz苯甲酰基；Lev乙酰丙酸基(lévulinyl)；Et乙基；Ph苯基；Me甲基；Ac乙酰基；SEt硫代乙基；MPp-甲氧基苯基；生物素六氢-2-氧代-1H-噻吩并[3，4-d]咪唑-4-戊酸；
ESI电喷雾电离；CCM薄层色谱法；PF熔点；[αD]＝旋光性；C＝浓度Rf＝在CCM上测定的相对于移动溶剂前沿的保留时间。
在下文中，作为说明将详细描述本发明化合物的制备与合成实施例。
制备流程

图1-第4号单糖的合成 制备11，6-脱水(anhydro)-2-叠氮基-2-脱氧-4-O-p-甲氧基苯基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.2)的制备采用与Brill和Tirefort，《四面体通信》(Tetrahedron Lett.)(1998)，39，第787-790页所描述的类似方法，合成化合物1，62，3-二脱水-4-O-p-甲氧基苯基-β-D-吡喃甘露糖，No.1，(4.39g，17.5mmol)。化合物No.1溶于130ml N，N-二甲基甲酰胺/水混合物[4/1(v/v)]中，然后添加叠氮化钠(22.8g，350mmol)。该反应介质在120℃加热6小时。用硅藻土过滤后，滤液用乙酸乙酯稀释，然后用水洗涤。该有机相用硫酸钠干燥，过滤，然后真空浓缩。该残留物在乙酸乙酯/环己烷混合物(20ml/7ml)中进行再结晶，得到4.46g晶体状化合物No.2。
PF144℃制备21，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-4-O-p-甲氧基苯基-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.3)的制备往化合物No.2(4.08g，13.9mmol)和碘甲烷(1.1ml，15.3mmol)在无水N，N-二甲基甲酰胺(40ml)中的冷(0℃)混合物里，在氩气氛下以小量添加氢化钠(1.04g)。该混合物在室温下搅拌20小时。用甲醇破坏过量的氢化钠。蒸去N，N-二甲基甲酰胺后，该残留物溶于二氯甲烷。该有机相用水进行洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，然后真空浓缩。该残留物采用硅胶柱色谱法进行纯化[甲苯/乙酸乙酯，12/1(v/v)]，得到3.57g白色固体状化合物No.3。
PF68℃制备31，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.4)的制备往硝酸铈铵(86g，156.2mmol)在390ml乙腈/水混合物[9/1(v/v)]中的溶液里，滴加化合物No.3(8.0g，26.03mmol)在130ml乙腈/水混合物[9/1(v/v)]中的溶液。该混合物在室温下搅拌40分钟，然后用乙酸乙酯稀释。该反应混合物用无水硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩。把滤液放在硅胶上能够部分地除去硝酸铈铵残留物。为了纯化该化合物，先进行乙酰化反应，接着进行脱乙酰反应。该残留物溶于二氯甲烷(90ml)中，然后相继地添加三乙胺(5.3ml)、二甲基氨基吡啶(280mg)，最终添加乙酸酐(3.2ml)。16小时后，该反应介质用二氯甲烷稀释(250ml)。该有机相用10％硫酸氢钾溶液、水、10％碳酸氢钠溶液、然后水洗涤。该有机相再用无水硫酸钠干燥，过滤，然后进行真空浓缩。该残留物采用硅胶柱色谱法进行纯化[甲苯/乙酸乙酯，10/1(v/v)]，得到4.9g固体状产物。该固体溶于80ml二氯甲烷/甲醇混合物[1/1(v/v)]中，然后添加甲醇钠(544mg)。该混合物搅拌35分钟，然后用Dowex50WX4 H+树脂中和，过滤，然后进行真空浓缩。该残留物采用硅胶柱色谱法进行纯化[甲苯/乙酸乙酯，3/2(v/v)]，得到3.9g化合物No.4。D＝-27°(C＝1.06，在二氯甲烷中)。
流程图2-五糖No.11的合成
制备4(2，3-二-O-苯甲酰基-4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.6)的制备以与公开专利申请WO 99/36443所描述的制备1类似方法得到的硫苷化合物No.5(9.00g，9.04mmol)、制备3中得到的化合物No.4(1.65g，8.22mmol)与4分子筛粉末(9.05g)在甲苯(180ml)中的混合物，在氩气氛下搅拌1小时。然后该混合物冷却到-20℃。往该反应混合物中滴加N-碘代丁二酰亚胺(2.14g，9.5mmol)和三氟甲烷磺酸(96μl，1.09mmol)在47ml二氯甲烷/二烷混合物[1/1(v/v)]中的溶液。10分钟后，该反应混合物用硅藻土过滤，用二氯甲烷(1000ml)稀释，然后相继地用1M硫代硫酸钠溶液、10％碳酸氢钠溶液和水洗涤。该反应混合物再用无水硫酸钠干燥，然后进行真空浓缩。该残留物采用硅胶柱色谱法进行纯化[甲苯/乙酸乙酯，5/1(v/v)]，得到9.20g三糖No.6。D＝+44°(C＝1.30，在二氯甲烷中)。
