专利名称：百合多糖医药新用途及其药物制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种百合多糖医药新用途及其药物制剂，用于免疫系统药物技 术领域。
背景技术：
百合自古以来即为一种疗效显著的中药，它具有镇啶、祛痰、抗病劳、耐 缺氧、抗癌等多种功能；百合也为常用养阴润肺中药，亦药亦食，是老年人适 宜的滋补强壮和抗衰健身之品；值得注意的是，现代的药理学研究提示，百合 中的单一组成成分具有独特的医药保健价值(黄泰康，常用中药成分与药理手 册，北京中国医药科技出版社，1994: 816)。
百合中富含多糖，经文献检索，与百合多糖生物活性与功能相关的文献报
道有苗明三，杨林莎，中药药理与临床，2003， 19(1): 15-16;苗明三，中药
药理与临床，2001， 17(2): 21-13;刘成梅，付桂明等，食品科学，2002， 23 (6)， 113-114;赵国华，李志孝，陈宗道，食品与生物技术，2002， 21 (1): 62-66)。
在这些文献中，对百合多糖的生物活性进行了初步、某一动物实验、非系统的 研究，结果提示，百合多糖可显著提高免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分 率和吞噬指数，促进溶血素及溶血空斑形成，促进淋巴细胞转化；可明显提高衰老 小鼠血SOD、 CAT及GSHP活性，降低血浆、肝匀浆及脑匀浆中LPO水平， 具有滋补强壮及抗衰老作用；可通过促进小白鼠受损P—胰岛细胞DNA和RNA 的合成，促进胰腺中残留的P—胰岛细胞代偿增生，及胰岛外分泌部分的管上皮 形成新的P—胰岛细胞，增加血浆中的胰岛素水平和降低肾上腺皮质激素分泌， 以及促进肝脏中血糖转化为糖元的联合作用，从而使血糖降低；鼠移植性实体 瘤研究表明，百合多糖对移植性黑色素B16和Lewis肺癌有较强的抑制作用。 即初步提示了百合多糖具有免疫调节、抗衰老、降血糖和抗肿瘤的生物活性与 功能。但上述文献的研究结果，由于仅是对百合多糖生物活性与功能的某一动物 实验结果和初步提示，均未有针对某一疾病的应用所开展百合多糖生物活性的 系统研究和未形成一种医药产品，也没有有关这方面的其他任何文献包括专利 文献的报道。目前尚无提出百合多糖用于治疗免疫功能低下疾病群医药新用途 及其药物制剂。 ，，
发明内容
本发明的目的在于针对上述现有百合多糖医用技术的不足，明确提出百合 多糖一种医药新用途及以百合多糖为原料的药物制剂。
本发明的目的是通过如下方案实现的，它明确提出百合多糖一种医药新用 途及以百合多糖为原料的药物制剂，其特征是百合多糖在治疗免疫功能低下疾 病群药物制备中的应用。
本发明提出的治疗免疫功能低下疾病群药物制剂，其特征在于含有治疗有 效量的百合多糖和一种或多种药效学上允许的辅料或其它组方药物。
所述的治疗免疫功能低下疾病群药物制剂，'其特征在于百合多糖的有效量 为20-60%,辅料或其它组方药物含量为40—80%。
本发明所述治疗免疫功能低下疾病群药物制剂，其药物形式是片剂、胶囊 剂、颗粒剂、混悬剂、注射剂、滴丸、气雾剂。
本发明所述的治疗免疫功能低下疾病群药物片剂，其组成及重量百分比为 6-30%的微晶纤维素、1-8%的羟甲基淀粉钠、6-30%的乳糖、3-16%的淀粉、 0.6-1.0%的硬脂酸镁和3:1(固体原料乙醇)的60%乙醇。
为此，本发明利用正常小鼠和荷瘤小鼠，对百合多糖的免疫增强作用进行 了系统的试验论证，釆用的技术方案如下
一.实验方法 '
l.小鼠脾淋巴细胞转化实验昆明种小鼠24只，质量20gi，随机平均分 成4组，每组6只，雌雄各半，并进行灌胃，灌胃剂量如下第一组低浓度组， 灌胃百合多糖100mg/kg/d，第二组中浓度组，灌胃200mg/kg/d，第三组高浓度 组，灌胃300mg/kg/d，第四组空白对照组，灌胃等体积生理盐水，连续灌胃14天。断头法处死小鼠，取脾脏，通过200目钢丝网，用Hanks液清洗后，用 RPMI1640(10。/。胎牛血清及20fig/ml PHA)lml制成脾淋巴细胞暴液(lx106/1111)， 37°C， 5。/。C02培养48h后，1500r/min离心5min，去上清，取细胞涂片，干燥， 瑞氏染色，观察计数200个淋巴细胞，根据转化的形态学指标，计算出脾淋巴 细胞的转化百分率。
