专利名称：：绿原酸在制备具有雌激素样或促雌激素样作用药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种绿原酸的新药物用途，具体讲是绿原酸在制备具有雌激素样或促雌激素样作用药物中的应用。技术背景植物雌激素(Phytoestrogen)是一类具有类似动物雌激素生物活性的植物成分。广泛分布于自然界植物中，是天然药物的重要成分。植物雌激素的种类很多，主要有异黄酮类(Isoflavones)和香豆素类(Coumestans)。其中的大豆黄酮(Daidzein,Da)和香豆雌酚(Ccmmestrol)是豆科植物中最主要的2种雌激素化合物。还有一些真菌毒素也具有雌激素活性，如玉米赤霉烯酮(Zearalenone)等。研究结果表明，适量的植物雌激素能促进动物生长、提高产蛋和泌乳性能、增强机体的免疫力、调节动物繁殖等，并具有毒性小等优点。现有的体内外试验结果证实，植物雌激素对人或动物机体的细胞免疫、体液免疫及非特异性免疫功能均有不同程度的影响。此外，植物雌激素还可具有抗癌作用，对胃癌、肝癌、.膀胱癌及其它一些癌细胞系的生长、增殖都具有抑制作用。女性雌激素水平下降后内分泌失调，在闭经的同时可表现出如潮热伴出汗、容易疲劳、烦躁不安、失眠心悸、头晕头痛、腰膝酸痛和记忆力下降、生殖器官萎縮或脱垂、生殖泌尿系统炎症、皮肤干燥松弛等一系列更年期症状。由于雌激素水平下降影响钙的吸收和沉积，破骨细胞活性增加，新骨不能填满旧骨空隙而常出现腰背、关节或足跟痛等症状，严重者易发生骨折。此外，进入更年期后的女性，还容易出现新陈代谢障碍，表现为血脂升高、体重增加、脂肪堆积等，许多妇科恶性肿瘤也与雌激素水平有关。绿原酸是广泛存在于各种植物中的一种重要成分，在如葵花籽、多种水果(苹果、梨、葡萄)、蔬菜(土豆)、大豆、小麦、可可豆、咖啡豆、沙棘果和传统中草药(杜仲、金银花)等植物中均含有不同程度的绿原酸。目前对绿原酸的化学结构已经清楚，如式(I)所示。申请号为200510020706.5的中国专利文献报道已可以从植物中分离纯化得到具有高纯度的该化合物单体，并且己经成为了许多中药材和中成药的质量指标。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(I)对绿原酸的生物活性研究已有很多报道，如已知绿原酸可具有清除自由基和抗氧化作用、抑制基因突变和抗肿瘤作用、降血糖、抗感染等，US6,395,279，US7,005,146，US6,998,141等文献都报道了对其进行的药用研究。中国专利申请200510088025.8，200510088023.3和200510088024.8等报道了对各种原因引起的全血细胞减少等疾病的应用。但对绿原酸所具有的雌激素样和或促雌激素样的作用和/或功效的应用，目前尚未见有文献报导。
发明内容鉴于上述情况，本发明将提供一种绿原酸在制备具有雌激素样或促雌激素样作用药物中的应用。本发明的绿原酸在制备具有雌激素样或促雌激素样作用药物中的应用，包括在人用或兽用药物中的应用。所说的绿原酸结构如上述式(I)所示。在本发明的上述绿原酸药物应用中，除包括以所说的绿原酸单独作为有效药物成分，与药学中可以接受的辅助性成分共同组成的包括口服或注射形式的药物制剂形式外，还包括以所说的绿原酸作为有效药物成分之一，与其它己有报道或使用的具有雌激素样或促雌激素样作用或能帮助绿原酸发挥作用的药物成分，如异黄酮、葛根素、黄芪皂苷等促雌激素样药物成分，与药学中可以接受的辅助性成分共同组成的包括口服和注射形式的药物制剂。所说的药学中可以接受的辅助性成分，可包括例如在片剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂或适当形式的缓控释剂等固体制剂形式口服药物制剂中可以接受和使用的填充剂(如淀粉、糊精、糖粉、预胶化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纤维素、碳酸钙、硫酸钙、碳酸氢钙等)、黏合剂(如羟丙甲纤维素、聚维酮、淀粉浆、糊精浆、糖浆、胶浆、海藻酸钠、聚乙二醇、桃胶、阿拉伯胶等)、崩解剂(如交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、羟丙基淀粉、低取代羟丙基纤维素柠檬酸、酒石酸、酸酐、碳酸氢钠、碳酸钠等)、赋形剂、润滑剂(如硬脂酸镁(钠)、滑石粉、微粉硅胶、液体石蜡、聚乙二醇等)等；软胶囊剂中的基质(如植物油(色拉油、蓖麻油、氣化大豆油)、聚乙二醇(300、400、6000)等)、抗氧化剂(如亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、半胱氨酸、叔丁基对羟基茴香醚、二丁甲苯酚、维生素E等)；在口服