专利名称：总姜黄素在制备预防及延缓慢性肾功能衰竭药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及总姜黄素的一种新的医药用途。
背景技术：
姜黄是姜科植物姜黄(Curcuma longa L.)的干燥根茎。在中医药领域中，其被公认为具有破血、行气、通经止痛之功效。主要用于治疗胸肋刺痛、闭经、风湿肩臂疼痛、跌打肿痛。姜黄的药用活性成分主要是姜黄素(curcumin，1)、去甲氧基姜黄素(demethoxy-curcumin，2)、二去甲氧基姜黄素(bisdemethoxy-curcumin，3)，在制药领域中，通常将其称为总姜黄素。姜黄素类的化学结构式为
其中R1＝R2＝Ome为姜黄素(curcumin)R1＝H，R2＝OMe为去甲氧基姜黄素(demethoxy-curcumin)R1＝R2＝H为二去甲氧基姜黄素(bisdemethoxy-curcumin)。
国外有学者研究发现，总姜黄素具有多种药理功效，包括抗炎、抑制细胞增殖(如人血管平滑肌细胞、内皮细胞、淋巴细胞、纤维细胞及各种肿瘤细胞的增殖)，同时还具有抑制炎症因子所诱导的单核细胞、成纤维性细胞、系膜细胞及其他细胞表达转化生长因子TGF-β、单核细胞MCP-1、肿瘤坏死因子TNF、白介素IL-1、诱生性一氧化氮合成酶iNOS、基质金属蛋白酶MMP等的作用，减少细胞外基质如纤维连接蛋白，胶原蛋白等的产生。在临床应用中人们发现总姜黄素具有药理活性强，毒副作用小等诸多优点，故许多研发机构都在进一步研究开发总姜黄素的新的医药用途。
发明内容
本发明的目的就是要提供一种总姜黄素在制药应用领域中的新用途，同时为临床提供一种有效预防及延缓慢性肾功能衰竭的药物。
慢性肾功能衰竭(以下简称慢性肾衰)是发生在各种慢性肾脏疾病晚期的一个临床综合征。是由各种原因所造成的肾单位严重破坏，以及肾实质性不可逆转的功能损害，从而产生临床上以蛋白质代谢产物潴留，水、电解质及酸碱平衡失调和体内各种毒物排泄障碍，出现全身一系列中毒症状。对慢性受损的肾功能目前尚无特异有效的办法使之治愈，不过可通过采取一些办法减缓其病情的发展速度。近年来国内外医学专家均倾向于采用早期预防、严格降压、降蛋白尿、降脂、纠正电解质紊乱、酸中毒、改善贫血、减少心脑血管和肾性骨病等并发症的一体化综合治疗方案来预防、延缓慢性肾衰。但令人遗憾的是，这些治疗方案通常是依据患者出现不同的临床症状而采用相应的药物进行对症治疗。如除控制饮食外，控制血压主要依靠降压药；降低血脂、纠正脂质代谢紊乱，需配合使用降血脂药物；控制肾单位高代谢，需辅以降低体内甲基胍水平、减少氧自由基生成的药物。众所周知，慢性肾功能衰竭通常都是同时伴有多种临床症状，故患者在治疗过程中往往需要同时服用多种药物，这无疑会进一步增加患者的肾脏负担。再则，化学药物的诸多不良反应，也不利于患者的长期用药。因而，目前临床医师迫切希望发明一种具有多靶点效应且毒副作用小的药物用于预防、延缓慢性肾衰。
本发明人经长期研究发现总姜黄素的许多药理活性对慢性肾衰的许多病理特性均有相应的靶点效应，鉴此发明了总姜黄素在制备预防及延缓慢性肾功能衰竭药物中的应用。
有益效果 本发明的有益结果通过以下实验得到证实。
总姜黄素对腺嘌呤诱发的慢性肾衰大鼠的药效试验 药物实验所用药物为按照实施例1制得总姜黄素干燥粉末，总姜黄素含量以姜黄素计为50-95％； 1、实验方法 1.1动物与试剂 ①动物SD大鼠，雌雄各半，体重180.6±(SD)18.0g左右，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，许可证号SCXK(鄂)(2004-0007)。
②试剂腺嘌呤(Adenine，C5H5N5，FW135.13)，购于上海奥博生物进口分装。