2. 迟发型变态反应昆明种小鼠12只，雌性，随机平均分成2组，每组6 只，于第O天每只小鼠以10。/。绵羊红血球(SRBC)0.5ml腹腔注射致敏，实验组 腹腔注射百合多糖溶液O.lml(浓度为10mg/ml)，，对照组注射等量生理盐水，连 续注射6天后，在小鼠右足掌注射50fil 10% SRBC，左足掌注射等量生理盐水， 24h后测量左右足掌之体积。计算左右足掌体积差。
3. NK细胞活性测定BLAC/c小鼠24只，质量20g士，雌雄各半，随机 平均分成4组，并进行灌胃，分组和剂量同l，连续灌胃10天后，小鼠眼眶取 血0.2ml，加入肝素抗凝血的PBS中，用Percoll分离其中的NK细胞，Hanks 液洗涤两次后用含小牛血清的RPMI1640培养液调节细胞浓度至lxl07/ml。将 培养24h的对数生长期的K562细胞，Hanks液洗涤后用含小牛血清的 RPMI1640培养液调节细胞浓度至lxl05/ml。在96孔板中每孔加K562细胞 lOOjil，再加入NK细胞100^1，自然释放组以含小牛血清的RPMI1640培养液 代替NK细胞，最大释放组为1%NP40代替NK细胞，每个标本设3个复孔， 37°C ， 5% C02培养4 h后离心，取上清，用LDH试剂盒于570nm处测定LDH 释放率，按下式计算NK细胞自然杀伤率自然杀伤率C/。)K样品释放平均D值 -自然释放平均D值)/(最大释放平均D值-自然释放平均D值)xl00。/。
4. 抗体生成细胞的检测昆明种小鼠？4只，质量20g士，分组和剂量同l， 连续灌胃10天后，给小鼠腹腔注射5。/。SRBClml免疫小鼠，将免疫4d的小 鼠断头法处死，取脾脏，通过200目钢丝网，用Earles液清洗后制成细胞悬液 (lxl07/ ml),取悬液0.1 ml加入10% SRBC0.05 ml，置45。C水浴中混匀，再加 RPMI 1640琼脂糖液(1%琼脂糖加热熔化后，力卩入等量预热的2倍RPMI1640 液，摇匀)0.4ml，继续在水浴中混匀，迅速倒于载玻片上，置于湿盒中，温育后加入稀释的豚鼠血清，继续温育2h，即可出现溶血空斑，计算每个小鼠脾脏的 溶血空斑数。
5. 腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验昆明种小鼠24只，质量20g±，分组 和剂量同l，连续灌胃10天后，放血处死小鼠，沿腹中线注入3ml冰中预冷的 无菌10%FCS-PBS (含10U/ml肝素和10%胎牛血清的PBS)，轻轻按摩腹部 5min，剪开腹壁，吸出渗出液，再用同样容量的预冷10y。FCS-PBS冲洗腹腔， 合并渗出液，用预冷的RPMI1640培养液洗涤并悬浮细胞(106/1111)，即得巨噬细 胞悬液；由鸡翼下抽取静脉血，加入5倍'量的Alsever液，用PBS将红细胞比 容配成5%的浓度，制成鸡红细胞悬液，用巨噬细胞悬液lml，加入0.04ml鸡红 细胞悬液，1500r/min离心5min，弃上清。涂片，吉萨染色，计数，计算吞噬 百分比。 ， ，
6. 碳廓清实验昆明种小鼠24只，质量20g士，分组和剂量同1，连续灌 胃10天后，在小鼠尾静脉注射印度墨汁O.lml，立即计时。注入后2、 10 min 分别从眼眶取血0.2ml，加入2mlNa2C03，于570nm处测光密度值(D值)。以 吞噬指数K为指标，按下式计算白细胞对碳粒的廓清作用 K=(logDl-logD2)/(t2-tl);其中，Dl和D2分别为2min时和10min时取血测得 的D值，tl和t2分别为2min和10min。
7. 百合多糖溶液对荷瘤小鼠免疫功能的影响昆明种小鼠24只，质量30 35g,雄性，随机平均分成4组，接种NCIH-460肿瘤细胞株24H后，分组给予 不同剂量的百合多糖溶液或等体积的生理盐水，'分组和剂量同1，接种肿瘤后连 续灌胃21天后，断头法处死小鼠，取脾脏，通过200目钢丝网，加少量细胞培 养液培养2 4h后，种入96孔板，进行MTT法测脾脏淋巴细胞增殖能力，并 在酶联检测仪上测定光密度值(D 4卯/D670)。
8. 急性毒性试验
昆明种小鼠36只，质量20g士，随机平均分成6组，每组6只，雌雄各半， 并进行灌胃，灌胃剂量如下600、 800、 1000、 1200、 1400mg/kg/d，对照组灌 胃等体积生理盐水，连续灌胃14天，比较各组动物体重变化并解剖内脏，观察内脏有无异常。