缓控释制剂中的阻滞剂(如蜂蜡、巴西棕榈蜡、氢化植物油、硬脂醇、单硬脂酸甘油酯、醋酸纤维素酞酸酯、L-或S-丙烯酸树脂、羟丙甲纤维素酞酸酯、醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙甲纤维素、聚维酮、卡波普、海藻酸钠、脱乙酰壳聚糖、乙基纤维素、聚甲基丙烯酸酯、无毒聚氯乙烯、聚乙烯、乙烯-醋酸乙烯共聚物、硅橡胶等)、增稠剂(如明胶、聚维酮、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、右旋糖酐等)；在液体口服制剂药物中常用的增溶剂、乳化剂、润湿剂、起泡或消泡剂等表面活性剂、稀释剂、防腐剂、稳定剂、矫味剂、增稠剂等辅助成分，以及稳定剂(如环糊精包合物，表面活性剂等)、抗氧化剂(如亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、半胱氨酸等)；在注射药物制剂中允许使用的溶剂、助溶剂、稳定剂和附加剂等。.经相应的制剂方法和过程，即可制备得到相应的口服或注射等制剂形式的药物。经实验发现，绿原酸长期给药除具有毒性低的优点外，还能具有雌激素样和或促雌激素样的作用和功效。雌激素对人体的作用超过200多种，其中关系较密切的是与女性卵巢功能衰退，体内雌激素水平下降导致的内分泌失调。绿原酸对雌激素水平下降者能发挥弱的雌激素样作用，可防止一些和雌激素水平下降有关的病症，如更年期综合征、骨质疏松、高血脂、心脑血管病、妇科恶性肿瘤等，如能调节内分泌系统，缓解阴道干燥，减少潮热次数，使皮肤保持弹性，改善失眠多梦，使精神情绪有所好转，减缓骨质疏松带来的一系列症状，降低高血脂、减少肥胖、预防心血管病，并可有助于预防妇科恶性肿瘤。通过下述对绿原酸的安全性试验及对Beagle犬静脉滴注30天长期毒性试验对雌性生殖系统的作用实验，可证实绿原酸不仅具有满意的安全性，并在雌激素样或促雌激素样作用方面具有显著的功效。实验例1绿原酸连续180天大鼠腹腔注射以及停药30天恢复性观察1、实验方法绿原酸连续180天腹腔注射给予大鼠80、40、20mg.kg-l.d(大、中、小)三剂量组，对照组给予生理盐水，以及停药恢复期观察30天。结果见表l。表1绿原酸给药剂量与分组<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>2、实验结果连续给药180天，三个剂量组动物的外观体征、行为活动无明显异常。饲料日耗量随体重增长而增加，各组动物对饲料消耗量无明显差别。给药180天与给药前比，体重平均增长。给药90、180天，以及停药观察30天，大、中、小剂量组外周血象检查指标和血液生化检査IO项指标与对照组比较均无统计学差异(P>0.05),外周血象，血液生化检査，数据均在正常范围内波动，未见异常。结果见表2表5.表2给药180天外周血象检査U+早；±s)指标(单位)大剂量(n=20)中剂量(n=19)小剂量(n=19)对照组(n=20)WBC(xlOVL)18.87±5.9417.63±7.2012.37±5.50*19.30±6.87LYM(xl09/L)12.74±4.0512.12±5.158.46±4.0512.43±5.28MID(xl09/L)1.22±0.471.15±0.510.83±0.311.30±0.43GRAN(xl09/L)4.92±1.624.36±1.663.09±1.355.57±1,55LYM(0/cO0.677±0.0220.684±0.0260.680±0.0370.637±0.065MID(%)0.067±0.0150.070±0.0110.074±0.0230.072±0.015GRAN(%_)0.256±0.0240.247±0.0220.246±0.0290.292±0.059RBC(xlO。/L)10.08±1,9711.39±0.9411.43±1.089.12±1.23HGB(g/L)206.卯±35.97258.84±30.09231.58±26.51215.40±8.41HCT(1/L)0.506±0扁0.567±0.0330.581±0.0380.446±0.065MCV(fl)51.04±6.4149.87±3.1350.82±4.