专利名称：：一种治疗肛瘘的生物填塞引流物的制备及其使用方法
技术领域：
：本发明涉及一种用于治疗肛瘘的生物填塞引流物的制备方法及其应用。该生物填塞引流物是应用人或动物的皮肤组织为原料，通过固定、脱细胞、引入抗生素涂层等步骤制备而成，通过肛瘘探针、手术和/或内镜方式置入肛瘘瘘道中，可以有效地促进肛瘘的愈合，具有愈合率高、复发率低、感染率低等优点。发明背景本说明书所述的肛瘘是肛周皮肤和直肠/肛管相同的一种慢性感染性管道，是肛门周围脓肿愈合后的必然结果，是一种常见的肛门良性疾病，临床表现为反复发作的肛周感染、破溃流脓，长期不愈的病人可以发生肛周癌。。临床上可以分为低位单纯性肛瘘、低位复杂性肛瘘、高位单纯性肛瘘、高位复杂性肛痿4种类型。本领域技术人员普遍认为，肛痿的发生率为40%-50%。长期以来，治疗肛瘘的主要方法是外科手术治疗，包括肛痿切除术、挂线疗法、瘘道旷置引流术、经肛直肠黏膜瓣内口修补术等手术方式，这些手术治疗方式都存在肛门功能障碍和复发的问题。根据文献报道，术后肛门失禁的发生率在10%-65%之间，术后肛瘘复发率在20%-40%之间。自1999年以来，本领域技术人员开始尝试应用纤维蛋白胶治疗肛瘘，该方法具有无副作用，无痛，操作简单，无肛门功能障碍等优点，但是根据文献报道，其复发率在15%-86%之间，特别是对于复杂性肛瘘，治疗效果不好。本说明书提供了一种用于治疗肛瘘的生物填塞引流物的制备及其使用方法。本发明提供的生物填塞引流物是以人或动物的皮肤组织为原料。与以上所述治疗方法不同，本发明所提供的生物填塞引流物治疗肛瘘的原理是为肛瘘瘘道愈合提供了生物支架，能够促进瘘道的愈合，并且，可以发挥引流的作用，另外，本生物填塞引流物具有抗生素涂层，可以防止感染，降低复发率。
发明内容本发明提供了一种治疗肛瘘的生物填塞引流物的制备和使用方法，所述生物填塞弓I流物的制备方法包括以下步骤a.从人或动物供体中获得人或动物的皮肤组织作为原料，b.用固定液对所获得的皮肤组织进行固定，C.脱细胞处理步骤，所述步骤是应用碱性溶液对固定后的组织进行孵育，d.洗涤并消除残留的固定液以及调节PH值的步骤，所述步骤是应用中性缓冲液对脱细胞处理后的组织进行洗涤，并且应用氨基酸溶液孵育至PH值为7.357.55，e.引入抗生素涂层的步骤，f.在引入抗生素涂层的步骤之前或者之后的成型步骤，所述步骤是将制备好的组织压制成具有纵长轴线，带有凹槽并适合置入瘘管中的圆锥台型体。所述的动物可以是猪、牛、羊、兔，优选是猪。根据上述制备方法，其中所述圆锥台型体的纵轴长度为610cm，所述圆锥台型体的顶面直径为0.20.4cm，底面直径为0.50.8cm，其中所述凹槽是位于圆锥台型体柱面上的均匀分布的三个轴向开放凹槽，其中凹槽的开放夹角是30°，凹槽的横截面为扇环形，其中所述圆锥台型体的顶面处凹槽深度为0.05-0.1cm，底面处凹槽深度为0.1-0.2cm。所述的固定剂包括本
技术领域：
