离子络合物的制作方法

专利名称：：离子络合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种通过磷酸肽/磷蛋白进行稳定的无定形磷酸钩和/或无定形磷酸4丐氟的活负载络合物(s叩erloadedcomplexes)。由于这些活负载络合物可以再矿化(修复)龋齿的早期阶段以及其它牙科/医学的应用(包括抗龋齿、抗侵蚀/腐蚀和抗牙本质过敏)，其具有用于保护牙齿和骨骼结构的抗龋齿的性能。还提供了制备本发明活负载络合物的方法以及治疗或预防龋齿、牙结石、牙侵蚀/腐蚀和牙本质过敏的方法。
背景技术：
：龋齿通常是由于牙齿硬组织被有机酸去矿化而引起的，该有机酸由食用的糖通过牙斑齿致病性细菌(dentalplaqueodontopathogenicbacteria)发酵产生。龋齿仍是一个主要的公共健康问题。此外，恢复的牙齿表面在恢复区边缘的周围可能还会形成龋齿。即使在大多数发达国家通过使用氟化物已经降低了龋齿的流行，但是该疾病仍是一个主要的公共健康问题。牙侵蚀/腐蚀是通过食用的或返流的酸使牙齿矿物质流失。牙本质过敏是由于保护矿化层流失而暴露了牙本质小管，牙骨质和牙结石是牙齿表面磷酸4丐矿物质的不希望的沉积。因此，所有这些情形，龋齿、牙侵蚀/腐蚀、牙本质过敏以及牙结石都是磷酸4丐水平的不平衡。通过提供生物可利用的钙离子和磷酸根离子代替流失的磷酸钙矿物质而使用稳定的无定形磷酸钙UCP)可以治疗龋齿、牙侵蚀/腐蚀以及牙本质过敏。稳定的ACP也可以加入到龋齿的表面并进一步防止沉积。因此，稳、定的ACP和稳定的无定形磷酸钓氟(ACFP)可以在预防和治疗口腔疾病以及其它医疗情形方面发挥重大作用。酪蛋白以胶束形式存在于牛奶中，可以认为其大致是半径为约100nm的球形颗粒，分散在水、盐、乳糖和乳清蛋白的连续相中。酪蛋白胶束作为磷酸钩的载体为骨骼和牙齿结构提供钩离子和磷酸根离子的生物源。酪蛋白胶束在可溶的以及生物可利用状态维持钙离子和磷酸根离子的能力可以通过称为酪蛋白磷酸肽(CPP)的酪蛋白的胰蛋白酶多磷酸化多肽祐:保留。WO98/40406描述了在碱性pH生产的酪蛋白磷酸肽-无定形磷酸钓络合物(CPP-ACP)和CCP-稳定的无定形磷酸钙氟络合物(CPP-ACFP)。已经表明，这种络合物在人或动物的原位龋模型中可以阻止釉质去矿化和改善釉质亚表面损坏的再矿化。无论磷酸肽是否是一全长酪蛋白的部分，在形成络合物中起作用的磷酸肽都会形成络合物。美国专利US5，015,628已说明了通过消化胰蛋白酶形成活性酪蛋白磷酸肽(CPP),所述活性酪蛋白磷酸肽(CPP)包括下述肽Bosca-caseinX-5P(f59-79)[1],Bos卩画caseinX-4P(fl-25)[2],BosaS2-caseinX-4P(f46-70)[3]以及Bosas2-caseinX-4P(fl-21)[4]:[1]Gln59-Met-Glu-Ala-Glu-Ser(P)-lle-Ser(P)-Ser(P)-Ser(P)-Glu-Glu-lle-Val-Pro-Asn-Ser(P)-Va1-Glu-Gln-Lys79asl(59-79)[2]Arg、Glu-Leu-Glu-Glu-Leu-Asn-Val-Pro-Gly-Glu-lle-Val-Glu-Ser(P)-Leu-Ser(P)-Ser(P)-Ser(P)-Glu-Glu-Ser-Ue-Thr-Arg2513(1-25)Asn46-Ala-Asn-Glu-Glu-Glu-Tyr-Ser-lle-Gly-Ser(P)-Ser(P)-Ser(P)-Glu-Glu-Ser(P)-Ala-Glu-Val-Ala-Thr-GIu-Glu-Val-Lys7°as2(46-70)LysLAsn-Thr-Met-Glu-His-Val-SeitP^Seil^-SeitP^Glu-Glu-Ser-lle-lle-Ser(P)-Gln-Glu-Thr-Tyr-Lys21as2(l-21)。具有有助于稳定活负载无定形磷酸钙络合物活性的其它酪蛋白磷酸肽为含有下述序列的多肽Ser(P)-Xaa-Glu/ser(P)，其中Ser(P)表示磷酸丝氨酰残基(phosphoserylresidue)。因此，在稳定活负载无定形磷酸4丐和无定形磷酸4丐氟络合物方面起作用的磷酸肽/磷蛋白含有序列-A-B-C-,其中A是磷酸氨基酸，优选磷酸丝氨酸;B是包括磷酸氨基酸的任何氨基酸，C是谷氨酸、天门冬氨酸或磷酸氨基酸中的一种。在W098/40406中描述的通过酪蛋白磷酸肽稳定的无定形磷酸钓可通过澳大利亚维多利亚的RecaldentPty有限公司提供的以商标为RecaldentTM销售的产品而在商业上获得。然而，通过可用于治疗的酪蛋白磷酸肽稳定的一种更有效的形式的无定形磷酸4丐是让人所希望的。此外，当RecaldentTM溶解在诸如蒸馏水的载体中时，离子会不可避免地漏入周围的水中以形成一种平衡。在某些应用中，例如在治疗中，这将减少由组合物可供应的;寿酸钓。