制备5(4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.7)的制备往化合物No.6(9.2g，8.11mmol)在二烷(81ml)中的溶液里，添加叔丁醇钾(1.82g，16.2mmol)。该混合物搅拌3小时，然后用Dowex50WX4H+树脂中和，过滤，再进行真空浓缩。硅胶柱色谱法纯化后[二氯甲烷/甲醇，8/1(v/v)]，分离出5.46g泡沫状的化合物No.7。
硅胶CCM，二氯甲烷/甲醇[9/1(v/v)]Rf＝0.35[α]D＝+38°(C＝0.84，在二氯甲烷中)。
制备6(4，6-O-亚苄基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.8)的制备往化合物No.7(5.05g，8.23mmol)和碘甲烷(3.8ml，61.7mmol)在无水N，N-二甲基甲酰胺(150ml)中的冷(0℃)混合物里，在氩气氛下以小量添加氢化钠(1.73g，72.0mmol)。该混合物在室温下搅拌20小时。用甲醇(8ml)破坏过量的氢化钠，然后把该反应混合物倒入冰水(400ml)中。用乙酸乙酯提取后，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，然后进行真空浓缩。该残留物采用硅胶柱色谱法进行纯化[二氯甲烷/丙酮，先7/1，然后5/1(v/v)]，得到4.8g化合物No.8。D＝+49°(C＝1.02，在二氯甲烷中)。
硅胶CCM，二氯甲烷/丙酮[5/1(v/v)]Rf＝0.45制备7(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.9)的制备化合物No.8(5.3g，7.75mmol)溶于60％乙酸(233ml)中，然后在80℃下搅拌1小时30分钟。该混合物进行浓缩，并与甲苯进行共蒸发。该残留物采用硅胶柱色谱法进行纯化[甲苯/乙醇，4/1(v/v)]，得到5.09g化合物No.9。D＝+57°(C＝1.06，在二氯甲烷中)。
硅胶CCM，甲苯/乙醇[4/1(v/v)]Rf＝0.36制备8(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.10)的制备往化合物No.9(5.09g，8.55mmol)在二氯甲烷(85ml)中的溶液里，添加1-苄氧基-1H-苯并三唑(2.86g，11.97mmol)和三乙胺(1.80ml)。该混合物在室温下搅拌20小时，然后用二氯甲烷稀释。有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，再用水洗涤。然后该有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，再进行真空浓缩。该残留物采用硅胶柱色谱法进行纯化(甲苯/乙醇，15/2(v/v)]，得到4.85g化合物No.10。D＝+43°(C＝1.06，在二氯甲烷中)。
硅胶CCM，甲苯/乙醇[15/2(v/v)]Rf＝0.31制备9(2，3-二-O-苯甲酰基-4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.11)的制备根据制备4所描述的操作方式，让化合物No.10(4.38g，6.26mmol)与化合物No.5(“除去糖基的供体”)(11.85g，11.9mmol)进行偶联反应，得到8.39g化合物No.11，化合物5是采用与公开专利申请WO 99/36443所描述制备1的类似方法得到的。D＝+61°(C＝1.06，在二氯甲烷中)。
流程图3-五糖No.15的合成
制备10(4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.12)的制备根据与制备5所描述的相同操作方式，将制备9得到的化合物No.11(8.36g，5.12mmol)转化成化合物No.12。采用硅胶柱色谱法纯化后，得到玻璃状的化合物No.12(4.92g)。
硅胶CCM，二氯甲烷/甲醇[10/1(v/v)]Rf＝0.41制备11(4，6-O-亚苄基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.13)的制备根据与制备6所描述的相同操作方式，将化合物No.12(4.57g，4.54mmol)转化成化合物No.13。该粗制产物采用硅胶柱色谱法进行纯化，得到4.94g化合物No.13。D＝+68°(C＝0.93，在二氯甲烷中)。
硅胶CCM，甲苯/乙醇[8/1(v/v)]Rf＝0.39制备12(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.14)的制备根据与制备7所描述的相同操作方式，将化合物No.13(4.89g，4.48mmol)转化成化合物No.14。该粗制产物采用硅胶柱色谱法进行纯化，得到4.30g化合物No.14。D＝+80°(C＝1.05，在二氯甲烷中)。