1.2分组及造模 ①分组将40只SD大鼠选用市售固体词料喂养7d适应环境后，随机分为4组，即(1)正常组，(2)模型组，(3)给药1组，(4)给药2组。
②造模从试验第1日期，每日上午固定时间造模，除正常组外其余各组大鼠用腺嘌呤250mg/(kg·d)灌胃51d，正常组用等量生理盐水灌胃，全部动物均自由摄取饲料和饮水。
③方法给药1组从实验开始至第51d试验结束，1次/d，以54mg/(kg·d)总姜黄素灌胃，目的是观察总姜黄素的预防性给药药效；给药2组实验开始至第21d，1次/d，生理盐水灌胃，实验第22-51d试验结束，1次/d，以54mg/(kg·d)总姜黄素灌胃，目的是观察在总姜黄素的治疗性给药药效。
1.3检测指标①一般状态，②尿液检测24小时尿蛋白，③血液学指标红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、总蛋白(TB)、白蛋白(Alb)、肿瘤坏死因子(TNF-α)，血清一氧化氮(NO)、血清超氧化物歧化酶(SOD)，④病理检查肾脏。
1.4统计学分析采用SPSS进行统计分析，试验数据均以均数±标准差(
)表示，多组间比较采用方差分析，计数资料采用卡方检验。
2、结果 2.1、一般情况大鼠随进食腺嘌呤饲料时间延长，明显表现生长抑制，模型组大鼠摄食明显减少，活动减少，反应迟钝，被毛稀疏枯槁，腹部有不同程度脱毛，饮水量增多，尿量增多；给药1、2组上述情况明显较轻，身长和体重均有不同程度增加。
2.2总姜黄素对腺嘌呤慢性肾功能衰竭大鼠24h尿蛋白、RBC和Hb的影响。
(见表1) 表1第51d各组大鼠24h尿蛋白、RBC和Hb统计结果(
，n＝10) 从表1中可以看出模型组24小时尿蛋白量非常显著高于正常组，而RBC，Hb值非常显著低于正常组(P＜0.01)，说明造模成功；24小时尿蛋白量，RBC，Hb给药1、2组与模型组比较有非常显著差异(P＜0.01)；各治疗组与模型组比较均无差异(P＞0.05)，但均数统计显示给药1组24小时尿蛋白量低于给药2组，RBC，Hb值高于给药2组。
当肾衰时由于肾小球毛细血管基底膜对血浆蛋白质的通透性增加，造成严重的蛋白尿引起低白蛋白血症，随之可导致高脂血症等并发症。本实验表明总姜黄素预防组及治疗组，24h尿蛋白含量明显降低，前者降低更明显，白蛋白升高水平也是预防组较为显著，提示总姜黄素在降低尿蛋白及升高血白蛋白方面有协同作用。
该项动物实验还表明，总姜黄素可以显著提高慢性肾衰大鼠的血红蛋白，故可以部分纠正慢性肾衰病情进展中常见的贫血问题。
2.3总姜黄素对腺嘌呤慢性肾功能衰竭大鼠肾功指标的影响(见表2) 表2第51d各组大鼠肾功指标统计结果(
，n＝10) 与正常组比较“*”P＜0.05，“**”P＜0.01。与模型组比较“△”P＜0.05，“△△”P＜0.01 通过表2可以看出，经过腺嘌呤造模，模型动物血中BUN、Scr含量比正常组有了显著升高(P＜0.01)，表明本次造模是成功的。第51d，给药1、2组BUN、Scr、TB、Alb指标均好于模型组对照，说明总姜黄素可以明显抑制肾衰的进展，给药1、2组之间无明显差别，给药1组较给药2组进展有减缓的趋势。
Scr是人体内肌酸的代谢产物，肌酐的排泄主要通过肾小球的排泄作用。BUN是机体蛋白质代谢的终末产物，其全部从肾小球滤过。总姜黄素预防给药与治疗给药组均可使慢性肾衰大鼠血肌酐下降，尿素氮降低，提示该药物可以保护肾小球功能，减轻肾小球病变，增加肾小球滤过功能，加速慢性肾衰大鼠体内毒素排泄，减轻氮质血症，而具化浊排毒的作用。并且总姜黄素预防组比治疗组有减缓慢性肾衰进程的趋势。
2.4总姜黄素对腺嘌呤慢性肾功能衰竭大鼠内皮素血脂的影响(见表3) 表3第51d各组大鼠血脂水平(
