通过唾液酸粘附素靶向巨噬细胞的制作方法

专利名称：：通过唾液酸粘附素靶向巨噬细胞的制作方法
技术领域：
：总体上，本发明涉及将货物(cargo)靶向送递至细胞的组合物和方法。具体而言，本发明涉及将货物靶向送递至表达唾液酸粘附素的细胞的组合物和方法。
背景技术：
：基于各种目的，包括药物介入以及临床生物测定和研究生物测定，需要将某物质专门送递至靶向细胞。在最好避免非靶向细胞暴露于待送递的物质的情形下，例如在非靶向细胞的暴露会导致不良副作用的情形下，特别需要靶向送递。例如，治疗介入可能需要消除、抑制、刺激和/或激活某一具体的细胞或细胞类型。在这种情况下，为了避免不良副作用，例如对非靶向细胞和细胞类型的抑制或刺激，将有效获得所需结果的物质优先送递至靶向细胞是有利的。靶向送递还可以使用较少待送递物质来实现所需效果。一直需要实现将物质靶向送递至细胞的组合物和方法。
发明内容本发明的实施方案提供了一种将货物部分送递至细胞的方法，所述方法包括将表达唾液酸粘附素的细胞与具有唾液酸粘附素结合部分和货物部分的缀合物相接触。该唾液酸粘附素结合部分结合由细胞表达的唾液酸粘附素，并与该货物部分一起被内化，藉此将该货物部分送递至该细胞内。天然表达唾液酸粘附素的细胞是已知的，特別包括巨噬细胞。7由本发明所提供的具体方法包括诱导或增强唾液酸粘附素在天然情况下产生少量或不产生唾液酸粘附素的细胞内表达。唾液酸粘附素表达的诱导或增强包括唾液酸粘附素表达构建体的转染和/或有效诱导或增强唾液酸粘附素表达的试剂的给予。唾液酸粘附素的表达通过以下各种方法中的任何一种确定，包括唾液酸粘附素特异性抗体的结合、编码唾液酸粘附素的mRM的检测等。在具体的实施方案中，唾液酸粘附素结合部分是主要特异性结合唾液酸粘附素的抗体。这类抗体包括但不限于小鼠抗猪唾液酸粘附素mAb41D3、小鼠抗人唾液酸粘附素mAb7D2和小鼠抗猪唾液酸粘附素mAbMCA2316。在本发明方法的其它实施方案中，唾液酸粘附素結合部分为唾液酸粘附素配体。在具体实施方案中，包含在缀合物中的货物部分为细胞内某一反应的刺激物。例如，在一个实施方案中，缀合物为细胞内免疫应答的刺激物。在其它的具体实施方案中，在细胞中刺激免疫应答的缀合物可在受试者内刺激免疫应答。因此，货物部分可为抗原。还提供了其中该货物部分作为细胞的抑制剂的本发明的实施方案。例如，在具体实施方案中，包含在缀合物中的货物部分为细胞毒剂。细胞毒剂的实例为核糖体失活蛋白，但并不限于此。作为核糖体失活蛋白的具体细胞毒剂为皂草素(saproin)。在其它的实施方案中，货物部分为抗微生物剂。包含在缀合物中的抗微生物剂可有效抑制微生物，例如但不限于细菌、病毒、真菌或原生动物《在本发明方法的某些实施方案中，货物部分为细胞因子。任选地，该货物部分为核酸。被送递的核酸任选为表达构建体。另外任选将表达构建体包含于诸如但不限于细菌质粒或病毒载体等的载体内。核酸货物任选为反义构建体，例如但不限于反义寡核苷酸、siRNA、shRNA或表达反义核酸的表达载体。在货物部分为抗原的情况下，该抗原任选为蛋白、肽、糖蛋白或糖肽。这类抗原可以是合成的，例如但不限于经重组产生或经化学合成的蛋白质或者肽；这类抗原也可以是天然的，例但不限于从细胞、病毒或生物体分离得到的抗原。在具体的实施方案中，为抗原的货物是病毒蛋白、病毒肽、病毒糖蛋白或病毒糖肽。在具体的实施方案中，缀合至唾液酸粘附素结合部分的抗原为流感病毒血凝素或其抗原性部分。流感病毒血凝素的特定抗原部分由SEQIDNo.3或其同源物编码。在具体的实施方案中，包含在本发明的缀合物内的病毒血凝素为SEQIDNo.4的流感病毒血凝素或其同源物。与将货物送递至细胞的缀合物相接触的细胞是在体外的或者在体内的。在本发明方法的其它实施方案中，细胞由可有效诱导或增强唾液酸粘附素在该细胞内表达的细胞因子处理。例如，由有效诱导或增强唾液酸粘附素表达的细胞因子处理的细胞为单核细胞、单核细胞系、巨噬细胞和巨噬细胞系。在具体的实施方案中，人细胞和/或人来源的细胞系由有效诱导或增强唾液酸粘附素表达的细胞因子处理。人来源的细胞系的一个实例是人单核细胞系THP-1。在其它具体的实施方案中，猪细胞和/或来源于猪的细胞系被有效诱导或增强唾液酸粘附素表达的细胞因子处理。有效诱导或增强唾液酸粘附素表达的合适的细胞因子包括干扰素cc(IFN-oc),以及肺瘤坏死因子-oc(TNF-a)和干扰素-Y(IFN-Y)的组合物。本发明提供的组合物包括缀合至货物部分的唾液酸粘附素结合部分。在本发明的组合物的具体实施方案中，唾液酸粘附素结合部分为抗体或唾液酸粘附素配体。本发明提供了一种在受试者内刺激针对病毒抗原的免疫应答的方法，该方法包括给予受试者含有缀合有病毒抗原的唾液酸黏附素结合部分的组合物。在具体的实施方案中，作为病毒抗原的货物是病毒蛋白、病毒肽、病毒糖蛋白或病毒糖肽。在具体的实施方案中，缀合有唾液酸结合部分的病毒抗原为流感病毒血凝素或其抗原部分。流感病毒血凝素的特异性抗原部分由SEQIDNo.3编码。还提供了方法和组合物，其中缀合有唾液酸粘附素结合部分的病毒抗原为猪繁殖和呼吸综合征病毒、猪繁殖和呼吸综合征病毒蛋白或猪繁殖和呼吸综合征病毒蛋白的抗原部分。任选地，唾液酸粘附素结合部分为抗体或唾液酸粘附素配体。包含在本发明缀合物中的特异性抗体包括单克隆抗体41D3、单克隆抗体7D2和单克隆抗体MCA2316。在具体的实施方案中，包含唾液酸粘附素结合部分和货物的缀合物由唾液酸粘附素结合部分和货物之间的化学键合产生。在其他的实施方案中，包含唾液酸粘附素和货物的缀合物由包括表达融合蛋白在内的重组技术产生。在具体的实施方案中，本发明的一种刺激免疫应答的方法包括给予受试者的细胞因子应答细胞一定量有效诱导或增强唾液酸粘附素的表达的细胞因子。有效诱导或增强唾液酸粘附素在INF-oc应答细胞中表达的特异性细胞因子是INF-ct。INF-ct应答细胞可通过本领域已知的方法鉴定，这些方法包括但不限于INF-ot受体的检测。具体的INF-源的细胞系(例如但不限于人单核细胞系THP-1)。巨噬细胞是INF-cc应答细胞的另一个实例。本发明的实施方案提供了一种针对受试者内抗原刺激免疫应答的方法，该方法包括给予受试者包含缀合有抗原的唾液酸结合部分的组合物。在本发明的其他实施方案中，提供了一种针对唾液酸粘附素结合能力和/或唾液酸粘附素结合刺激的细胞内化活性对化合物进行筛选的方法，该方法包括给予有效诱导或增强唾液酸粘附素表达的细胞因子；给予所述化合物；并针对所述化合物与唾液酸粘附素的特异性结合进行分析和/或针对唾液酸粘附素结合刺激的细胞内化活性进行分析。在具体的实施方案中，有效诱导或增强唾液酸粘附素表达的细胞因子为INF-oc。例如，化合物为抗唾液酸粘附素抗体或唾液酸粘附素配体，确定该化合物的特异性结合的分析的实例包括将该化合物与细胞在唾液酸粘附素结合部分的典型结合条件下(例如在基本为生理条件下)孵育并检测结合。对结合的检测可包括例如对与所述化合物结合的受体的检测。例如，对该化合物的内化的检测可通过以下步骤实现透化细胞，与结合所述化合物的试剂(例如但不限于抗体)孵育，然后对该试剂进行检测。提供了一种转染细胞的方法，该方法包括给予表达唾液酸粘附素的细胞缀合有表达构建体的唾液酸粘附素结合部分。在具体的实施方案中，表达唾液酸粘附素的细胞是由唾液酸粘附素表达构建体转染的细胞。在其他实施方案中，该细胞为稳定表达唾液酸粘附素的细胞系。在又一些实施方案中，该细胞由细胞因子处理，以诱导或增强唾液酸粘附素表达《本发明提供了将货物送递给细胞的试剂盒，该试剂盒包括表达唾液酸粘附素的细胞和唾液酸粘附素结合部分。任选地，所提供的试剂盒包括用于将货物缀合至唾液酸粘附素结合部分的试剂。包含在本发明试剂盒内的细胞任选为细胞系。在另一种情况下，包含在试剂盒内的唾液酸粘附素结合部分被缀合至货物。在具体的实施方案中，缀合有唾液酸粘附素结合部分的货物为表达构建体。提供了一种治疗受试者病理状态的方法，包括给予受试者治疗有效量的缀合有治疗性货物部分的唾液酸粘附素结合部分，其中所述治疗性货物部分被送递至受试者的表达唾液酸粘附素的细胞，由此治疗所述病理状态。在具体的实施方案中，该治疗性货物部分为该细胞的抑制剂，例如但不限于细胞毒剂。抑制剂的实例为皂草素。在具体的实施方案中，由本发明方法治疗的病理状态其特征在于在该细胞中存在病原体。在其他的实施方案中，该病理状态为自身免疫疾病或癌症。在治疗自身免疫疾病的实施方案中，所包括的货物部分为巨噬细胞激活和/或发炎的抑制剂。这类抑制剂包括但不限于巨噬细胞激活和/或发炎的抑制剂，例如IL-IO、TGF-P、6-(甲基亚硫酰基)己基异硫氰酸酯、倍半萜色酮以及它们的组合。图1示出巨噬细胞于37'C与迈Ab41D3孵育之后，唾液酸粘附素结合部分在不同时间的特异性结合和内化。图2A示出用本发明的唾液酸粘附素结合部分/抗原缀合物进行初次免疫接种之后，抗原特异性IgM血清滴度的平均值土SEM，其中正方形符号表示用偶联有Sn特异性mAb41D3的HSA进行免疫接种的猪；三角形符号表示用偶联有无关对照mAb的HSA进行免疫接种的猪；并且圆形符号表示用游离HSA进行免疫接种的猪。图2B示出用本发明的唾液酸粘附素结合部分/抗原缀合物进行初次免疫接种之后，抗原特异性IgG血清滴度的平均值土SEM，其中正方ii形符号表示用偶联有Sn特异性mAb41D3的HSA进行免疫接种的猪；三角形符号表示用偶联有无关对照mAb的HSA进行免疫接种的猪；并且圆形符号表示用游离HSA进行免疫接种的猪。图2C示出进行加强免疫接种之后，抗原特异性IgG血清滴度的平均值士SEM,其中正方形符号表示用偶联有Sn特异性mAb41D3的HSA进行免疫接种的猪；三角形符号表示用偶联有无关对照mAb的HSA进行免疫接种的猪；并且圆形符号表示用游离HSA进行免疫接种的猪。图3示出与用非唾液酸粘附素结合部分/细胞毒剂缀合物处理的细胞相比较，用唾液酸粘附素结合部分/细胞毒剂缀合物处理的表达唾液酸粘附素的细胞群中活细胞的百分比。图4示出与用唾液酸粘附素结合部分/细胞毒剂缀合物处理的不表达唾液酸粘附素的细胞相比较，用唾液酸粘附素结合部分/细胞毒剂缀合物处理的表达唾液酸粘附素的细胞群中活细胞的百分比。图5为一系列由流式细胞分析形成的直方图，示出具体的唾液酸粘附素结合部分的结合和内化情况。图6A为数码照片的静电复印图，示出在纯化期间获得的不同级分中天然流感病毒血凝素的存在情况和纯化的SDS-PAGE分析，该分析包括使用针对H1N1病毒的HA的单克隆抗体通过蛋白质印迹对HA进行检测。图6B为教码照片的静电复印图，示出图6A示出样本中的总蛋白使用考马斯亮蓝染色的检测情况。图7A是数码照片的静电复印图，示出具有V5-His标签的重组HA产生的SDS-PAGE分析，其中该蛋白在不存在胎牛血清的情况下产生。图7B是数码照片的静电复印图，示出具有V5-His标签的重组HA产生的SDS-PAGE分析，其中该蛋白在存在胎牛血清的情况下产生。图8A是数码照片的静电复印图，示出在HA的纯化过程中采集的不同级分的SDS-PAGE蛋白质印迹分析。图8B是数码照片的静电复印图，示出在图8A示出HA的纯化过程期间采集的相同级分的SDS-PAGE考马斯亮蓝分析。图9A是数码照片的静电复印图，示出SDS-PAGE蛋白印迹分析，该分析示出抗体13D12与分离的天然HA偶联的可视情况。图9B是数码照片的静电复印图，示出SDS-PAGE蛋白印迹分析，该分析示出抗体41D3与分离的天然HA偶联的可视情况。图10是一系列由流式细胞分析形成的直方图，示出具体的唾液酸粘附素结合部分的结合和内化情况。图ll是数码照片的静电复印图，示出在抗体-皂草素缀合方案期间采集的不同样本的SDS-PAGE和考马斯亮蓝染色。图12示出用13D12-HA或41D3-HA免疫接种的猪的平均免疫-过氧化物酶单层分析滴度。具体实施例方式鲜有有效的靶向送递组合物和方法能将所需货物送递至靶向细胞。特定受体唾液酸粘附素(Sn)被鉴定为本发明耙向送递组合物和方法的靶标。唾液酸粘附素，也被称为绵羊红细胞受体(SER)或唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素1(Siglec-1),属于I型凝集素的Siglec家族，并且专门在主要存在于脾脏、淋巴结、骨髓、肝脏、结肠和肺的巨噬细胞亚型表达，但不会在血单核细胞表达，如以下参考文献所述Crocker,P.R.，etal.,1991,EmboJ10:1661-9;Crocker,P.R.,etal，1994，EmboJ13:4490-503;Duan，X.，etal，1998，JVirol72:4520-3;Hartnell，A.，etal"2001,Blood97:288-96，andVanderheijden,N.，etal.，2003，JVirol77:8207-15。Sn的高表达还在获自类风湿性关节炎患者的组织中的炎性巨噬细胞中检测到，并且还在与乳腺癌细胞密切接触的浸润巨噬细胞上检测到，如Hartnell，A.，etal，2001，Blood97:288-96;andNath，D.，etal，1999,Immunology98:213-9所述，唾液酸粘附素(Sn)最初被鉴定为小鼠的居留骨髓细胞上依赖于唾液酸的绵羊红细胞受体(SER),并且现在还在包括人、大鼠和猪在内的多种哺乳动物体内被表征，如Crocker,P.R.，andS.Gordon,1989，JExpMed169:1333-46;Crocker,P丄，andS.Gordon,1986,JExpMed164:1862:75;andVanderheijden,N.，etal.，2003，JVirol77:8207-15所述。本发明提供了一种缀合物组合物，它包含缀合有货物部分的唾液酸粘附素结合部分。包含缀合有货物部分的唾液酸粘附素结合部分的缀合物组合物可用于将货物部分送递至表达唾液酸粘附素的细胞。本文所使用的术语"核酸"是指任何形式具有一个以上核苷酸的RNA或MA分子，包括单链的、双链的寡核苷酸或多核苷酸。术语"核苦酸序列"用来指单链形式核酸的寡核苷酸或多核苷酸中核苷酸的顺序。可以理解的是，由于遗传密码子的简并性，多个核酸可以编码同一多肽。术语"蛋白"、"多肽"和"肽"在本文中互换用来指通过肽键连接的两个或多个氨基酸。术语蛋白包括经修饰的蛋白和肽，例如但不限于经糖基化的、经磷酸化的、泛素化的、肉豆蔻酰化的(myristoylated)、棕榈酰化的和乙酰化的蛋白和肽。术语"表达构建体，，指重组核酸或合成核酸，该核酸包括编码蛋白的核酸以及一个或多个与编码所述蛋白的核酸有效连接的调控核酸序列，所述调控核酸序列指导至少编码该蛋白的核酸在细胞内的转录。术语"转染"指的是将外源核酸引入细胞。术语"有效连接，，指一核酸与另一核酸之间的功能关系。通常，有效连接的核酸是毗邻的。一个例外是增强子的有效连接，该增强子与另一核酸是非毗邻的，并且与之具有功能关系。术语"疫苗"指药物组合物，包括在受试者内刺激免疫应答的至少一种抗原o术语"免疫接种"指给予疫苗以在受试者内刺激免疫应答。可对受试者进行免疫接种，以对该受试者进行疾病预防或者治疗。术语"抗原"指包含一个或多个表位的分子，该表位可通过宿主免疫系统例如免疫细胞来刺激抗原特异性应答。抗原可包括肽、蛋白、糖蛋白、多糖、脂质、神经节苷脂、它们的一部分，以及它们的组合。术语"刺激免疫应答"指激发或增强免疫应答。术语"同源物"指通过与参比蛋白之间的氨基酸序列和/或结构同源性来表征的蛋白。通常，参比蛋白的同源物与参比蛋白具有至少50%、优选至少75%、更优选至少80%、85°/。、90%、91%、92°/。、93%、94%、95%、96°/L97%、98%、99%或更高的同一性。举例来说，同源物为从另一物种分离得到的参比蛋白的直系同源物。同源物包括与参比蛋白相比具有一个或多个氨基酸置换、缺失或插入的蛋白。术语参比蛋白的"生物活性同源物"指通过与该参比蛋白的氨基酸14序列和/或结构同源性表征的蛋白，它与该参比蛋白尤其是天然存在的参比蛋白相比具有基本相似的功能、结构和/或生物化学性质。一类同源物是经保守修饰的蛋白和/或其片段。经保守修饰的蛋白或其片段为包含由化学性质上相似的氨基酸对氨基酸进行置换的蛋白或肽。例如，每个氨基酸可被描述为具有一个或多个以下特征带正电的、带负电的、脂肪族的、芳香族的、极性的、疏水的和亲水的。保守置换是指用具有特定结构或功能特征的一个氨基酸置换具有相同特征的另一个氨基酸。酸性氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸；碱性氨基酸包括组氨酸、赖氨酸和精氨酸；脂肪族氨基酸包括异亮氨酸、甘氨酸、亮氨酸和缬氨酸；芳香族氨基酸包括苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；极性氨基酸包括天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、赖氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸；疏水性氨基酸包括丙氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、缬氨酸、酪氨酸和色氨酸；并且亲水性氨基酸包括天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、组氨酸、丝氨酸和苏氨酸。氨基酸还可以通过相对大小来进行描述，丙氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、苏氨酸、丝氨酸、缬氨酸，通常全都被认为是较小的氨基酸。同一性百分比可通过对氨基酸或核酸序列(包括参比序列和推定同源序列)进行比较来确定。例如，用于确定同一性百分比的算法包括以下文献中的算法S.KarlinandS.Altshul，PMS，90:5873-5877，1993;T.Smithan线Waterman,Adv.Appl.Math.2:482-489，1981,S.NeedlemanandC.Wunsch，J.Mol.Biol,48:443-453，1970，W.PearsonandD.Lipman，PMS，85:2444-2448,1988;以及纳入计算机执行的其他算法，例如但不限于公众可从美国国立生物技术信息中心例如http:〃丽.ncbi.nlm.nih.gov获取的GAP、BESTFIT、FASTA、TFASTA和BLAST。唾液酸粘附素结合部分唾液酸粘附素结合部分与唾液酸粘附素特异性结合。本文所使用的术语"特异性结合"旨在表示包含在本发明缀合物中的唾液酸粘附素结合部分优先与唾液酸粘附素相互作用，而不会与其它蛋白或其它分子发生显著相互作用。缀合有货物部分的唾液酸黏附素结合部分具有唾液酸粘附素特异性结合活性，并因此赋予本发明的缀合物以唾液酸粘附素特异性结合活性。具体而言，缀合有货物部分的唾液酸粘附素结合部分会结合由细胞所表达的唾液酸粘附素的胞外部分。另外，唾液酸粘附素结合部分会与存在于靶细胞的细胞膜的唾液酸粘附素特异性结合，并刺激本发明的缀合物被摄入至该细胞内。在一个实施方案中，唾液酸粘附素结合部分为抗体。术语"抗体"指多克隆抗体、单克隆抗体(mAb)、嵌合抗体、人源化抗体，以及抗原结合抗体片段和具有抗原结合功能性的分子。术语"抗体"包括具有四条多肽链(通过二硫键连接在一起的两条重(H)链和两条轻(L)链)的完整免疫球蛋白。术语"抗体"还包括唾液酸粘附素结合抗体片段，例如包括但不限于诸如Fab片段、Fab，片段、F(ab，)2片段、Fd片段、Fv片段、scFv片段等片段，以及结构域抗体(dAb)。包含在本发明的缀合物中的抗唾液酸粘附素抗体和/或唾液酸粘附素结合抗体片段能结合唾液酸粘附素并刺激将该缀合物摄入到该细胞内。包含在本发明缀合物中的抗体或抗体片段特异性结合唾液酸粘附素。优选的唾液酸粘附素结合部分以高于它结合Siglec家族的另一成员的亲和力结合唾液酸粘附素。优选的包含在本发明缀合物中的唾液酸粘附素结合部分其特征在于对唾液酸粘附素有至少约lx1()SM^的特异性结合活性。在其它实施方案中，优选的唾液酸粘附素结合部分对唾液酸粘附素有至少约1xlO^-1的特异性结合活性。在另一些实施方案中，优选的唾液酸粘附素结合部分对唾液酸粘附素有至少约1x10Vi的特异性结合活性。抗唾液酸粘附素抗体和唾液酸粘附素结合抗体片段可由任何方法来提供，例如包括但不限于免疫接种、分离和纯化、完整免疫球蛋白的酶切、所需唾液酸粘附素结合肽或蛋白的化学合成、通过重组核酸技术生产。也可采用这些方法的组合。抗唾液酸粘附素抗体可使用用作抗原的全长唾液酸粘附素或唾液酸粘附素的肽片段通过免疫接种来制备。举例而言，这类蛋白和肽可为人、猪、绵羊、大鼠、小鼠或其它动物的唾液酸粘附素蛋白或肽。包含在本文中的示例人、小鼠和猪唾液酸粘附素蛋白序列和编码人、小鼠和猪唾液酸粘附素的核酸序列为SEQIDNo.5、SEQIDNo.6、SEQIDNo.7、SEQIDNo.8、SEQIDNo.9和SEQIDNo.10。来源于多个物种的唾液酸粘附素的胞外部分已^皮表征具有唾液酸结合位点，这在以下文献中举例说明Nath，D.etal，J.Biol.Chem.，270:26184-26191，1995;Vinson,M.etal.，J.Biol.Chem"271:9267-9272，1996;Hartnell，A.etal,,Blood，97:288—296;和Vanderheijden，N.etal.