发明内容一方面，本发明提供一种稳定的"活负载"磷酸肽或磷蛋白(PP)-无定形磷酸钩(ACP)或无定形磷酸钓氟(ACFP)络合物。该络合物可以在任何pH值形成(例如3-10)。优选地，石粦酸肽包括序列-A-B-C-，其中A为一种磷酸氨基酸，优选磷酸丝氨酸，B为包括磷酸氨基酸的任何氨基酸，C为谷氨酸、天门冬氨酸或磷酸氨基酸。磷酸氨基酸可以是磷酸丝氨酸。PP由钓离子和磷酸根离子活负载。钩离子的范围可以为30-1000摩尔的Ca每摩尔的PP，或30-100摩尔的Ca每摩尔的PP或30-50摩尔的Ca每摩尔的PP。在另一实施方案中，每摩尔的PP的Ca的摩尔数至少为25,30,35,40，45或50。磷酸根离子与钙离子的比率(Ca:P)通常为1.5-1.8:1。在一实施方案中，该比率为约1.58:1。另一方面，本发明提供了一种磷酸肽或磷蛋白(PP)稳定的无定形磷酸钓或无定形磷酸钩氟络合物，所述络合物的钩离子含量高于约30摩尔的钩每摩尔的PP。在一优选实施方案中，钓离子含量的范围为约30至100摩尔的钙每摩尔的PP。更优选地，钓离子含量的范围为约30至约50摩尔的4丐每摩尔的PP。本发明进一步涉及一种如上所描述的PP稳定的ACP或ACFP络合物的水溶液制剂。还应当理解，在本说明书中使用的术语"包含"(或其语法变形)与术语"包括"是等同的，其可以互换使用，不应认为排除其它成分或特征的存在。出乎意料的是，通过使用钙离子和磷酸根离子活负载酪蛋白磷酸肽，可以4吏采用W098/40406中所描述的方法生产的酪蛋白磷酸肽-无定形磷酸钩(CPP-ACP)在再矿化(修复)釉质亚表面损伤(牙齿腐烂的早期阶段)方面的活性超出预期可能的量显著地提高。钙可以是CaHP04或乳酸钩的形式以及磷酸氩钠或任何其它适宜形式的钙盐或磷酸盐。本发明的络合物中的PP可以是酪蛋白磷酸肽(CPP),所述磷酸肽可以是完整的酪蛋白或酪蛋白片断。形成的CCP-无定形磷酸钙络合物可以是一种胶体络合物，其中心颗粒凝聚以形成悬浮在水中的大(例如lQQnm)力交体颗粒。PP可以源自任何来源；其可以存在于包括一全长酪蛋白多肽的较大多肽中，或者如果其含有序列-A-B-C-，其可以通过酪蛋白或其它诸如卵黄高磷蛋白的富含磷酸氨基酸的蛋白的胰蛋白酶的或化学的(例如碱水解)的消化作用分离，或通过化学合成或重组合成分离。核心序列旁侧的序列可以是任何序列。然而，这些旁侧序列优选为asl(59-79)[1],(3(1-25)[2],aS2(46-70)[3]andaS2(l-21)[4]。所述旁侧序列可以通过册J除、添加或4呆守置^灸(conservativesubstitution)—个或多个残基而任意地被修饰。虽然优选的旁侧区有助于基序的结构作用(structuralaction)以保持肽的构象，从而所有的磷酰基和羧基可以和4丐离子相互反应，但是氨基酸组合物和旁侧区序列不是关键的。在一优选实施方案中，PP选自由o^(59-79)[1]、(3(1-25)[2]、as2(46-70)[3]和as2(I-21)[4]组成的组。在一优选实施方案中，以PP的重量计，PP-稳定的ACP或ACFP中至少40%为蛋白质或蛋白质片段的混合物，所述蛋白质或蛋白质片段为或含有上述肽[1]至[4]中的一种或多种。优选地，以PP的重量计，PP-稳定的ACP或ACFP中优选至少60%，更优选至少70%为蛋白质或蛋白质片段的混合物，所述蛋白质或蛋白质片段为或含有所述肽[1]至[4]。可以认为磷酸肽稳定活负载钙、磷酸盐(和氟化物)以产生亚稳的溶液。这种结合被认为是抑制ACP或ACFP生长至一引发磷酸钙的成核和沉淀的大小。通过这种方式，可以定位钙离子以及诸如氟离子的其它离子，例如定位在牙齿的表面以阻止去矿化并阻止或減少龋齿的形成。这样，另一方面，如上所述，本发明提供一种稳定的、活负载的ACFP络合物或一种稳定的、活负载的ACP络合物，所述络合物作为一种在靶向位置共同定位包括但不限于钩离子、氟离子和磷酸根离子的运输工具。在一优选实施方案，所述络合物为产生优越的抗龋齿效果的緩慢释放无定形的形式。所述靶向位置优选为牙齿或骨骼。另一方面，如上所述，本发明还提供了一种生产稳定的、活负载的ACP或ACFP的络合物的方法，所述方法包括下述步骤(I)制得含有钙、无机磷酸盐和氟化物(可选的)的溶液；以及(II)将(I)与含有PP-ACP的溶液混合。在一优选实施方案中，PP是酪蛋白磷酸肽(CPP)。本发明的另一方面，提供了一种^:高PP稳定的ACP/ACFP-ACP和/或ACFP的钙(和磷酸根)的离子的含量的方法，所述方法包括下述步骤(I)制得含有钙、无机磷酸盐和氟化物(可选的)的溶液；以及(II)将(I)与含有PP-ACP和/或PP-ACFP的溶液混合。或(I)制得含有诸如CaHP04、乳酸锌等的粉末；以及(II)将(I)与含有PP-ACP和/或PP-ACFP的粉末混合。已经发现，提高商标为RecaldentTM的商业产品PP-ACP络合物的磷酸钓的负载，会产生较高粘度的制剂而不适于特定的应用。