专利名称：：一种红景天多糖铁复方制剂的制备及应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及中药
技术领域：
，具体涉及红景天多糖铁复方制剂的制备及其在抗缺铁性贫血疾病中的应用，背棄技术缺铁性贫血(IDA)是全世界发病率最高的营养缺乏性疾病之一。从全球范围来看，50亿人口中约有1/3的人贫血，而IDA或铁营养不良的人群约占5亿，在发展中国家铁缺乏(ID)发生率是发达国家的4倍，在我国大约有20%的人口存在IDA或铁营养不良。现有的补铁制剂通常分为两类一类为无机铁，主要指硫酸亚铁，如CN94108819.7专利申请报道的在硫酸亚铁中加入维生素制成复方控释制剂；另一类为有机铁，主要包括有机酸铁络合物，如CN02146594.0专利申请报道的乙二胺四乙酸铁钠(EDTA铁)新制剂，以及铁与贫基酸、蛋白质等的络合物，如CN00113615.1专利申请报道的利用羟基蛋氨酸与铁制成螯合物作为饲料添加剂，近年来也出现了植物或菌类多糖与铁形成的络合物，如突国专利号为3,821,192公开报道了一种用葡萄糖、麦芽糖、低分子右旋糖酐与FeCl3反应形成糖-铁络合物，又如CN96102440.2专利申请报道的利用海藻多糖与微量元素离子络合反应成海藻多糖铁等金属络合物，可用于动物饲料添加剂，比较而言，无机铁剂结构简单、制备容易、成本低有机铁剂则易吸收、对胃肠道刺激作用小，不易发生食欲减低、恶心、呕吐以及腹泻等胃肠道反应。作为一种新型的有机铁，多糖铁类化合物是以多糖为载体与铁合成有机铁配合物，性质稳定，能以分子状态在肠道被吸收，可以充分发挥多糖和铁的协同作用；同时，由于无游离铁离子存在，能够明显降低对胃肠道的刺激性。蒹医常用药大花红景天是生长在西藏海拔3500—5000米冰山雪域之中的天然植物，据《四部医典》记载，本品用于胂虚证，能健脾益气，擅治脾气虚衰，倦怠乏力等症，单用即有一定的疗效本品用于血虚证，能益气生血，可单用或与补血药配伍使用。2005年版《中华人民共和国药典》记载，红景天具有益气活血、通脉平喘、用于气虚血淤，胸痹心痛，中风偏瘫，倦怠气喘等多方面的功效。近代研究表明，红景天中所含的红景天苷和苷元酪醇具有抗疲劳、抗缺氧、抗微波辐射、抗毒以及对神经系统和新陈代谢的双向调节作用，在环境适应、在军事医学、航天医学、运动医学和保健医学等方面都具有十分重要的作用。其中的多糖类成分作为药材的主要有效部位，也具有免疫调节、降血糖、降血脂、抗肿瘤、抗病毒等多种生物活性，本实验以大花红录天药材为原料，经过提取、分离、纯化获得红景天多糖，在此基础上合成红景天多糖铁，再配合红景天醇提物浸裔，制成红景天多糖铁复方制剂，希望通过补铁、健脾益气、益气生血、免疫调节等途径治疗缺铁性贫血。
发明内容本发明所要解决的问题是提供一种抗缺铁性贫血的有效部位一红景天多糖铁，可适用于临床。本发明提供了一种含红景天多糖铁和红景天醇提物浸裔的中药制剂，该制剂是由重量百分比为10%33.3%的红景天多糖铁、10%~33.3°/。红景天醇提物浸裔和80%33.3%药用辅料组成的口服固体制剂及由重量百分比为1.5%的红景天多糖铁、1.5%红景天醇提物浸裔、20%的药用辅料和水组成的口服液体制剂。本发明所述的口服固体制剂为胶囊剂、颗粒剂本发明所述的口服液体制剂为口服液本发明所要解决的另一问题是公开红景天多糖铁及上述含红景天多糖铁中药制剂的制备方法。