一种具有解热抗炎作用的三叶青块根多糖及其用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种具有解热抗炎作用的三叶青块根多糖及 其用途。
【背景技术】
[0002] 保持恒定的体温，是保证新陈代谢和生命活动正常进行的必要条件。一定限度内 的发热是人体抵抗疾病的生理性防御反应，但体温过高或时间过长可使机体各种调节功能 失调，并引起机体一系列的代谢和功能变化。例如，发热容易导致神经系统的功能障碍，可 使病人出现烦躁、谵语、幻觉，甚至抽搐。这种情况在婴幼儿中更容易发生，当体温上升到39 °C以上时，极易引起惊厥，若反复发作则会使大脑受到伤害。等到体温达到43°C，只要几小 时病人就会因体温过高而死亡；由于循环系统的功能障碍，发热可引起心跳加快，消耗大量 的物质和能量，常常导致机体水盐代谢的紊乱。尤其是肿瘤患者，即使是低热也会增加全身 的慢性消耗，往往很容易产生负氮平衡，进一步促进恶液质的提前发生。因此，解热对于维 持机体身体健康起着至关重要的作用。
[0003] 目前解热抗炎类药物主要为非留体类药物，尽管这些药物有明显的解热抗炎作 用，但该类药物所引起的不良反应却不容忽视，比如肝肾毒性、消化道出血、镇静、头痛、皮 肤过敏、认知功能障碍等，常常因为不良反应中断治疗，影响药物疗效。因此，开发研究药效 明确且安全的新型的解热抗炎类药物十分必要。以中药为代表的天然药物因其多靶点的综 合作用机制且副反应少而成为解热抗炎新药的最佳研究热点，具有较好的研究及开发前 景。
[0004] 三叶青学名为三叶崖爬藤（Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)，是我国 特有的葡萄科崖爬藤属珍稀药用植物，主要分布于浙江、广西、江西等少数省份，以地下块 根或全草入药。具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛等功效，主治毒蛇咬伤、扁桃体炎、淋巴 结结核、跌打损伤、小儿高热惊厥等疾病。尽管已有文献报道三叶青提取物具有解热镇痛抗 炎作用，但有关三叶青多糖是否具有解热抗炎作用未见任何报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种具有解热抗炎作用的三叶青块根多糖，该多糖具有如 图1所示的红外特征，且具有显著的解热抗炎作用，扩大了三叶青的药用用途。
[0006] 本发明还提供了三叶青块根多糖作为制备解热抗炎药物的用途。
[0007] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0008] -种具有解热抗炎作用的三叶青块根多糖，通过以下方法制备获得：
[0009] (1)取三叶青块根35-65°C烘箱干燥，干燥至恒重后粉碎，将粉碎物与双蒸水按照 lg: 10-30mL的料液比混合，加热回流提取2-5次，过滤，合并滤液，减压浓缩，并采用乙醇沉 淀法得到三叶青块根粗多糖；
[0010] (2)将三叶青块根粗多糖溶于双蒸水，Sevag法除蛋白，接着脱盐，然后过阴离子交 换柱，收集O. l-o. 8mol/L NaCl洗脱峰，最后除去NaCl得三叶青块根多糖。
[0011]发明人通过长期研究发现，三叶青富含多糖，且三叶青多糖具有明确的解热抗炎 镇痛作用，进一步研究，发明人利用活性追踪法发现三叶青块根多糖是三叶青解热抗炎的 主要活性组分。
[0012] 通过建立干酵母致小鼠发热模型、二甲苯致小鼠耳肿胀及角叉菜胶致小鼠足跖肿 胀等动物模型，本发明人发现三叶青块根多糖具有很强的解热抗炎作用。
[0013] 通过上述三叶青块根多糖的制备和解热抗炎作用药效的确认。根据现代制剂技 术，三叶青块根多糖可以与药剂或者食品上认可的辅料，制成以三叶青块根多糖为主的胶 囊剂、片剂、散剂、□服液、软胶囊、丸剂、缓释制剂等各种剂型。
[0014] 作为优选，步骤（1)乙醇沉淀法具体为：向浓缩物中入3倍体积的95 %乙醇，静置过 夜后，4200rpm高速离心15min，取沉淀用水溶解，然后再次进行乙醇沉淀，离心得三叶青块 根粗多糖。
[0015] 作为优选，所述阴离子交换柱为DEAE Sepharse Fast Flow阴离子交换柱。一种具 有解热抗炎作用的三叶青块根多糖用于制备解热抗炎药物的用途。一种具有解热抗炎作用 的药物，由三叶青块根多糖作为有效成分与药学上可接受的辅料制成。