硅胶CCM，甲苯/乙醇[4/1(v/v)]Rf＝0.31制备13(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.15)的制备根据与制备8所描述的相同操作方式，将化合物No.14(4.26g，4.25mmol)转化成化合物No.15。该粗制产物采用硅胶柱色谱法进行纯化，得到4.33g化合物No.15。D＝+59°(C＝1.0，在二氯甲烷中)。
硅胶CCM，甲苯/丙酮[4/3(v/v)]Rf＝0.38
流程图4-七糖No.20的合成
制备14(2，3-二-O-苯甲酰基-4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.16)的制备根据制备4所描述的操作方式，让采用公开专利申请WO 99/36443所描述的类似方式得到的硫苷No.5(4.90g，4.93mmol)，与制备No.13描述的化合物No.15(4.55g，4.11mmol)进行偶联反应。提取后得到的残留物采用硅胶柱色谱法进行纯化，得到8.07g化合物No.16。D＝+71°(C＝0.99，在二氯甲烷中)。
制备15(4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.17)的制备根据制备5所描述的操作方式，将化合物No.16转化成化合物No.17。
硅胶CCM，二氯甲烷/甲醇[8/1(v/v)]Rf＝0.45制备16(4，6-O-亚苄基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]2-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.18)的制备根据制备6所描述的操作方式，将化合物No.17转化成化合物No.18。
硅胶CCM，甲苯/丙酮[5/4(v/v)]Rf＝0.40制备17(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]2-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.19)的制备根据制备7所描述的操作方式，将化合物No.18转化成化合物No.19。
硅胶CCM，二氯甲烷/甲醇[10/1(v/v)]Rf＝0.41制备18(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]2-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.20)的制备根据制备8所描述的操作方式，将化合物No.19转化成化合物No.20。
硅胶CCM，环己烷/丙酮[1/1(v/v)]Rf＝0.36
流程图5-九糖No.25的合成
制备19(2，3-二-O-苯甲酰基-4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-苯甲酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)]2-(1→4)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.21)的制备根据制备4所描述的操作方式，让公开专利申请WO 99/36443所描述的制备1的类似方式得到的硫苷糖No.5(3.91g，3.93mmol)，与制备18得到的化合物No.20(4.97g，3.27mmol)进行偶联反应。该粗制产物采用硅胶柱色谱法进行纯化，得到8.06g化合物No.21。D＝+77°(C＝0.92，在二氯甲烷中)制备20(4，6-O-亚苄基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)]2-(1→4)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.22)的制备根据制备5所描述的操作方式，将化合物No.21转化成化合物No.22。
硅胶CCM，二氯甲烷/甲醇[9/1(v/v)]Rf＝0.34制备21(4，6-O-亚苄基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)]3-(1→4)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.23)的制备根据制备6所描述的操作方式，将化合物No.22转化成化合物No.23。
硅胶CCM，环己烷/丙酮[1/1(v/v)]Rf＝0.44制备22(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)]3-(1→4)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.24)的制备根据制备7所描述的操作方式，将化合物No.23转化成化合物No.24。
硅胶CCM，二氯甲烷/甲醇[10/1(v/v)]Rf＝0.43制备23(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)]3-(1→4)-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.25)的制备根据制备8所描述的操作方式，将化合物No.24转化成化合物No.25。