，n＝10) 与正常组比较“*”P＜0.05，“**”P＜0.01。与模型组比较“△”P＜0.05，“△△”P＜0.01 表3可以看出，给药51d给药1、2组与模型组相比，对大鼠内皮素血脂ET、UHO、LDL有非常显著的降低作用(P＜0.01)，给药1、2组比较无明显差异(P＞0.05)，但均数统计显示给药1组降血脂趋势优于给药2组。
脂质代谢紊乱是促进肾小球硬化发生和慢性肾衰进展的重要因素之一。TNF-α使炎症细胞聚集与粘附，循环微血管扩张，通透性增强，参与了肾小球组织损伤。姜黄素预防组与治疗组均能降低TNF-α水平，而预防组较治疗组降低更显著。ET可刺激肾小球系膜细胞收缩、增殖，释放炎症介质和产生细胞外介质，促进肾小球炎症及硬化。总姜黄素预防和治疗组对ET具有显著降低作用，推测与其改善毛细血管堵塞，降低血脂水平，及血液粘滞度，改善肾脏血液灌注有关。总姜黄素对低密度脂蛋白(LDL)具有非常显著降低作用，而LDL被活性氧修饰后变成OX-LDL后者被认为比LDL更具有细胞毒作用，目前认为是高脂血症造成肾脏损害的主要病理机制之一。
2.5总姜黄素对腺嘌呤慢性肾功能衰竭大鼠TNF-α、SOD、NO检测(见表4) 表4 51d各组大鼠血TNF-α、SOD、NO检测统计结果比较(
，n＝10) 与正常组比较“*”P＜0.05，“**”P＜0.01。与模型组比较“△”P＜0.05，“△△”P＜0.01 表4可以看出第51d，给药1、2组与模型组比较可显著降低TNF-a值、SOD和NO值(P＜0.01)；给药1、2组无显著差异(P＞0.05)，但均数统计显示给药1组TNF-a值、SOD和NO值低于给药2组。
2.6总姜黄素对慢性肾衰大鼠自由基的影响，结果见表5。
表5总姜黄素对慢性肾衰大鼠自由基的影响(％，
) 与正常组比较“*”P＜0.01，与模型组比较“△△”P＜0.01 腺嘌呤诱发慢性肾衰模型肾组织SOD显著降低，推测可能是高浓度的腺嘌呤在肾组织黄嘌呤氧化酶作用下，转化为黄嘌呤和尿酸时伴有O2-和脂质过氧化物的产生，造成肾单位的功能损害和丧失。另外，慢性肾衰时肾小管高代谢，肾小管上皮细胞和浸润的炎症细胞耗氧量增加，诱发“呼吸爆发”，也是氧自由基大量产生的又一原因。
本实验证明了慢性肾衰时肾组织中SOD活力远低于正常组动物(P＜0.01)。经过总姜黄素预防或治疗后，较模型动物有了显著改善(P＜0.01)。研究表明，总姜黄素在改善肾功能的同时，可明显提高慢性肾衰大鼠肾组织SOD活力，说明该药物可减轻氧自由基对肾脏组织的损害，同时可抑制肾组织脂质过氧化反应和提高肾脏抗脂质过氧化的能力。
2.7病理学观察 正常组肾组织如常，组织学均未见改变。模型组肾体积均明显增大。各肾均存在区域性肾单位萎缩、消失，纤维组织增生明显及炎细胞浸润部分肾小管上皮细胞坏死、消失或扩张，甚者呈囊性。肾实质内肾小球数目明显减少，可见大小不一、数量小等的棕揭色结品或异物肉芽肿形成及蛋白质管型。给药1组肾病变较模型组明显减轻，肾体积除个别动物外，均略增大或接近正常组，肾单位萎缩、消失，纤维组织增生面积较小且局限在近被膜的皮质部分。除个别动物外，扩大的肾小管及结晶体形成均减轻，部分肾组织学与正常对照组比较大致相似。给药2组肾病变较模型对照组明显减轻，区域性肾单位萎缩、消失及纤维组织增生面积较模型组小；扩大的肾小管及肾实质内的结晶体较少。
腺嘌呤对大鼠肾脏损害是全面的，损害以肾小球和肾间质为主。总姜黄素治疗组与预防组动物其肾小球数量较模型组明显增多，肾小球囊壁底膜增厚减轻，肾小管结构、肾间质炎性反应等都有不同程度的减轻，可见总姜黄素具有改善肾功能的作用。详见图1、图2、图3、图4。
图1正常组病理图片。
图2模型组病理图片。
图3给药1组病理图片。
图4给药2组病理图片 综上所述，总姜黄素对慢性肾衰具有以下多靶点效应，即 (1)可增加肾衰大鼠的摄食量，增长体重，改善生存状态。
(2)能降低肾衰大鼠血肌酐、尿素氮，减少蛋白尿，改善肾功。
(3)能提高肾衰大鼠Hb、RBC，改善肾性贫血症状。
(4)总姜黄素能够降低肾衰大鼠NO，TNF-a含量，提高SOD水平，从而延缓肾衰的进展。