因此，对某些应用而言，通过将PP-ACP与磷酸钙(特别是CaHP04)千混制备活负载络合物以随后加入一种制剂中，例如，诸如牙膏或口香糖的口腔护理剂是有用的。本发明的另一方面，提供了一种生产磷酸肽或磷蛋白(PP)稳定的无定形磷酸钙(ACP)和/或无定形磷酸钙氟(ACFP)络合物的方法，该络合物中钙离子含量大于约30摩尔的钙每摩尔的PP,所述方法包括下述步骤(I)制得含有PP-ACP和/或PP-ACFP络合物的溶液；以及(II)与4丐离子和磷酸根离子混合，保持溶液的pH小于7。本发明的另一方面，4是供了一种PP稳定的ACP和/或ACFP络合物与以重量计至少等量的磷酸钙的制剂。磷酸钙优选为CaHP04，优选地，磷酸钙(例如CaHP04)与PP稳定的ACP和/或ACFP络合物进行千混。在一优选实施方案中，PP-ACP和/或PP-ACFP络合物与磷酸钙的比率为约l:1-50，更优选为约l:1-25,更加优选为约1:5-15。在一实施方案中，PP-ACP和/或PP-ACFP络合物与磷酸钾的比率为约1:10。本发明的另一方面，^提供了一种口腔治疗组合物，所述组合物包括一种如上所描述的PP稳定的ACP和/或ACFP络合物与以重量计至少等量的磷酸钩的制剂。本发明的另一方面，提供了一种生产含有磷酸肽或磷蛋白(PP)稳定的无定形磷酸4丐(ACP)和/或无定形磷酸4丐氟(ACFP)络合物的口腔护理剂的方法，所述络合物中4丐离子含量大于约30摩尔的4丐每摩尔的PP,所述方法包括下述步骤(I)制得含有PP-ACP和/或PP-ACFP络合物的粉末；(II)与有效量的磷酸4丐干混；以及(III)将干混的PP-ACP和/或PP-ACFP和石粦酸钓的混合物制成口腔护理剂。优选地，用于干混的磷酸钧的形式为CaHP04。优选地，所述口腔护理剂选自由牙膏、牙乳剂、口香糖、止咳糖、嗽口水以及牙粉组成的组。不受任何理i仑或作用机理(modeofaction)的约束，虽然内在的稀释是由络合物加入至生理可接受的载体中产生，并且例如在牙科应用的唾液中会进一步稀释，但是认为"活负载，，磷酸肽可以供应浓度足够高的钓离子和磷酸才艮离子，特别是在ACP和ACFP时情况会是这样。本发明是针对较大量ACP-ACFP的定位输送。这通过使用高ACP/ACFP含量的起始原料和/或减少制备和使用之间的ACP/ACFP的损失或泄漏可以实现。这些活负载络合物也可以用作由于任何原因，例如食物不耐受、过敏或宗教或文化因素不能或不愿消费足够量的乳制品以满足其饮食中钙需要的饮食补充剂。本发明的活负载络合物用作在刺激骨骼生长方面需要的钙补充剂，例如骨折的修复、关节置换、骨嫁接或颅面外科手术。本发明的另一方面，提供了一种用于牙齿再矿化的方法，所述方法包括将如上所述的活负载络合物涂覆至牙齿，所述络合物最好是在药学上可接受的载体中。络合物可以含有磷酸钧、氟化4丐或两者都含有。优选地，该方法应用于需要治疗的方面。另一方面，本发明提供了一种用于再矿化牙齿表面或亚表面的方法，所述方法包括将钙离子含量大于约30摩尔的钙每摩尔的PP的磷酸肽或磷蛋白(PP)稳定的无定形磷酸钓和/或无定形磷酸4丐氟络合物涂覆至牙齿表面或亚表面。本发明的另一方面，提供了一种含有磷酸肽或磷蛋白(PP)稳定的无定形磷酸4丐和/或无定形-瞵酸钩氟络合物在制备用于再矿化牙齿表面或亚表面的药物中的用途，所述络合物中钩离子含量大于约30摩尔的4丐每摩尔的PP。本发明的另一方面，提供了一种含有磷酸肽或磷蛋白(PP)稳定的无定形磷酸钩和/或无定形磷酸钩氟络合物用于再矿化牙齿表面或亚表面的用途，所述络合物中钓离子含量大于约30摩尔的钩每摩尔的PP。优选地，牙齿表面或亚表面为牙釉质，更优选地，为牙釉质表面或亚表面的损伤处。稳定的ACFP或ACP活负载络合物可以被加入至或形成在口腔护理组合物中，例如牙膏、漱口水或用于口腔的制剂。例如，这可以有助于预防和/或治疗龋齿或牙脱落。以组合物的重量计，ACFP或ACP活负载络合物(其可以只包含CPP-ACP和/或-ACFP络合物，或可以含有CPP-ACP和/或-ACFP络合物与磷酸4丐，例如CaHP04)的含量可以为0.01-50%,优选为0.1-25%,更优选为0.5-20%以及可选择地为0.5-10°/。。对于口腔护理组合物(oralcomposition),以组合物的重量计，服用的CPP-ACP和/或CPP-ACFP的量优选为0.01-50%，优选地，为0.5-20%或0.5-10%。在一特别优选的实施方案中，本发明的口腔护理组合物含有约l-5。/。活负载CPP-ACP(sCPP-ACP)。含有上述制剂的本发明的口腔护理组合物可以诸如牙膏(dentifrice)的适于口腔的各种形式制备和使用，包括牙膏、牙粉和液体牙膏，漱口水、片剂、口香糖、牙膏(dentalpaste)、牙龈按摩膏、含片(gargletablet)、乳制品以及其它食品。根据特定口腔护理组合物的种类和形式，根据本发明，所述口腔护理组合物还可以包括另外的公知配料成分。