常用的各种用来防止组织溶解及腐败，并使细胞内蛋白质、脂肪、糖、酶等各种成分转变为不溶性物质，能够保持组织和细胞与正常生活时的形态和结构相似的物质，可以是任意浓度的甲醛、多聚甲醛、苦味酸溶液、冰醋酸、戊二醛、锇酸、Bouin氏固定液、Zenker液、Camoy液、改良Bouin氏固定液等，优选是2%甲醛和1.5%戊二醛。所述的碱性溶液是碱金属氢氧化物溶液，优选是氢氧化钠溶液和氢氧化钾溶液。所述的中性缓冲液可以是磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲垸缓冲液(Tris缓冲液)。本发明实施中所用的举证性缓冲液为磷酸钠缓冲液。所述的氨基酸缓冲液可以是甘氨酸一HC1缓冲液、甘氨酸^NaOH缓冲液、甘氨酸一Tris缓冲液、组氨酸缓冲液、甘氨酰胺(glycineamide)缓冲液、甘氨酰甘氨酸(glycylglycine)缓冲液。其作用是调整脱细胞处理后的组织的PH值至7.357.55，其选择根据脱细胞处理后的组织的PH值而定。本发明实施中所用的举证性氨基酸缓冲液是甘氨酸一HC1缓冲液。所述的抗生素涂层制备方法为通过喷洒、浸泡或滴注的方式，将抗生素的均质水溶液引入到成型后的组织中，经蒸发和/或应用干燥剂基本上去除水后，再通过同样的方法加入至少一种易溶于水的两性分子溶液，再经蒸发和/或应用干燥剂干燥后得到抗生素涂层。所述的抗生素可以是氨基糖苷类抗生素、四环素类抗生素、林可酰胺类抗生素、喹诺酮类抗生素、硝基咪唑类抗生素、磺胺类抗生素、甲基呋喃类抗生素、硝基呋喃类抗生素或上述抗生素任意组合的混合物，具体来讲可以是庆大霉素、甲硝唑、西梭霉素、乙基西梭霉素、链霉素、妥布霉素、大观霉素、万古霉素、环丙沙星、莫西沙星、克林达霉素、林可霉素、四环素、梭金霉素、土霉素和罗列四环素或上述抗生素任意组合的混合物。本发明实施中所用的举证性抗生素为庆大霉素硫酸盐和甲硝唑的组合物。所述的两性分子可以是烷基硫酸盐、垸基磺酸盐、烷基芳基硫酸盐、二烷基芳基硫酸盐、烷基芳基磺酸盐、二垸基芳基磺酸盐、环烷基硫酸盐、环烷基磺酸盐、垸基环垸基硫酸盐。本发明实施中所用的举证性两性分子为十二垸基硫酸钠。本发明还提供了一种根据上述任一项制备方法所制备的生物填塞引流物，所述生物填塞引流物是具有纵长轴线，带有凹槽并适合置入瘘管中的圆锥台型体，其中所述圆锥台型体的纵轴长度为6~10cm，所述圆锥台型体的顶面直径为0.20.4cm，底面直径为0.5~0.8cm，其中所述凹槽是位于圆锥台型体柱面上的均匀分布的三个轴向开放凹槽，其中凹槽的开放夹角是30°，凹槽的横截面为扇环形，其中所述圆锥台型体的顶面处凹槽深度为0.05-0.1cm，底面处凹槽深度为0.1-0.2011(图1、图2)。本发明还提供了上述生物填塞引流物在制备用于治疗肛瘘的药物以及器械中的应用。所述治疗优选是通过手术、探针牵引和/或内镜的方法，将本发明所制备的生物填塞引流物置入肛瘘瘘管中，顶面朝向外口，底面缝合固定于内口，外口更换敷料直至肛瘘愈合。实施例2提供了本发明所制备的生物填塞引流物的具体使用方法。按照实施例3，本发明人还提供了本发明所制备的生物填塞引流物治疗肛痿的有效率(60%~86%)、复发率(040%)和感染率(14%40%)，其治疗效果显著优于手术和纤维蛋白胶疗法。本发明所述的肛瘘可以是低位单纯性肛痿、低位复杂性肛瘘、高位单纯性肛瘘、高位复杂性肛痿。下面结合附图和实施例详细描述本发明，所述的实施例是用于描述本发明，而不是限制本发明。图l:生物填塞引流物的透视图图2:生物填塞引流物的横断面实施例实施例1:应用新鲜猪真皮组织制备肛瘘生物填塞引流物采集新鲜猪真皮组织，切割成13C1^小块，立即用2%甲醛溶液固定24小时，用蒸馏水洗涤数次。