具体内容1红聚天提取物的制备取大花红景天药材，用乙醇回流提取，过滤，滤液减压浓縮成稠裔，然后烘干，得到醇提物。药渣挥干，加入蒸馏水，加热回流，过滤，减压浓縮提取液，然后加入乙醇，析出沉淀，静置，过夜，离心，得到红棕色不溶物，真空干燥，得到粗多糖。将粗多糖复溶于适量蒸馏水中，加入木瓜蛋白酶进行酶水解除蛋白，浓縮水辨液，醇沉，沉淀溶于适量蒸馏水，用sevage法再次除蛋白，浓缩提取液，醉沉，离心收集沉淀，依次用95%乙醉，无水乙醇，无水乙醚洗涤，真空干燥得精制多糖。2红条天多糖铁的制备及一般性质2.1红景天多糖铁的制备取干燥精制多糖、柠樣酸三钠加入到三颈瓶中，用适当蒸馏水溶解。在热水浴中不停搅拌，同时缓缓滴加三叛化铁溶液和氨氧化钠溶液，控制溶液的pH值在一定范围内。当反应液中出现棕红色不溶性沉淀时，立即停止滴加三拔化铁和氛氧化钠溶液，继续在热水浴中搅拌lh。待反应液冷却后，离心。取上层深红棕色液体，减压浓縮，醇沉，分别用95%乙醇、无水乙醇、无水乙醚各2次洗涤沉淀，真空干燥得粗多糖铁，将粗多糖铁溶于适量蒸馏水，装入透析袋中，分别用流动水冲洗和蒸馏水透析各24h,醇沉，离心取沉淀，沉淀依次用95%乙醇、无水乙醇、无水乙醚各洗2次，真空干燥，得多糖铁(精品)，2.2红景天多糖铁含量測定按李玉贤等在《中成药》2006;28(5)中报道的含量测定方法操作，得到标准曲线为八=0.2036€+0.0104(1=0.9996，11=3)。得出红景天多糖铁中铁含量为23.05%。2.3红景天多糖铁的一般性质红景天多糖铁为无定形棕褐色粉末，无嗅，易溶于水，不溶于甲醉，乙醉，乙醚等有机试剂，K4[Fe(CN6)]试验证明红景天多糖铁水溶液中不含游离的Fh，说明生成了较为稳定的配合物。2.4红景天多糖铁红外光谱图据报道，红外光谱可以鉴别多糖铁(m)配合物中FeOOH核的类型。为此我们做了红景天多糖铁的红外光谱(结果见图l)。由图1可知，它在850cnT1与680cm"特征吸收与MarshallPR在JColloidInterlaceSci，1971(37)所报道的卩-FeOOH的红外光谱相二致，提示图l中铁核是P-FeOOH核。2.5红景天多糖铁制剂的制备2.5.1胶囊剂的制备.红景天醇提物，多糖铁、药用淀粉混合均匀，过筛,去除杂质，大颗粒用粉碎机粉碎后再过筛。填充，制粒，包装，2.52颗粒剂的制备红景天醇提物，多糖铁，羧甲基淀粉钠，微粉纤维素，庶糖混合均匀，用淀粉桨制成软材，过筛，烘干，过筛整粒，干燥，全部通过一号筛和四号筛。密封包装，干燥储存。2.5.3口服液的制备将等量红景天醇提物浸裔和红景天多糖铁溶于水，加入蔗糖浆做矫味剂，加入苯甲酸作为防腐剂，拔拌均匀，装瓶，灭菌。3药效学实验3.1材料将按实施例1得到的多糖铁2.1088与按实施例2得到的红景天醇提物浸裔2.1088混合均匀，溶于200ml水，制成复方制剂(铁含量为243mg'ml勺。阳性对照采用复方三维亚铁口服溶液，每10ml含硫酸亚铁120mg,成都某药品有限公司产品，批号H51023375。按体表面积比例计算试验动物用药剂量。3.2实验动物昆明种小鼠80支，1822g,雌雄各半，由四川大学华西实验动物中心提供。3.3饲料一般动物饲料由四川大学华西实验动物中心提供。低铁词料按低铁饲料配方配制,其中红薯淀粉54%，全脂奶粉40%,豆油5%,食盐1%。