，2003，J.Virol.77:8207-15。例如，人唾液酸粘附素的胞外部分从第l位氨基酸延伸至第1642位氨基酸，猪唾液酸粘附素的胞外部分从第l位氨基酸延伸至第1643位氨基酸，并且小鼠唾液酸粘附素的胞外部分从第l位氨基酸延伸至第1638位氨基酸，每个序列均参见本文所描述的序列。在制备唾液酸粘附素结合抗体中用作抗原的唾液酸粘附素片段优选包括一个或多个Ig样结构域。抗原可通过各种已知方法中的任何一种方法制备得到，包括从天然来源分离、重组产生或通过化学合成技术。在制备唾液酸粘附素结合抗如果需要，可通过与载体分子例如牛血清白蛋白或匙孔血蓝蛋白连接，从而增强唾液酸粘附素或者其它抗原的肽部分的免疫原性。这类连接可通过各种方法中的任何一种方法进行，例如包括但不限于缀合以及融合蛋白的表达。可将经重组表达的蛋白和肽(例如但不限于唾液酸粘附素和唾液酸粘附素片段)标记，从而简化分离。例如，可对这类蛋白和肽进行Fc标记。抗体、抗原结合片段及其形成方法在本领域是已知的，并且这类抗体、抗原结合片段和方法在以下参考文献中进一步详细描述，例如AntibodyEngineering,Kontermann，R.andDubel，S.(Eds.),Springer,2001;Harlow,E.andLane,D.，Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,1988;Ausubel，F.etal.，(Eds.)，ShortProtocolsinMolecularBiology,Wiley,2002particularlychapter11;J.D.Pound(Ed.)ImmunochemicalProtocols,MethodsinMolecularBiology,HumanaPress;2nded.，1998;B丄C.Lo(Ed.)，AntibodyEngineering:MethodsandProtocols,MethodsinMolecularBiology,HumanaPress,2003;andKohler，G.andMilstein，C,Nature,256:495-497(1975)，制备唾液酸粘附素结合部分的上下文中，术语"抗原"指唾液酸粘附素或其抗原性肽部分。在一个具体的实施方案中，唾液酸粘附素的抗原性部分包括存在于表达唾液酸粘附素的细胞外的唾液酸粘附素的一部分。这个部分优选包括唾液酸结合结构域。作为唾液酸粘附素结合部分的抗体可使用天然唾液酸粘附素(例如所附氨基酸序列)和/或其肽片段作为抗原来制备得到。作为唾液酸粘附素结合部分的抗体还可使用唾液酸粘附素、经修饰的唾液酸粘附素和/或其片段作为抗原来制备得到。在一个具体的实施方案中，唾液酸粘附素结合部分为单克隆抗体41D3。单克隆抗体41D3(mAb41D3)为小鼠抗猪唾液酸粘附素单克隆抗体。单克隆抗体41D3在以下文献中得以描述Vanderheijden，N.etal.，2003，JVirol77:8207-15和D磁,X.etal.，1998，JVirol72:4520-3。杂交瘤产生的单克隆抗体41D3保藏于CNCM(法国微生物保藏中心，InstitutePasteur,28，RueduDocteurRoux，F-75724ParisCedex15)，并被给予获取号1-2719。在另一个具体的实施方案中，唾液酸粘附素结合部分为结合人唾液酸粘附素的小鼠单克隆抗体7D2(mAb7D2)。mAb7D2针对含有人唾液酸粘附素N端四个结构域的Fc融合蛋白产生。mAb7D2在Hartnell，A.etal.，Blood,97:288-96，2001中得以进一步描述，并且可以商购获得。唾液酸粘附素结合部分的另一个具体实例为描述于例如Builido,R.，TissueAntigens,1997,49(4):403-13中的小鼠抗猪唾液酸粘附素单克隆抗体MCA2316，并且是可以商购获得。在本发明缀合物组合物的另一个实施方案中，唾液酸粘附素结合部分为唾液酸粘附素配体。如上所述，唾液酸粘附素为结合唾液酸的免疫球蛋白样凝集素。唾液酸粘附素结合唾液酸，特别是oc2-3唾液酸残基和一些a2-6和a2-8唾液酸残基。举例说来，这类唾液酸残基包括Siacc2-3Galp1-3GalNAc、Siaoc2-3Galpl-3GlcNAc和Siaoc2-3Galp1-4GIcNAc、Siacx2-6Galp卜3GalMc和Siacc2-8Neu5Acot2-3Galpl-3GalNAc。因此，在其中唾液酸粘附素结合部分为唾液酸粘附素配体的实施方案中，唾液酸粘附素结合部分优选包括唾液酸化的有机结构，例如但不限于唾液酸化的蛋白或肽、配体和/或碳水化合物。在另一个实施方案中，唾液酸粘附素结合部分包括唾液酸粘附素的天然的经唾液酸化的配体。唾液酸粘附素的天然的经唾液酸化的配体为天然存在并且在体内结合唾液酸粘附素的唾液酸化的结构。举例而言，天然的经唾液酸化的配体包括CD43、半乳糖型C型凝集素1以及MUC1抗原。唾液酸粘附素的天然的经唾液酸化的配体可从天然来源分离得到，或者重组产生，用于包含到本发明的缀合物组合物中。另一个天然的唾液酸粘附素配体为猪动脉炎病毒蛋白。货物部分如上所述，本发明的缀合物组合物包括唾液酸粘附素结合部分和货物部分。货物部分是待送递至靶细胞的物质。在一个实施方案中，货物部分为靶细胞中应答的刺激物。例如，货物部分任选为巨噬细胞内免疫应答的刺激物。货物部分还可为靶细胞内一氧化一氮产生的刺激物。例如，作为巨噬细胞刺激物的货物部分的实例包括白细胞介素-4、白细胞介素-10、白细胞介素-13、巨噬细胞刺激蛋白、CD40配体和干扰素-Y。其它刺激物包括脂膜酸、胞壁酰三肽TNF-oc、GM-CSF、脂多糖和胞外基质蛋白。在一个具体的实施例中，作为免疫应答刺激物的货物部分为抗原。包含在本发明缀合物中的抗原可为任何类型的抗原，例如包括但不限于肽、蛋白、脂质、碳水化合物以及这些或者那些抗原性物质的组合。抗原可来源于任何来源，因此可为经分离的天然物质、经重组产生的物质、经化学合成的物质或者以其他方式提供的物质。抗原的性质有赖于所需结果。通常，所包含的抗原是作为待送递至抗原呈递细胞的货物部分，目的是刺激受试者的免疫系统，以产生针对该抗原的免疫应答。在一个具体实施方案中，所包含的作为货物部分的抗原为猪动脉炎病毒的肽或蛋白。还提供了包含货物部分的缀合物，该货物部分为靶细胞的抑制剂。示例性抑制剂包括巨噬细胞活性的抑制剂、炎症的抑制剂以及常规的细胞抑制剂。g，l刺由俗仏血厶'巨噬细胞活性和炎症，例如在自身免疫疾病中，包括但不限于内毒素血症、多发性硬化、类风湿性关节炎、和红斑多良疮。巨噬细胞活性和炎症的抑制剂包括抗炎性细胞因子和抗炎性化合物，例如但不限于IL-IO、TGF-P、6-(甲基亚硫酰基)己基异硫氰酸酯和倍半萜色酮(包括从阜康阿魏(Ferulafukanensis)分离得到的那些)。在另一个实施方案中，作为靶细胞抑制剂的货物部分为细胞毒剂。细胞毒剂可包含在本发明的送递至细胞的缀合物中，目的是抑制或者破坏该细胞。例如，可靶向巨噬细胞，用于通过细胞毒剂进行抑制或破坏，目的是抑制巨噬细胞活性，例如炎症活性。在另一个实施例中，将细胞毒剂送递至表达唾液酸粘附素的细胞，目的是抑制微生物感染。细胞毒剂可为任何可与唾液酸粘附素结合部分缀合从而产生本发明的缀合物的细胞毒剂。示例性细胞毒素货物部分为用作抗肿瘤剂的药物。抗肿瘤剂在例如Goodmanetal.,GoodmanandGilman'sThePharmacologicalBasisofTherapeutics,8thEd.,MacmillanPublishingCo"1990中有述。例如，这类药物包括阿西维辛(acivicin)、阿柔比星(aclarubicin)、阿考达峻(acodazole)、阿克罗宁(acronine)、阿多来新(adozelesin)、阿地白介素(aldesleukin),阿利维A酸(alitretinoin)、另'J噤醇(allopurinol)、六曱蜜胺(altretamine)、安波霉素(ambomycin)、双氯胺蒽職(ametantrone)、氨磷汀(amifostine)、氨鲁米特(aminoglutethi迈ide)、安吖咬(amsacrine)、阿那曲唾(anastrozole)、氨茴霉素(anthramycin)、跳霜(arsenictrioxide)、门冬酰胺酶(asparaginase)、曲林菌素(asperlin)、阿扎胞苷(azacitidine)、氮替派(azetepa)、阿佐霉素(azotomycin)、巴马司他(batimastat)、节替派(benzodepa)、比卡鲁胺(Mcalutamide)、比生群(bisantrene)、曱磺酸双奈法德(bisnafidedimesylate)、比折来新(bizelesin)、博来霉素(bleomycin),布会那(brequinar)、溴匹立明(bropirimine)、白消安(busulfan)、放线菌素C(cactinomycin)、卡普睾酮(calusterone)、卡培他滨(capecitabine)、卡醋胺(caracemide)、卡贝替姆(carbetimer)、卡辆(carboplatin)、卡莫司汀(carmustine)、卡柔比星(carubicin)、卡折来新(carzelesin)、西地芬戈(cedefingol)、塞来考昔(celecoxib)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、西罗里霉素(cirolemycin)、顺賴(cisplatin)、克拉屈滨(cladribine)、克立那托敏使朗(crisnatolmesylate)、环碌酰胺(cyclophosphamide)、阿糖胞香(cytarabine)、达卡巴漆(dacarbazine)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地西他滨(decitabine)、右奥马辆(dexormaplatin)、地扎p瓜宁(dezaguanine)、地扎p瓜宁敏使朗(dezaguaninemesylate)、地吖酸(diaziquone)、多西他赛(docetaxel)、多柔比星(doxorubicin)、屈洛昔芬(droloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、屈他雄酮(dromostanolone)、达佐霉素(duazomycin)、依达曲沙(edatrexate)、依氟鸟氨酸(eflomithine)、依沙f星(elsamitrucin)、恩洛钿(enloplatin)、恩普氨酯(enpromate)、依匹艰咬(epipropidine)、表柔t匕星(epirubicin)、厄布洛哇(erbulozole)、依索比星(esorubicin)、雌莫司汀(estramustine)、雌莫司；丁(estramustine)、依他硝峻(etanidazole)、依托泊香(etoposide)、依托泊香(etoposide)、氣笨乙嗜胺(etoprine)、法倔哇(fadrozole)、法扎拉滨(fazarabine)、芬维A胺(fenretinide)、氟尿香(floxuridine)、氟达拉滨(fludarabine)、氟尿嘧咬(fluorouracil)、氟西他滨(flurocitabine)、磷会酮(fosquidone)、福司曲星(fostriecin)、氟维司群(fulvestrant)、吉西他滨(gemcitabine)、吉西他滨(gemcitabine)、羟基脲(hydroxyurea)、伊达比星(idarubicin)、异环磷酰胺(ifosfamide)、伊莫福新(ilmofosine)、白细胞介素11(IL-2，包括重組白细胞介素11即rlL2)、白细胞介素oc-2a、白细胞介素a-2b、白细胞介素a-nl、白细胞介素a-n3、白细胞介素P-Ia、白细胞介素y-Ib、异丙柏(iproplatin)、伊立替康(irinotecan)、兰瑞肽(lanreotide)、来曲峻(letrozole)、亮丙瑞林(leuprolide)、利阿哇(liarozole)、洛美曲索(lometrexol)、洛莫司汀(lomustine)、洛索蒽職(losoxantrone)、马索罗酚(masoprocol)、美登素(maytansine)、盐酸双氯乙基曱胺(mechlorethaminehydrochlride)、曱地孕酮(megestrol)、曱地孕酮(melengestrolacetate)、美法仑(melphalan)、美诺立尔(menogaril)、巯噤呤(mercaptopurine)、曱氨蝶呤(methotrexate)、甲氨蝶呤21(methotrexate)、氯苯氨咬(metoprine)、美妥替派(meturedepa)、米丁度胺(mitindomide)、mitocarcin、丝裂红素(mitocromin)、米托洁林(ndtogillin)、米托马星(mitomalcin)、丝裂霉素(mitomycin)、米托司培(mitosper)、米托坦(mitotane)、米托蒽疲(mitoxantrone)、麦考酚酸(mycophenolicacid)、奈拉滨(nelarabine)、诺考达唾(nocodazole)、诺拉霉素(nogalamycin)、ormnaplatin、奥昔舒仑(oxisuran)、紫杉醇(paclitaxel)、培门冬酶(pegaspargase)、培利霉素(peliomycin)、溴新斯的明(pentamustine)、培洛霉素(peplomycin)、培磷酰胺(perfosfamide)、p底泊溴烷(pipobroman)、旅泊舒凡(piposulfan)、盐酸p比罗蒽鹏(piroxantronehydrochloride)、普卡霉素(piicamycin)、普洛美坦(plomestane)、吟菲尔钠(porfimer)、泊非審素(porfiromycin)、波尼莫司打(prednimustine)、丙卡巴胖(procarbazine)、噤罗霉素(puromycin)、噤罗霉素(puromycin)、p比峻吹喻菌素(pyrazofurin)、利》皮腺苦(riboprine)、罗谷亚胺(rogletimide)、沙芬戈(safingol)、沙芬戈(safingol)、司莫司汀(semustine)、辛曲秦(simtrazene)、sparfosate、司帕霉素(sparsomycin)、锗螺胺(spirogermanium)、螺莫司打(spiromustine)、螺铂(spiroplatin)、链黑菌素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、磺氯苯脲(sulofenur)、他利霉素(talisomycin)、他莫昔芬(tamoxifen)、tecogalan、替力口氟(tegafur)、替洛蒽醒(teloxantrone)、替莫泊芬(temoporfin)、替尼泊苦(teniposide)、替罗昔隆(teroxirone)、睾内酪(testolactone)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟噪呤(thioguanine)、塞替派(thiotepa)、塞峻吹林(tiazofurin)、替拉扎明(tirapazamine)、托泊替康(topotecan)、托瑞米芬(toremifene)、曲托龙(trestolone)、曲西立滨(triciribine)、三曱曲沙(trimetrexate)、曲普瑞林(triptorelin)、妥布氯峻(tubulozole)、乌拉莫司汀(uracilmustard)、乌瑞替派(uredepa)、伐普肽(vapreotide)、维替泊芬(verteporfin)、长春械(vinblastine)、疏酸长春新威(vincristinesulfate)、长春地辛(vindesine)、长春地辛(vindesine)、长春匹定(vinepidine)、长春甘酉旨(vinglycinate)、长春罗新(vinleurosine).、长春瑞滨(vinorelbine)、长春罗定(vinrosidine)、长春利定(vinzolidine)、伏氯喳(vorozole)、折尼辆(zeniplatin)、净司他丁(zinostatin)、zoledronate和佐柔比星(zorubicin)。具有细胞毒性的货物部分还可为可药用的盐类、酯类、酰胺类、水合物和/或这些或其他细胞毒素中的任何一种的前药。在又一个具体实例中，具有细胞毒性的货物部分为具有细胞毒性的核糖体失活蛋白皂草素。在一些实施方案中，可以包含毒剂以抑制或破坏与该细胞有联系的病理微生物。例如，已知可将细菌、病毒和原生动物隔离于某些细胞内。病原体例如包括但不限于克氏锥虫、结核分支杆菌、沙门菌属种、脑膜炎双球菌、HIV和罗斯河病毒，可藏匿于来自于宿主免疫系统的巨噬细胞，并由此引起持续的感染，如以下文献所述Aquaro，S.，etal.，2002,AntiviralRes55:209-25;Brodsky，I.E.，etal.,2005，MolMicrobiol55:954-72;Jones,C，etal,,2003，MolMicrobiol49:1213-25;Monack，D.M.，etal.，2004，JExpMed199:231-41;Monteiro,V.G.，etal.，2005，ParasitolRes97:380-5;Rengarajan:J.,etal.，2005，ProcNatlAcadSciUSA102:8327-32和Way,S.J.，etal.，2002，Virology301:281-92。真菌是可存在于宿主免疫系统的病原体的另一个实例。因此，在本发明的缀合物组合物的一个实施方案中，有效抑制生物体的毒剂是被送递至被该生物体感染的细胞的货物部分。例如，这类毒剂包括抗细菌剂、抗病毒剂、抗真菌剂和抗原虫剂。抗细菌剂的具体实例包括四环素(例如但不限于多西环素、四环素土霉素、地美环素和米诺环素)、内酰胺(例如但不限于青霉素和先锋霉素)、氨基糖苷类(例如但不限于庆大霉素、新霉素和链霉素)、大环内酯类(例如但不限于阿奇霉素、克拉霉素、林可霉素和红霉素)、硝基咪唑(例如但不限于双唑泰栓和替硝唑)、全诺酮类(例如但不限于西诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星和左氧氟沙星)、利福平、万古霉素和克林霉素。抗病毒剂的具体实例包括阿巴卡韦(abacavir)、阿昔洛韦(acyclovir)、安泼那韦(amprenavir)、aplaviroc、atazanavir、brecanavir、darunavir、地拉韦咬(delavirdine)、dexelvucitabine、去羟肌香(didanosine)、disoproxil、依法韦仑(efavirenz)、恩曲他滨(emtricitabine)、enfuvirtide、etravirine、泛昔洛韦(famciclovir)、膦沙那韦(fosamprenavir)、更昔洛韦(ganciclovir)、茚地那韦(indinavir)、拉米夫定(lamivudine)、洛匹那韦(lopinavir)、maraviroc、洛匹那韦(nelfinavir)、奈韦拉平(nevirapine)、利托那韦(ritonavir)、沙奎那韦(saquinavir)、司他夫定(stavudine)、替诺福韦延胡索酸酉旨(tenofovirf腿rate)、替拉那韦(tipranavir)、vicriviroc、扎西他滨(zalcitabine)和齐多夫定(zidovudine)。抗原虫剂的具体实例包括阿4L贿哇(azanidazole)、氯会(chloroquine)、双哇泰栓(metronidazole)、尼莫哇(nimorazole)、奥硝峻(ornidazole)、塞克硝峻(secnidazole)、西奈芬净(sinefungin)、替诺尼哇(tenonitrozole)、temidazole、替贿哇(tinidazole)。抗真菌剂的实例包括唑类，举例来说，包括但不限于咪康唑(miconazole)、ketonazole、伊曲康哇(itraconazole)、氟康峻(fluconazole)、伏立康哇(voriconazole)、泊沙康峻(posaconazole)、雷夫康峻(ravuconazole)、特康唾(terconazole)、克霉峻(clotrimazole)、舍他康峻(sertaconazole)、益康峻(econazole)和芬替康峻(fenticonazole);以及多烯类化合物，举例来说，包括但不限于那他霉素(natamycin)、非律平(filipin)、制霉菌素(nystatin)和两'法霉素B(amphotericinB)。在具体的实施方案中，货物部分为核酸。例如，货物核酸可为DNA、RNA、多核香酸、寡核苷酸、反义多核苷酸或寡核苷酸或者siRNA。核酸可编码蛋白或肽，例如mRNA。货物核酸可为线性的、环形的、超螺旋状的、单链的或双链的、三链的或四链的。