9.统计学处理数据以x士s表示，组间比较采用t-test。
二.实验结果
1.百合多糖对正常小鼠免疫功能的影响
①小鼠脾淋巴细胞转化实验结果: '
百合多糖对正常小鼠脾淋巴细胞转化率的影响(n=6， x±s)
对照组低剂量组中剂量组高剂量组
淋巴细胞转化率(％) 30.46±1.0538.02 ±1.5445.00 ±1.7549.88 ±1.32
结果表明各组剂量的百合多糖能增加正常小鼠的脾淋巴细胞转化率
(P<0.05)，且作用随百合多糖浓度增高而增强。
② 百合多糖对正常小鼠迟发型变态反应的影响
迟发型变态反应实验结果可见小鼠右足掌明显比左足掌肿胀，左右足掌的
体积差[(250.32±45.89) m m3]明显比对照组的[(108.20±11.72)mm31大，并且有统 计学意义(P0.05)。结果显示百合多糖能显著地增强正常小鼠的迟发型变态反 应。
③ NK细胞活性实验结果 ，
百合多糖对正常小鼠NK细胞活性的影响(n=6， x±s)
对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组
NK(0/o) 0.45±0.09 0.58±0.06 0.70±0.08 0.81±0.02
结果表明各组剂量的百合多糖能增强小鼠NK细胞活性(P0.05)，且随百合 多糖浓度增高而增强。
④抗体生成细胞的实验结果百合多糖对正常小鼠抗体形成细胞活性的影响(n=6， x±s)
对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组
抗体形成细胞活性 10.08±2.31 20.11±2.17 56.38±9.23 85.41±12.05
结果表明各组剂量的百合多糖能增强小鼠抗体形成细胞活性作用(P〈0.05)， 且随百合多糖浓度增高而增强。
⑤巨噬细胞吞噬实验结果
百合多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率的影响(n=6， x±s)
对照组低剂量组中剂量组 高剂量组
吞噬百分率(％) 33.41±1.63 36.79±0.09 41.56±1.22 43.95±0.05
结果表明各组剂量的百合多糖能增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活性 (P<0.05)，且随多糖浓度增高而增强。
碳廓清实验结果 '
百合多糖对小鼠碳廓清率的影响(n=6， x±s)
对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组
碳廓清率(K) 0.07±0.02 0.13±0:03 0.16±0.03 0.18±0.01
实验结果显示各组剂量的百合多糖能增强小鼠碳廓清作用(P0.05)，且随百 合多糖浓度增高而增强。
2.百合多糖对荷瘤小鼠免疫功能的影响百合多糖对荷瘤小鼠脾脏细胞增殖的影响
对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组
OD4卯/670(A) 0.39±0.04 0.50±0.08 0.68±0.05 0.75±0.07
实验结果显示各组剂量的百合多糖能非常显著地增加荷瘤小鼠的脾脏细胞 的活力(P〈0.05)，且随多糖浓度增高而增强。
3.百合多糖急性毒性试验百合多糖灌胃各组动物体重和生理盐水对照组无 差异，观察内脏也无异常变化。
本发明应用现代生物技术从天然百合植物中提取的具有生物活性的百合多 糖分子，通过上述系统的实验研究，考察百合多糖对机体^1疫功能的影响，结 果表明该生物活性百合多糖能激发、修补、增强、调节人体的免疫功能，使人 体增强对于疾病的防御能力，无毒副作用，且质量稳定，从而达到防病、抗病 的作用，可作为免疫功能低下疾病群治疗药物。
以下结合治疗免疫功能低下疾病群药物的百合多糖片剂的实施方式进一步 说明本发明。
具体实施方式
实施例一