在本发明的某些优选形式中，所述口腔护理组合物在特征方面可以基本上为液体，例如漱口水或沖洗剂(rinse)。在该制备中，赋形剂通常是水-醇的混合物，最好含有如下所述的润湿剂。通常，水与乙醇的重量比在从约1:l至约20:l的范围内。在这种制备方式中，以制剂的重量计，水-醇混合物的总量通常在^v约70%至约99.9%的范围内。通常，醇为乙醇或异丙醇，优选乙醇。本发明的这种液体以及其它制剂的pH通常在/人约3至约1G的范围内，通常为从约5.0至7.0。可以使用酸(例如柠檬酸或安息香酸)或碱(例如氢氧化钠)或緩冲溶液(例如使用柠檬酸钠、安息香酸盐、碳酸盐或重碳酸盐、磷酸氢二钠、磷酸二氩钠等)调节pH。在一实施方案中，根据本发明的口腔护理组合物的pH为约5.5。因此，本发明另一方面，提供了一种用于再矿化牙齿表面或亚表面的组合物，该组合物含有4丐离子含量大于约30摩尔的4丐每摩尔的PP的磷酸肽或磷蛋白(PP)稳定的无定形磷酸4丐和/或无定形磷酸钓氟络合物和药学上可接受的载体和/或赋形剂。本发明另一方面，提供了一种用于再矿化牙齿表面或亚表面的组合物，该组合物主要地由钙离子含量大于约30摩尔的4丐每摩尔的PP的磷酸肽或磷蛋白(PP)稳定的无定形磷酸钓和/或无定形磷酸4丐氟络合物和药学上可接受的载体和/或赋形剂组成。在另一实施方案中，根据本发明的口腔护理组合物含有钙螯合剂，例如焦磷酸盐、多磷酸盐、柠檬酸盐、EDTA等。在本发明其它适宜的形式中，口腔护理组合物在特征方面可以基本上为固体或糊状，例如牙粉、含片(dentaltablet)、牙膏(牙乳膏)或凝胶体牙膏。这种固体或糊状口腔制剂的赋形剂通常含有牙科上可接受的抛光材料。抛光材料的示例为不溶于水的偏磷酸钠、偏磷酸钾、磷酸三钩、磷酸钓二水合物、无水磷酸二4弓、焦磷酸钓、正磷酸镁、磷酸三镁、碳酸钓、水合氧化铝、煅烧氧化铝、-圭酸铝、硅酸锆、二氧化石圭、膨润土(bentonite)以及其混合物。其它适宜的抛光材料包括热固树脂颗粒，例如三聚氰胺-、酚和尿-甲醛以及交连聚环氧化物和聚酯。优选的抛光材料包括粒径大小为约5微米、平均粒径为约l.l微米、表面积为约50，000cmVg的结晶二氧化硅，二氧化硅凝胶或胶体二氧化硅以及无定形碱金属铝矽酸盐络合物。当使用在视觉上透明(clear)的凝胶时，一种胶体二氧化硅抛光剂，例如以商标SYLOID销售的Syloid72和Syloid74或以商标SANTOCEL销售的SantocellOO,石成金属铝矽酸盐络合物特别有用，这是因为其具有与普遍用于牙膏中的凝胶剂-液体(包括水和/或润湿剂)体系的折射指数接近的折射指数。许多所谓的"不溶于水"的抛光材料在特征上为阴离子，还包括少量的可溶性材料。这样，不溶性偏磷酸钠可以任何适宜的方式形成，例如，如应用化学索普词典第9巻、第4版、第510-511页(Thorpe'sDictionaryofAppliedChemistry,Volume9,4thEdition,pp.510-511)所描述的。被称为马德雷尔盐(MadrelTssalt)和库罗尔氏盐(Kurrol'ssalt)的不溶性偏磷酸钠为适宜材料的其它示例。这些偏磷酸盐在水中仅呈现;微弱的可溶性(minutesolubility),因此其通常被称作不溶性偏磷酸盐(IMP)。其中存在微量的可溶性磷酸盐物质杂质，以重量计，比例通常很少，例如为4°/。。如果需要，通过用水洗可降低可溶性磷酸盐物质的量或将其除去，在不溶性偏磷酸盐的情形下，认为其含有可溶性的三偏磷酸钠。不溶性偏磷酸碱金属盐通常以粉末形式使用，该物质中粒径大于37微米的不超过1%。抛光材料在固体或糊状组合物中的重量比通常为约10°/。至约99%。优选地，在牙膏中的量为从约10°/。至约75%,在牙粉中的量为从约70°/。至约99%。在牙膏中，当抛光材料在性质上是由硅石组成的时，以重量计，其通常的含量为约10-30%。以重量计，其它抛光材料的含量通常为约30-75%。在牙膏中，以制剂的重量计，液体赋形剂可以包含量通常从约10%至约80%的范围的水和润湿剂。甘油、丙二醇、山梨醇、聚丙二醇是适宜的润湿剂/载体的示例。水、甘油和山梨醇的液体混合物也是有利的。在透明凝胶中，折射率是一个重要的考虑因素，优选地，使用约2.5-30%w/w的水，0至约70%w/w的甘油，以及约20-80%w/w的山梨醇。牙膏、乳剂以及凝胶通常含有比例为约0.1%至约10%w/w，优选为约0.5%至约5%w/w的天然或合成的增稠剂或凝胶剂。适宜的增稠剂为合成的锂蒙脱石(hectorite)、可用的合成的胶体镁碱金属硅酸盐络合物粘土(colloidalmagnesiumalkalimetalsi1icatecomplexclay),例如由拉波特工业有卩艮公司(LaporteIndustriesLimited)销售的Laponite(例如CP,SP2002,D)。以重量计，LaponiteD为约58.00°/。的Si02、25.40%的MgO、3.05%的Na20、0.98%的Li20以及一些水和痕量金属。其准确的比重为2.53,在8°/。