3.4仪器BECKMANATC血细胞分类计数仪，UV-2201紫外可见分光光度计。3.5方法取78只小鼠随机分为空白组、复方制剂低剂量组(20111&1^|)、中剂量组(40mgAg")、高剂量组(6011^紐-1)、阳性组(39.78mgAg")和模型组。除空白组外按上述方法分组给药，连续灌胃给药20d(空白组按0.2mH()g"灌生理盐水)，空白组喂常规饲料，饮用自来水，其余各组喂低铁饲料，饮用去离子水。除空白组外，其余各组辅助放血，5d—次，每次采用眼眶静脉丛放血0.51111,—共放血4次，第20天称重，摘眼球取血，采用BECKMANATC血细胞分类计数仪测血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)，分离血清(SI),按张秀明等主编的《现代临床生化检验学》(人民军医出版社，2001)中报道的铬天青S法，采用UV-2201紫外可见分光光度计测血清铁含量，解剖小鼠称脾重，计算脾脏系数,结果釆用t检验法进行分析。3.6试验结果表l红景天多糖铁复方制剂对缺铁性贫血小鼠Hb、RBC的影响(5:ts)组别剂量(以铁计算mg/kg)RBC(xlOl2/L)Hb(g/L)离剂量组606.0610±1.150**98.808±15.7335**中剂量组407.8509±0.549**129,727±6.9191**低剂虽组207.6736±0.4邪**123:500±9.0211**阳性组39.787.7880±0.458**122.532±8.6217**模型组-5.2177±0.65784.677±11.7907空白组—8.2438±0.454林140.031±9.5364**与模型组比较"P〈0.01由表l可见，模型组小鼠Hb、RBC分别84.677士11.790g/L，5.2177±0.657xlOl2/L，与空白组140.031士9.5364g/L、8.2438士0.454xl0…L比较，有极显著差异，同时动物出现精神萎靡，皮毛蓬松、不活跃等症状,证明建模成功，给药组在建模的同时，每天灌胃红景天多糖铁复方制剂，经过20天的治疗，小鼠的Hb、RBC值接近空白组小鼠，与模型组相比较，有极显著差异。表2红景天多糖铁复方制剂对缺铁性贫血小鼠体重的影响(^±5)tl(g)t2(g)增￡(g)高剂组20.4±2.2321.9±4.121.45±4.03中剂豕组21.09±0.8825.14±1,67*4.03±1.82*低剂量组20.39±1.肪24.11±2.993.84±3.幼*阳性组20.93±0.9224.31±1.983.35±1.95模型组20.53±1.4722.09±2.411.11±1.53空白组20.76±2.6126.22±3.02神5.31±3.57**与模型组比较，P〈0.05,**P<0.01,tl为实验丌始时小鼠的体重，t2为实验结束时小鼠的体重。由表2可知，经过20d的实验，各组小鼠体重均升高，空白组、中剂量组、低剂量组、阳性组小鼠体重髙于模型组，其中空白组小鼠体重与模型组比较有极显著差异，中剂量组小鼠体重与模型组比较有显著差异。三个实验组、阳性组、空白组小鼠体重增值均大于模型组，其中，空白组小鼠体重增值与模型组比较有极显著差异，中剂量组、低剂量组小鼠体重增值与模型组比较有显著差异。