然后，将组织用1N的氢氧化钠溶液于20°C恒温下孵育24小时进行脱细胞处理。然后，应用磷酸钠缓冲液洗涤组织直至组织呈半透明状。然后将洗涤后的组织于甘氨酸一HC1缓冲液中孵育以消除残存的固定液并降低PH值，直至PH值为7.35~7.55。将上述处理后的组织浸泡于混合50mg/ml的硫酸庆大霉素和50mg/ml的甲硝唑均质水溶液中，10分钟后取出，干燥，然后将组织浸泡于50mg/ml的十二垸基硫酸钠溶液中，干燥后粉碎，并应用制备好的模具压制成生物填塞引流物，该生物填塞引流物是具有纵长轴线，带有凹槽并适合置入瘘管中的圆锥台型体，其中所述圆锥台型体的纵轴长度为610cm，所述圆锥台型体的顶面直径为0.20.4cm，底面直径为0.50.8cm，其中所述凹槽是位于圆锥台型体柱面上的均匀分布的三个轴向开放凹槽，其中凹槽的开放夹角是30°,凹槽的横截面为扇环形，其中所述圆锥台型体的顶面处凹槽深度为0.05-0.1cm，底面处凹槽深度为0.1-0.2cm(图1、图2)。实施例2:探针结合内镜方法置入肛痿填塞物1.应用内镜探查痿道，并寻找内口。然后进行清创，确保清创和止血效果。2.置入肛瘘探针，并牵引实施例1所制备的肛痿填塞物经内口进入瘘道，填塞物尖端经外口引出。3.用可吸收缝线于实施例1所制备的肛瘘填塞物的底端缝合一针并打结。4.将肛瘘填塞物向外牵引，使底端达直肠粘膜下肌层水平。5.经直肠粘膜将肛瘘填塞物底端"8"字缝合固定。6.去除肛瘘填塞物尖端多余部分，使肛瘘填塞物尖端与肛周皮肤平行。7.外口覆盖无菌敷料并每日换药直至愈合。实施例3:疗效病例选择选择2006年6月2007年6月肛瘘患者共30例，其中低位单纯性肛瘘15例、低位复杂性肛瘘5例、高位单纯性肛瘘5例、高位复杂性肛痿5例。应用实施例1所制备的肛瘘填塞物，采用实施例2提供的方法进行治疗。经随访，结果如下表<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>权利要求1.一种用于治疗肛瘘的生物填塞引流物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤a.从人或动物供体中获得人或动物的皮肤组织作为原料，b.用固定液对所获得的皮肤组织进行固定，c.脱细胞处理步骤，所述步骤是应用碱性溶液对固定后的组织进行孵育，d.洗涤并消除残留的固定液以及调节PH值的步骤，所述步骤是应用中性缓冲液对脱细胞处理后的组织进行洗涤，并且应用氨基酸溶液孵育至PH值为7.35～7.55，e.引入抗生素涂层的步骤，f.在引入抗生素涂层的步骤之前或者之后的成型步骤，所述步骤是将制备好的组织压制成具有纵长轴线，带有凹槽并适合置入瘘管中的圆锥台型体。2.根据权利要求书1的制备方法，其中所述引入抗生素涂层的步骤是通过喷洒、浸泡或滴注的方式，将抗生素的均质水溶液引入到组织中，经蒸发和/或应用干燥剂基本上去除水后，再通过同样的方法加入至少一种易溶于水的两性分子溶液，再经蒸发和/或应用干燥剂干燥后得到抗生素涂层。3.根据权利要求书1-2中任一项的制备方法，其中所述圆锥台型体的纵轴长度为6~10cm，所述圆锥台型体的顶面直径为0.2~0.4cm，底面直径为0.5~0.8cm，其中所述凹槽是位于圆锥台型体柱面上的均匀分布的三个轴向开放凹槽，其中凹槽的开放夹角是30°，凹槽的横截面为扇环形，其中所述圆锥台型体的顶面处凹槽深度为0.05-0.1cm，底面处凹槽深度为0.1-0.2cm。