湿度的表观容积密度(apparentbulkdensity)为1.0g/ml。其它适宜的增稠剂包括爱尔兰莒(Irishmoss)、i-角叉菜(iotacarrageenan)、黄蓍胶、淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、羟乙基丙基纤维素、羟丁基甲基纤维素、羟丙基曱基纤维素、羟乙基纤维素(例如纤维素羟乙基醚(Natrosol)可用)、羧甲基纤维素钠以及胶体二氧化硅，例如精细研磨的Syloid(例如244)。稳定剂也可以包括诸如丙二醇、二丙二醇和己烯二醇的多元醇润湿剂，诸如甲基纤维素溶剂和乙基纤维素溶剂的纤维素溶剂，植物油以及含有至少12个直链碳的石蜡，例如橄揽油、蓖麻油和矿脂(petrolatum)以及诸如乙酸戊酯、乙酸乙酯和苯甲酸千酯的酯。可以理解，通常口服制剂是通过带适宜标签的包装物销售或分发的。因此，含漱剂(mouthrinse)的并瓦上会有描述含漱剂或漱口？K(mouthwash)内含物的以及其使用说明的标签；牙膏、乳剂或凝月交通常被装在软管中，通常为铝、衬铅(linedlead)或塑料软管，或其它可计量内含物的挤压分配器、泵送分配器或加压分配器。为获得增进的疾病预防作用，有助于实现活性成分在整个口腔完全和彻底的扩散，并使速溶组合物更易被表面吸受，在本发明的组合物中可以使用有机表面活性剂。有机表面活性物质在性质上优选为带阴离子的、不带离子的或两性的，并且优选不与活性成分反应。优选地，使用一种可使组合物具有清洁和起泡特性的清洁物质作为表面活性剂。阴离子表面活性剂的适宜示例为可溶于水的高脂肪酸单石危酸单甘酯，例如氢化椰子油脂肪酸的单硫酸盐甘油一酸酯的钠盐，诸如十二烷基硫酸钠的高级烷基硫酸盐，诸如十二烷基苯磺酸钠的烷基芳基硫酸盐，高级烷基石黄酸乙酸酯(alkylsulfo-acetates),1,2-二羟基丙烷磺酸盐的高级脂肪酸酯以及低级脂肪胺基羧酸化合物的基本上饱和的高级脂肪酰胺，例如具有12至16个碳的脂肪酸、烷基或酰基以及类似基团。最后提及的酰胺的示例为N-月桂酰肌氨酸以及N-月桂酰肌氨酸、N-肉豆蔻酰肌氨酸或N-棕榈酰肌氨酸的钠盐、钾盐和乙醇胺盐，其应该基本上不含脂肪酸盐(soap)或类似的高级脂肪酸物质。本发明的口腔护理组合物中的这些肌氨酸化合物的使用是特别有益的，这是因为这些物质除了使牙釉质在酸性溶液中的溶解度方面有所降低外还使碳水化合物分解，使得这些物质在抑制口腔中酸的形成方面呈现出延长的显著的效果。适合使用的可溶于水的不带离子的表面活性剂的示例为乙撑氧与含有各种活性氢的、具有长疏水链(例如约12至20个碳原子的脂肪链)的化合物的活性氩反应的缩合产物，其缩合产物("乙氧化物(ethoxamers)")含有亲水的聚氧乙烯基团，例如聚乙烯(乙撑氧)与脂肪酸、脂肪乙醇、脂肪胺、多羟基乙醇(例如失水山梨醇单硬脂酸酯)和聚环氧丙烷(例如聚丙二醇与环氧乙烷的力口聚物(Pluronicmaterials))的缩合产4勿。以重量计，表面活性剂的量通常为约0.1-5°/。。值得注意的是，表面活性剂可以有助于溶解本发明的活性成分，从而减少需要的溶解的润湿剂的量。诸如增白剂、防腐剂、硅树脂、叶绿素化合物和/或诸如尿素、磷酸氢二铵的氨合物以及其混合物可以加入本发明的口腔制剂中。当使用这些辅药时，以基本上不负面影响所希望的特性和性质的量加入至制剂中。也可以使用任何适宜的香^F或甜味剂。适宜的香料组成成分的示例为香味油(flavouringoils),例如留兰香油、薄荷(peppermint)油、冬青油、黄樟油、丁香油、鼠尾草(sage)油、桉树油、马郁兰油、肉桂油、柠檬油和油以及曱基水杨酸盐。适宜的甜味剂包括蔗糖、乳糖、麦芽糖、山梨醇、木糖醇、甜蜜素、紫苏糖(perillartine)、AMP(P可斯巴甜(aspartylphenylalaninemethyester))、糖精以及类似物。适宜地，香料和甜味剂可以分别或一起从占制剂的约0.1%至5°/。多(more)。本发明也提供了一种如上所述的组合物的用途。在本发明优选的使用中，优选地，将根据本发明的含有本发明的组合物的诸如漱口水或牙膏的口腔组合物定期地涂覆至牙龈或牙齿，例如每天一次或每两天一次或每三天一次或优选每天1至3次，优选的pH为约3.0至约10.O或更优选为5.0至约9.0,至少使用2周至8周或更长至终身。在一实施方案中，口腔组合物的pH为约5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0。本发明组合物也可以加入锭剂或口香糖或其它产品中，例如搅拌至温胶基中或涂覆至胶基的外表层，胶基的示例为明胶、乳胶、乙烯基树脂等，最好是含有常规的增塑剂或软化剂，糖或其它的甜味剂，或诸如葡萄糖、山梨糖以及类似物。在另一实施方案中，本发明的络合物被配制成一种饮食补充剂，优选地，含量为食物的0.1-100%w/w,更优选为1-50°/。w/w，最优选为1-10%,特别地为2%w/w。所述络合物也可以加入食品产品中。