硅胶CCM，二氯甲烷/甲醇[10/1(v/v)]R＝0.64
流程图6-十二糖No.30的合成
制备24(2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-1，6-脱水-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-β-D-吡喃型葡萄糖(No.27)的制备采用公开专利申请WO 99/36443制备36所描述的类似方法制备的硫苷化合物No.26(10.1g，10.4mmol)、制备23得到的受体化合物No.25(5.02g，2.61mmol)，与4分子筛粉末(14.5g)在甲苯(220ml)中的混合物，在氩气氛下搅拌1小时。该反应混合物冷却到0℃，然后加入N-碘代丁二酰亚胺(2.58g)和三氟甲烷磺酸(366μl)在57ml二氯甲烷/二烷混合物[1/1(v/v)]中的溶液。40分钟后，该混合物用硅藻土过滤，用甲苯稀释，然后相继地用1M硫代硫酸钠溶液、10％碳酸氢钠溶液和水洗涤。该反应混合物再用无水硫酸钠干燥，过滤，然后进行真空浓缩。该残留物采用硅胶柱色谱法进行纯化[二氯甲烷/乙酸乙酯/乙醇，先17/1/1，然后14/1/1(v/v/v)]，得到5.87g化合物No.27。
硅胶CCM，二氯甲烷/乙酸乙酯/乙醇[8/0.5/0.5(v/v/v)]；[甲苯/丙酮(1/1(v/v)]Rf＝0.41制备25(2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-1，6-二-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-D-吡喃型葡萄糖(No.28)的制备化合物No.27(4.06g，1.44mmol)在乙酸酐(13.6ml)和三氟乙酸(1.2ml)混合物中的溶液进行搅拌6小时。浓缩后，该混合物与甲苯(5×25ml)共蒸发。该残留物采用硅胶柱色谱法进行纯化[环己烷/乙酸乙酯/乙醇，3/1/1(v/v/v)]，得到2.930g化合物No.28。
硅胶CCM，甲苯/丙酮[1/1(v/v)]Rf＝0.44
制备26(2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-6-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-D-吡喃型葡萄糖(No.29)的制备化合物No.28(2.72g，0.928mmol)和苄胺(3.9ml，35.2mmol)在四氢呋喃中的溶液在室温下进行搅拌16小时。该反应混合物用乙酸乙酯进行稀释，用1M盐酸、再用水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，然后进行真空浓缩。该残留物采用硅胶柱色谱法进行纯化[环己烷/丙酮，4/5(v/v)]，得到2.21g化合物No.29。
硅胶CCM，环己烷/丙酮[4/5(v/v)]Rf＝0.42制备27(2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-6-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-D-吡喃型葡萄糖三氯亚氨逐乙酸酯(No.30)的制备往化合物No.29(0.313g，108μmol)在二氯甲烷(3ml)中的溶液里，添加三氯乙腈(54.6μl，541μmol)和碳酸铯(56.4mg，173μmol)。搅拌1小时30分钟后，该混合物进行过滤，然后浓缩。该残留物采用硅胶柱色谱法进行纯化，使用含有0.1％三乙胺的环己烷/乙酸乙酯/乙醇混合物[2/0.5/0.5(v/v/v)]洗脱，得到245mg化合物No.30。
硅胶CCM，环己烷/乙酸乙酯/乙醇[5/1.5/1.5(v/v/v)]Rf＝0.41
流程图7-四糖No.34的合成
制备28甲基(4-O-乙酰丙酸基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(3，6-二-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷(No.32)的制备采用与公开专利申请WO 99/36443所描述制备31的类似方法制备的化合物No.31(4.50g，3.02mmol)，在72ml乙酸乙酯/叔丁醇混合物[1/1(v/v)]中的溶液，在10％披钯炭(9.0g)的存在下在氢气压(4bar)下处理6小时。过滤与浓缩后，得到的化合物No.32未经纯化直接加到下述步骤中。