在一个具体的实施方案中，货物核酸包括表达构建体。将包含有唾液酸粘附素结合部分和货物核酸表达构建体的缀合物送递至表达唾液酸粘附素的细胞，可使得编码蛋白或肽的表达构建体在该细胞内表达。在其他实施方案中，作为靶细胞的抑制剂或刺激物的货物部分可为核酸。例如，核酸抑制剂可编码抑制剂或刺激物。或者，核酸自身作为刺激物或抑制剂。在一个实施方案中，核酸货物为抑制剂，被送递至表达唾液酸粘附素的细胞以抑制蛋白的表达和/或核酸的转录和/或翻译。核酸抑制剂的示例性实例包括siMA、反义多核苷酸、反义寡核苷酸和核酶。核酸抑制剂可含有天然存在的核酸和/或含有经修饰的核酸，例如但不限于磷硫酰。Crooke，S.T.，AntisenseDrugTechnology:Principles,Strategies,andApplications，CRCPress,2001和Engelke,D.，RNAInterference(廳i):TheNuts&BoltsofsiRMTechnology,DMPress,2004。被送递的核酸抑制剂能抑制体外、离体和/或体内的表达唾液酸粘附素的细胞(尤其是巨噬细胞)中的所需耙标。例如，被送递核酸抑制剂能够抑制感染表达唾液酸粘附素的细胞的微生物蛋白或核酸的功能或其合成，以抑制微生物感染。在另一个实施例中，送递核酸抑制剂来抑制表达唾液酸粘附素的细胞的加工或功能。例如，需要抑制或消除表达唾液酸粘附素的细胞。炎或功能。可送递抑制性核酸货物例如核苷酸类似物，以抑制或消除这样的细胞。在一个实施方案中，核酸货物为刺激物，被送递至体外、活体外和/或体内的表达唾液酸粘附素的细胞，目的是刺激该表达唾液酸粘附素的细胞的加工或功能。例如，核酸货物包括编码肽或蛋白的质粒，免疫应答需针对该肽或蛋白进行。将质粒货物送递至生物体内的表达唾液酸粘附素的巨噬细胞，该肽或蛋白在此生产并刺激免疫应答。编码肽或蛋白的质粒优选为这样一种表达构建体，它含有编码该肽或蛋白的核酸，以及表达该肽或蛋白所要求或所需要的一个或多个调控核酸序列。例如，这类调控序列包括启动子、增强子、剪接信号、转录起始位点、转录终止信号、多腺苷酸化信号、内核糖体进入位点(IRES)以及它们的组合。合适的启动子包括在组成上具有活性的启动子、诱导型启动子和细胞型特异性启动子。可将核酸货物直接地或间接地缀合至唾液酸粘附素结合部分。例如，可将核酸缀合至唾液酸粘附素结合部分，从而在该核酸和该唾液酸结合部分之间形成一个键。例如，碳二亚胺如l-乙基-3-[3-二曱基氨基丙基]碳二亚胺盐酸盐(l-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimidehydrochloride，EDC),可用来与存在于核酸的5，端25磷酸基团形成磷酸酯，然后与唾液酸粘附素结合部分的氨基基团偶联，从而产生含有氨基磷酸酯键的缀合物。在另一个实施方案中，核酸通过例如接头或其它分子间接缀合至唾液酸粘附素结合部分。例如，唾液酸粘附素结合部分可缀合至带正电的蛋白。带正电的蛋白可与核酸接触，从而在带正电的蛋白和带负电的核酸之间基于电荷进行键合。在本文中，带正电的蛋白的实例包括硫酸鱼精蛋白和聚赖氨酸。货物部分任选包括微生物和/或来源于该微生物的抗原性分子。例如，货物部分可为病毒、细菌、原生动物和/或来源于这类生物体的抗原性分子。包含在这类缀合物中的^t生物优选^:杀死或灭活。在一个优选的实施方案中，病毒性货物部分为完整的病毒或其缀合至唾液酸粘附素结合部分的部分。这样的病毒可为任何类型的病毒，包括用于刺激针对该病毒的抗原性应答的病毒。在具体的实施方案中，包含在缀合物中作为货物部分的病毒为猪病毒病病毒。猪病毒病病毒包括猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)、2型猪环病毒属、细小病毒组和伪狂犬病病毒。在具体的实施方案中，猪病毒病病毒作为货物部分包含在用于给药的本发明缀合物中，以刺激针对该病毒的免疫应答。在具体的实施方案中，具体的猪病毒病病毒蛋白或猪病毒病病毒蛋白的抗原性部分作为货物部分包含在本发明的缀合物中。例如，在本发明缀合物的一些实施方案中，PRRSV膜蛋白GP3、GP4、GP5或基质(M)和/或其抗原性部分为货物部分。在另一些实施方案中，货物部分为2型猪环病毒衣壳蛋白(CAP)、细小病毒组衣壳蛋白VP2和/或伪狂犬病病毒gB、gC和/或gD蛋白和/或其抗原性部分。任选地，病毒蛋白和/或其抗原性部分的组合作为货物部分包含于本发明缀合物的实施方案中。PRRSV的实例为欧洲型PRRSVLelystad病毒(获取号No.M96262)和美国型PRRSVVR-2332(获取号No.U87392)。在其他实施方案中，作为货物部分包含在缀合物中的病毒为人病毒病病毒。人病毒病病毒1型单纯疱渗病毒、2型单纯疱渗病毒、水痘-带状疱疹病毒、巨细胞病毒、麻渗病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)、脊髓灰质炎病毒、人乳头状瘤病毒和冠状病毒。在具体的实施方案中，人病毒病病毒作为货物部分包含在用于给药的本发明的缀合物中，目的是刺激针对该病毒的免疫应答。在具体的实施方案中，具体的人病毒病病毒蛋白或人病毒病病毒蛋白的抗原性部分作为货物部分包含在本发明的缀合物中。例如，货物部分任选为1型单纯疱瘆病毒gB、gC和/或gD蛋白；2型单纯疱渗病毒gB、gC和/或gD蛋白；水痘-带状疱渗病毒gH:gL复合物、gB和/或gC蛋白；巨细胞病毒gM:gN复合物和/或gB蛋白；麻渗病毒血凝素蛋白(H)和/或融合蛋白(F);腮腺炎病毒血细胞凝集素神经氨酸酶(HN)和/或融合蛋白(F);德国麻疹病毒包膜蛋白El和/或E2;曱型肝炎病毒衣壳蛋白VP1和/或VP2;乙型肝炎病毒衣壳蛋白S、M、L和/或HbsAb;丙型肝炎病毒包装糖蛋白El和/或E2;人免疫缺陷病毒(HIV)gpl20;脊髓灰质炎病毒VP1、VP2和/或VP3蛋白；人乳头状瘤病毒L1蛋白；冠状病毒突起蛋白，例如但不限于SARS冠状病毒突起蛋白(S);和/或这其中的任何一种的抗原性部分。在具体的实施方案中，人乳头状瘤病毒L1蛋白为16、18、6和/或ll型人乳头状瘤病毒Ll蛋白和/或其抗原性部分。病毒蛋白的组合任选作为货物部分包含在本发明缀合物的实施方案中。流感病毒是人和动物疾病的主要因素。4艮据在该病毒表面上的两种蛋白血细胞凝集素(也被称为血凝素)和神经氨酸酶的具体特征，可对流感病毒进行分类和命名。依据血凝素蛋白的特征，已经鉴定出至少十六种不同的流感病毒亚型。这些亚型被称为H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、HIO、HI1、H12、H13、H14、H15和H16。已经鉴定出各亚型的多个流感病毒毒抹，并且有很多都通过对病毒糖蛋白血凝素进行核酸测序和/或蛋白测序进行了表征。流感病毒蛋白血凝素的核苷酸和蛋白序列为本领域所知，并且公众可经由美国国立生物技术信息中心(NCBI)Entrez蛋白和核苷酸搜索和检索系统获得，该搜索和检索系统由许多资料提供者汇编，包括GenBank、RefSeq和PDB，并且包括SwissProt、PIR、PRF、PDB、genpept，并从包含在本文的GenBank和RefSeq获取号中所标注出来的编码区翻译。与本文包括的获取号相关的蛋白和核酸序列对适合作为货物部分包含在本发明缀合物中的流感病毒血凝素进行了表征。具体而言，适合作为货物部分包含在本发明缀合物中的流感病毒亚型HI凝血素的蛋白序列具有如下的获取号，并且公众通过美国国立生物技术信息中心(NCBI)Entrez蛋白搜索和检索系统可获得AAF87274;AAF87282;AAF87284;AAN64900;AAN64902;AAN83988;AAQ10372;AAQ10387;AAQ10394;AAT81327;AAT81329;AAT81330;AAT81336;AAT81338;ABB19551;ABB19618;ABB79979;ABC02277;ABD62781;ABD94965;ABD95075;ABD95152;ABD95229;ABD95284;ABD95306;ABF47869;ABF82896;ABG柳74;ABI21200;ABI21222;ABJ09327;ABK40028;AB021716;AB021724;AB032992;ABP49327;ABP49382;ABP49481;BAE53729;BAE96533;BAE96534;BAE96536;BAF03629;CAA40728;AAF87278;AAF87279;AAF872S0:AAF87281;AAN64卯3;AAN64904;AAN64905;AAQ10390;AAQ10391;AAR90881;AAT81331;AAT8]332;AAT81333;AAT81334;AAT81335;AAT93388;AAY56898;ABA43189;ABB19562;ABB21772;ABC86237;ABD61518;ABD62843;ABD79255;ABD94987;ABD95240;ABD95251;ABD95273;ABF47891;ABF82662;ABF82684;ABF82841;ABF82863;ABF82918;AB腿78;ABI84948;ABI93028;ABJ16686;ABK40006;ABK40557;ABN50917;ABN51066;AB固088;ABO21709;AB021723;CAA40730;CAA86563;CAA91082;AAA16808;AAA16813;AAA16880;AAA訓5;AAA43142;AAA43153;AAA43168;AAA43170;AAA43171;AAA43175;AAA43231;AAA43240;AAC57415;AAK40318;AAK51344;AAK51345;AAK51347;AAN46827;AAN64894;AAN64896;AAP69688;AAP69691;AAP79971;AAU09400;ABA08519;ABA42247;ABB03123;ABB04972;ABB80045;ABB84190;ABB86887;ABD77675;ABD78071;ABD94789;ABE12248;ABF47693;ABG72868;ABG72869;ABG79952;ABI54437;ABI54444;ABI54445;ABO21730;AB021731;ABO33006;ABO52038;AB052258;ABP49305;ABP49360;BAF31892;CAA86560;CAA86561;CAA86562;CAC18524;AAA43158;AAA43169;AAA43173;AAA43176;AAA43190;AAA43194;AAA43225;AAA43232;AAA43283;AAK40314;AAK40315;AAK51348;AAN64897;AAN64898;AAN64899;AAP79977;AAX56530;AAZ79549;ABA08497;ABA12707;ABA42258;ABB51962;ABB53603;ABB82194;ABB82205;ABB82216;ABB86877;ABB86917;ABB86929;ABB柳37;ABB86946;ABC40522;ABD77708;AAA43661;AAA43680;AAF06945;AAF06946;AAF87275;AAF87276;AAF87283;AAN64901;AAQ10369;AAQ10373;AAQ10380;AAQ10385;AAQ10386;AAQ10388;AAQ10395;AAQ10396;AAT81328;AAT81337;AAT81339;AAT81340;AAT85679;ABA12729;ABB19571;ABB19607;ABB19628;ABB20429;ABB79990;ABC40631;ABD61540;ABD61735;ABD62061;ABD79101;ABDS5261;ABD95053;ABD95064;ABD95086;ABD95163;ABD95218;ABD95295;ABF71860;ABF82852;ABF82874;ABF82885;ABF82907;ABI92379;ABI96088;ABI96091;AB騰93;AB画97;ABI96098;ABI96101;AB腿07;ABI96108;ABI96111;ABJ09151;ABJ53493;ABK40510;ABK40579;ABK40601;ABM22246;AB038384;ABO38406;BAA96109;BAA96114;BAA96115;BAA96122;BAA96124;BAA96125;CAA35094;AAA58799;AAA58801;AAA65544;AAA65546;AAA65551;AAA65553;AAA65554;AAA74285;AAA74289;AAA74291;AAA74293;AAA74299;AAA91616;AAA92279;AAB03291;AAB27052;AAB29091;AAB39351;AAB50958;AAB50966;AAG22555;ABD77917;ABD77928;ABD77950;ABD78038;ABD94778;ABE12634;ABE26991;ABF47583;ABG48049;ABG72867;ABI20826;ABI51313;AB154438;ABI84617;ABI92302;ABI95250;ABI96094;ABI96095;ABI96096;ABI96104;ABI96105;ABI96106;ABJ53427;ABJ53504;ABK40689;ABM22224;AB038318;ABO38340;ABO44046;BAA96111;BAA96112;BAA96117;BAA96118;BAA96121;BAA96126;BAA96127;BAA96128;BAA96131;BAF47397;AAA65547;AAA65548;AAA65549;AAA65550;AAA65556;AAA65557;ABG37362;ABG66973;ABG66975;ABI21211;ABI21233;ABJ16609;ABM21960:ABM66864;ABN50928;ABN51077;ABN59423;ABN59434;AB021725;ABO52104;ABP49316:ABP49338;ABP49349;BAE53730;BAE96535;BAE96537;BAE96541;BAE96542;BAF03627;29CAA40729;CAA82950;CAA91083;AAA16779;AAA16809;AAA16812;AAA16879;AAA16905;AAA43161;AAA43167;AAA43172;AAA43206:AAA43209;AAA43233:AAA43234;AAA43238;AAC53845;AAC53846;AAC57166;AAK40317;AAK51342;AAK51343;AAK51346;AAF06947;AAF75994;AAF80098;AAF80099;AAF87277;AAQ10367;AAQ10368;AAQ10389;AAQ10392;AAQ10393;AAZ38627;ABA42575;ABB19574;ABB19667;ABD63063;ABD79112;ABD85123;ABD94976;ABD94998;ABD95130;ABD95141;ABD95262;ABF47880;ABF82673;ABF82819;ABF82830;ABF82929;ABG66976;ABG66977;ABG88344;ABK39995;ABK40534;ABK40546;ABK40568;ABN50756;ABN50900;ABO33025;ABO52280;ABP49393;ABP49448;BAE96538;BAE96539;BAE96540;CAA40731;CAA42444;AAL60444;AAL87869;AAL87871;AAM76686;AAM76689;AAM76690;AAP34322;AAP69678;AAP69679;AAP69681;AAZ74374;ABA08464;ABA18037;ABB19518;ABB19529;ABB19540;ABC66233;ABC66236;ABD77719;ABD77807;ABD77818;ABD77972;ABD94811;ABD95328;ABD95339;ABE11657;ABE11723;ABE11812;ABE11922;ABE12032;ABF21277;ABG26243;ABG26791;ABG26813;ABG26824;ABG26945;ABG67477;ABI21530;AB121552;ABI21574;ABI22109;ABI30367;ABI96117;ABI96118;AB196123;AAA67338;AAA72339;AAA74296;AAA74297;AAA74298;AAA79714;AAA79727;AAB03292;AAB39352;AAB50960;AAB50961;AAB50962;AAB50963;AAB50964;AAB50965;AAL60449;AAL87868;AAM22277;AAM22278;AAM76691;AAP34323;AAP34324;AAT65329;AAZ83977;ABA06510;ABA42324;ABC66239;ABD78093;ABD95350;ABD95712;ABE11668;ABE11690;ABE11834;ABE11856;ABE11878;ABE11889;ABF21278;ABF47561;ABF82940;ABG26835;ABG88300;ABG88311;ABG88333;ABG88542;ABI85225;AAK51352;AAN64893;AAN64895;AAP69687;AAP69692;AAP79964;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531;AF461532;AY083840;AY083841;AF5366狄AF536690;AF536691;AF536692;AF536鹏；AF536694;AF536695;AF536696;AF536697;AF536柳;AY1謝44AYl80445;AY180446;AY180447;AY180448;AY180449;AY180450;AY180451;AY1謝52AYl80453;AY180454;AYl80455;AY180456;AYl80457;AY180458;AY180459;AY206671AY206672;AY206673;AY206674;AY206675;AY206676;AY206677;AY206678;AY206679AY206680;AY198313;AY198314;AY198315;AY198316;AY198317;AY198318;AY198319AY198320;AY198321;AY281745;AY264870;AY264871;AY264872;AY264875;AY264876AY294658;AF523372;AF523373;AF523374;AF523375;AF523376;AF523377;AF523378;AF523379;AF523380;AF523381;AF523382;AF523383;AF523384;AF523385;AF523386;AF523387;AF523388;AF523389;AF523390;AY336597;AF508554;AF508555;AF508556;AF508557;AF508558;AF508559;AF508560;AF508561;AF508562;AF508563;AF508564;AF508565;AF508566;AF508567;AF508568;AF508569;AF508570;AF508571;AF508572;AF508573;AF508574;AY345925AY345926;AY345927;AY345928;AY345929;AY345930;AY345931;AY345932;AY345933AY345934;AY345935;AY345936;AY345937;AY345938;AY345939;AY345940;AY364228;AY330332;AY330333;AY330334;AY330335;AY330336;AY435039;AY435040;AY513715;AY548499;AY548500;AY548501;AY548502;AY548503;AY548504;AY548505;AY548506;AY548507;AY548508;AY548509;AY548510;AY548511;AY548512;AY548513;AY548514;AY548515;AY603067;AY549889;AY623810;AY633116;AY633164;AY