一种融合蛋白在化妆品中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种融合蛋白在化妆品中的应用，属于日化产品领域。
【背景技术】
[0002] 干细胞是人体的起源细胞，是一类具有多向分化潜能和自我复制能力的原始的未 分化细胞，是形成哺乳类动物的各组织器官的原始细胞，有"万能细胞"之美誉。人类衰老的 根本原因在于干细胞本身的衰老，干细胞生成新细胞的活力会随着年龄的增长而逐渐降 低，因此肌肤就会渐渐失去弹性、老化、暗淡等衰老现象。hSCGF可以快速激活休眠的皮肤干 细胞并促使其生长，让皮肤干细胞达到活化、修复、再生的能力，调节体内微环境，为皮肤干 细胞提供有力的生长环境。但hSCGF作为一种生物活性蛋白，在涂抹情况下很难被皮肤吸 收，限制了其在化妆品领域的应用。
[0003] 随着现代透皮技术的发展，增强透皮效果成为可能，现常用的促透技术可以分为 两大类，一类为化学促透技术，另一类为物理促透技术。化学促透技术主要是通过在透皮制 剂中加入化学成分，改变皮肤角质层结构，溶解皮脂或打开毛孔、毛囊，促进药物在皮肤中 的扩散与溶解，促进皮肤各部位的血液流畅等手段来提高药物吸收效率。物理促透技术主 要是通过一些物理手段来破坏皮肤表层结构，使一些亲水性的大分子如蛋白药物直接到达 皮肤内部发挥治疗效果，但是其对设备要求高，应用并不广泛。
[0004] 透皮增强肽是一种能够促进蛋白质透皮的短肽，现已发现的有TDl，其氨基酸序列 为:ACSSSPSKHCG; SPACE，其氨基酸序列为:ACHSALTKHCG; T2，其氨基酸序列为:LVGVFH。但现 有技术中未有透皮增强肽用于化妆品的报道。
【发明内容】
[0005] 为克服现有技术的缺点和不足，本发明提供了一种融合蛋白及其在化妆品中的应 用方法，该融合蛋白包括一种透皮肽和人干细胞生长因子hSCGF，透皮肽通过连接肽或共价 连接到hSCGF的N端或C端。本发明发现透皮肽可以促进干细胞生长因子透皮肽穿过完整皮 肤，从而提高干细胞生长因子的肌肤吸收率。
[0006] 为了实现上述目的，本发明采用了如下的技术方案： 一种融合蛋白，其结构为A-B-X，或A-A-B-X，或A-B-X-B-A;所述A为一种透皮肽，选自 TDl、SPACE或T2;所述B为共价键或长度为2-25个氨基酸的连接肽;X为人干细胞生长因子 hSCGF〇
[0007] 所述A优选为TDl。
[0008] 所述人干细胞生长因子优选根据人hSCGF全长基因序列（GenBank Accession N0.BC005810.2)克隆得到。
[0009] 优选的，所述A共价连接到hSCGF的N端。
[0010] 优选的所述A为TDl，且A共价连接到hSCGF的N端。
[0011 ] 优选的，所述融合蛋白通过Ni2+的Chelating Segparose Fast Flow纯化得到。
[0012] 更具体的，所述融合蛋白通过如下方法制备得到：从健康的新生儿或小儿包皮环 切术切除的包皮组织中提取总RNA，根据人SCGF全长基因序列（GenBank Accession NO · BC005810 · 2)设计PCR引物Fl，F2; Fl:GAGTCCAGC TTAATGC，F2: AAGACACTAACAAGGAGGAG， RT-PCR扩增SCGF cDNA，共价连接将TDl(透皮肽)连接至hSCGF的N端，得到了TDl-hSCGF融合 基因；将其克隆入原核表达质粒pET-22b(+)，构建表达载体pET-22b-TDl-hSCGF，将表达质 粒转化 E.coli Rosetta(DE3)，TDl_hSCGF融合蛋白通过Ni2+的Chelating Segparose Fast Flow纯化，获得纯化的融合蛋白。
[0013] 上述融合蛋白在化妆品中的应用，其特征是:通过化妆品生产工艺将上述融合蛋 白添加到化妆品中，其中，每100g化妆品的TDl-hSCGF添加量为I lIg~30此，纯度大于90%。