表3红录天多糖铁复方制剂对缺铁性贫血小鼠血清铁、脾脏系数的影响(；")<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>与模型组比较吓<0.05，**P<0.01由表3可知，实验组、阳性组、空白组小鼠的血淸铁含量均髙于模型组，其中髙剂量组、中剂量组、阳性组和空白组小鼠的血淸铁含量与模型组比较有极显著差异，低剂量组小鼠的血清铁含量与模型组比较有显著差异。实验组、阳性组、空白组小鼠的脾重及脾脏系数均高于模型组，其中，中剂量组、低剂量组和空白组小鼠的脾重于空白组比较有显著差异，高剂量组、中剂量组、低剂量组和空白组小鼠的脾脏系数与模型组比较有极显著差异，阳性组小鼠的脾脏系数与模型组比较有显著差异，图1为红录天多糖铁的红外光谱图具体实施方案实施例l红景天多糖提取物的制备取大花红景天药材2000g,用3倍量80%乙酵在75匸下回流提取3h,过滤，滤液减压浓縮成稠裔，然后烘干，得到醇提物浸裔520g。药渣挥干(1466g)，分别加入12、10、8倍量蒸馏水，80'C下回流提取3次，每次2h,过滤，减压浓縮滤液至粘稠状液体，然后加入95%乙醇至溶液醉浓度为80%,析出沉淀，静置，过夜，离心，得到红棕色不溶物，40"C下真空干燥，得到粗多糖480g。将粗多糖复溶于5000ml蒸馏水中，按照重量体积浓度1。/。的比例加入木瓜蛋白酶(w/v)，在pH6.4、60"条件下水解3h,水解液减压浓縮至l/5后，再加入等体积95%乙醉醇沉，沉淀烘干后加入2500ml蒸馏水使其溶解，用Sevage法除蛋白2次,即多糖溶液中加入等体积三諷甲烷-正丁醇混合溶液(4:l)，振荡30min,离心，取上层溶液，浓縮至1/5,加入3倍量95°/。乙醇醇沉，离心收集沉淀，依次用95%乙醉，无水乙醇，无水乙醚洗涤，真空干燥得精制多糖102.6g。实施例2红景天多糖铁的制备取干燥精制多糖2g、柠檬酸三钠0.58加入到2501111三颈瓶中，用100ml蒸馏水溶解。在70"C下不停搅拌，同时滴加三氣化铁溶液(2mol/L)和20。/oNaOH溶液，控制溶液的pH值在8.08.5。当反应液中出现棕红色不溶性沉淀时，停止滴加三氮化铁和氡氧化钠溶液，继续在热水浴中搅拌1h。待反应液冷却后，离心。取上层深红棕色液体，减压浓缩至原体积1/3，加入95%乙醇至溶液醉浓度为80%,静置过夜，离心收集沉淀，分别用95%乙醇、无水乙醇、无水乙醚各2次洗涤沉淀，4050"真空干燥得粗多糖铁，将粗多糖铁溶于适量蒸馏水，装入透析袋中，分别用流动水冲洗和蒸馏水透析各24h,醉沉，离心取沉淀，沉淀依次用95S^乙醇、无水乙醇、无水乙醚各洗2次，4050"真空干燥，得多糖铁0.56g。实施例3胶囊剂的制备将按实施例l得到的红景天醉提物浸裔，按实施例2得到的多糖铁、药用淀粉各100g,混合均匀，过筛(40目)，去除杂质，大颗粒用粉碎机粉碎后再过筛。然后用2号胶襄填充，共制成1000粒，每粒0,285g,控制水分在9.0°/。之内，塑料密封包装。口服一日三次，一次三粒。实施例4颗粒剂的制备lOOg按实施例l得到的红景天醉提物浸裔，100g按实施例2得到的多糖铁，200g羧甲基淀粉钠(过100目筛)，350g微粉纤维素(过IOO目筛)，50g蔗糖(选用白砂糖，用前于60"C下干燥12小时，粉碎，过四号筛的糖粉，密封储藏)混合均匀，用200g淀粉浆制成软材，过20目筛，烘干，过20目筛整粒，干燥，控制水分在2%以内，全部通过一号筛，再过四号筛除去细小颗粒和细粉。