在另一方面，本发明提供了含有药物组合物的组合物，该药物组合物含有如上所述的任何活负载ACFP和/或ACP络合物以及药学上可接受的载体。这种组合物可以选自由牙科组合物、抗龋齿组合物、治疗剂组合物以及饮食补充剂组成的组。牙科组合物或治疗剂组合物可以为凝胶、液体、固体、粉末、乳剂或4走剂形式。治疗剂组合物还可以为片剂或胶嚢形式。在一实施方案中，活负载ACP和/或ACFP络合物基本上为这种组合物中唯一的再矿化活性成分。在另一实施方案中，作为口腔护理剂组合物的活负载ACP和/或ACFP络合物组合物与口腔中的唾液接触。另一方面，l是供了一种治疗或预防龋齿或牙脱落、牙侵蚀/腐蚀、牙本质过敏以及牙结石的方法，所述方法包括将本发明的络合物或组合物给需要这种治疗的患者的牙齿或牙龈用药的步骤。优选该络合物被局部用药。根据本发明的另一方面，提供了一种用于牙齿修复的组合物，所述组合物含有一种添加了根据本发明的活负载ACFP和/或ACP络合物的牙齿修复物质。牙齿修复物质的基本成分可以为玻璃离聚物粘合剂、合成物质或任何其它适宜的修复物质。优选地，以重量计，牙齿修复物质中含有的活负载CPP-ACP络合物或活负载CPP-ACFP络合物的量为0.01-80%,优选为0.5-10%，更优选为1-5°/。。含有上述药剂的本发明的牙齿修复物质可以适用于牙科临床的各种形式制备和使用。根据特定的牙齿修复物质的种类和形式，根据本发明的牙齿修复物质还可以含有其它离子，例如抗菌离子Zn2—、Ag+等或其它附加成分。优选地，活负载CPP-ACP络合物或活负载CPP-ACFP络合物的pH在2-10之间，更优选为5-9，更加优选为5-7。优选地含有活负载CPP-ACP络合物或活负载ACFP络合物的牙齿修复材料的pH在2-10之间，更优选为5-9,更加优选为5-7。本发明还涉及一种制备牙齿修复组合物的方法。优选地，所述方法包括加入如上所述的活负载ACP和/或ACFP络合物至基本的牙齿修-复物质。本发明还涉及上述修复组合物用于治疗和/或预防龋齿的用途。本发明的另一方面提供了一种用于制备牙齿修复组合物的试剂盒，所述试剂盒包括(a)牙齿修复物质以及(bH丐离子含量大于30摩尔的钙每摩尔的PP的磷酸肽或磷蛋白(PP)稳定的无定形磷酸钓和/或无定形磷酸钙氟络合物。所述试剂盒可选择地包括用于制备牙齿修复组合物的才乘作头见程(instructions)。在一优选实施方案中，牙齿々务复物质为多孔牙粘合剂。在另一优选实施方案中，所述牙齿修复物质为玻璃离聚物粘合剂。不受任何理论或作用机理的约束，可以认为某些类型的多孔牙粘合剂中的微孔，例如玻璃离聚物粘合剂，允许本发明的络合物通至牙齿表面以促进牙齿材料的再矿化。本发明还涉及一种用于制备牙齿修复组合物的试剂盒，所述试剂盒包括(a)牙齿修复物质以及(b)活负载CPP-ACP络合物和/或活负载CPP-ACFP络合物。所述试剂盒可选择地包括用于制备牙齿^f奮复组合物的操作规程。本发明还涉及一种用于制备牙齿修复组合物的试剂盒，所述试剂盒包括(a)牙齿修复物质(b)酪蛋白磷酸肽(c)4丐离子以及(d)磷酸根离子，可任选氟离子。所述试剂盒可选择地包括用于制备牙齿修复组合物的操作规程。本发明还提供了一种治疗和/或预防包括人在内的动物龋齿、牙侵蚀/腐蚀、牙本质过敏以及牙结石的方法，所述方法包括提供根据本发明的组合物，或根据本发明制备，并且涂覆至需要治疗和/或预防的动物牙齿。另一方面，本发明涉及治疗有关身体钓流失，特别是从骨骼流失、缺钙、钙吸收不良或类似情形等情形中的一种或多种的方法。这种情形的示例包括但不限于骨质疏松症以及骨软化。总之，通过提高4丐的生物利用度而改善的任何情形都是所预期的。本发明的另一方面提供了磷酸肽或磷蛋白(PP)稳定的无定形磷酸钙和/或无定形磷酸4丐氟络合物在制备用于治疗和/或预防龋齿、牙侵蚀/腐蚀、牙本质过敏和/或牙结石的组合物中的用途，所述络合物中钙离子含量大于约30摩尔的钙每摩尔的PP。本发明的另一方面提供了含有磷酸肽或磷蛋白(PP)稳定的无定形磷酸钓和/或无定形磷酸4丐氟络合物的组合物用于治疗和/或预防龋齿、牙侵蚀/腐蚀、牙本质过壽文或牙结石的用途，所述络合物中钙离子含量大于约30摩尔的钙每摩尔的PP。可以清楚地理解，虽然本说明书特定地提及在人方面的应用，但是本发明也用于兽医的用途。因此，本发明用于诸如牛、羊、马的家畜和家禽；诸如猫和狗的伴侣动物；以及动物园动物的所有方面。图1:使用活负载4丐离子以及磷酸根离子的CPP,体外釉质亚表面损伤的增进的再矿化。图2:使用含有活负载磷酸4丐的CPP的牙膏，原位釉质亚表面损伤的增进的再矿化。具体实施例方式现参照下述非限制性的实施例描述本发明。实施例1从澳大利亚维多利亚RecaldentPty有限乂>司购买Recaldent(CPP-ACP)。以重量计，产品(#841117)含有14.3°/。的4丐、22.3%的磷酸盐以及47°/。的酪蛋白磷酸肽。溶解产品的浓度为0.5%，通过添加HCI调节至pH5.5。