制备29甲基(4-O-乙酰丙酸基-2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸甲酯)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸甲酯)-(1→4)-2，6-二-O-乙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷(No.33)的制备在0℃，往化合物No.32(1.09g，1.13mmol)在无水N，N-二甲基甲酰胺(15ml)中的溶液里，添加碳酸氢钾(1.13g)，再添加碘甲烷(1.4ml)。在室温下搅拌16小时后，该反应介质冷却到0℃。然后相继地添加二甲基氨基吡啶(44mg)，乙酸酐(2.4ml)。该混合物搅拌16小时。中和过量的乙酸酐后，该混合物用乙酸乙酯稀释。有机相相继地用10％硫酸氢钾溶液、水和饱和碳酸氢钠溶液、再用水洗涤。然后有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，然后蒸发至干。再在通常的条件(二氯甲烷中的乙酸酐、二甲基氨基吡啶、三乙胺)下，将得到的残留物进行乙酰化。处理后，该残留物采用硅胶柱色谱法进行纯化[环己烷/乙酸乙酯/乙醇，12/2.5/2.5(v/v/v)]，得到0.910g化合物No.33。
硅胶CCM，甲苯/丙酮[2/1(v/v)]Rf＝0.49制备30甲基(甲基2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(甲基2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-2，6-二-O-乙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷(No.34)的制备化合物No.33(0.884g，0.793mmol)溶于160ml甲苯/乙醇混合物[1/1(v/v)]中。添加乙酸肼(0.365mg)。在室温下搅拌5小时后，该反应介质浓缩至干。把残留物溶于二氯甲烷中。有机相相继地用2％碳酸氢钠溶液和水洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干。硅胶柱色谱法纯化[甲苯/丙酮5/3(v/v)]后，得到0.696g化合物No.34。
硅胶CCM，甲苯/丙酮[2/1(v/v)]Rf＝0.37
流程图8-十六糖No.42和No.43的合成
制备31甲基(2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(6-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸甲酯)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸甲酯)-(1→4)-2，6-二-O-乙酰基-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷(No.36)的制备将制备27中得到的亚氨酸酯化合物No.30(170mg，56μmol)和制备30得到的化合物No.34(114mg，112μmol)溶于2.5ml二氯甲烷/二乙基醚混合物[1/2(v/v)]中。添加4分子筛粉末后，该混合物冷却到-20℃，然后添加0.1M三甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯在二氯甲烷(84μl)中的溶液。40分钟后，添加固体碳酸氢钠中和该混合物。过滤与浓缩后，残留物用SephadexLH60凝胶色谱法进行纯化，接着进行硅胶柱色谱法纯化[二乙醚/乙醇(17/2v/v)]，得到123mg化合物No.36。
质量“ESI”法，正模式化学质量＝3890.87；实验质量3890.46±0.68u.m.a.
硅胶CCM，二乙醚/乙醇[17/2(v/v)]Rf＝0.40制备32甲基(2，3，4，6-四-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(6-O-苯甲酰基-2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(6-O-乙酰基-2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(甲基2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(甲基2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-乙酰基-α-D-吡喃葡萄糖苷(No.37)的制备将根据制备27得到的亚氨酸酯化合物No.30(95mg，0.031mmol)和公开专利申请WO 02/24754制备42得到的化合物No.35(65.4mg，0.062mmol)溶于1.5ml二氯甲烷/二乙醚混合物[1/2(v/v)]中。添加4分子筛粉末后，该混合物冷却到-20℃，然后添加0.1M三甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯在二氯甲烷(47μl)中的溶液。40分钟后，添加固体碳酸氢钠中和该混合物。过滤与浓缩后，该残留物采用SephadexLH60凝胶色谱法(进行2次色谱纯化)进行纯化，得到68mg化合物No.37。
质量“ESI”法，正模式化学质量＝3918.88；实验质量3919.35±0.71u.m.a.