装袋，每袋10g，密封包装，干燥储存。口服一日10g。实施例5口服液的制备将15g按实施例1得到的红景天醇提物浸裔，15g按实施例2得到的红景天多糖铁混合，溶于500ml水，另取蔗糖200g制成糖浆，与上述药液合并，加入0.5ml苯甲酸作防腐剂，调整重量至1000ml，搅拌均匀，滤过，装瓶，灭菌。口服一日三次，一次20ml。权利要求1.一种红景天多糖铁复方制剂的制备及应用，其特征在于多糖铁中铁的含量为23.05％，铁核以β-FeOOH形式存在。2.—种制备权利要求1所述的红景天多糖铁复方制剂的方法，其特征在于①取大花红景天药材，用3倍量80%乙醇在75'C下回流提取3h，过滤，滤液减压浓缩成稠膏，烘干，得到醇提物浸膏。②药渣挥干，分别加入12、10、8倍量蒸馏水，8(TC下回流提取3次，每次2h，过滤，减压浓縮提取液至粘稠状液体，然后加入95%乙醇至溶液醇浓度为80%，析出沉淀，静置，过夜，离心，得到红棕色不溶物，4(TC下真空干燥，得到粗多糖。将粗多糖复溶于蒸馏水中，按照重量体积浓度"/。的比例加入木瓜蛋白酶(w/v)，在pH6.4、6(TC条件下酶水解3h，浓縮水解液至l/5后，再加入等体积95%乙醇醇沉，沉淀烘干后加入蒸馏水使其溶解，用Sevage法除蛋白2次，即多糖溶液中加入等体积三氯甲垸-正丁醇混合溶液(4:1)，振荡30min，离心，取上层溶液，浓縮至1/5，醇沉，离心收集沉淀，依次用95%乙醇，无水乙醇，无水乙醚洗涤，真空干燥得精制多糖。③按比例取干燥精制多糖2g、拧檬酸三钠0.5g加入到250ml三颈瓶中，用100ml蒸馏水溶解。在70。C下不停搅拌，同时缓缓滴加三氯化铁溶液(2mol/L)和20。/。NaOH溶液，控制溶液的pH值在8.08.5。当反应液中出现棕红色不溶性沉淀时，停止滴加三氯化铁和氢氧化钠溶液，继续在热水浴中搅拌lh。待反应液冷却后，离心。取上层深红棕色液体，减压浓缩至原体积1/3，加入95%乙醇至溶液醇浓度为80%，静置过夜，离心收集沉淀，分别用95%乙醇、无水乙醇、无水乙醚各2次洗涤沉淀，405(TC真空干燥得粗多糖铁，将粗多糖铁溶于适量蒸馏水，装入透析袋中，分别用流动水冲洗和蒸馏水透析各24h，醇沉，离心取沉淀，沉淀依次用95%乙醇、无水乙醇、无水乙醚各洗2次，4050。C真空干燥，得多糖铁。④将重量百分比为10%33.3%的按步骤的到的红景天多糖铁、10。/。33.3。/。按步骤①得的红景天醇提物浸膏、80%33.3%药用辅料混合制成口服固体制剂。◎将重量百分比为1.5。/。的按步骤③的到的红景天多糖铁、1.5。/。按步骤①得到的红景天醇提物浸膏、20%药用辅料和水混合制成口服液体制剂。3.—种按权利要求1所述的红景天多糖铁复方制剂的用途，其特征在于用作治疗缺铁性贫血疾病的药物。全文摘要本发明属于中药
技术领域：
，特别涉及红景天多糖铁复方制剂的制备及其在抗缺铁性贫血中的应用。本发明利用大花红景天药材作原料，通过分离纯化得到醇提物浸膏和多糖部位，其中的多糖与铁离子络合反应生成红景天多糖铁后，与醇提物浸膏制成复方制剂，可用于治疗缺铁性贫血。本制剂制备方法较为简单，易于工业化生产。文档编号A61K36/41GK101390923SQ20071005008公开日2009年3月25日申请日期2007年9月21日优先权日2007年9月21日发明者韩泳平,黄家锟申请人:韩泳平;黄家锟