4.根据权利要求书3的制备方法，其中所述的固定液选自适宜浓度的甲醛、多聚甲醛、苦味酸溶液、冰醋酸、戊二醛、锇酸、Bouin氏固定液、Zenker液、Carnoy液、改良Bouin氏固定液等。5.根据权利要求书3的制备方法，其中所述的碱性溶液是碱金属氢氧化物溶液。6.根据权利要求书3的制备方法，其中所述的中性缓冲液选自磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲垸缓冲液。7.根据权利要求书3的制备方法，其中所述的氨基酸溶液选自甘氨酸-HCl缓冲液、天门冬氨酸缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、甘氨酸-Tris缓冲液、组氨酸缓冲液、甘氨酰胺缓冲液、甘氨酰甘氨酸缓冲液。8.根据权利要求书3的制备方法，其中所述的两性分子选自垸基硫酸盐、烷基磺酸盐、烷基芳基硫酸盐、二垸基芳基硫酸盐、烷基芳基磺酸盐、二烷基芳基磺酸盐、环烷基硫酸盐、环垸基磺酸盐、烷基环烷基硫酸o9.根据权利要求书3的制备方法，其中所述的抗生素盐选自氨基糖苷类抗生素、四环素类抗生素、林可酰胺类抗生素、喹诺酮类抗生素、硝基咪唑类抗生素、磺胺类抗生素、甲基呋喃类抗生素、硝基呋喃类抗生素或上述抗生素的组合物。10.根据权利要求书9的制备方法，其中所述的抗生素选自庆大霉素、甲硝唑、西梭霉素、乙基西梭霉素、链霉素、妥布霉素、大观霉素、万古霉素、环丙沙星、莫西沙星、克林达霉素、林可霉素、四环素、梭金霉素、土霉素和罗列四环素或上述抗生素的组合物。11.根据权利要求书10的制备方法，其中所述的抗生素为庆大霉素硫酸盐和甲硝唑的组合物。12.根据权利要求书1-11任一项的制备方法所制备的生物填塞引流物，其特征在于，所述生物填塞引流物是具有纵长轴线，带有凹槽并适合置入瘘管中的圆锥台型体，其中所述圆锥台型体的纵轴长度为610cm，所述圆锥台型体的顶面直径为0.20.4cm，底面直径为0.5~0.8cm，其中所述凹槽是位于圆锥台型体柱面上的均匀分布的三个轴向开放凹槽，其中凹槽的开放夹角是30°，凹槽的横截面为扇环形，其中所述圆锥台型体的顶面处凹槽深度为0.05-0.1cm，底面处凹槽深度为0.1-0.2cm。13.根据权利要求书12的生物填塞引流物在制备用于治疗肛瘘的药物以及器械中的应用。14.根据权利要求书13的应用，其特征在于，所述治疗是通过手术、探针牵引和/或内镜的方法，将所述生物填塞引流物置入肛瘘瘘管中，顶面朝向外口，底面缝合固定于内口，外口更换敷料直至肛瘘愈合。全文摘要本发明涉及一种用于治疗肛瘘的生物填塞引流物的制备方法及其应用。该生物填塞引流物是应用人或动物的皮肤组织为原料，通过固定、脱细胞、引入抗生素涂层等步骤制备而成，通过肛瘘探针、手术和/或内镜方式置入肛瘘瘘道中，可以有效地促进肛瘘的愈合，具有愈合率高、复发率低、感染率低等优点。文档编号A61L27/36GK101322856SQ20071011115公开日2008年12月17日申请日期2007年6月15日优先权日2007年6月15日发明者王振军,清贾,博赵申请人:王振军