[0014] 本发明的融合蛋白在化妆品中的应用，其特征是:所述的化妆品包括护肤、健肤、 功效性的美容化妆品。
[0015] 本发明的融合蛋白在化妆品中的应用，其特征是:所述的化妆品包括护肤、健肤、 功效性的美容产品包括柔肤水、乳液、活性原液、抗衰眼霜、活力面膜、润肤霜、冻干粉。
[0016] -种含一种或几种本发明融合蛋白的活性原液，按质量百分比计，包括以下组分： 卡波940 0.1-0.5% 尿囊素 0.05-1.0% 1.3丁二醇 2.0-10.0% 三乙醇胺 0.1-2.0% K-100 0.05-0.2% PC-305 0.05-0.2% 香精 0.001-0.02% 可溶性蛋白多糖 0.1-10.0% 融合蛋白 0.000001-0.0003% 一种含一种或几种本发明融合蛋白修护网肽膜，按质量百分比计，包括以下组分： 卡波 2020 0.1-1.0% 1.3丁二醇 2.0-10.0% 甘油 2.0-8.0% 尿囊素 0.05-0.5% 芦荟提取液 2.0-10.0% 天来可GL 0.1-2.0% G-plus 0.05-0.2% 融合蛋白 0.000001-0.0003% 一种含一种或几种本发明融合蛋白的玻尿酸精华乳，按质量百分比计，包括以下组分： 16/18醇 0.1-2.0% A-165 0.1-1.0% M-68 0.5-5.0% 角鲨烷 1.0-5.0% 白油 1.0-10.0% DC-200 0.1-5.0% 甘油 2.0-10.0% 丙二醇 2.0-10.0% 汉生胶 0.05-0.5% S-305 0.1-1.0% 香精 0.005-0.2% K-100 0.05-0.2% 透明质酸 0.01-0.5% 拉丝剂 0.001-0.01% 融合蛋白 0.000001-0.0003% 一种含一种或几种本发明融合蛋白冻干粉，按质量百分比计，包括以下组分： 甘露醇注射液 0-6.0 % 海藻糖 0.1-5.0% 透明质酸 0.01-0.4% QlO 0.05-0.2% 红景天提取液 2.0-8.0% 融合蛋白 0.000001-0.0003% 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果： 本发明通过将透皮肽连接至hSCGF，构建融合蛋白，并将其应用于化妆品领域。本发明 的融合蛋白可以很容易的穿过完整皮肤，可以保持良好的生物活性及肌肤吸收率。
【附图说明】
[0017] 图I hSCGF对人成纤维母细胞的促生长作用； 图2 hSCGF对人角质细胞的增殖作用。
【具体实施方式】
[0018] 现结合具体实施例详细说明本发明，但本发明的实施方式不限于此。
[0019] 实施例1 TDl-hSCGF融合蛋白的获得 所述的融合蛋白通过如下方法制备得到:从健康的新生儿或小儿包皮环切术切除的包 皮组织中提取总RNA，根据人hSCGF全长基因序列（GenBank Accession NO.BC005810.2)设 计PCR引物Fl，F2;F1 :GAGTCCAGC TTAATGC，F2:AAGACACTAACAAGGAGGAG，RT-PCR扩增hSCGF cDNA，共价连接将TDl (透皮肽)连接至hSCGF的N端，得到了 TDl-hSCGF融合基因；将其克隆入 原核表达质粒pET-22b( + )，构建表达载体pET-22b-TDl-hSCGF，将表达质粒转化E.coli Rosetta(DE3)，TDl_hSCGF融合蛋白通过Ni2 +的Chelating Segparose Fast Flow 纯化，获 得融合蛋白。
[0020] 实施例2 一种含融合蛋白的活性原液，按重量百分比计，包括以下组分：
生产工艺： I、A相加热至85°C均质2-3分钟完全溶解，B相加入A中搅拌保温20min后开始降温;2、降 温至65°C左右加 C相，搅拌均匀后加入D相;3、40°C左右加 E对板合格出料。