卯48.77±1.56MCH(pg)20.85±3.3022.73±2.3020.81±'3.4523.87±3.12MCHC(g/1)411.05±58.49455.79±42.45407.63±38.15491.15±71.78RDW-CV0.195±0.0320.198±0.0130,201±0.0150.198±0.024RDW-SD(fl)19.75±3.7319.05±0.9719.21±1.0319.45±1.64PLT(xl09/L)792.75±211.70691.79±255.14776.58±233.37802.95±237.04MPV(fl)9.03±1.749.12±1.569.40±2.939.40±1.62PCT(1/L)0.00348±0.002190.00296±0.002120.00309±0.001960.00338±0,00211LCDW(%)11.45±3.6510.79±4.8611.00±4,6211.45士5.19RCDW(0/0)3.95±3.023.53±2.462.95±1.185.10±2.49PDW(fl)10.88±3.2211.23±3.9410.56±3.4112.55±2.39RC(0/o)0.83±0.110.84±0.110.84±0.120.84±0.09凝血时间PT(s)11.95±1.0711.63±0.941.81±1.0711.48±0.59与对照组比较，P〈0.05表3停药观察30天外周血象检査($+早jc±s)指标(单位)大剂量(n=10).中剂量(n=10)小剂量(n=10)对照组(n=10)WBC(xlOy/L)11.11±1.0911.29±0.7611.88±1.973.03±2.12LYM(xl09/L)7.75±0.797.61±0.647.98±1.548.51±1.37MID(xl09/L)0.94±0.221.01±0.191.17±0.33U4±0.51GRAN(xl09/L)2.42±0.572.67±0.402.73±0.483.17±0,56LYM(%)0.697±0.0390.674±0.0310.671±0.0390.656±0.035MID(%)0.088±0.0130.094±0.0160.103±0.0220.105±0.026GRAN(%)RBC(xl(/2/L)0.216±0.0410.232±0.0320.227±0.0290.240±0.0238.16±0.867.87±0.807.76±0.497.39±0.77隨(g/L)169.30±15.06156.10±9.07158.70±10.75162.30±16.96HCT(1/L)0.374±0.037O.358±0.0590.350±0.0230.337±0.032MCV(fl)45.99±2.4543.94±2.9945.18±1.8945.71±2.27MCH(pg)20.75±2.0820.12±1.9320.31±1.5221.71±1.42MCHC(g/1)453.卯±56.80460.30±47.83449.50±23.00475.90±25.38RDW-CV0.183±0.0230.182±0細o.no土o.on0.181±0.010RDW-SD(fl)19.40±3.0618.40±.5118.60±0.9719.40±1.51PLT(xl09/L)757.60±123.34760.40±51.50745.30±118.34762.90±58.27MPV(fl)12.98±0.7712.91±0.6412.85±0.4012.97±0.72PCT(1/L)0.00399±0.001060.00324±0.000580.00370±0.001080.00333±0.00081LCDW(%)8.20±1.758.30±1.067.10±2.086.00±1.49RCDW(0/0)2.20±1.321.80±0.921.50±0.531.20±0.63PDW(fl)8.58±1.747.96±2.336.94±0.836.50±0.92RC(%)0.81±0.110.82±0.I20.80±0.110.82±0.11CT(s)12.30±0.5812.62±0.6612.77土0.8912.43±1.08表4给药180天血生化检测(;c土s)指标大剂量(n-20)中剂量(n-19)小剂量(11=19)对照组(n-20)Glu(mmol/L)5.02±0.645.36±0.995.39土0.594.47±0.68*Cre(umol/L)78.56±8.2676.67±9.4472.43±6.9784.02±6.17BUN—ol/L)4.18±0.734.63±0.964.02±1.653.82±1.56T-Bil(嶋l/L)9.23±2.0411.20±4.129.30±3.169.85±2.53TP(g/L)67.72±4.7466.93±4,3369.48±10.0070.89±6.33Alb(g/L)31.10±3.0733.18±3.5831.95±3.1331.87±3.29T-CHO(mmol/L)2.27±0.412.16±0.232.14±0.222.16±0.37ALT(U/L)48.85±8.6054.84±11.1056.37±10.31