然后通过滴定3.25MCaCl2以及2MNaH2P04添加钙离子和磷酸根离子，同时通过添加2.5MNaOH保持pH在5.5。持续滴定钙离子和磷酸根离子，直至溶液变得半透明。记录加入的钙和磷酸盐的浓度。也可以通过滴定钙离子和磷酸根离子至0.5°/。的CPP-ACP溶液中并且通过进一步加入磷酸4丐使pH降至5.5而形成所述溶液。表l通常以及活负载CPP-ACP的4丐和磷酸盐水平<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>这些结果表明CPP-ACP可以负载钙离子和磷酸根离子以产生在亚稳溶液中热力学稳定的络合物。实施例2在另一实施例中，Recaldent(CPP-ACP)粉与CaHP04粉末以CPP-ACP:CaHP04的重量比为1:10的比例干混。然后以1-5%w/w添加该粉末至无糖口香糖和牙膏制剂中。实施例3使用通常CPP-ACP与活负载CPP-ACP(sCPP-ACP)，体外釉质亚表面损伤再矿化的比较拔出的人第三磨牙的抛光釉质表面被锯成板(8x4mm2)，并且使用耐酸的固定清漆(nailvarnish)覆盖以形成间隔为lmm的半咬合以及半牙龈近中远侧(gingival-halfmesiodistal)的窗(lx7匪2)[ReynoldsE.C.(1997),D挺L76，1587-1595]。使用如雷诺兹(Reynolds)^f务正的[ReynoldsE.C.(1997)/Z)e/^.W仏76，1587-1595]怀特(White)的卡波普(Carbopol)法[WhiteD丄(1987)Orn^i^s21,228-242]在这些窗中产生亚表面釉质损伤。釉质板被对半锯成4x4mm2的块。使用清漆密封一块上的半牙龈损伤以及另一块上的半咬合损伤以产生如雷诺兹(Reynolds)描述的去矿物质控制(demi認alizedcontrols)[ReynoldsE.C.(1997)De打LU6，1587-1595]。在37。C使半损伤釉质暴露于两种不同的再矿化溶液中10天，不混合(mixing)。所述再矿化溶液为使用HCL调节至pH5.5的0.5%w/vCPP-ACP和实施例1中制备的活负载CPP-ACP。再矿化后，每对块在乙醇中脱水并被植入曱基丙烯酸曱酯树脂中(Paladur，Kulzer，德国)。与损伤表面垂直地切割3块200-300jam的切片，研磨至80±5jam，并且如之前描述的在10xl4nm厚的铝制梯级旁放射照片。通过传输的光穿过Dilux22显微镜(ErnstLeitzWetzlar，德国)观察损伤的放射照片图像。由摄像机(SonyDXC930P)获得图像，在成像软件(Optimas6.2)的控制下数字化(Scion成像公司，图像获取7(Scionimagingcorporation,colourgrabber7))。由沈等人(Shena/.)之前的描述[ShenP."a人，(2001)/.Res.80，2066-2070]扫描损伤图像、调节装置和铝制梯级。使用由沈等人(Shene"/.)之前描述[ShenP.e"/.，(2001)/."e鼓Res.80，2066—2070]的安才各玛(Angmar)方程式[AngmarB."a7.，(1963)UltrastructuralRes8，12-23]测量釉质切片厚度并确定石/M匕物体积百分比数据。再矿化百分比(。/。R)也由沈等人(ShenWa/.)之前的描述[ShenP."a/.,(2001)/."e/2ne义80,2066—2070]计算出。图1中示出了釉质亚表面损伤的再矿化。图l的结果表明在体外釉质亚表面损伤的再矿化方面，活负载CPP-ACP(sCPP-ACP)的溶液优于通常的CPP-ACP溶液。实施例4使用雷诺兹(Reynoldse"人)等人的实验方案[ReynoldsE.C.Ws人，(2003)/Wes.82,206-211]通过随才几、正交、只又盲原位临床研究而调查(investigate)含有活负载CPP-ACP(sCPP-ACP)的牙膏制剂再矿化釉质亚表面损伤的能力。十个受试对象戴有可拆卸的腭具，该腭具带有六块人釉质半板，该半板含有如实施例3中的描述而制备的亚表面去矿化损伤。各釉质板的另一半被保存在潮湿的容器中，用作去矿化损伤对照物。在研究中有七种治疗，牙膏B含有0.2%w/w的通常的CPP-ACP,牙膏C含有0.2%的CPP-ACP/1.0%Ca跳(在图2中示出，实施例5为"1.2%sCPP-ACP"),牙膏E含有1.0°/。CaHP04，牙膏F含有1000ppmF，牙膏G含有1.2%sCPP-ACP和1000卯mF，牙膏D含有0.2詣-ACP/1.8%CaHP。4(在图2中示出，实施例5为"2.0%sCPP-ACP，，)，以及一对照物牙膏A(对照剂)。使用牙膏的期间为30天，每天4次。在使用牙膏时戴上腭具，然后在使用牙膏后戴l个小时。每种治疗持续14天，十位受试对象中的每位在各种治疗之间，每进行一种治疗后休息一周。