633276;AY633292AY652980;AY594194;AY594195;AY594196;AY664660;AY664661;AY664662;AY664663AY664664;AY664665;AY664666;AY664667;AY664668;AY664669;AY664670;AY664671AY664672;AY664673;AY664674;AY664675;AY664676;AY664677;AY664678;AY743216AY768552;AY768553;AY768554;AY768555;AY768556;AY768557;AY768558;AY768559AY790275;AY790283;AY790297;AY790305;AY790313;AY790314;AY790315,AY790320AY738451;AY738452;AY738453;AY738454;AY738455;AY738456;AY851460AY851461AY862598;AY862599;AY862600;AY862601;AY862602;AY862603;AY862604AY862605AY862606;AY937403;AY937404;AY949989;DQ003335;DQ064354;DQ064355DCJ064356DQ064357;DQ064358;DQ064359;DQ064360;DQ064361;DQ064362;DQ064363DQ064364DQ064365;DQ064366;DQ064367;DQ064368;DQ064369;DQ064370;DQ064371DQ064372DQ064373;DQ064374;DQ064375;DQ064376;DQ064377;DQ064378;DQ064379DQ064380DQ067444;DQ108905;DQ108906;DQ108907;DQ108908;DQ108909;DQ108910DQ10,DQ108912;DQ108913;DQ108914;DQ鹏15;DQ108916;DQ108917;DQ108918DQ108919DQ鹏20;DQ108921;DQ108922;DQ108923;DQ108924;DQ108925;DQ108926DQ108927DQ108928;DQ108929;DQ108930;DQ108931;DQ108932;DQ104448;DQ104449DQ104450DQ104451;DQ104452;DQ104453;DQ104454;DQ104455;DQ104456;DQ104457DQ104458;DQ104459;DQ104460;DQ104461;DQ104462;DQ104463;DQ104464;DQ104465DQ104466;DQ104467;DQ腕68;DQ104柳；DQ104470;DQ104471;DQ104472;DQ104473DQ104474;DQ104475;DQ104476;DQ104477;DQ104478;DQ104479;DQ104480;DQ104481DQ104482;DQ104483;DQ104484;DQ104485;DQ225271;DQ227352;DQ223544;CY004420CY004642;CY005632;CY005639;CY005746;DQ234277;DQ226106;DQ226107;DQ226108DQ226109;DQ226110;DQ226111;DQ226112;DQ226113;DQ226114;DQ226115;DQ226116CYO05919;CY005929;CY005934;CY005984;CY005985;CY005986;CY005987;CY005988CY005卿；CY005990;CY005991;CY005992;CY006025;CY006042;CY006018;CY006021CY006023;DQ299829;DQ299837;DQ299845;DQ299853;DQ299861;DQ390215;DQ464352DQ473608;DQ4736G9;DQ473610,DQ473611;DQ473612;DQ4736丄3;DQ473614;DQ465400DQ485208;DQ485216;DQ485224;DQ681203;DQ681207;DQ681216;DQ681221;DQ885991DQ787797;DQ787802;CY014613;CY014663;DQ997505;DQ997481;DQ997474;DQ997437DQ997460;DQ997187;DQ997465;DQ997490;DQ997451;DQ997419;DQ997448;EF070733EF063510;EF063511;EF063512;EF063513;EF063514;EF063515;EF063516;EF154907;EF154908;EF154909;EF154910;EF154911;EF154912;EF154913;EF154914;EF154915;EF154916;EF154917;EF154918;EF154919;EF154920;EF154921;EF154922;EF154923;EF154924;EF154925;EF154926;EF154927;EF154928;EF154929;EF154930;EF154931;EF154932;EF154933;EF154934;EF154935;EF154936;EF154937;EF15柳8;EF154939;EF154940;EF15顿1;EF154942;EF154943;EF154944;EF154945;EF154946;EF154947;EF154948;EF154949;EF154950;EF154951;EF154952;EF154953;EF154954;EF154955;EF154956;EF154957;EF154958;EF154959;EF154960;EF154961;EF154962;EF154963;EF154964;EF154965;EF154966;EF154967;EF154968;EF154969;EF154970;EF154971:EF154972;EF154973;EF154974;EF154975;EF154976;EF154977;EF154978;EF154979;画305;AB049159;AB049160;AB080224;AB080225;AB080226;AB080227;AB080228;AB125927AB125928;AB125929;AB125930;AB125931;AB262463;AB276111;AB256666;AB256674AB256682;AB256690;AB256698;AB256706;AB256714;AB256722;AB256730;AB256738AB256746;AB295601;AJ404626;AJ404627;AJ291392;AJ536330;AJ536331;AJ536332;A鹿818AJ781819;AJ781820;AJ781821;AJ781822;AJ781823;AJ781824;AJ781825;AJ781826;AJ781827AM087218;AM087219;AM286688andAM286689.适合作为货物部分包含在本发明缀合物中的流感病毒亚型H10血凝素的核酸序列具有如下的获取号，并且公众通过美国国立生物技术信息中心(NCBI)Entrez核酸搜索和检索系统可获得AB271117;AB274041;CY005996;CY005997;CY005998;CY005999;CY006000;CY006001;CY014619;CY014644;CY014671;CY014739;CY017781;CY020901;CY020909;CY020925;DQ374399;J02110;M21646;M21647;AB289339;AB292412;AB292666;AB292781;AB296078;AF311750;AM087215;AM087216;CY005921;CY005922;CY005930;CY005982;CY005993;CY005994andCY005995.适合作为货物部分包含在本发明缀合物中的流感病毒亚型Hll血凝素的核酸序列具有如下的获取号，并且公众通过美国国立生物技术信息中心(NCBI)Entrez核酸搜索和检索系统可获得AB277756;AB288845;DQ424861;DQ435281;DQ435282;DQ435283;DQ435284;DQ435285;DQ482667;EF200063;J02100;J02106;J02107;J02108;J02161;AB292779;AB292783;AB296076;AB298283;AF310986;AY684895;CY005923;CY005924;CY006002;CY006003;CY006004;CY006005;CY014593;CY014595;CY014679;CY014687;CY014719;CY014806;CY017075;CY017765;CY017845;CY0讓5;CY020941;CY020949;CY020965;CY021133;CY021141;CY021149;CY021165;CY021173;CY021181;CY021245;CY021253;CY021437;CY021445;CY021469;CY021613;CY021645;CY021653;CY021661;CY021669;CY021685;D90306;DQ080993;DQ327835;DQ424858;DQ424859andDQ424860.适合作为货物部分包含在本发明缀合物中的流感病毒亚型H12血凝素的核酸序列具有如下的获取号，并且公众通过美国国立生物技术信息中心(NCBI)Entrez核酸搜索和检索系统可获得AB288334;AB288843;AF310990;AF310991;AF310992;AM286685;CY005920;CY005925;CY006006;CY006007;CYO06008;CY012840;CY014598;CY014636;CY016419;CY017733;CY017853;CY021293;CY021301;D90307;DQ787811andJ02104.适合作为货物部分包含在本发明缀合物中的流感病毒亚型H13血凝素的核酸序列具有如下的获取号，并且公众通过美国国立生物技术信息中心(NCBI)Entrez核酸搜索和检索系统可获得AB284988;AB285094;AB292664;AM087220;AM087221;AY684886;AY684887;CY005914;CY005931;CY005932;CYO05979;CY014603;CY014694;CY014720;D90308;K00383;M26089;M26090andM26091.适合作为货物部分包含在本发明缀合物中的流感病毒亚型H14血凝素的核酸序列具有如下的获取号，并且公众通过美国国立生物技术信息中心(NCBI)Entrez核酸搜索和检索系统可获得AB289335andCY014604.适合作为货物部分包含在本发明缀合物中的流感病毒亚型H15血凝素的核酸序列具有如下的获取号，并且公众通过美国国立生物技术信息中心(NCBI)Entrez核酸搜索和检索系统可获得CY006010;CY006033;CY006034;L43917;CY006032;AB295613;CY006009andL43916.适合作为货物部分包含在本发明缀合物中的流感病毒亚型H16血凝素的核酸序列具有如下的获取号，并且公众通过美国国立生物技术信息中心(NCBI)Entrez核酸搜索和检索系统可获得CY005933;CY014599;CY015160;AY684888;AY684889;AY684890andAY684891.因此，任选包含作为货物部分的编码流感病毒血凝素的核酸序列。在具体的实施方案中，流感病毒血凝素蛋白或其抗原性部分包含在用于送递至受试者的缀合物组合物中，以增强针对流感病毒的免疫应答。在其他实施方案中，缀合有唾液酸粘附素结合抗体的病毒可用作基因转移栽体，目的是在靶细胞中表达所需核酸。这样的病毒在本领域中是已知的，包括例如疱渗病毒、腺病毒和腺伴随病毒。在另一些实施方案中，病毒货物部分为不表达非病毒蛋白的病毒或其一部分。在一个实施方案中，货物部分病毒为猪动脉炎病毒。缀合货物部分可通过各种方法中的任何一种缀合至唾液酸粘附素结合部分。所选择的缀合方法将取决于该货物和该唾液酸粘附素结合部分的化学性质。本发明实施方案的缀合物包括通过(共价或非共价)化学键合以及通过重組技术(包括融合蛋白的产生)连接在一起的唾液酸粘附素结合部分和货物，例如使用编码唾液酸粘附素结合部分和货物的核酸表达构建体产生得到的缀合物。在具体的实施方案中，货物部分和唾液酸粘附素结合部分经由这些部分上的游离官能团通过化学方式连接在一起。例如，这样的官能团包括氨基、羧基、羟基和巯基。例如，货物部分和唾液酸粘附素结合部分之间的连接为酯、醚、曱酸酯、碳酸酯、二硫化物、肽和酰胺。术语"连接"指在两个部分之间通过化学反应形成的键或基团，从而使得各部分通过共价方式直接或间接偶联。在一个实施方案中，唾液酸粘附素结合部分和货物部分之间的连接在胞内环境是不稳定的，因此，唾液酸粘附素结合部分和货物部分会随细胞摄入而分离。例如，连接会对水解、酶解或其他形式的裂解敏感，从而使得货物部分随与唾液酸结合部分这种形式分离而提供所需效应。酯键是在细胞内对水解敏感的连接的一个实例。二硫键是随细胞摄入对裂解敏感的另一个实例。在其他实施方案中，货物部分会在缀合至唾液酸粘附素结合部分时提供所需效应。在一个实施方案中，一个以上货物部分可包含在缀合物组合物中。另外，一个以上唾液酸粘附素结合部分可包含在缀合物组合物中。在唾液酸粘附素结合部分和货物部分之一或两者包含肽和/或蛋白时，货物部分和唾液酸粘附素结合部分的官能团(用于缀合这些部分)可在肽或蛋白一者或两者的N端或C端或在其末端之间。在形成本发明缀合物的过程中，保护基团可添加至唾液酸粘附素结合部分和/或货物部分。这类基团、其形成和用途描述于ProtectiveGroupsinOrganicSynthesisbyT.W.GreeneandP.G.M.Wuts，JohnWiley&Sons,1999。例如，用于缀合货物部分和唾液酸粘附素结合部分的缀合化学试剂包括偶联剂，例如但不限于戊二醛、碳二亚胺、琥珀酰亚胺酯、联苯胺、高碘酸盐、异硫代硫酸盐以及它们的组合。本发明的缀合物任选使用重组技术来产生。例如，在具体的实施方案中，缀合物是核酸构建体的表达产物，该核酸构建体包括编码融合蛋白的表达构建体，所述融合蛋白包含唾液酸粘附素结合部分或其一部分以及直接与所述唾液酸粘附素结合部分或其一部分连接或通过中间接头连接的货物部分。在具体的实施方案中，编码融合蛋白的表达构建体编码抗唾液酸粘附素抗体或抗唾液酸粘附素抗体的片段。因此，在具体的实施方案中，包含编码货物部分和抗唾液酸粘附素抗体或其一部分的核酸的表达构建体编码融合蛋白。例如，在具体的实施方案中，编码本发明融合蛋白的表达构建体编码与抗唾液酸粘附素抗体的一部分连接的货物，所述抗唾液酸粘附素抗体包含抗唾液酸粘附素抗体的可变区，例如但不限于重链可变区和/或轻链可变区、单链VL-VH区和/或H链C区。在具体的实施方案中，编码融合蛋白的表达构建体编码货物部分和mAb41D3或mAb41D3的一部分。在更为具体的实施方案中，编码融合蛋白的表达构建体编码流感病毒血凝素和mAb41D3或mAb41D3的一部在具体的实施方案中，编码融合蛋白的表达构建体编码货物部分和mAb7D2或mAb7D2的一部分。在更为具体的实施方案中，编码融合蛋白的表达构建体编码流感病毒血凝素和和mAb7D2或mAb7D2的一部分。在具体的实施方案中，编码融合蛋白的表达构建体编码货物部分和mAbMCA2316或mAbMCA2316的一部分。在更为具体的实施方案中，编码融合蛋白的表达构建体编码流感病毒血凝素和mAbMCA2316或mAbMCA2316的一部分。编码抗体区域和包含抗体区域的融合蛋白的核酸的克隆和表达为本领域所知，如以下文献例示J.D.Pound(Ed.)ImmunochemicalProtocols,MethodsinMolecularBiology,HumanaPress;2nded"1998，chapter43;R.KontermamiandS.Dubel(Eds.)，AntibodyEngineering,SpringerLabManuals,Springer,2001;andB丄C.(Ed.)，AntibodyEngineering:MethodsandProtocols,MethodsinMolecularBiology,HumanaPress,2003。货物部分和唾液酸粘附素结合部分可直接连接形成缀合物。或者，将接头连接于货物部分和唾液酸粘附素结合部分两者，从而使得这些部分通过该接头间接连接。根据待缀合部分的性质，接头可为同基双功能(homobifunctional)接头或异基双功能(hetero—bifunctional)接头。此外，接头可为多功能的，使得可连接一个以上货物部分和/或一个以上唾液酸粘附素结合部分。通常，接头具有约1-20个骨架碳原子。但是，接头也可以更大或更小。任选地，接头由表达构建体中的核酸编码。在一些实施方案中，接头可为天然的或合成的聚合物。例如，合适的聚合物包括琼脂糖、羧甲基纤维素、纤维素、葡聚糖和聚氨基聚苯乙烯。优选的聚合物为聚丙烯酰胺、PE0(聚乙烯)或PEG(聚乙二醇)隔离物。在一个实施方案中，包含唾液酸和/或唾液酸化结构的唾液酸粘附素结合部分可与货物部分直接或间接缀合。例如，唾液酸残基可缀合至含有脂质的货物部分，以形成糖脂缀合物組合物，并且/或者通过N键或0键缀合至蛋白或肽货物部分，以形成本发明的糖肽或糖蛋白缀合物。唾液酸残基还可缀合至接头。药物组合物和给药本发明的缀合物可单独或作为药物组合物的一部分给予受试者。本发明的缀合物组合物时刻通过多种途径给予受试者，例如包括但不限于静脉内给药、口服给药、胃肠外给药、肌内给药、皮下给药和粘膜给药。本发明的药物组合物包括本发明的缀合物和可药用载体。术语"可药用"指在不会引起显著的不良生物效应、并且不会以有害方式与药物组合物的任何其他组分相互作用的情况下，可同本发明的缀合物组合物一起给予受试者的物质。举例说来，适合给药的药物组合物包括生理上可接受的无菌水溶液或非水溶液、分散液、悬液或乳液，以及于无菌注射溶液或分散液中复水的无菌粉剂。合适的水性载体和非水性栽体、稀释剂、溶剂或运载体(vehicle)的实例包括水、乙醇、多元醇(例如但不限于丙二醇、聚乙二醇、丙三醇等)、其合适的混合物、植物油(例如但不限于橄榄油)和可注射的有机酯(例如但不限于油酸乙酯)。例如，恰当流动性的维持可通过使用包衣例如但不限于卵磷脂、通过维持所需颗粒大小(就分散剂而言)以及使用表面活性剂。适合注射的组合物任选包括生理生可接受的无菌水溶液或非水溶液、分散液、悬液或乳液，以及于无菌注射溶液或分散液中复水的无菌粉剂。合适的水性载体和非水性载体、稀释剂、溶剂或运载体的实例包括水、乙醇、多元醇(例如但不限于丙二醇、聚乙二醇、丙三醇等)、其合适的混合物、植物油(例如但不限于橄榄油)和可注射的有机酯(例如但不限于油酸乙酯)。例如，恰当流动性的维持可通过使用包衣例如但不限于卯砩脂、通过维持所需颗粒大小(就分散剂而言)以及使用表面活性剂。本发明的药物组合物还可含有佐剂，例如但不限于防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。可通过各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟苯曱酸酯、三氯叔丁醇、苯酚、山梨酸等来保证阻止微生物的活动。还可包含等渗剂例如糖类、氯化钠等。可注射药物形式的延长吸收可通过使用延緩吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶来实现。其他示例性佐剂包括具有免疫剌激性的佐剂，例如但不限于弗氏完全佐剂、弗氏不完全佐剂、氢氧化铝例如可商购的Alhydrogel(AccurateChemical&ScientificCo，Westbury，NewYork)、以及Gerbu佐剂(获自C-CBiotech,Poway,California)。口服给药的固体剂型包括胶嚢、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这样的固体剂型中，本发明的缀合物与以下物质混合至少一种惰性惯用赋形剂(或载体)，例如但不限于柠檬酸钠或磷酸二钙；或(a)填充剂或膨胀剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)润湿剂(humectant),例如丙三醇；(d)崩解剂，例如琼脂-琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、褐藻酸、某些复合硅酸盐和碳酸4丐；(e)溶解阻滞剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如季胺类化合物；(g)湿润剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸收剂，例如高岭土和膨润土；以及(i)湿润剂，例如滑石、硬脂酸钾、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠；或其混合物。