*50.15土18.49AST(u/L)132.00±34.24118.95±14.54119.21±17.30120.85±25.97ALP(u/L)123.80±46.40135.79±55.12117.37±38.99130.60±53.50表5停药观察30天血生化检测(x士s)指标大剂量(n-lO)中剂量(n-10)小剂量(n-lO)对照组(n-lO)Glu(mmol/L)5.93±0.555.81±0.665.66±0.425.58±0.47Cre(umol/L)109.58±9.25U2.28±7.73119.41±86.67110.04±14.89BUN(mmol/L)4.62±0.644.59±0.534.23±0.794.37±0.69T-Bil(umol/L)7.47±0.936.44±0.927.26±1.006.93±1.03TP(g/L)73.54±5.3075.04±4.2572.08±2.1373.81±3.81Alb(g/L)30.51±2.5730.11±3.2430.96±3.0030.34±1.69T-CHO(mmol/L)1.41±0.321.23±0.171.51±0.271.42±0.29ALT(u/L)53.卯±16.3350.10±12.9352.20±12.6149.90±7.17AST(u/L)136.70±36.17126.卯±19.19127.20±29.66121.20±25.78ALP(u/L)191.卯±90.98173.00±54.37167.00±74.74165.00±82.51为了验证比较依托度酸普通外用凝胶制剂、醇质体外用凝胶制剂的抗炎效果，使用大鼠佐剂关节炎模型考察依托度酸的抗炎作用。受试药物本发明提供的依托度酸普通外用凝胶制剂(按实施例3的制备方法)、双氮芬酸外用凝胶制剂(按实施例3的制备方法)、醇质体外用凝胶制剂。实验方法模型建立及实验方案1、Fmmd's完全佐剂的制备:将液体石蜡和羊毛脂(2:l)共热至70t:振荡,高压灭菌,然后按每ral加入卡介苗7.5卿制成。2、选用雄性Wistar大鼠，体重180g左右。3、致炎模型建立将每只大鼠右后足跖皮内注射Freimd's完全佐剂0.05ml致炎。原发性病变主要表现为早期致炎组织局部的炎症反应，致炎后理论上18h右脚的肿胀达到峰值，持续3天后逐渐减轻，8天后再度肿胀续发病变一般出现于致炎后IO天左右。4、给药方案主要观察药物对原发性病变的影响，所以，在致炎前0.5-1小时给药以后每8h给药一次。表1依托度酸对大鼠佐剂性关节炎足跖肿胀的抑制作用(cm)組別模盥对照阳性对瓶灌胃给药曹通外用.醉质体外88888致炎前0.665±0加00.663±0加70.667士0.0.665±汰加7她汰757±0.啦0.6抑士0.0110.708士0.0130.676±0.0170.674±0.009差值WH7±0.002"0.083±0.加3**汰W1士0加2禍25h0.郊3土0.02S0.6M±0.0060.725±0.咖禱3士ft加5O.砂l士O.鹏差值O.鹏士O.,0.057±0.004"'0.028±謹2"*働0.739±0.0160.682±謹70.703±0.015O.棚士O細0.677±謹7差值,4±0.鹏WM9士(L003"0.036±0.004"72h0.674土0加50.666±0.0110.673±0.013O.娜土O.卿0.663±0.,差僮汰腳土O鹏0.003±0.002**0.卿±0观20.001±0.001""'-j模艰组比较"P幼.(M,具体实施方式实施例1绿原酸的0.9%氯化钠静脉注射液处方一纯度大于95%的绿原酸lg枸橼酸l.Og枸櫞酸钠0.5g氯化钠18g注射用水2000ml按注射剂的常规操作共制成2ml的注射剂1000支，每支含绿原酸1毫克处方二纯度大于95%的绿原酸3000g氯化钠4500g注射用水500,000ml按注射剂的常规操作共制成500ml的注射剂1000瓶，每瓶含绿原酸3克防止绿原酸水解的稳定剂如环糊精包合物、表面活性剂(普鲁朗尼克)。抗氧化剂亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、半胱氨酸。生理可用的pH值调节剂谷氨酸、L-天冬氨酸、抗坏血酸、盐酸、醋酸。实施例2含氯化钠的无菌粉针剂处方一纯度大于95%的绿原酸无菌粉lg氯化钠无菌粉_^_按无菌粉针剂的常规操作共制成2ml粉针剂1000支，每支含绿原酸l毫克处方二纯度大于95%的绿原酸无菌粉__按无菌粉针剂的常规操作共制成5ml粉针剂1000支，每支含绿原酸3克处方三四分别将实施例1中各处方的成分，经冻干设备冷冻干燥制得绿原酸氯化钠的无菌冻干粉针剂。