硅胶CCM，环己烷/乙酸乙酯/乙醇[3/1/1(v/v/v)]Rf＝0.53制备33甲基(α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖苷(No.38)的制备在-5℃，往制备31中得到的化合物No.36(111mg)在四氢呋喃(4.6ml)中的溶液里，添加30％过氧化氢(3.9ml)。搅拌5分钟后，滴加0.7M氢氧化锂水溶液(1.8ml)。该反应混合物在-5℃下搅拌1小时，然后在0℃搅拌4小时，最后在室温下搅拌16小时。把该反应混合物加到用水洗脱的细粒SephadexG-25(5×100cm)柱上。这些含有期望化合物的馏分合并，浓缩并加到DowexAG 50WX4H+树脂(1.9ml)柱上。在0℃收集该化合物，浓缩得到72.1mg化合物No.38。
硅胶CCM，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水[16/12/2.6/7(v/v/v/v)]Rf＝0.60。
制备34甲基(α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-α-D-吡喃葡萄糖苷(No.39)的制备在-5℃，往化合物No.37(60mg)在四氢呋喃(5.5ml)中的溶液里，添加30％过氧化氢(2.2ml)。搅拌5分钟后，滴加0.7M氢氧化锂水溶液(1ml)。该反应混合物在-5℃下搅拌1小时，然后在0℃下搅拌4小时，最后在室温下搅拌16小时。用1M盐酸溶液中和该混合物。把这种溶液加到用水洗脱的细粒SephadexG-25(5×100cm)柱上。含有期望化合物的馏分合并，浓缩，放到DowexAG 50 WX4 H+树脂柱上。在0℃收集该化合物，浓缩得到37.5mg化合物No.39。
硅胶CCM，乙酸乙酯/吡啶/乙酸/水[16/12/2.6/7(v/v/v/v)]Rf＝0.36。
制备35甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-3-O-甲基-2，6-二-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，钠盐(No.40)的制备制备33得到的化合物No.38仅在使用前与N，N-二甲基甲酰胺(3×2ml)一起进行共蒸馏。往化合物No.38(70.3mg，22.8μmol)在N，N-二甲基甲酰胺(2ml)中的溶液里，添加三氧化硫-三乙胺配合物(351mg)。在避光下，该混合物在55℃搅拌16小时。该混合物冷却到0℃后滴加到碳酸氢钠水溶液中。在室温下搅拌16小时，然后浓缩至干。把溶于水的残留物加到用0.2M氯化钠洗脱的细粒SephadexG-25柱上。含有该产物的馏分进行浓缩，再使用用水洗脱的相同柱进行脱盐。冻干后，得到103mg化合物No.40。
质量“ESI”法，负模式化学质量＝4864.82；实验质量4862.90±0.21u.m.a.
制备36甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-(α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-叠氮基-2-脱氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，钠盐(No.41)的制备根据制备35中所描述的操作方式，将制备34得到的化合物No.39(33mg，0.017mmol)转化成化合物No.41。浓缩后，得到40mg化合物No.41。
质量“ESI”法，负模式化学质量＝4952.83；实验质量4950.19±0.55u.m.a.
制备37甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-amino-2-脱氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-3-O-甲基-2，6-二-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，钠盐(No.42)的制备制备35得到的化合物No.40(93.8mg)在叔丁醇(1.2ml)与水(1.8ml)混合物中的溶液，在氢压力(5bar)与10％披钯炭(28mg)存在下，在40℃处理4小时。过滤(MilliporeLSWP 5μm过滤器)后，该溶液浓缩至干，得到93mg化合物No.42。
制备38甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-氨基-2-脱氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，钠盐(No.43)的制备根据制备37所描述的操作方式，将制备36得到的化合物No.41(40.8mg)转化成化合物No.43。浓缩后，得到42.3mg化合物No.43。
质量“ESI”法，负模式化学质量＝4926.84；实验质量4924.07±0.36u.m.a.
实施例1 实施例2
实施例1甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-[N-(6-生物素酰胺基己酰基)]-2-脱氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-3-O-甲基-2，6-二-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，钠盐的制备根据制备37得到的化合物No.42(20mg，4.13μmol)溶于0.5％碳酸氢钠水溶液(1.7ml)中。往该溶液里滴加磺基丁二酰亚胺6-(生物素酰胺基)己酸酯(23mg，41.3μmol)在0.5％碳酸氢钠溶液(100μL)中溶液。在室温下搅拌16小时后，添加1M氢氧化钠水溶液，然后搅拌1小时。把该反应混合物加到用0.2M氯化钠水溶液洗脱的细粒SephadexG-25(5×100cm)柱上。含有产物的馏分进行浓缩，再用用水洗脱的相同柱进行脱盐。冻干后，得到21.2mg实施例1的化合物。
质量“ESI”法，负模式；单一同位素质量＝5174.38；化学质量＝5178.28；实验质量＝5177.69±0.52u.m.a.