就胶嚢剂、片剂和丸剂而言，剂型还可包含緩沖剂。相似类型的固体组合物也可用作使用赋形剂例如乳糖以及高分子量聚乙烯二醇等的软胶嚢和硬胶嚢中的填充剂。固体剂型例如但不限于片剂、锭剂、胶嚢剂、丸剂和颗粒剂可由包衣和壳(例如但不限于肠溶包衣以及本领域已知的其它物质)来制备。它们可含有遮光剂，并且还可为这样的组合物它们以延緩方式在肠道的某一部分中释放一种或多种活性化合物。本发明缀合物的微嚢制剂也在考虑之中。用于口服给药的液体剂型包括可药用的乳液、溶液、悬液、糖浆和酏剂。除了本发明的缀合物之外，液体剂型可含有本领域常用的惰性稀释剂，例如但不限于水或其他溶剂、增溶剂和乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、醋酸乙酯、苯曱醇、苯曱醇、苯甲酸卡酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二曱基酰胺、油脂(尤其是棉花子油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、丙三醇、2-四氢呋喃甲醇、聚乙烯二醇和山梨聚糖的脂肪酸酯，或这些物质的混合物等。除了这类惰性溶剂之外，本发明的药物组合物还包含佐剂，例如但不限于湿润剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。除了本发明的缀合物之外，悬液还含有悬浮剂，例如乙氧基化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝97(aluminummetahydroxide)、膨润土、琼脂-琼脂和西黄蓍胶，或者这些物质的混合物等等。药物制剂更为具体的细节可参见PharmaceuticalDosageForms:Tablets,eds.H.A.Liebermanetal.，NewYork:MarcelDekker，Inc.,1989;L.V.Allen,Jr.etal.，Ansel'sPharmaceuticalDosageFormsandDrugDeliverySystems,8thEd.，Philadelphia,PA，Lippincott,Wi11iams&Wilkins，2004;andRemington,TheScienceandPracticeofPharmacy,21sted.，Lippincott,Williams&Wilkins，Philadelphia,PA，2006。在一个实施方案中，本发明的缀合物任选与非缀合的治疗试剂和/或诊断试剂一起送递。例如，在这一方面合适的治疗试剂和/或诊断试剂包括止痛剂、抗生素、抗体、抗原、消炎药、抗肿瘤剂、抗病毒剂、Y或P射线发射物质、酶和激素。另外，可将两种或多种缀合物组合物给予受试者。本发明的药物组合物的剂量会随诸如(但不限于)以下的各种因素而异给药途径；待给予组合物的受试者的年龄、健康和体重；受试者症状的性质和程度；如果还有的话，以及所需效果。通常，本发明的缀合物的日剂量介于每千克受试者体重的约0.001-100毫克之间。日剂量可以两份或多份分份剂量给予，以获得所需效果。本发明的药物组合物还可制备为緩释形式，以获得所需结果。例如，适合通过注射给药的胃肠外组合物包括溶于緩沖盐水中的以重量计1°/。本发明的缀合物。方法
技术领域：
：本发明提供了将货物部分送递给细胞的方法，该方法包括将表达唾液酸粘附素的细胞与本发明的缀合物相接触。存在于缀合物中的唾液酸粘附素结合部分结合由细胞表达的唾液酸粘附素，并且所述缀合物净皮内化至所述细胞内。该细胞可以是体内的、活体外的或体外的。唾液酸粘附素主要由巨噬细胞表达。因此，在本发明方法的一个实施方案中，提供了靶向巨噬细胞的药物送递系统。因此，在这样一个实施方案中，与经缀合的唾液酸粘附素结合部分和货物部分相接触的细胞为巨噬细胞。与本发明方法中的缀合物组合物相接触的细胞在自然情况下表达唾液酸粘附素，或者可被诱导来表达唾液酸粘附素。在这样一种方法中，可靼向除巨噬细胞之外的细胞。例如，细胞可由编码唾液酸粘附素的表达构建体转染，从而使得唾液酸粘附素在该细胞内表达。表达构建体包含编码全长唾液酸粘附素或其一部分的核酸，任选与调控元件连接。已从多个物种分离出编码唾液酸粘附素的全长核酸，示例性核酸序列和被编码的唾液酸粘附素蛋白在本文中述及。例如，与编码唾液酸粘附素的核酸有效连接的调控元件包括启动子、增强子、复制起点、多腺苷酸化信号和转录终止序列。表达构建体及其形成方法为本领域所知，例如在Sambrooketal.，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,2001;andAusubel，F.etal.，(Eds.)，ShortProtocolsinMolecularBiology,Wiley,2002中有述。在具体的实施方案中，编码唾液酸粘附素蛋白的表达构建体编码在本文中,皮鉴定为SEQIDNo,5、SEQIDNo.7、SEQIDNo.9的唾液酸粘附素蛋白或其具有生物活性的同源物。在具体的实施方案中，编码唾液酸粘附素蛋白的表达构建体包含在本文中被鉴定为SEQIDNo.6、SEQIDNo.6或SEQIDNo.IO的核苷酸序列。推定唾液酸粘附素同源物的生物学活性很容易由本领域的技术人员所确定，例如使用本文所描述的功能分析或本领域已知的其他功能分析中的任何一种。编码唾液酸粘附素的表达构建体可依据本领域已知的方法来形成。例如，在Vanderheijden,N.etal.，2003，J.Virol.77:8207-15中述及的含有克隆至pcDM3.1载体(Invitrogen)的猪唾液酸粘附素cDM的pcDM3.1/Sn质粒为唾液酸粘附素表达构建体。在具体的实施方案中，由表达构建体转染来诱导或增强唾液酸粘附素在该细胞中表达的细胞可被瞬时转染。或者，可产生表达唾液酸粘附素的稳定细胞系。多种细胞中的任何一种均可用于产生稳定表达唾液酸粘附素的细胞系。具体的实例包括但不限于THP-I细胞、PK-15细胞、3D4/31细胞和HEK293T细胞。表达所需蛋白的稳定细胞系的产生方法为本领域所知，病在标准的分子生物学参考文献例如S.0zturkandW.-S.Hu(Eds.)，CellCultureTechnologyforPharmaceuticalandCell—BasedTherapies,BiotechnologyandBioprocessingSeries,CRCPress,2005.中以示例方式给出。简要说来，细胞由编码唾液酸粘附素的表达构建体转染。例如，细胞包含SEQIDNo.6、SEQIDNo.6或SEQIDNo.IO或编码SEQIDNo.5、SEQIDNo.7或SEQIDNo.9的另一条序列或其同源物的表达构建体转染。被转染的表达构建体还编码针对选择试剂的抗性基因，包括但不限于新霉素抗性基因(G418)。赋予选择试剂以抗性的表达构建体为本领域所知，并且可商购或使用标准的分子生物学技术构建。例如，细胞可依据标准的转染方法来转染，包括但不限于磷酸钾技术和lipofectin技术，如Sambrooketal.，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,2001和Ausubel，F.etal.，(Eds.)，ShortProtocolsinMolecularBiology,Wiley,2002所述。转染之后，将细胞于例如含有选择试剂例如0.5g/L新霉素的培养基中在细胞培养板或细胞培养孔中孵育。在与选择试剂一同孵育之后，未被转染或不表达抗性标记的细胞将死亡，通常在几天之后。将死亡的细胞从活着的被转染的细胞附近移去，目的是选择特定的克隆。例如，通常将经转染的细胞单独置于孔中或置于克隆缸中，目的是选择一个或多个稳定转染的细胞系。一旦单独的集落已生长，则可对它们的唾液酸粘附素表达情况进行分析，例如通过ELISA。还针对唾液酸粘附素结合部分和/或缀合物以及该结合部分和/或缀合物至该细胞的摄入情况对被稳定转染的细胞进行了进一步分析。被稳定转染的细胞可用于本发明的方法中。例如，表达唾液酸粘附素的稳定细胞系被用于本发明的通过送递包含唾液酸粘附素结合部分和核酸的缀合物来转染细胞的方法中。在本发明方法的其他实施方案中，细胞由有效诱导或增强唾液酸粘附素在该细胞内表达的试剂处理。在本发明方法的具体实施方案中，细胞由有效诱导或增强唾液酸粘附素在该细胞内表达的细胞因子处理。例如，由有效诱导或增强唾液酸粘附素表达的细胞因子处理的细胞为单核细胞、单核细胞系、巨噬细胞和巨噬细胞系。在具体的实施方案中，人细胞和/或来源于人的细胞系由有效诱导或增强唾液酸粘附素表达的细胞因子处理。来源于人的细胞系的一个实例是人单核细胞细胞系THP-I。有效诱导或增强唾液酸粘附素表达的合适的细胞因子为干扰素-a(INF-a)。在一个具体的实施方案中，用INF-a处理人单核细胞来诱导或增强唾液酸粘附素的表达。例如，单核细胞可从血液中分离，并在体外用INF-ot处理。唾液酸粘附素的表达可通过各分析来评估，例如包括但不限于免疫分析。在其它实施方案中，将有效量的INF-a给予受试者，从而在体内诱导或增强唾液酸粘附素在细胞中表达。例如，有效量介于每毫升受试者血液10-5QQ单位INF-a。本发明提供了使用本发明的包含货物核酸尤其是货物表达构建体的缀合物转染细胞的方法。在一个具体的实施方案中，将表达唾液酸粘附素的细胞与包含唾液酸结合部分和货物表达构建体的缀合物相接触，目的是在该细胞内表达编码蛋白或肽。将使用唾液酸粘附素结合部分和货物表达构建体的转染用于体外或体内的表达唾液酸粘附素的细胞中。将使用本发明提供的缀合物进行的转染用于升高细胞内所需蛋白或肽的水平，例如用于产生经重组表达的蛋白，目的是例如研究该蛋白的功能叱。本发明的包括将表达唾液酸粘附素的细胞与缀合物组合物相接触的方法可用于刺激受试者内的免疫应答，目的是例如对该受试者进行疫苗接种。免疫接种是最早使用且最为有利的用于刺激生物体抵御感染的工具之一。简要说来，免疫接种是一种给予生物体抗原来刺激该生物体的免疫系统，从而提供细胞和/或分子防御应答的方法。尽管通过将抗原非细胞靶向地给予生物体来进行免疫接种是有效的，但是在一些情况下必须给予大量的抗原来获得所需应答。此外，非细胞靶向给予需要较长时间和/或更多次的抗原加强给予来获得有效的免疫应答。因此，需要刺激受试者内免疫应答的组合物和方法。本发明提供了这样一种方法，包括给予受试者有效量的本发明的包含缀合有抗101原的唾液酸粘附素结合部分的缀合物组合物。例如，可刺激免疫应答来抑制病原体感染，或刺激抗肺瘤应答。例如，可针对与所给予的作为本发明缀合物一部分的抗原相结合的抗体对受试者的血清进行分析来测量免疫应答。例如，可应用的免疫分析包括在给予缀合物之前或之后一次或多次对样本进行的ELISA。在一个实施方案中，给予将抗原有效靶向抗原呈递细胞(尤其是巨噬细胞)的组合物包含在本发明提供的方法中。在一个具体的实例中，针对猪呼吸和繁殖综合征(PRRS)病毒对猪进行免疫接种是本发明方法的一个实施方案。PRRS病毒是猪的感染性疾病，它会引起严重的呼吸病变以及流产。正如在Weensvoort，G.，etal.，1991，VeterinaryReview.13:121—130所述的那样，已对病毒剂进行了鉴定。然而，目前尚且没有针对该病的有效治疗方法，通常只能通过毁灭猪群来加以控制，这导致养猪人损失惨重。本发明提供了针对PRRS病毒对猪进行免疫接种的疫苗和方法。将包含与猪唾液酸粘附素结合的唾液酸粘附素结合部分的缀合物组合物缀合至PRRS病毒、PRRS蛋白、或者PRRS病毒或蛋白的抗原性部分。将该缀合物组合物给予猪，其量可有效刺激免疫应答。给药途径可为任何常规途径，例如包括但不限于静脉内给药、肌内给药、腹膜内给药、皮下给药、口服给药、粘膜给药以及它们的任一组合。在另一个实例中，针对流感病毒对受试者进行免疫接种是本发明方法的一个实施方案。流感病毒是多种物种的感染性疾病，会导致严重的呼吸综合征和死亡。本发明提供了针对流感病毒对受试者进行免疫接种的疫苗和方法。将包含与唾液酸粘附素结合的唾液酸粘附素结合部分的缀合物组合物缀合至流感病毒、流感病毒蛋白、或者流感病毒或蛋白的抗原性部分。在具体的实施方案中，本发明提供了针对甲型流感病毒对受试者进行免疫接种的组合物和方法。将该缀合物组合物给予受试者，其量可有效刺激针对流感病毒的免疫应答。给药途径可为任何常规途径，例如包括但不限于静脉内给药、肌内给药、腹膜内给药、皮下给药、口服给药、粘膜给药以及它们的任一组合。在具体的实施方案中，本文提供了针对流感病毒对受试猪进行免疫接种的组合物和方法。本发明的针对流感病毒的免疫接种方法和组合物不限于受试猪，并且可用于对流感病毒感染敏感的其他受试者，例如但不限于人类和鸟类。在具体的实施方案中，用于针对流感对受试者进行免疫接种的缀合物组合物包含唾液酸结合部分和流感病毒血凝素蛋白或其抗原性部分。在一个具体的实例中，用于针对流感病毒对受试者进行免疫接种的缀合物组合物包含由SEQIDNo.3编码的蛋白或其同源物。在另一具体的实例中，用于针对流感病毒对受试者进行免疫接种的缀合物组合物包含SEQIDNo.4所定义的蛋白或其同源物。在传统上，采用一些抗原例如灭活疫苗或亚单位疫苗来获得所需抗体滴度很困难，需要多次给予该抗原。使用本发明的包含与唾液酸粘附素特异性mAb偶联的抗原的组合物，将抗原靶向送递至表达唾液酸粘附素的巨噬细胞，可提高抗原特异性抗体的滴度。与给予未缀合的抗原相比，靶向送递会引发更为有效的免疫应答，原因在于抗体在给药后很快出现并且达到高滴度。因此，在一个实施方案中，刺激受试者的免疫系统的方法包括单次给予本发明的具有抗原货物部分的缀合物組合物。在本发明可供选择的实施方案中，可实行额外给予这样的缀合物。术语"受试者"指本发明的缀合物所给予的脊推动物。在具体的实施方案中，受试者优选为哺乳动物，更优选为人。在其他的实施方案中，优选的受试者是猪。但是，术语受试者并不限于受试人或受试猪，并且本发明的方法和组合物可与多种动物中的任何一种动物一起使用，例如包括牛、马、鸡和其他家禽、山羊、啮齿类、猫、狗和鸟类。有效量是足以获得预期效益或所需效果的量。通常，有效量范围在每千克受试者体重约0.001-100毫克。在本发明方法的其他实施方案中，靶向表达唾液酸粘附素的细胞的目的是消除或抑制该细胞。例如，在某些疾病状态例如但不限于类风湿性关节炎下，需要消除或抑制表达唾液酸粘附素的巨噬细胞。类风湿性关节炎的特征在于存在被激活的滑膜巨噬细胞，所述滑膜巨噬细胞会引发出现滑膜炎和关节受损。本发明方法的另一个实施方案涉及送递治疗剂来抑制病原性感染。因此，本发明方法的一个实施方案包括将本发明的包含抗微生物药货物部分的缀合物组合物靶向送递至巨噬细胞。这样的把向送递系统使得在使用非靶向送递系统例如全身给予游离抗微生物药时具有不良副作用的抗微生物药得以使用。本发明组合物和方法的实施方案在以下的实施例中例示。这些实施例的提供其目的仅在于说明，而不能被认为是对本发明组合物和方法的范围的限定。实施例实施例1本实施例描述了对唾液酸粘附素结合部分与唾液酸粘附素结合的评估分析，同时还描述了对已结合的唾液酸粘附素结合部分被摄入至细胞内的评估分析。在该实施例中，表达唾液酸粘附素的原代猪肺泡巨噬细胞被用于评估唾液酸粘附素结合部分的结合和/或摄入。如Wensvoort，G.，C.etal.，1991，VetQ13:121-30所述，猪肺泡巨噬细胞分离自4-6周龄普通比利时长白猪(PRRSV阴性猪群)。简而言之，夹住各半肺的主支气管，并将注射针头插入远端。注射冷的PBS(3x20ml)，然后按摩肺组织病抽吸。可抽吸到约75%的BAL液，将将其置于冰上。BAL细胞通过离心自液体里分离，并将细胞用于实验中。采用mAb41D3的染色表明，该方法通常会使得表达唾液酸粘附素的巨噬细胞的纯度高于95%。于371C在潮湿的5%C02氛围下于添加有如下物质的Earle，sMEM中培养该细胞10。/。胎牛血清(FBS)、2mML-谷氨酰胺(BDHChemicalsLtd.)、"/。非必需氨基酸(GibcoBRL)、1mM丙酮酸钠和抗生素。巨噬细胞优选在使用前培养24小时。对照细胞例如不表达唾液酸粘附素的细胞可用于评估结合的特异性和^^情况。这样的细胞包括例如HEK293T细胞、在DuBridge，R.B.etal，1987，MolCellBiol7:379-8中描述的用SV40大T-Ag(SV40TtsA1609)转染的人胚胎肾细胞系。HEK293T细胞维持在添加有10%FBS、2mML-谷氨酰胺和抗生素混合物的DMEM中。在本实施例中所使用的抗体包括针对唾液酸粘附素的Mab41D3。对照抗体包括在Nauwynck，H.J.，an线B.Pensaert，1995，ArchVirol140:1137-46中进一步描述的针对PRV糖蛋白gD、同种型匹配(IgGl)的mAb13D12与SWC3(Pescovitz，M.D.etal.，1984，JImmunol133:368-75中所描述的一种用作猪单核细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞的标记的膜蛋白/表面蛋白)起反应的mAb74-22-15。使用G蛋白琼脂糖柱色诿法(AmershamBiosciences)纯化抗体，用PBS透析，并在使用前于4'C或-70'C保存。对照细胞例如不表达唾液酸粘附素的细胞可用于评估结合的特异性和摄入情况。这样的细胞包括例如HEK293T细胞、在DuBridge，R.B.etal，1987，MolCellBiol7:379-8中描述的用SV40大T-Ag(SV40TtsA1609)转染的人胚胎肾细胞系。HEK293T细胞维持在添加有10%FBS、2mML-谷氨酰胺和抗生素混合物的DMEM中。在本实施例中所使用的抗体包括针对唾液酸粘附素的Mab41D3。对照抗体包括在Nauwynck，H.J.，an线B.Pensaert,1995，ArchVirol140:1137-46中进一步描述的针对PRV糖蛋白gD、同种型匹配(IgGl)的mAb13D12与SWC3(Pescovitz,M.D.etal.，1984，JI醒no1133:368-75中所描述的一种用作猪单核细胞、巨噬细胞和嗜中性粒细胞的标记的膜蛋白/表面蛋白)M应的mAb74-22-15。4吏用G蛋白琼脂糖柱色谱法(AmershamBiosciences)纯化抗体，用PBS透析，并在使用前于4x:或-7on保存。在评估唾液酸粘附素结合部分的特征的分析中，将细胞与多个条件和多个浓度下的唾液酸粘附素结合部分一起孵育。在本实施例中，原代巨噬细胞与浓度为25微克/毫升的纯化抗体于4'C一起孵育1小时，目的是仅贴壁而不内化。然后洗涤细胞以除去未结合的抗体，并转移至37*0来开始胞吞。不同时间之后，细胞用3'/。多聚曱醛(PF)固定、用0.1%TritonX-100透化，并用FITC标记的山羊抗小鼠IgG染色，以显现结合到细胞且内化至细胞中的抗体。作为对照，将细胞在4匸孵育(时间0)之后固定。使用恰当的技术例如共聚焦显微镜，可对内化到于不同条件下孵育的巨噬细胞和对照细胞中的小嚢泡数目进行计数。共聚焦分析的进行使用扫描光谱共聚焦系统，例如与来自LeicaMicrosystemGmbH、与LeicaDMIRBE倒置显微镜连接的LeicaTCSSP2激光。图像获取使用LeicaTCSSP2共聚焦软件包进行，重叠图像由AdobePhotoshopCS产生。105在一个具体的实施例中，将巨噬细胞与唾液酸粘附素特异性mAb41D3于4t:一起孵育来使抗体结合而不内化。然后洗涤细胞来除去未结合的抗体，病转移至37'C来进行内化。固定细胞，并在不同时间对其进行染色，以分析结合情况以及摄入至细胞的情况。图l表明，原代猪巨噬细胞与mAb41D3—起孵育引发唾液酸粘附素和抗体内化。图1示出巨噬细胞于37"C与mAb41D3孵育之后，唾液酸粘附素结合部分在不同时间的特异性结合和内化。摄入动力学由巨噬细胞与mAb41D3于37'C—起赙育之后，在不同时间具有内化的唾液酸粘附素的细胞百分比表示。图1中的数据表示三个独立实验中的平均值士标准差。在时间0时，观察到清晰的膜染色，并且没有一个巨噬细胞细胞质内含有唾液酸粘附素阳性嚢泡，如在该图原点的点所示。在转移至37'C之后，在37C随着时间的增加，内化有唾液酸粘附素和抗体的细胞数目在90分钟时上升到最大值90%(图1)，然后在120分钟时下降到61%，在180分钟是下降到50%。在较早的时间点，胞吞嚢泡主要存在于质膜周围，而随时间的增加，胞吞的唾液酸粘附素主要位于核周区。作为对照，将原代猪巨噬细胞与非唾液酸粘附素结合抗体、同种型匹配的mAb13D12或mAb74-22-15—起醉育。与mAb13D12—起孵育的细胞未显示有染色(数据未给出)，而mAb74-22-15孵育的细胞在检测的全部时间点均显示出独有的质膜染色。