实施例3绿原酸的5%葡萄糖静脉注射液处方一绿原酸(纯度大于95%)2g枸橼酸l.Og枸橼酸钠0.5g葡萄糖100g注射用水2000ml按注射剂的常规操作共制成2ml的注射剂1000支，每支含绿原酸2毫克处方二绿原酸(纯度大于95%)1500g葡萄糖1000g注射用水20000ml按注射剂的常规操作共制成20ml的注射剂1000支，每支含绿原酸1.5克处方三-绿原酸(纯度大于95%)3000g葡萄糖100g注射用水1000,00ml按注射剂的常规操作共制成100ml的注射剂1000瓶，每瓶含绿原酸3克防止绿原酸水解的稳定剂如环糊精包合物、表面活性剂(普鲁朗尼克)。抗氧化剂亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、抗坏血酸、半胱氨酸。实施例4绿原酸片剂处方一<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>共计200.00g按片剂常规方法制备，共制成1000片，每片含绿原酸lmg。处方二绿原酸(纯度大于95%)lOO.OOg填充剂no.oog崩解剂15.00g黏合剂lO.OOg润滑剂5.00g共计300.00g按片剂常规方法制备，共制成1000片，每片含绿原酸100mg。处方三:绿原酸(纯度大于95%)300.00g填充剂155.00g崩解剂20.00g黏合剂15.00g润滑剂lO.OOg共计500.00g按片剂常规方法制备，共制成1000片，每片含绿原酸300mg。填充剂如淀粉、糊精、糖粉、预胶化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纤维素、碳酸钙、硫酸钙、碳酸氢钙。黏合剂如羟丙甲纤维素、聚维酮、淀粉浆、糊精浆、糖浆、胶浆、海藻酸钠、聚乙二醇、桃胶、阿拉伯胶。崩解剂如交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、羧甲淀粉钠、羟丙基淀粉、低取代羟丙基纤维素、柠檬酸、酒石酸、酸酐、碳酸氢钠、碳酸钠。润滑剂如硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、液体石蜡、聚乙二醇。实施例5绿原酸胶囊剂处方一绿原酸(纯度大于95%)l.OOg填充剂184.00g黏合剂5.00g润滑剂10.00g共计200.00g按胶囊剂常规方法制备，共制成iooo粒胶囊，每粒胶囊含绿原酸lmg。处方:绿原酸(纯度大于95%)100.00g填充剂85.00g黏合剂5.00g润滑剂10.00g共计200.00g按胶囊剂常规方法制备，共制成iooo粒胶囊，每粒胶囊含錄原酸100mg。处方三绿原酸(纯度大于95%)300.00g填充剂85.00g黏合剂5.00g润滑剂10.00g共计400.00g按胶囊剂常规方法制备，共制成1000粒囊，每粒胶囊含绿原酸300mg。填充剂如淀粉、糊精、糖粉、预胶化淀粉、乳糖、葡萄糖、微晶纤维素、碳酸钙、硫酸钙、碳酸氢钙。黏合剂如羟丙甲纤维素、聚维酮、淀粉浆、糊精浆、糖浆、胶浆、海藻酸钠、聚乙二醇、桃胶、阿拉伯胶。润滑剂如硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、液体石蜡、聚乙二醇。权利要求1.绿原酸在制备具有雌激素样或促雌激素样作用药物中的应用，所说的绿原酸结构如式(I)所示2.如权利要求1所述的应用，其特征是以所说的绿原酸为有效药物成分，与药学中可以接受的辅助性成分共同组成的口服药物制剂。3.如权利要求1所述的应用，其特征是以所说的绿原酸为有效药物成分，与药学中可以接受的辅助性成分共同组成的注射药物制剂。4.如权利要求1所述的应用，其特征是以所说的绿原酸为有效药物成分之一，与其它具有雌激素样或促雌激素样作用或能帮助绿原酸发挥作用的药物成分的药物成分共同作为复方形式的有效药物成分，与药学中可以接受的辅助性成分共同组成的口服药物制剂。5.如权利要求4所述的应用，其特征是以所说的复方形式有效药物成分与药学中可以接受的辅助性成分共同组成的口服药物制剂。6.如权利要求1所述的应用，其特征是以所说的复方形式有效药物成分，与药学中可以接受的辅助性成分共同组成的注射药物制剂。全文摘要绿原酸在制备具有雌激素样或促雌激素样作用药物中的应用，所说的绿原酸结构如式(I)所示。以所说的绿原酸为有效药物成分，与药学中可以接受的辅助性成分，或者是所说的绿原酸作为有效药物成分之一，与其它具有同类功效的药物成分共同作为复方形式的有效药物成分，和药学中可以接受的辅助性成分共同组成包括口服、注射等制剂形式的药物。文档编号A61P35/00GK101120936SQ200610021590公开日2008年2月13日申请日期2006年8月11日优先权日2006年8月11日发明者洁张,舒张,徐小平,波江,雍智全申请人:四川九章生物化工科技发展有限公司