实施例2甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-[N-(6-生物素酰胺基己酰基)]-2-脱氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，钠盐的制备根据实施例1所描述的操作方式，将根据制备38得到的化合物No.43(19.1mg)转化成化合物No.45。冻干后，得到18.1mg实施例2的化合物。
质量“ESI”法，负模式；单一同位素质量＝5262.31；化学质量＝5266.30；实验质量5263.93±0.38u.m.a.
权利要求
1.下式I的生物素化十六糖以及它们在药物上可接受的盐 式中-T代表下式链T1或T2 -Biot代表下述基团 -R代表(C1-C6)烷氧基，特别地甲氧基，或-OSO3-基，-R1代表(C1-C6)烷氧基，特别地甲氧基，或-OSO3-基，-R2代表(C1-C6)烷氧基或-OSO3-基，-R3代表(C1-C6)烷氧基，特别地甲氧基，或-OSO3-基，或R3构成-O-CH2-桥，-CH2-基团与在相同环上带有羧基官能团的碳原子连接起来，-Pe代表下式的糖链
2.根据权利要求1所述的式I生物素化十六糖，式中-R代表甲氧基或-OSO3-基，-R1代表甲氧基，-R2代表-OSO3-基，-R3代表甲氧基。
3.根据权利要求1或2中所述的生物素化十六糖，它选自·甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-[N-(6-生物素酰胺己酰基)]-2-脱氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-3-O-甲基-2，6-二-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，钠盐·甲基(2，3，4，6-四-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-[(2，3，6-三-O-甲基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-O-(2，3，6-三-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)]3-(2-[N-(6-生物素酰胺己酰基)]-2-脱氧-3-O-甲基-6-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖基糖醛酸)-(1→4)-(2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖基)-(1→4)-(2，3-二-O-甲基-α-L-艾杜吡喃糖基糖醛酸)-(1→4)-2，3，6-三-O-磺酸基-α-D-吡喃葡萄糖苷，钠盐。
4.药物组合物，其含有作为活性组分的根据权利要求1-3中任一项权利要求所述的十六糖，任选地与一种或多种惰性或适当的赋形剂并用。
5.根据权利要求4所述的药物组合物在下述疾病中的用途当心血管和脑血管系统障碍，如与动脉粥样硬化和糖尿病有关的血栓栓塞，像不稳定型心绞痛、中风、血管成形术后再狭窄、动脉内膜切除术、血管内假体插入；或与溶栓后的血栓再形成、梗塞、缺血性痴呆、外周动脉病、血液透析、心房纤维性颤动相关的血栓塞障碍时，或使用主动脉-冠状动脉分流术的血管假体时出现凝血系统内环境稳定性改变所造成的各种病理学，用于治疗或预防静脉源血栓塞病症，例如肺栓塞，用于预防或治疗在外科手术后，由细菌、病毒或酶活化剂诱发的肿瘤生长或凝血失常后所观察到的血栓性并发症。
6.根据权利要求1-3中任一项权利要求所述的生物素化十六糖在覆盖假体中的用途。
7.根据权利要求1-3中任一项权利要求所述的生物素化十六糖在用多孔气囊进行的动脉内膜切除术中作为辅药的用途。
8.使用抗生物素蛋白或抗生蛋白链菌素的方法，其特征在于它能够中和根据权利要求1-3中任一项权利要求所述的生物素化十六糖。
9.抗生物素蛋白或抗生蛋白链菌素在制备药品中的用途，该药品用于中和根据权利要求1-3中任一项权利要求所述的生物素化十六糖。
全文摘要
本发明涉及新的式(I)的生物素化十六糖，式中Biot是生物素衍生物；R、R
文档编号A61F2/958GK101039963SQ200580034445
公开日2007年9月19日 申请日期2005年9月7日 优先权日2004年9月9日
发明者P·迪肖索伊, J·P·赫劳尔特, J·M·埃尔贝, M·佩蒂图, P·萨维 申请人:赛诺菲-安万特