此外，将mAb41D3于37X:直接添加至巨噬细胞时，这得到了相似的内化动力学。实施例2在一个分析中使用多种细胞来评估唾液酸粘附素结合部分的摄入情况和/或内化情况。表达唾液酸粘附素的细胞系可用于唾液酸粘附素结合部分的结合和/或摄入分析。在一个分析中，猪细胞系PK-15可用于评估唾液酸粘附素结合部分的摄入和/或内化情况。如Vanderheijden，N.etal.，2003，J.Virol.77:8207-15所述维持PK-15细胞。大约25%的PK-15细胞通常表达唾液酸粘附素。PK-15细胞任选由唾液酸粘附素表达构建体来转染，以增强唾液酸粘附素在用于评估唾液酸粘附素结合部分的M和/或内化的分析中的细胞中的表达。猪肺泡巨噬细胞系3D4/31(37)维持于添加有10%FBS、2mML-谷氨酰胺、r/。非必需氨基酸(Gibco)和抗生素混合物的RPMI/MEM(50/50)中。通常约5%的3D4/31细胞表达唾液酸粘附素。3D4/31任选由唾液酸粘附素表达构建体来转染，以增强唾液酸粘附素在用于评估唾液酸粘附素结合部分的摄入和/或内化的分析中的细胞中的表达。依据制造商的说明书，^f吏用磷酸钓(Cellphecttransfectionkit，AmershamBiosciences)转染HEK293T细胞，并使用LipofectaminePlus(Invitrogen)转染PK-15和3D4细胞。在转染后24小时将细胞用于实验中。实施例3可处理其特征在于少量表达或不表达唾液酸粘附素的原代细胞或细胞系，来表达唾液酸粘附素和/或来增强唾液酸粘附素表达。在具体的实施方案中，细胞用唾液酸粘附素表达构建体转染，目的是提供用于评估唾液酸粘附素结合部分的结合和/或摄入的分析中的细胞。任选使用本文详细描述的包含编码猪、小鼠或人唾液酸粘附素的核苷酸序列的表达构建体。含有克隆至pcDNA3.1载体(Invitrogen)的猪唾液酸粘附素cDNA的pc腿3.1/Sn质粒在Vanderheijden，N.etal.，2003，J.Virol.77:8207-15中述及。实施例4在其他具体的实施方案中，细胞由唾液酸粘附素表达的刺激物处理，目的是提供用于评估唾液酸粘附素结合部分的结合和/或摄入的分析中的细胞。唾液酸粘附素表达的刺激物包括干扰素-a。在该实施例中，依据制造商的说明书(AmershamBiosciences),人夕卜周血单核细胞经由在Ficoll-paque离心分离自来自健康供体的肝素化血液。单核细胞的半纯化通过塑料粘附和除去非粘附淋巴细胞的几次洗涤步骤。采用小鼠抗人CD14抗体的流式细胞术分析表明，该方法通常会使得单核细胞的纯度高于90%。将细胞在含有10%FBS的RPMI培养基(RPMI-FBS)中或含有500U/ml干扰素-y和10ng/ml肿瘤坏死因子-a(TNF-cc)的RPMI-FBS中(如Hartnell，A.，etal.，Blood，2001.97(1):p.288-96所述)，或在添加有干扰素-y(100U/ml)的rpmi-fbs中培养3天。通过在4°C与冰冷的PBS赙育，将细胞从塑料基底转移至它们附着处。先让细胞在4'C与小鼠抗人唾液酸粘附素特异性抗体或者同种型匹配的无关对照抗体13D12—起孵育。然后用多聚甲醛(3°/。，溶于PBS)固定细胞，或者在37。C孵育1小时以内化所结合的抗体，随后进行多聚甲醛固定。将细胞洗涤3次，然后与FITC标记的山羊抗小鼠Ab(MolecularProbes)赙育。一些细胞由APC-标记的小鼠抗人CD14(BDPharmingen)进《亍双染。最后，将细胞洗涤两次，重悬于PBS中，并用Becton-Dickinson(SanJose，California)FACScalibur进行分析。对每个样本中的一万个细胞进行分析，并保存四个参数用于进一步分析前向散射光、侧向散射光、绿色荧光和红色荧光，该分析的结果示于图5。对唾液酸粘附素表达的流式细胞术分析得到了代表三个实验的数据。染色期间，对照样本(图5中的I所示)如其他样本一样处理，但是没有使用抗体。未处理的细胞和细胞因子处理的细胞用对照抗体13D12和人唾液酸粘附素特异性抗体7D2染色，如图5中的II所示。在7D2的结合之后，在37。C将一个样本孵育1小时，目的是使得受体唾液酸粘附素能内化该抗体，如图5中的III所示。很明显，IFN-oc处理诱导了Sn表达，并且所诱导的Sn能内化单克隆抗体7D2。如图5所示，单克隆抗体7D2内化的表现在于对在37C与FITC标记的山羊抗小鼠IgG(MolecularProbes,InvUrogen)孵育的干扰素-a处理的细胞进行表面染色时，平均荧光强度的降低。在使用人单核细胞的三次实验中的两次中，低水平的唾液酸粘附素出现在未处理细胞上，而在第三次实验中，它没有出现。使用TNF-cc和IFN-Y处理细胞诱导Sn表达，而使用IFN-a处理导致显著升高的唾液酸粘附素表达。采用分离自猪的外周血并由IFN-a处理来诱导Sn表达的单核细胞，获得了相似的结果。正如IFN-a处理的单核细胞的唾液酸结合能力所示，IFN-a处理所诱导的唾液酸粘附素是具有生物学活性的。红细胞在其表面含有唾液酸，如果单核细胞具有功能性表达的唾液酸粘附素，那么这使得红细胞可结合这些单核细胞。如上所示，将单核细胞在96孔板中培养三天。然后，将它们在37C与正常的培养基或添加有30U/ml神经氨酸酶(Roche,目的是除去表面上的唾液酸)的培养基一起孵育30分钟。除去神经氨酸酶之后，将单核细胞在室温下与0.1%人红细胞溶液一起孵育1小时。洗去多108余的红细胞，并通过光学显微镜显现红细胞与唾液酸粘附素的结合。单核细胞的表面上存在的唾液酸未被除去时，则在所检测的任何条件下，红细胞均不能结合单核细胞。然而，在将唾液酸从单核细胞上除去时，则在一些条件下红细胞能够结合。在正常培养基中生长的细胞中观察到少量的结合。由TNF-oc和IFN-Y处理的细胞不会结合RBC。但是，在IFN-oc处理的细胞中，观察到了清晰形成的蔷薇状结构(rosettes)，即与单核细胞结合的红细胞。这些数据证实了在流式细胞术中获得的结果，表明具有生物学活性的唾液酸粘附素在单核细胞中受到IFN-ct处理的诱导。本实施例还给出了在人单核细胞上表达的细胞因子诱导的唾液酸粘附素内化唾液酸粘附素结合部分的能力。单核细胞如上所述进行分离并用IFN-oc处理3天来诱导人唾液酸粘附素。然后将细胞与人唾液酸粘附素特异性mAb7D2—起于37X:孵育60分钟，使其结合和内化。作为对照，将细胞与mAb7D2—起于4。C孵育。在4X:，细胞不再能够调节内化，因而该对照仅结合唾液酸粘附素结合部分mAb7D2。60分钟后，将细胞用3%溶于PBS的多聚曱醛处理，并通过与溶于PBS中的0.1%TritonX-100孵育2分钟来透化。通过与FITC标记的山羊抗小鼠(Invitrogen)—起孵育来显现MAb7D2。还使用TexasRed标记的次毒萆环肽显现对照肌动蛋白，从而区分表面结合的唾液酸粘附素和内化的唾液酸粘附素。在时间0观察到唾液酸粘附素的表面表达以及唾液酸粘附素结合部分mAb7D2的结合。于37X:孵育60分钟之后，在IFN-cc处理的人单核细胞中观察到内化的唾液酸粘附素和唾液酸粘附素结合部分mAb7D2。因此，本文提供了用于评估人唾液酸粘附素结合部分和人唾液酸粘附素结合部分的缀合物的体外系统，该体外系统与用于评估唾液酸粘附素结合部分和唾液酸粘附素结合部分的缀合物的体外和体内猪系统相似。实施例5针对干扰素-ot对人THP-1细胞(一种单核细胞连续细胞系)中的唾液酸粘附素表达的影响进行测试，以确定由作为唾液酸粘附素结合部分的抗体刺激时，唾液酸粘附素是否被内化到这些细胞内。THP-1细胞保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)，并被鉴定为ATCC编号TIB-202。将THP-1细胞在含10%FBS的RPMI培养基(RPMI-FBS)或含有干扰素-y(500U/ml)109和TNF-a(10ng/ml)的RPMI-FBS或在添加有干扰素-oc(100U/ml)的RPMI-FBS中培养3天。将THP-1细胞与人唾液酸粘附素特异性抗体7D2或同种型匹配的无关对照抗体13D12—起于4X:孵育。然后，细胞用多聚曱醛(3%，溶于PBS)固定，或者在37X:孵育1小时，使抗体诱导唾液酸粘附素和被结合的抗体内化，然后进行多聚甲醛固定，并使用0.1%TritonX-100透化细胞。将细胞洗涤三次，然后与FITC-标记的山羊抗小鼠Ab(MolecularProbes)一起孵育。一些细胞由APC-标记的小鼠抗人CD14(BDPharmingen)进行双染。将细胞洗涤两次，重悬于PBS中，并用Becton-Dickinson(SanJose，California)FACScalibur进行分析。对每个样本中的一万个细胞进行分析，并保存四个参数用于进一步分析前向散射光、侧向散射光、绿色荧光和红色荧光(图10)。这些数据表明，IFN-a处理诱导了THP-1细胞上的人唾液酸粘附素，并且在用mAb7D2于37。C进行刺激时，观察到细胞表面唾液酸粘附素荧光的下降，这指示与唾液酸粘附素结合的抗体发生了内化。图10示出唾液酸粘附素表达和抗体诱导的唾液酸粘附素内化的流式细胞分析结果。柱状图代表三次实验。染色期间，对照样本(I)如其他样本一样处理，但是没有使用抗体。未处理的和细胞因子处理的细胞用对照抗体13D12和人唾液酸粘附素特异性抗体7D2(n)染色。在7D2的染色之后，于37X:将一个样本赙育1小时，使得受体能内化抗体(III)。IFN-a处理显著诱导了唾液酸粘附素表达，并且被诱导的唾液酸粘附素能内>[匕单克隆抗体7D2，这由下降的平均值示出，该平均值在37匸孵育时从364下降至258。在本实施例中^^用共聚焦显^^镜来显现唾液酸粘附素和被结合的唾液酸粘附素结合部分mAb7D2的内化情况。将THP-1细胞与人唾液酸粘附素特异性mAb7D2于371C孵育60分钟来内化。作为对照，通过将该细胞与mAb7D2于4匸一起孵育来分析时间0。在41C,细胞不再能够调节内化，因而该对照仅结合细胞表面未被内化的唾液酸粘附素。60分钟后，将细胞用3%溶于PBS的多聚甲醛处理，并通过与溶于PBS中的0.1%TritonX-100孵育2分钟来透化。通过与FITC标记的山羊抗小鼠(Invitrogen)一起孵育和染色来显现内化的抗体。在时间0时观察到这些细胞的表面标记，而在时间60时，观察到唾液酸粘附素和被结合的抗体被内化到THP-1细胞中。因此，本发明提供了一个包含人单核细胞THP-1细胞系的体外系统，使得可对抗体诱导的人唾液酸粘附素内化进行进一步分析，无需分离原代血液单核细胞或巨喧细胞。实施例6对唾液酸粘附素结合部分和货物部分的化学交联进行了描述。在本实施例中，人血清白蛋白(HSA)是货物部分，是待与mAb41D3(唾液酸粘附素结合部分)缀合来形成本发明的组合物的抗原。此外，作为对照，将人血清白蛋白(HSA)与非唾液酸粘附素结合抗体mAb13D12缀合。就本实施例中HAS和迈Ab的化学交联而言，采用了两步交联法。通过将600微克LC-SMCC与20毫克mAb于8升磷酸盐緩冲的盐水(PBS)中室温孵育30分钟，将具有胺活性的交联剂LC-SMCC(Pierce)偶联至经纯化的mAb41D3。通过将2亳克SPDP与40亳克HSA在8升PBS中于37"C孵育30分钟，将具有胺活性的交联剂SPDP(Pierce)偶联至经纯化的HAS。然后通过添加125孩￡克DTT来活化SPDP-HAS，从而形成硫醇活化的蛋白。然后，使用截留量为10-14kDa的膜将mAb-LC-SMCC和该硫醇活化的HAS在4X:用PBS透析，以除去残留的未反应的LC-S醒C、SPDP和DTT。然后将mAb-LC-SMCC和该硫醇活化的HAS混合在一起，并在37匸孵育30分钟，目的是使得HAS上的巯基与mAb上的LC-SMCC的马来酰亚胺端反应，从而形成共价的巯醚键。偶m应之后，使用截留量为100kDa的膜将该混合物用PBS透析，以将任何未反应的HSA从该混合物中除去。进行相似的反应来形成包含缀合有非唾液酸粘附素结合抗体mAb13D12的Aj6l清白蛋白(HSA)的对照缀合物。对在交联方案的不同步骤之间采集的样本进行分析，以确认缀合物的形成。例如，这样的样本可通过7°/。凝胶上的SDS-PAGE来分离，并且可使用试剂例如考马斯蓝来染色，目的是显现反应物和反应产物。实施例7在原代巨噬细胞中以举例方式示出了包含唾液酸粘附素结合部分和货物部分的缀合物组合物的内化。在本实施例中，将HSA-mAb41D3缀合物和HSA-mAb13D12缀合物与表达唾液酸粘附素的原代猪巨噬细胞一起在37。C孵育一小时。将在不同培养皿中的细胞与mAb41D3、mAbl3D12或仅与HAS—起于37'C孵育1小时。然后洗涤细胞，并通过与3%多聚甲醛一起孵育10分钟来固定，并通过与0.1%TritonX-100—起孵育2分钟来进行透化。隆猪血清一起孵育，然后与FITC标记的链霉素亲和素FITC(MolecularProbes)—起赙育。用TxRed标记的山羊抗小鼠Ig(MolecularProbes)来检测单克隆抗体。然后使用合适的技术例如共聚焦显微镜来对该细胞进行分析。共聚焦分析的进行使用扫描光语共聚焦系统，例如与来自LeicaMicrosystemGmbH、与LeicaDMIRBE倒置显^:镜连接的LeicaTCSSP2激光。图像获取使用LeicaTCSSP2共聚焦软件包进行，重叠图像由AdobePhotoshopCS产生。分析表明不管是否与HSA偶联，mAb41D3均发生内化，这说明该偶联反应对mAb41D3结合唾液酸粘附素和诱导内化的能力没有影响。当与mAb41D3偶联的游离HSA被添加至没有巨噬细胞时，其内化不存在或者水平极低，然而，在HSA与mAb41D3偶联时，观察到其明显的内化。此外，在由HSA-mAb41D3缀合物处理的细胞的共聚焦图像中，内化的HAS与mAb41D3位于同一位置。因此，将HAS与mAb41D3偶联^(吏得HSA与mAb41D3通过唾液酸粘附素受体一起内化。因此，将本发明的包含与唾液酸粘附素特异性mAb41D3偶联的HSA的缀合物与表达唾液酸粘附素的原代巨噬细胞相接触，会使得HSA以唾液酸粘附素依赖形式被摄入巨噬细胞内，然而，将非偶联的HSA添加至巨噬细胞并不会得到高效的HSA摄入。实施例8在本实施例中，采用本发明的缀合物组合物进行免疫接种。从猪动脉炎病毒阴性牧场购买六周龄普通猪，并依照根特大学兽医学院伦理委员会的建议，将其圏养在具有HEPA过滤空气的隔离单位。六只猪用一亳克本发明的具有偶联有唾液酸粘附素特异性mAb41D3的HSA的缀合物进行免疫接种。三只猪用一毫克具有偶联有对照mAb13D12的HSA的对照缀合物112进行免疫接种。每次免疫接种包括给予2毫升PBS中的缀合物，其中1.5毫升通过静脉内给予，1.5亳升通过肌内给予。作为对照，六只猪用一亳克未缀合的HSA进行免疫接种。在免疫接种之前以及免疫接种之后第10、17、24、32和38天收集血液样本。三个月之后，再次采集血样，并用一毫克HSA通过肌内注射对该猪进行加强免疫。针对是否存在HSA特异性IgM和IgG抗体，通过ELISA对获自经免疫接种的猪的血清进行分析。HSA特异性IgM和IgG抗体滴度由VanderStede，Y.，E.etal，2001,Vaccine19:1870-8和Verdonck，F.etal，2005，JControlRelease104:243-58中所述的间接ELISA来确定。简而言之，将96孔PolysorbImmuno微滴定板(NUNC)的孔用溶于PBS、浓度为30微克/毫升的HSA于37。C包被2小时。然后洗涤该板，并用添加有0.2%Tween⑧80的PBS对剩下的结合位点在4X:进行过夜封闭。将在ELISA稀释緩冲剂(PBS+0.05%Tween20)中两倍系列稀释的血清样本(从1/10开始)添加至该板_中，然后加入如在VanZaane，D.，andM.M.Hulst，1987，VetImmunolImmunopathol16:23-36所述的猪特异性IgM或IgGMab，和添加有2。/。猪血清、缀合有过氧化物酶的兔抗小鼠多克隆抗体(Dako)。ABTS和H202用作色原体和底物，并且通过分光光度计在405nm(OD405)测量光密度。截留值被计算为在第0天所有血清(稀释度为1/10)的平均OD柳值加上三倍的标准差。抗体滴度是最高稀释度的倒数，所述最高稀释度仍然具有高于计算得到的截留值的OD4。5。图2示出初次免疫接种之后，HSA特异性IgM(图2A)和IgG(图2B)血清滴度的平均值(士SEM)。图2C示出加强免疫接种之后，HSA特异性IgG血清滴度的平均值。方格符号指示用偶联有Sn特异性mAb41D3的HSA进行免疫接种的猪；三角符号指示用偶联有无关对照mAb的HSA进行免疫接种的猪；并且圆形符号指示用游离HSA进行免疫接种的猪。初次免疫接种之后，在用仅HSA或用偶联有对照mAb13D12的HSA进行免疫接种的猪中，检测到低至不能检测的IgM抗体滴度。相反，在用偶联有唾液酸粘附素特异性mAb41D3的HSA免疫接种的猪中，从免疫接种后(dpi)10天开始就存在IgM抗体。这些抗体维持在接近稳定的水平，直至17dpi,并从24dpi开始下降，如图2A所示。同样，在用仅HSA免疫接种的猪中，直至24dpi均不能检测到HSA特异性IgG抗体，从32dpi开始检测到低滴度。在用偶联有对照mAb13D12的HSA进行免疫接种的猪中，从10dpi开始检测到低滴度的HSA特异性IgG抗体，所述IgG抗体在32dpi时达到最大滴度。HSA和非唾液酸粘附素结合抗体的交联会刺激一些HSA特异性IgG抗体应答。相反，用偶联有唾液酸粘附素特异性mAb的HSA进行免疫接种的猪会出现在10dpi就已开始的高低度IgG抗体。最大的抗体滴度在17dpi检测到，并且这些抗体直至38dpi—直维持4艮顶，如图2B所示。为研究采用偶联有唾液酸粘附素特异性mAb41D3的HSA进行免疫接种是否会对诱导HSA特异性记忆细胞有影响，在用仅HSA进行初次免疫接种之后3个月对所有动物进行加强免疫。在加强免疫接种和4dpi时，所有动物均具有低至不能检测的HSA特异性IgG滴度。从7dpi开始，在所有动物中均检测到IgG抗体应答，但是最高滴度在接受偶联有唾液酸粘附素特异性mAb41D3(作为初次免疫接种)的HAS的动物中检测到，如图2C所示。用HSA-mAb41D3构建体进行免疫接种的猪在整个研究中均展现出最高的IgG和IgM抗体滴度，这表明将HSA偶联至唾液酸粘附素特异性mAb大大提高了诱导速度和HSA特异性IgG和IgM抗体的滴度。因此，免疫原至巨噬细胞的靶向送递通过将免疫原偶联至唾液酸粘附素特异性mAb是可能实现的，并且这会影响体液免疫应答，提高诱导速度和抗原特异性抗体滴度。实施例9唾液酸粘附素结合部分/病毒蛋白缀合物，给药和免疫应答。在本实施例中，流感病毒血凝素(HA)缀合至唾液酸粘附素结合部分单克隆抗体(mAb)41D3。缀合至唾液酸粘附素结合部分单克隆抗体41D3的流感病毒血凝素为自病毒纯化的天然蛋白或在真核细胞中产生的重组蛋白形式。在本实施例中，缀合至唾液酸粘附素结合部分单克隆抗体41D3的血凝素以化学方式与mAb41D3交联，并被注射到猪内来显示并评估该缀合物诱导HA特异性抗体的能力。天然血凝素的纯化114为了获得天然血凝素，基本按照VanReeth，K.，S.etal，VetRec，2003.153(1):p.9-13所述来制备分开的H1N1组件。将具有胚胎的10日龄SPF鸡蛋接种HlNl猪流感毒林A/猪/比利时/1/98。接种后72小时收集尿嚢液，并通过离心除去红细胞和细胞碎片。然后将被净化的尿嚢液于4。C70，000g离心90min来沉淀病毒。将病毒沉淀于4'C在TSE緩冲液(10mMTris-HClpH7.4、100mMNaCl和1mMEDTA)中过夜重悬。流感病毒是否存在通过以下方法确认血凝素(HA)测试例如VanReeth，1L，S.etal.，VetRec，2003.153(1):p.9-13所述，然后通过在20-60%(w/v)蔗糖线性梯度液中于4。C130，000g超速离心14小时来浓缩和纯化。含有病毒的梯度级分用HA测试鉴定、被收集起来，并在slide-a-lyzer透析盒(IO，OOO匿O)中用磷酸盐緩冲的盐水(PBS)透析来除去蔗糖，并通过在20。/。聚乙二醇(PEG-20，OOO)溶液中透析来浓缩。最后，通过在20-60%(w/v)变性的线性蔗糖梯度液(由溶于TSE緩冲液中的0.1%Tween80和1.2%去氧胆酸钠组成)上于4'C离心14小时，从经纯化和浓缩的病毒中释放出血凝素。含有血凝素的级分用HA测试鉴定、#皮收集起来，并在slide-a-lyzer透析盒(10，000MWCO)中用PBS透才斤，并通过在20%PEG溶液中透析来浓缩。残留的感染性病毒通过对该溶液进行UV处理(5J/cm2)来灭活。完全灭活的确定通过在MDCK细胞上接种以及在具有胚胎的10日龄SPF鸡蛋中的两次盲目传代。通过SDS-PAGE，然后进行蛋白质印迹和考马斯蓝染色来对纯化过程进行分析。HA清晰存在于最初的尿嚢液中，并且还存在于变性蔗糖梯度液处理后的纯化溶液中。在纯化过程所有步骤期间，HA被检测为单体，并被检测为两种不同的多聚体，主要是二聚体和三聚体。