于容器中分别加入过120目筛的28.1%的微晶纤维素、6%的羟甲基淀粉钠、 26%的乳糖、15%的淀粉、0.8。/。的硬脂酸镁，搅拌混均，然后加入过卯目筛的 22%百合多糖，搅拌混均。加入60%乙醇(固体原料乙醇=3: 1，重量比)调 配制粒，30目筛制软材，4(TC烘干，30目筛整粒。然后，用2%的乳糖、0.1% 的硬脂酸镁与上述颗粒充分混合均匀，按照标示量片重，异型冲压成片。
由该处方制得的百合多糖片剂，成本较低，成人一日二次， 一次2片，具 有明显的免疫增强作用，适用于免疫功能低下疾病症状较轻的患者长期服用或 作为保健药剂使用。
9实施例二
于容器中分别加入过120目筛的22.2%的微晶纤维素、5%的羟甲基淀粉钠、 16%的乳糖、8%的淀粉、0.7%的硬脂酸镁，搅拌混均，然后加入过卯目筛的 46%百合多糖，搅拌混均。加入60%乙醇(固体原料乙醇=3: 1，重量比)调 配制粒，30目筛制软材，4(TC烘干，30目筛整粒。然后，外加2%的乳糖、0.1% 的硬脂酸镁与上述颗粒充分混合均匀，按照标示量片重，异型冲压成片。
由该处方制得的百合多糖片剂，成本适中，成人一日二次， 一次2片，具 有明显的免疫增强作用，适用于免疫功能低下疾病症状较明显的患者服用。
于容器中分别加入过120目筛的16%的微晶纤维素、3.2°/。的羟甲基淀粉钠、 13%的乳糖、5.2%的淀粉、0.5%的硬脂酸镁，搅拌混均，然后加入过90目筛的 60%百合多糖，搅拌混均。加入60%乙醇(固体原料乙醇=3: 1，重量比)调 配制粒，30目筛制软材，40'C烘干，30目筛整粒。然后，外加2%的乳糖、0.1% 的硬脂酸镁与上述颗粒充分混合均匀，按照标宗量片重，异型冲压成片。
由该处方制得的百合多糖片剂，成本较高，成人一日二次， 一次2片，免 疫增强作用较明显，适用于单次用药量较大的免疫功能低下疾病群患者服用。
实施例四
于容器中分别加入过120目筛的26%的微晶纤维素、5.2°/。的羟甲基淀粉钠、 20%的乳糖、10%的淀粉、0.7%的硬脂酸镁，搅拌混均，然后加入过90目筛的 36%百合多糖，搅拌混均。加入60%乙醇(固体原料乙醇=3: 1，重量比)调 配制粒，30目筛制软材，40。C烘干，30目筛整粒。然后，外加2%的乳糖、0.1% 的硬脂酸镁与上述颗粒充分混合均匀，按照标示量片重，异型冲压成片。
由该处方制得的百合多糖片剂，成本适屮，'免疫增强作用明显，成人一曰 二次， 一次2片，不同程度免疫功能低下疾病群的患者均适合服用，综合考虑 成本、药效特性等各种因素，该处方为百合多糖片剂的最佳配比之一。
权利要求
1、百合多糖的一种医药新用途，其特征在于，百合多糖在治疗免疫功能低下疾病群药物制备中的应用。
2、 一种治疗免疫功能低下疾病群药物制剂，其特征在于，含有治疗有效量 的百合多糖和药效学上允许的辅料或其它组方药物。
3、 根据权利要求2所述百合多糖与药物辅料或其它组方药物，其特征在于， 百合多糖的有效量为20-60%，辅料或其它组方药物含量为40—80% 。
4、 根据权利要求2所述药物制剂，其特征在于，药物形式为片剂、胶囊剂、 颗粒剂、混悬剂、注射剂、滴丸和气雾剂。
5、 根据权利要求4所述的片剂，其特征在于，所包括的组成及重量百分比 为20-60%百合多糖、6-30%的微晶纤维素、1-8%的羟甲基淀粉钠、6-30%的乳 糖、3-16%的淀粉、0.6-1.0%的硬脂酸镤和3:1(固体原料乙醇)的60%乙醇。
全文摘要
本发明提供了百合多糖的医药新用途及其药物制剂，其特征是百合多糖在治疗免疫功能低下疾病群药物中的应用。一种治疗免疫功能低下疾病群的百合多糖药物制剂，其特征在于百合多糖的有效量为20-60％，辅料或其它组方药物含量为40-80％；其药物形式是片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、注射剂、滴丸、气雾剂；其片剂组成及重量百分比为6-30％的微晶纤维素、1-8％的羟甲基淀粉钠、6-30％的乳糖、3-16％的淀粉、0.6-1.0％的硬脂酸镁和3∶1(固体原料∶乙醇)的60％乙醇。本发明提供的百合多糖片剂，具有增强机体免疫功能，主治免疫功能低下疾病具有明显的疗效，该药物毒副作用小，质量稳定。
文档编号A61K31/715GK101450073SQ20071017153
公开日2009年6月10日 申请日期2007年11月30日 优先权日2007年11月30日
发明者万锕俊, 李慧丽 申请人:上海汉素信生化科技发展有限公司