[0016] 本发明的有益效果是：本发明以三叶青为依托，制备三叶青块根多糖，开发其功 效，扩大三叶青新的药用资源。发明人的实验表明：该三叶青多糖具有显著的解热抗炎作 用，可用于制备新型的解热抗炎类中药制剂，在肿瘤、自身免疫、2型糖尿病等疾病防治中都 有一定应用价值。
【附图说明】
[0017] 图1是本发明三叶青块根多糖的红外光谱图。
[0018] 图2是葡萄糖标准曲线图。
[0019]图3是三叶青块根多糖的梯度洗脱曲线。
[0020]图4是三叶青块根多糖解热实验体温变化趋势图。
【具体实施方式】
[0021]下面通过具体实施例，并结合附图，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。 [0022]本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。 下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
[0023] 实施例：
[0024]具有解热抗炎作用的三叶青块根多糖制备：
[0025] (1)三叶青块根粗多糖的制备：取三叶青块根35_65°C烘箱干燥，干燥至恒重后粉 碎，将粉碎物与双蒸水按照Ig: 20mL的料液比混合，加热回流提取3次，每次Ih。过滤后合并3 次提取液，减压蒸馏浓缩，加入3倍体积的95%乙醇，静置过夜后，4200印111高速离心151^11， 取沉淀用水溶解，然后再次进行乙醇沉淀，离心得三叶青块根粗多糖。
[0026] (2)采用苯酚-硫酸法测定粗多糖含量：
[0027]①标准液的配制:D-葡萄糖标准品在105°C条件下干燥至恒重，精密称取IOOmg，置 于IOOmL容量瓶中，加适量蒸馏水溶解并稀释至刻度，配成标准溶液为1.0mg/mL。临用前，精 确吸取标准溶液1.0 ，2.0，3.0，4.0，5.0，6. OmL，分别置于IOmL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀， 即成系列葡萄糖标准溶液。
[0028]②绘制标准曲线：精密移取上述系列标准溶液0.5mL，置于IOmL的具塞玻璃试管 中，空白对照用蒸馏水〇.5mL。每管加入I.OmL 5%苯酸溶液中，混勾后，加3.5mL浓硫酸，迅 速混匀，室温放置IOmin，置40°C水浴中加热反应30min，冰水浴冷却至室温，于490nm处测吸 光度。
[0029]三叶青块根粗多糖样品测定：取三叶青块根粗多糖样品适量，精密称定，定容至 IOOmL，精密吸取0.5mL，于490nm处测吸光度，由绘制的标准曲线计算样品中多糖含量，并换 算为干燥药材中含量（％ )，计算此方法的多糖收率。标准曲线的绘制以OD值为纵坐标，以葡 萄糖标准品浓度为横坐标，求得线性回归方程为:Y = 5.0095X-0.0024，R2 = 0.9992。实验结 果表明，葡萄糖在浓度范围为0.00625-0.2mg/mL内与吸光度呈线性关系(见图2)。
[0030] (3)三叶青块根多糖纯化及精制：
[0031]①采用Sevag法除蛋白：将7.04g三叶青块根粗多糖以最大浓度配成150mL水溶液， 加入l/4Sevag试剂(氯仿：甲醇=4:1)，充分振荡10min，4000rpm，离心20min，收集上清液， 继续重复上述操作3次，收集旋蒸得除蛋白后多糖3.8g。
[0032]②透析袋脱盐:使用截留分子量为13000Da透析袋进行透析。先用蒸馏水冲洗透析 袋至无醇味，加入稀释的去蛋白多糖80mL，加入双蒸水作为渗透液，每隔3h换水1次，48h后， 浓缩冻干。
[0033]多糖的精制：取透析后的多糖冻干粉适量，用蒸馏水溶解，以5mL/min流速上DEAE Sepharse Fast Flow阴离子交换柱（2.5*10cm)，先用蒸馏水平衡3个床体积，然后分别用 0 · lmol/L、0 · 2mol/L、0 · 5mol/L、0 · 8mol/L NaCl溶液进行洗脱。每IOmL收集一管，用硫酸-苯 酚法测定吸光度，并绘制洗脱曲线（见图3)，合并相同组分。将不同组分分别用截留分子量 为9000Da的透析袋透析48h，去除NaCl。透析过的组分真空冷冻干燥得精制后的多糖组分即 三叶青块根多糖，该多糖具有如图1所示的红外特征。
[0034]三叶青块根多糖解热抗炎作用的药效实验：
[0035] 1.材料
[0036] 1.1试验药物
[0037]