图6A示出在纯化期间获得的不同级分中天然流感病毒血凝素的存在情况和纯度的SDS-PAGE分析包括使用针对H1N1病毒HA的单克隆抗体通过蛋白质印迹来检测HA。图6B示出对样本中所有蛋白的检测可通过考马斯蓝染色来完成。图6A和6B中泳道A:分子标记，泳道B:除去RBC之后的尿嚢液，泳道C:除去细胞碎片之后的尿嚢液，泳道D:沉淀病毒之后的上清，泳道E:病毒沉淀(稀释度1/100),泳道F:第一次蔗糖梯度液处理之后并且在除去蔗糖之后的病毒(稀释度1/100),泳道G-J:变性蔗糖梯度液处理之后的病毒泳道G:HAU为64和128的级分(1/100)，泳道H:HAU>256的级分(1/100)，泳道I:HAU为64和128的级分(未稀释)，泳道J:HAU>256的级分(未稀释)。HA被检测为单体，并被检测为两种不同的多聚体，主要是二聚体和三聚体。重组血凝素的产生在其他实施方案中，产生了重组流感病毒血凝素蛋白。在本实施例中所使用的重组流感病毒血凝素蛋白包括与pcDM3.1D/V5-His载体(Invitrogen)中的V5-His标签融合的血凝素的胞外结构域。病毒RNA通过Rneasy迷你试剂盒(Qiagen)分离自H1N1猪流感病毒毒林A/猪/比利时/1/98，然后通过随才几引物(Invitrogen)和SuperscriptII反转录酶(Invitrogen)转化为cDNA，之后进行RNaseH(Gibco)处理。所获得的单链cDNA作为使用以下引物对HA序列进行PCR扩增的模板正向引物5，GAAGATCTCACCATGGAAGCAAAACTGTTTGTATTATTCTG3'(SEQIDNo.1)和反向引物5,TCCCCGCGGAATCTGGTAAACTCCCATTGATTC3*(SEQIDNO.2)(Invitrogen)。然后将PCR片段克隆至pcDNA3.1D/V5-His载体。然后通过限制性酶切和测序验证序列。分离得到的且得到發逸的编码流感病毒血凝素的胞外结构域的核苷酸序列被给出并在本文中表示为SEQIDNO.3。流感病毒血凝素的胞外结构域-SEQIDNO.3TGTTACCCATTCAGTTAATTTACTAGAAAACAGCCATAATGGAAAACTCTGCAGCCTGAATGGGTGACTTGTTGCTCACAGCGAATTCATGGTCTTACATAATAGAGACTTCAAATTCAAAAAATGGAAAATGCTACCCCGGAGAATTCGCTGATTATGAGGAATTAAGGGAGCAGCTGAGTACAGTTAAAGGTACCACAACTGCATGCTCCCACTCTGGAACCAGCAGTTTTTACCGGAACTTGCTATGGCCAGAATGCTTATACATATGTTTCAGTTGAATCATCAAAATACTACCGAAGGTTCACACCAGAAATAGCAGCTAGACCTAAAGTCAGAGGACAAGCAGGCAGAATGAATmTTATTGGACACTGTTAGATCAAGGAGACACCATAACATTTGAAGCCACTGGGAACTTAATAGCACCATGGTACGCATTTGCnTGAATAAGOGCTCTAATTCTGGAATTATGATGTCGGATGCTCATGTTCACAATTGCA116CTACAAAGTGCCAAACTCCTCATGGGGCCTK3AAAAGTAATCTTCCTTTTCAgAACGTACATCCCATCACTATTGGAGAATGCCCTAAATATGTTAAAAGCACCCAACTAAGAATGOCAACAGGATTAAGAAACGTCCCCTCTATCCAATCCAGAGGACTTTTTOGAGCAATTGCTGGGTTCATTGAAGCTCAGTAATrGAAAAAATGAACATTCAATTrACTTCAGTGGGCAAGGAGTTCAATAATCTGOAGAAAAGGATTGAGAAnTGAATAAGAAGGTCGATGATGGGTTTTTGGATATATGGACATATAATGCTGAGTTGCTCATTTTGCTCGA'GAATG'AAAGGACTCTAGATTTCCATGACTTTAACGTAATGTTTTGAGTTCTATCACAAATGT(3ATAATGA.ATGCATGGAGAGCGTAAAGAATGGCACATACAGAATCAATGGGAGTTTACCAGATT-3'在人胚胎肾细胞系HEK293T中以举例方式给出了可溶性重组HA的产生和纯化。使用磷酸钧转染HEK293T细胞来产生可溶性血凝素。转染后十六小时，用含或不含胎牛血清(FBS)的新鲜培养基替换培养基。转染后每24小时采样，并经由SDS-PAGE和蛋白质印迹分析，来确定在转染后什么时间上清含有最高浓度的可溶性HA(图7A和7B)。不管FBS是否存在于血清中，在HEK293T细胞中均产生可溶性重组HA。在不存在FBS的情况下，血清中最大量HA在转录后72小时达到。在存在FBS的情况下，HA的量保持相同，一直到转录后120小时。产生得到的重组HA主要为单体，一小部分为三聚体，这可以通过二硫化物还原剂P巯基乙醇来确定。图7A和7B示出对生产具有V5-His标记的重组HA的SDS-PAGE分析。重組HA在不存在(图7A)或存在(图7B)胎牛血清的情况下产生。在转染后24小时采样，图7A和7B中的泳道同上所述。HA由识别V5标签的单克隆抗体检测。在非还原条件下，HA作为单体主要存在于上清中，但是它也形成三聚体。在存在二硫化物还原剂P巯基乙醇的情况下，如图7A和7B中的星号"斤示，HA仅作为单体存在，这确定了高分子量蛋白事实上是HA三聚体。蛋白质的分子量通过泳道A(预先染色的)和B中的分子标记确定。收集到上清之后，依据制造商的说明书(Qiagen),经由Ni-FTA珠纯化重组HA。由于FBS对该纯化步骤的干扰，还在不存在FBS的情况下产生HA,并在转染后72小时收集上清。在纯化过程期间采集不同的级分，并且先通过SDS-PAGE,然后通过蛋白质印迹或考马斯蓝染色来显现HA，如图8A和8B分别所示。重组HA存在于原始上清中，而不存在于流出液中。单体和三聚体两种形式的HA均被完全浓缩。图8A和8B示出经由Ni-NTA珠对重组HA-V5-His的纯化过程的SDS-PAGE分析。先进行SDS-PAGE,然后进行蛋白质印迹，并使用针对V5标签的单克隆抗体检测HA，从而鉴定含HA的级分(图8A)，或者先进行SDS-PAGE,然后进行考马斯蓝染色，从而显现HA的纯度(图8B)。泳道A:分子标记，泳道B:含FBS的原始上清，泳道C和D:来自两个不同的不含FBS的产物的原始上清，泳道E:纯化流出液，以下泳道洗脱级分O.8ml，级分由在泳道上的其各自编号示出。HA存在于所有原始上清中而不存在于流出液中。单体和三聚体形式的HA被完全浓缩。抗体与HA的缀合培养产生单克隆抗体41D3(在Duan，X.，etal.，AdvExpMedBiol，1998.440:p.81-8中述及)或单克隆抗体13D12(在Na鼎ynck,HJ.andM.B,Pensaert，ArchVirol，1995.140(6):p.1137-46中述及)(分别针对猪唾液酸粘附素或同种型匹配(IgGl)的无关对照抗体)的杂交瘤细胞，并且每72小时收集上清。如制造商(GEHealthcare)所述，通过G蛋白琼脂糖柱来纯化抗体。具有被鉴定为GenP印t获取号为AY590824并且在本文中净皮作为SEQIDNo.4的蛋白序列的流感病毒血凝素A型/猪/比利时/1/98在本实施例中被用作缀合有mAb41D3的货物部分。SEQIDNo.4:MEAKLFVLFCWNALKADTICVGYHANNSTDTVDTILEKNVTVTHSVNLI￡NSHNGKLCSLNGKAPLQLGNCNVAGWILGNPECDLLLTANSWSYIIETSNSKNGKCYPOEFADYEELREQLSTVSSFERFEIFPKATSWPDHETTKGTTTACSHSGTSSFYRNLLWIVKKGNSYPKLSKSYTNNKGKEVLVIWGVHHPPTNSDQQTLYQNAYTYVSVESSKYYRRFTPEIAARPKVRGQAGRMNYYWTLLDQGDTITFEATGNLIAPWYAFALNKGSNSGIMMSDAHVHNCTTKCQTPHGALKSNLPFQNVHPmGECPKYVKSTQLRMATGLRNVPSlQSRGLFGAIAGF正GGWTGMIDGWYGY冊QNEQGSGYAADQKSTQIAIDGISNKVNSV正KMNIQFTSVGKEFNNLEKRIENLNKKVDDGFLDIWTYNAELLILLENERTLDFHDFNVKNLYEKVKSQLRNNAKEVGNGCFEFYHKCDNECMESVKNGTYNYPKYSEESKLNREEIDGVKLESMGVYQI通过二硫键将经纯化的抗体偶联至流感病毒血凝素(HA)SEQIDNo.4。为完成此举，依据制造商的说明书(PierceBiotechnology)，用交联剂SPDP(卜琥珀酰亚胺基-3-(2-硫代吡啶)-丙酸酯)来激活41D3单克隆抗体、同种型匹配的对照单克隆抗体和HA。对于HA，SPDP的激活是通过二硫苏糖醇(DTT)。被激活的蛋白通过PD-10脱盐柱(AmershamBiosciences)自未反应的交联剂纯化。被激活的蛋白以1:1抗体HA比例混合。通过用匿C0100，000的float-a-lyzer(Spectra/Por)透析，将未偶联的HA从偶联产物、41D3-HA和对照单克隆抗体-HA除去。抗体和HA偶联来形成缀合物可先通过SDS-PAGE、然后通过蛋白质印迹并对原代肺泡巨噬细胞对偶联产物的摄入进行分析来验证。对于两种抗体而言，存在明显的朝向较大蛋白的偏移，这确认了每种蛋白均与HA偶联。图9A和9B示出抗体13D12(图9A)或41D3(图9B)与分离得到的天然HA偶联的显现情况。在偶联过程期间采集的样本先通过SDS-PAGE、然后通过蛋白印迹并通过三种识别H1N1的HA的单克隆抗体的混合物检测来进行分析。泳道A:原始抗体，泳道B:过PD-10脱盐柱之后SPDP处理的抗体，泳道C:偶联有抗体的HA，泳道D:透析之后偶联有抗体的HA,和泳道E:分子标记。免疫接种十二只六周龄的猪获自流感病毒血清阴性的农场，并被随机分为每组4只猪的三组。这些动物被圈养在具有高效分子空气(HEPA)过滤器的隔离单位。对水和食物的提供没有限制。将第一组4只猪用1mgHA-13D12缀合物/猪来进行免疫接种，第二组用1mgHA-41D3缀合物/猪来进行免疫接种，对照组用相同体积不含任何蛋白的PBS来进行免疫接种。对于每只猪而言，将缀合物稀释于3mlPBS中。将一半缀合物静脉内注射，另一半肌内注射至颈部。在免疫接种时以及免疫接种之后第4、7、11、14和18天从全部猪收集血样。血清用血细胞凝集抑制(HI)测试、病毒中和(VN)测试以及免疫过氧化物酶单层分析(IPMA)检测，如VanReeth，K.，S.VanGucht，和M.Pensaert，VetRec，2003.153(1):p.9—13所述。血细胞凝集分析(HA)将含有流感病毒血凝素的样本系列稀释，并用0.5%鸡红细胞在室温下混合一个小时。仍表现出血细胞凝集作用的最高稀释度被认为是使血细胞凝集的滴度。血细胞凝集抑制(HI)用针对HlNl毒林A/猪/比利时/1/98的血细胞凝集抑制(HI)测试检测血清。被灭活的血清先用来自霍乱弧菌的受体破坏酶(RDE)处理，然后通过柠檬酸钠处理来使该酶失活。然后，将血清吸附于鸡红细胞来除去流感病毒血细胞凝集的非特异性抑制剂。依据包含阳性和阴性对照的标准方法来进行HI测试。由于预处理，在二倍血清稀释之后血清的起始稀释度为1:10。另外，每个孔与四个血细胞凝集单位的H1N1毒林和0.5%鸡红细胞混合。孵育l小时之后，结果得到了解释。在存在HA识别抗体的情况下，未观察到血细胞凝集，并且RBC全都聚集在板底的一个点上。HI滴度是完全抑制血细胞凝集所需要的滴度的倒数。作为参照，阳性和阴性对照血清均包含在HI测试中。病毒中和(VN)还用病毒中和(VN)测试针对是否存在H1N1中和抗体对血清进4亍了测试。将两倍血清稀释液与100组织培养感染剂量(TCIDs。)A/猪/比利时/1/98病毒一起醉育。然后加入浓度为600，000细胞/ml的Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞。赙育24小时之后，通过免疫过氧化物酶染色检测病毒阳性细胞。血清的起始稀释度为1:2。免疫过氧化物酶单层分析(IPMA)最后，通过免疫过氧化物酶单层分析(IPMA)针对是否存在流感病毒识别抗体对血清进行分析。因此，在存在1000TCIDs。A/猪/比利时/1/98病毒的情况下，使MDCK细胞生长24小时。固定之后，将细胞与二倍稀释的血清稀释液孵育，然后通过免疫过氧化物酶染色来检测抗体。血清的起始稀释度为1:2。结果示于图12。图12示出用13D12-HA或41D3-HA免疫接种的猪的平均免疫过氧化物酶单层分析(IPMA)滴度。对于每一组而言，将4只猪用偶联有同种型匹配的(IgGl)对照抗体13D12的天然血凝素(HA)或者偶联有41D3(—种针对猪唾液酸粘附素的单克隆抗体)的HA进^f亍免疫接种。在免疫接种之后第O、4、7、11、14和18天收集血清，并通过IPMA进行分析。用偶联有唾液酸粘附素特异性mAb41D3的HA进行免疫接种的猪表现出IPMA抗体被快速诱导，并且具有较高滴度的IPMA抗体。实施例10在本实施例形成了包含唾液酸粘附素结合部分和细胞毒剂的缀合物组合物。细胞毒剂急草素是30kDa的植物酶，属于核糖体灭活蛋白(RIP)家族。皂草素可依据本领域已知的方法分离自植物石碱草的种子，或者购买获得。在本实施例中使用作为细胞毒剂的代表的皂草素，它可包含在本发明的缀合物内。皂草素自身没有细胞结合部分，因此不能进入细胞。但是，在与唾液酸粘附素结合部分缀合产生缀合物之后，皂草素与唾液酸粘附素结合部分一起被共同内化到细胞内。皂草素也是能够通过唾液酸粘附素结合部分和皂草素之间的二硫键与唾液酸粘附素结合部分连接的细胞毒剂的代表。其他细胞毒剂描述于Thrush，G.R"etal.,A廳RevImmunol,1996.14:p.49-71。唾液酸粘附素结合部分和皂草素之间的二硫键使得毒素的解离成为可能。细胞毒素与唾液酸粘附素结合部分的缀合将经纯化的抗体41D3通过二硫键缀合至皂草素(Sigma)。因此，依据制造商的说明书(PierceBiotechnology),用交联剂SPDP(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-硫代吡咬)-丙酸酯)激活抗体和皂草素。就急草素而言，用二硫苏糖醇活化SPDP，并^f吏用PD-10脱盐柱(AmershamBiosciences)将该蛋白从未处理的交联剂中纯化出来。被活化的蛋白以l:l抗体皂草素比例混合。通过用MWC0100,000float-a-lyzer(Spectra/Por)透析来将未偶联的皂草素从偶联产物中除去。急草素和抗体41D3的偶联先通过SDS-PAGE、然后通过考马斯蓝染色并通过对原代肺泡巨噬细胞对偶联产物的^7v进行分析来检验。SDS-PAGE的考马斯蓝染色表明，在缀合之后有明显的向上偏移，表明大小增加，这确定了一部分抗体与皂草素偶联在一起。在透析之后未偶联的蛋白被完全除去。图11示出在抗体-皂草素缀合法期间采集的不同样本的SDS-PAGE和考马斯蓝染色。泳道I:分子标记，泳道A:原始抗体，泳道B:SPDP处理的抗体，泳道C:过PD-10脱盐柱之后的SPDP处理抗体，泳道D:原始皂草素，泳道E:SPDP和DTT处理的皂草素，泳道F:过PD-10脱盐柱之后的SPDP和DTT处理的急草素，泳道G:偶联有抗体的急草素,泳道H:透析之后偶联有抗体的皂草素，和最后，泳道J:在负载染料中存在二硫化物还原剂P巯基乙醇的情况下，偶联有抗体的急草素。对于两种抗体而言，存在朝向较大蛋白的明显偏移，这肯定了一部分抗体偶联有急草素。未偶联的蛋白在透析之后被完全除去。皂草素被缀合至mAb41D3，从而得到本发明的缀合物组合物。还形成了包含非唾液酸粘附素识别抗体mAb13D12和皂草素的对照缀合物。将mAb41D3/急草素缀合物和对照mAB13D12/鬼草素缀合物每一种分别与表达唾液酸粘附素的原代猪巨噬细胞孵育。恰当时间之后，将细胞进行免疫染色，并通过共聚焦显微镜来分析，从而确定缀合物是否结合以及是否被内化到细胞。细胞与mAb41D3/皂草素缀合物孵育引起缀合物内化，表明41D3mAb仍然具有结合缀合物并剌激该缀合物内化的能力。相反，并未观察到mAb41D3/皂草素缀合物被内化。实施例11对mAb41D3/急草素缀合物和mAB13D12/皂草素缀合物对原代猪巨逸细胞的细胞毒性作用进行了测试。将巨噬细胞与多个浓度的mAb41D3/皂草素缀合物或者mAB13D12/皂草素缀合物一起孵育不同时间。使用MTT分析来通过比色法测定细胞数目并区分活细胞和死细胞。以下表格示出这些处理所得到的OD值和时间的函数关系，以及活细胞百分比与缀合物浓度的函数关系。巨噬细胞0D值01030100APOPLevend41D3-Sap0.7720.5370.5410.4012.64413D12-Sap0.8510.7080.7030.7800.4452.824平均值0.3890.423活细胞百分率0If)-70.3*10-610641D3-Sap89.829.330.413D12-Sap110.273.472.191.9122图3以绘图形式给出活细胞百分比和缀合物浓度的函数关系。实施例12将mAb41D3/皂草素缀合物与多种细胞一起孵育，来评估细胞毒剂皂草素的作用。表达重组唾液酸粘附素的CH0细胞和不表达唾液酸粘附素的CHO细胞每一种与不同量的mAb41D3/皂草素缀合物一起孵育，病在加入缀合物之后不同时间测量对细胞活力的影响。使用MTT分析来通过比色法分析细胞数目并区分活细胞和死细胞。以下表格示出这些处理所得到的OD值和时间的函数关系，以及活细胞百分比与缀合物浓度的函数关系。<table>tableseeoriginaldocumentpage123</column></row><table>图4以绘图形式给出活细胞百分比和缀合物浓度的函数关系。CHO-Sn指示表达唾液酸粘附素的CHO细胞。CH0-Kl指示不表达唾液酸粘附素的CHO细胞。采用皂草素-41D3免疫毒素对猪的体内处理通过肌内方式给猪注射0.1或1mg皂草素-41D3缀合物(溶于1mlPBS)/kg体重，以一个剂量形式，或者分为间隔6小时注射的两个剂量。将四头猪用于各皂草素-41D3缀合物条件，四头对照猪仅注射PBS,总共二十头猪。在首次注射之后24小时将猪麻醉，并收集和分析局部引流淋巴结。淋巴结免疫细胞的流式细胞术分析通过流式细胞术分析淋巴结的免疫细胞数目的变化。全部免疫细胞均通过机械分离或胶原酶D消化从淋巴结制备。对于机械分离而言，淋巴结样本用注射针分离并在40微米孔径尼龙滤器上过滤。将细胞收集到50-ml锥形管，并用RPMI洗涤两次。对于胶原酶D消化而言，淋巴结与1迈g胶原酶D(Sigma)/ml在RPMI中于37。C孵育1小时。然后将细胞悬液用40微米孔径尼龙滤器过滤，并收集于含30%FBS的RPMI中。400xg离心15分钟之后，用含5%FBS的RPMI将细胞洗涤三次。对于红细胞裂解而言，将细胞在5ml裂解液(NH4C1、KHC03[1mM]、Na2+EDTA)中孵育5分钟，并用含5%FBS的RPMI洗涤三次。用FITC-标记的SWC3特异性mAb74-22-15鉴定单核细胞/巨噬细胞。先用生物素化的mAb41D3、然后用FITC标记的链霉素生物素对表达唾液酸粘附素的巨噬细胞进行染色。通过用FITC标记的CD3特异性mAb染色来对全部T细胞进行定量，而一小部分T细胞由FITC-标记的CD4或CD8来定量。B细胞用FITC标记的小鼠单克隆抗猪IgM抗体(CloneM160)来鉴定。淋巴结微观解剖学分析将淋巴结样本在磷酸盐緩冲的3.5%多聚曱醛溶液固定24小时。固定之后，使用自动系统(ShandonCitadelTissueProcessor,Cheshire,UK)将样本固定在石蜡中。制备厚度为8微米的切片、二曱苯脱蜡、下行梯度酒精再水合、染色、酒精和二甲苯的上行梯度脱水，并用DPX封片。进行苏木精-伊红染色来分析被处理和未被处理的猪的淋巴结的形态学和显微解剖学。免疫组织化学分析将来自引流淋巴结的样本包被在甲基纤维素介质中，并在-70t:冷冻。制备冷冻切片(厚度为5至8微米)，并用丙酮于-2(TC固定。用一种或多种以下抗体对切片进行染色(1)FITC标记的山羊抗小鼠IgG抗体来检测所注射的免疫毒素；U)先用生物素化的mAb41D3，然后用FITC标记的生物素链霉素，目的是对表达唾液酸粘附素的细胞进行定量，并对免疫毒素对表达唾液酸粘附素的细胞的数目的影响进行评估；胞都进行染色的生物素化抗体74-22-15(抗SWC3抗体)，然后用FITC标124记的链霉素生物素，目的是评估毒素对单核细胞巨噬细胞镨系的所有细胞的影响；和(4)先用生物素化mAb41D3，再用FITC标记的链霉素生物素同特异性针对活化半胱天冬酶-3(细胞凋亡标记)的山羊多克隆抗体一同染色，最后用TexasRed标记的兔抗山羊抗体，目的是对凋亡整体水平和皂草素-41D3缀合物免疫毒素处理猪的引流局部淋巴结中凋亡的表达唾液酸粘附素的巨噬细胞数目进行定量。