完成各种治疗后，移去釉质板，使其与各矿化对照物配对，植入、切片并进行显微》文射照相以及通过计算机辅助光密度图像分析以确定再矿化水平。图2中示出了以釉质再矿化百分比(％R)表示的结果，该结果表明活负载1.0%CaHPO4(l.2%sCPP-ACP)或1.8%CaHP04(2.0°/。sCPP-ACP)的0.2%CPP-ACP比相同浓度的通常单一的0.2。/。CPP-ACP或CaHP04再矿化釉质亚表面损伤显著地好。2.0%sCPP-ACP牙膏比含有1000ppm氟的牙膏显著地好。此外，1.2%sCPP-ACP加上1000ppmF相对于单一的1.2%sCPP-ACP或1000ppmF具有相力口效应。实施例5含有活负载CPP-ACP(sCPP-ACP)的牙骨配方配方1成分_o/ow/v_123<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>葡萄糖氯己定0.01葡聚糖酶0.01sCPP-ACP5.0纯净水差量使用磷酸调节pH至5-7_配方4成分_%w/v山梨醇22.0爱尔兰苔1.0甘雀兹19.0纯净水差量糖精钠0.3焦磷酸盐2.0水合氧化铝43.0单氟磷酸钠0.3香料0.95sCPP-ACP5.0十二烷基硫酸钠2.0使用NaOH调节pH至5.5_配方5成分_%w/v二水磷酸氢钙45.0山梨醇10.0甘油10.0羧甲基纤维素钠1.0十二烷基碌u酸钠1.5十二烷基肌氨酸钠0.5香料1.o糖精钠0.1葡萄糖氯己定0.01葡聚糖酶0.01单氟磷酸钠0.3sCPP-ACP5.0纯净水差量4吏用磷酸调节pH至5.5_配方6%w/v成分_I_2山梨醇53.053.0二氧化珪(Zeodent119)20.G20.0纯净水差量差量十二烷基硫酸钠4.04.0sCPP-ACP5.05.0单氟磷酸钠-0.3磷酸二氢钠1.451.45香料1.01.0羧甲基纤维素钠0.750.75二氧化钬(RuUle)0.5250.525黄原胶0.4750.475氟化钠0.243-使用磷酸/NaOH调节pH至5-7_配方7O/U/V成分_12<table>complextableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>纯净水差量使用磷酸/NaOH调节pH至5.5_配方2成分_%w/v甘雀兹S-972.5甘油10.0香味油0.4葡萄糖氯己定0.01二乙醇胺月桂酰0.2sCPP-ACP5.0水差量使用磷酸/NaOH调节pH至5.5_实施例7锭剂配方成分__o/ow/v糖/糖醇75-80玉米糖浆1-20香味油卜2sCPP-ACP5.0硬脂酸镁l-5水差量使用磷酸/NaOH调节pH至5.5_实施例8口香糖配方成分_%w/v胶基30碳酸钧2.0晶体山梨醇53.0甘油0.5香味油0.1sCPP-ACP5.0水差量使用柠檬酸调节pH至5.5_可以理解，在本说明书中公开和定义的发明延及所有可选择的由正文或附图提及或显而易见的单个特征中的两个或多个的组合。所有这些不同组合构成本发明的各种可选择的方面。权利要求1.一种钙离子含量大于约30摩尔的钙每摩尔的PP的磷酸肽或磷蛋白(PP)稳定的无定形磷酸钙或无定形磷酸钙氟的络合物。2.—种根据权利要求1所述的络合物，其特征在于，所述PP为酪蛋白磷酸肽(CPP)。3.—种根据权利要求1所述的络合物，其特征在于，所述钓离子的含量在30至50摩尔的钙每摩尔的PP的范围。4.一种含有根据权利要求1所述络合物的口腔护理制剂。5.—种用于制备磷l肽或磷蛋白(PP)稳定的无定形磷酸钓(ACP)和/或无定形磷酸钾氟(ACFP)络合物的方法，所述络合物中4丐离子含量钙离子含量大于约30摩尔的钙每摩尔的PP,所述方法包括下述步骤(I)制得含有PP-ACP和/或PP-ACFP络合物的溶液；以及(II)将钙离子与磷酸根离子混合，同时保持溶液的pH低于7。6.—种PP稳定的ACP和/或ACFP络合物和以重量计至少等量的磷酸钙的制剂。7.—种根据权利要求6所述的制剂，其特征在于，所述磷酸钙的形式为CaHP04。8.—种含有根据权利要求7所述制剂的口腔护理制剂。9.一种用于再矿化牙齿表面或压表面的方法，所述方法包括涂覆磷酸肽或磷蛋白(PP)稳定的无定形磷酸4丐或无定形磷酸钩氟络合物至牙齿表面或亚表面，所述络合物中4丐离子的含量大于约30摩尔的钧每摩尔的PP。10.—种治疗和/或预防包括人在内的动物龋齿、牙侵蚀/腐蚀、牙本质过敏以及牙结石中的一种或多种的方法，所述方法包括涂覆磷酸肽或磷蛋白(PP)稳定的无定形磷酸4丐或无定形磷酸4丐氟络合物至牙齿表面或亚表面，所述络合物中4丐离子含量大于约30摩尔的钓每摩尔的PP。全文摘要本发明提供了一种磷酸肽或磷蛋白(PP)稳定的无定形磷酸钙或无定形钙氟磷酸盐络合物，该络合物中钙离子含量大于约30摩尔的钙每摩尔的PP。文档编号A61K8/24GK101208070SQ200680022782公开日2008年6月25日申请日期2006年6月23日优先权日2005年6月24日发明者埃里克·查尔斯·雷诺兹申请人:墨尔本大学