(5)能明显改善肾衰大鼠肾组织病理改变，延缓慢性肾衰的进展。
总姜黄素在其他药物制剂已有广泛而长期的应用(如作为心血管药物的降脂通络软胶囊)，至今未见其有任何严重毒副作用的相关报道。
本发明通过急性毒性试验的结果也表明该药物的无毒副作用(详见总姜黄素动物急毒试验)。
总姜黄素动物急毒试验 文献报导小鼠口服姜黄素胶囊制剂6g/kg(含20％的总姜黄素)测不出半数致死量。12只小鼠用姜黄醇浸液一次灌胃40-100g/kg(相当临床用药量的114-286倍)，观察三天无一只死亡。当大鼠经口服剂量高达5g/kg姜黄素后，没有发现任何明显的中毒作用。
本发明人用ICR小鼠30只，分成高、中、低3个组，每组10只动物，雌雄各半，每天灌胃姜黄提取物二次，每次10mg、5mg、2.5mg总姜黄素(相当于人体[以60kg计]一日用量的200倍、100倍和50倍)，连续观察一周，未出现异常反应，未见一只动物死亡，测不出LD50。因此，采用口服灌胃和腹腔注射两种途径对小鼠进行最大耐受量试验。
试验表明小鼠口服灌胃给药的最大耐受量为60mg/0.8ml总姜黄素，相当人一日用量的563倍；小鼠腹腔注射给药的最大耐受量为20mg/0.5ml总姜黄素，相当人一日用量的190倍。
总姜黄素在制备预防及延缓慢性肾功能衰竭药物中的应用，可按照常规的制剂方法将总姜黄素制成各种药物剂型，如片剂、滴丸、胶囊剂、散剂、注射剂、缓控释剂等等药物剂型。
在用于预防及延缓慢性肾功能衰竭时，口服制剂的用法用量为，每日服用总姜黄素300-600mg。其他制剂的用量可参考该用量。本发明的药物用法用量，也不完全限于此，临床医师也可以根据病人的具体情况决定药物的用法用量。
具体实施例方式 实施例1总姜黄素软胶囊 将姜黄药材粉碎成粉，过40-80目筛；姜黄粉进行超临界CO2萃取，萃取压力为30-35Mpa，萃取温度为50-60℃，萃取时间2-5小时；姜黄粉与CO2的重量比为1∶3-6，分离得到姜黄挥发油和去油后的姜黄A；将去油后的姜黄A加入2-10倍重量的乙醇或丙酮回流3次，每次0.5-2小时，过滤，得姜黄液B；回首姜黄提取液B中的乙醇或丙酮，减压干燥，得姜黄提取物；测定姜黄提取物干燥粉末的含量，其总姜黄素含量以姜黄素计为50-95％；将符合含量要求的姜黄素提取物，加入3-6倍的植物油或聚乙二醇混合，制成混悬液，即为软胶囊内容物；按重量比为40-60∶10-30∶50-30，称取明胶、甘油、水；混合制成软胶囊的囊壳；压制软胶囊。
用法用量口服，每日服用总姜黄素300-600mg。
实施例2总姜黄素片剂 按照上述实施例的方法制备的总姜黄素，加入适量辅料，采用常规方法压片，制成片剂。
用法用量口服，每日服用总姜黄素300-600mg。
实施例3总姜黄素颗粒剂 按照上述实施例的方法制备的总姜黄素，加入适量辅料，采用常规方法压片，制成颗粒剂。
权利要求
1、总姜黄素在制备预防及延缓慢性肾功能衰竭药物中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种总姜黄素在制药领域中的新用途，为临床预防、延缓慢性肾功能衰竭提供了一种新的、有效的药物。本发明表明总姜黄素可增加肾衰大鼠的摄食量，增长体重，改善生存状态；能降低肾衰大鼠血肌酐、尿素氮，减少蛋白尿，改善肾功；能提高肾衰大鼠Hb、RBC，改善肾性贫血症状；总姜黄素能够降低肾衰大鼠NO，TNF－a含量，提高SOD水平，从而延缓肾衰的进展；能明显改善肾衰大鼠肾组织病理改变，延缓慢性肾衰的进展。由此证明总姜黄素在制备预防、延缓慢性肾功能衰竭药物中的应用具有良好的效果。
文档编号A61K36/88GK1994286SQ200610102338
公开日2007年7月11日 申请日期2006年12月29日 优先权日2006年12月29日
发明者李振江 申请人:神威药业有限公司