唾液酸粘附素结合部分/细胞毒剂缀合物例如皂草素-41D3缀合物的体内给药，为评估唾液酸粘附素特异性免疫毒素的体内功能性，以及评估该缀合物选择性杀死淋巴结中的表达唾液酸粘附素的巨噬细胞的能力提供了可能。体外和体内分析两者提供了最佳的清除淋巴结中表达唾液酸粘附素的巨噬细胞的给药剂量和方式的信息。清除表达唾液酸粘附素的巨噬细胞可用于治疗涉及巨噬细胞的特定疾病，例如类风湿性关节炎、炎性皮肤病、持续感染等。唾液酸粘附素蛋白和核苦酸序列序列IDNo.5是GenBank获取号为AF509585.1的猪唾液酸粘附素的蛋白序列。序列IDNo.5:mdflllllllassalaglaswtvsspetvqgikgscli工pctfgfp週vewhgitaiwyydysgkrlwshsrnpkwe朋fqgralllgqveq:rtcslllkdlqpqdsgsynfrfeisegnrwsdvkgtwtvtevpsvptialpaklhegmsvdfncstpyvcptepvnlqwqgqdptrsvtshlqklepsgtshmetlhmalswqdhgrilscqvsaaerrmqkeihlqvqyapkgveiushsgrnvlpgdlvtlscqvkssnpqvssvqwvkdgtklkdqkrvlqlrraawadagvytcqagnavgssvsppvslhvfmaevqvspvgsiiienqwtiiacntpkeapselryswyknhaklegshsrtlirlhsvtradsgfyfcevqnargrersppvsvwshppi/tpd;ltafletqag:lvg助cswseppat:lv:ls.hgglilastsgegdhsprfsvasapnslrleigdlgptdsgeymcsassslg皿sstldfhanaarllispaaewegqavtlscrsslslmpdtrfswyl船alilegpssslllpaasstdagsyhcraqnshstsgpsspavltvlyaprqpwtaqldpdtagagagrqglllcdegvylceassalguasasatldaqawlvitpshtlqegieanltcnvsreasgpanCQVPIGVLEGTSYRWYRDGQPLQESTSiVTLRFAAITLSQAGAYHCQAQAPGSATTDIAeel.agssprlqvatapntlrle工hnavledegvytceatisitlgqtlasaafdaqamrvqvwp:natvqegqlv^tclvwtthlaqltytwyrdqqqlpgaahs工e:lpwtvtdaasxrcg工lipgqalrlsrpvaldvlyaprrlrlthllesrggolawlctvdsrpaaqltlshagrllasstaasvpntlrlelweprpsdeglyscsarsplgqantslelrlegvqlshdgkvlatshgvhglavgtghvqvarnalqlrvqnvpsrdkdtyvcmdrwslgsvstmgqlqpegvhwaepgldvpegtalnlscrlpsgpghignstfawfrngrqlhtesvptltfthvaraqaglyhcqaelpagaatsapvxlrvlyppktptmtvfvepeggiqgiLDCRVDSEPLASLTLHLGSRLVASSQPQAAPAKPHIRVSASraALRVDMEELKPSDQGeyvcsasnalgsasaatyfgtralhrlhlfqhllwflgliasllflllglgvwyawrrgnfyklrmgeysvemvsrkettqmstdqeevtgigddagsvnqaafdpahlcentqsvKSTV序列IDNo.6是编码GenBank获取号为AF509585.1的猪唾液酸粘附素的核苷酸序列。序列IDNo.6:13tggacttcctgctcctgctcctcctcctggcttc改tctgctctagcaggcctggcctcg61tggacggtttccagccccgagaccgtgcsgggcatcaagggctcctgcctcatcatcccc12Htgcaccttcggcttcccggccaacgtggaggtgccccatggcatcacagccatctggtac181tatgactaetcaggcsagcgcctggtagtgagccactccaggaacccaasggtggtggsg241a.accacttccaaggccgggccctgctgttggggcaggttgaacagaggacgtgcagcctg301ctgctgaaggaectgcagccccaggactcgggctcctataacttccgctttgagatcagc361gagggcaaccgctggtcagatgtcaaaggcacagttgtcsccgtgacagsggtgcccagc421gtgcccaccattgccttgccagceaagctgcatgagggcatggaggtggscttcaactgc481tccactccctatgtgtgcccgacggagccggtcaacctacagtggcsaggccaggatccc541acccgctccgtcacctccc.acctccag3atgc仁tgagccctcgggcaccagccacatggag601accctgcacatggccctgtcctggx:aggaccatggccggstcctgagctgccaggtctcs661gcagccgascgcagga七gcagaaggagattcacctccaagtgcagtstgcccccaagggt721gtggagstccttttcagccactccggscggaacgtccttccaggtgatctggtcaccctc781agctgccaggtgaatagcagcaaccctraggtcsgttccgtgcagtgggtcsaggatggg841acgaagctcaaagsccagssiacgtgtactgcagttgcgccgggcagcctgggctgstgct901ggcgtctacacctgccaagccgggaatgccgtgggctcttcagtctcscccccggtcsgc961ctxcac:gtcttcatggctgaggtc;caggtaagccctgtgggctccstectggagaaccsg1021stcggtgacgctggcctgcaatacacctaaggasgcgcccagcgagctgcgctacagctgg1081tacaagaaceacgccc七gctggagggctctcacagccgcaccctccggctge3Ctcagtt1141acca.gggcggattcgggcttctacttctgcgaggtgcagaacgcccggggcagagagcgc1201tctccccctgtcagcgtggtggtcagccacccacccctcaccccggacct33ctgccttc1261ctggagacacaggcggggctggtgggcatcctccaatgctctgtggtcsgcg3gccccc31321gctactctggtgttgtcacacgggggcctcatcttggcctctacctccggggagggtgac1381cacagcccacgcttcagtgtcgcctctgcccccasctccctgcgcctggagattcaagac1441ctggggccaacagaca.gtggggatatacstgtgctcagccagcagttctcttggga匈cg1501tcctccaccctggacttccatgccsatgcagcccgcctcctcatcsgcccagcagcagag1561gtggtgg3agggcaggcggtgacactgagctgcaggagcagcct:gagcct:gstgcctgac1621scccgtttttcctggtacctgaacggggccctgattctcgaggggcccagcagcagcctc1681ctgctcccagcagcct:ccagcacagatgccggctcataccact:gccgggccc3gaac3gc1271741cacagcaccacccacgccag1801cccgtgttcaacgccaaggcl"lcicictettgtccscaggggc1921cgtgttgtggaggctgttte1981caccgc:atgaagacccggtg2CHIcrggeggatgcgcctccgcc2101tctgcMCCtcacgctgcag2161gaaggcattgccctgccaac2221ttctcctggtcgtga.cgctg2281ctacctgtggcgaggetggt2341gctggcctcttccaaagttg2401tcagccctcctgtggacegt2461cgccctcttg2521ctccggctcc2581gaggtccgagC3CC5L3CStC2641cttggatcagccgggtgtca2701ccgtcgcctgacccataggg2761gtcctggaggggagtccact2821tcggccacgcccsttgccas2881gcccatagctcccacgtgacc2941tacgcacctcgcgactgg.gc3001ctccttctgtccstgggagc3061cgcctcgtggtccccgccts3121csggtggccagctggsggat3181ga^ggcgtctctccgccgcc3241ttcgstgccc3301ctggtgaaccctacacgtgggcgggccc.tcccccaqctcctcrttctctaggtcaccaa^gcca3ccl:tccgaLgatggccsgaactgaccacccctgttggacgtggacccagttggccccctcgtggccsacax:tt:ctcegttttgcgccaggccacgccgt:gtgsacctctsctcttgac;ctgcct.gga.ccctgatgtcatgggggaLgcacccsdccctgtgcgagggccectgtcggcgctstggtgetgccctcccagggccaccctgttccgtccgcctccagtggggsctcttCtt5LCCttCgggccnggcttcgttggtatcagtgaccctcacgctgcgcagtgcaggtgtgtatggsccgttctcsccgactgcaggagggcggctgctctactgegtggccagcsgcgctggtcat.cagtgsgccgtgtatgcttgccgtgetetatcacggctgtgtgccaaagcctgtggtcctgacgggatggccctggct.gcccctgstggactcctgcccsgcgaggagcttga_ccctgggtctggcccaatga_cgca_cctggctggggccggtgc袅gctgctgc.acetgcggccctgggcaacaccgtcacaaagcc.agcggctctggacacgcatcgtcaccccccgatcctcgtctgtsctcctggccgccggcc3actcactgtgaggcgagcctgggtgctgccaggtagcccctccactggagcctactgtcsgcctcaggcctcggtccgsctgctcaggcsgctcagaccttggccccagctcsc1283361taccgagacccaatgtcact3421gtcscsgatgsctccgcctc3481tcc^gacctggscccatctc3541ttggagagcctcgcccagct3601gcccagctgaa.gcctctgtc3661cccaacaccctctctacagc3721tgctcggcccgctagagggc3781gtgc3ggtggcscagtgacc3841tgtgaagacccagccgttgg3901ctgcatggagg3961gccta"cctcgcagcactg4021c改C3tcctct40^1cctaitggccggsccctgtcc4141catgatggcaggggacaggc4201catgtccaggGtcacgtg己c4261aaggacacct4321ctgcsigccag4381gcgctgaaccctccaccttt4441gcttggttcc4501catgtggccccgccggggct4561gccacctctgcaccatgact4621gtttttgtggggacagtgagccagcctcag4741gctgcccctg4801atggaggagccaatgccctg4861ggctctgcctgcatctgttc4921csgcaccttcgttgggcctgccgcc七cctatcgc;c:c;tgg3gtggtgggcaccctcsgccattgcgcctggagc^gtcctctcsctggctccctgctgcccgggtcggctgcgceaggtccsatgcccctcgtggtscsgtgaggtgctggctggcccgcsaaaggtgtgcs七g丑gctgtcgggeacggtcggcgcccaatgcctccsgtcttagcccgaggggcctgaccctccaagccgcatgaagcccagtctggttcctcccaggrtgctccgctgtgg.ctgtcctctacgctggccgtgtgctggccgcgctgtgggaggggcca^gccCCC3CCC8Ctctccctctcgggatgcccsgggatgctgtccactgtggaccaccagccstcgccctgcagggaccgcsaccgtggtsigctcctccctsgttggcttgtacgctccgggtgtggcatccagccacctgggccatccgcgtcctacttcggaggggctgctgatattgatccgcac:cc;cgc^gtgctgtgcsctcctggcctccccggccca^atcac3tcccgtgccggaggctctatgtcttttccagcggggc丑cacgceagcgagccacggggtccacgctgcgggtgctccttgggctgagccagggcggccctgggccactgccaggCtCt5LCCCtCggcsttctggagtcggctggtcagccsgtcgagtdtgtgtaccagagcccgcg^igcctcctccticctgccctggccsggcgactgcgcctctgtggacagcctcwccgcgtgatgagggtggdgctgcggggcccctgtctacacgggctctcccagcctctgggactcctgccgagatgcttagcagtagaatgtgcctgga/tgtgccacataggcaatgcccsccctctg丑gctcccccaagacgccsctgccgagttggcctccsgccaatgccttgctcggcctctgcatcgccttcttectact4981ggggtctggtacgcctggagacggggaaatttttacaagctgagaatgggcgaatattc.a5041gt,agagatggtat:ctcggaaggaaaccacgcagatgtccactgaccaggasgaagtt3ct5101ggsatcggtgatgatgcgggctctgtgaaccaggcggcatttgatcctgcccacctctgt5161gaaaacacacagtctgtgaaaagcscstgtctga序列IDNo.7是GenBank获取号为NM—011426的小鼠唾液酸粘附素的蛋白序列。序列IDNo.7:MCVLFSLLKLASVFSLGQTTWGVSSPKNVQGLSGSCLL工PC工FSKDIiKPEDSGTYMFRFEISDSlSIRWLDVKGTWTVTTDPSPPTITIPEELREGMERNFNCSTPYLCLQEKQVSLQWRGQDPTHSVTSSFQSLEPTGVYHQTTLHMALSWQDHGRTLLCWARDG西LGVTGHVXRLFSA服NDSGAYTCQATNDMGSLVSSPLSLHVFMAEVKMNPAGPVLE腿TVTIiCSTPKEAPQEUlYSWYK丽工L]LEDAHASTLiH]LPAVTRADTGFYFCEVQNAQGSERSSPLSWVRYPPLTPDLTTFLETQAGLVGILHCSWSEPLATWLSHGGLTLASNSGENDFNPRFR工SSAPNSLRLE工RDLQPADSGEYTCLAVNSLGNSTSSLDFYANVARLLINPSAEWEGQAVTLSCRSGLSPAPDTRFSWYLNGAKLLEGSSSSLKLPAASSTDAGSYYCRTQAGPNTSGPSLPTVLTVFYPPRKPTFTARLDLDTSGVGDGRRGICHVDSDPPAQLRLMKGHWATSLPSRCGSCSQRTKVSRTSNSLHVEIQKPVXEDEGVYLCEASNTLGNSSAAASFNAKATVLV工TPSNTLREGTEANLTCNVNQEVAVSPANFSWFRNGVLWTQGSLETVRLQPVARTDAAVYACRIXTEDGAQLSAPWLSVLYAPDPPKLSALLDVGQGHMAVFICTVDSYPtAHLSIiFRGDHLLATOLEPQRPSHGRIQAKATANSLQLEVRELGLVDSGNYHCEATNILGSANSSLFFQVRGAWVQVSPSPELEEGQAWLSCQVPTGVSEGTSYSWYQDGRPLQESTSSTLR工AAIS阔AGAYHCQAQAPDTAIASLAAPVSLUVSYTPRHVTLSALLSTDPERLGHLVCSVQSDPPAQLQLFHRNRLVASTLQGADELAGSNPRLHVTVLP,LRLQIHFPELEDDGTYTCEASNTLGQASAAADFDAQAVRVTVWPNMVQEGQQVNLTCL酉STHQDSLSYTWYKGGQQLLGARSITLPSVKVLDATSYRCGDQLVASSTEASVPMTLHLELQDPKPSNEGLYSCSAHSPLGKANTSLELLLEGVRVK丽PSGSVPEGEPVTVTCEDPMlLSSAXYMFHMG冊LQEGPASSLQFLVTTRMAGM:FCqvhdtqgtrssrpaslqilyaprdavxssfrdsrtrlmwiqctvdseppaemvlshngkvxaasherhssasgighiqvahnm^qvqdvtlgdgntyvctaqntlgsisttqrl:ltetdirvtaepg:ldvpegtadsi:lscl:l:pggsgptg]sissfiw柳rhrlhsapvptxsftpwraqagkracradlptgattsapvmlrvilyppktptlivfvepqgghqgildcrvdseplmltlhrgsglvas恥lhdaptkph工rvtappnalrvd工eelgpsnqgeyvctasntlgsasasayfgtralhqlquqrliiwvlgflagflcliiglvayhtwrkksstkojedensaematkknt耶ewami序列IDNo.8是编码GenBank获取号为NM—011426的小鼠唾液酸粘附素的核苷酸序列。序列IDNo.8:1agaeaagatt:aggcc匸agagtaagtctatgaaacacagagaaaggggacagcataggggt61taagaaatgsggtctttcaasatctcagggggcaatgaiggagttttttgagagaggaagg121丑ctctttasagg3agttg3aggsggattctgtgaacttgagaccaccctgagctgcc33g181ttgsg33Ctttgtct3C3S3ca^gccaggcagcctcsgcgtgtgctcsgtccgscttgta241gctggagaggeaggagaceaatttccggtgcttaeggtgcttgctgga'tgccctggagta301agtgacagggtctcactgg^ctccaggttctgttggtttgagtaataggaggcggcaggg361gagaagtgaagagagacatgcactgctgstctgccttgaggctgtgtccttaaggggtgg421agecasggggcacag'aagsctctctgggacatgccaccsagtgagagcatttceaatcsc481tccctgagcea,gga.acaggggct匸ct:ggttccctgctggtggctgccacsgcagtcct541ctgttgggttgaccaacacagcaggtgagataaac:cctatagacttgggccctggatgt601tccaggcagtctct:gtg'tgcctacecacccggcttccctsggcacctgaatgcacctg661cactgggatgtgtgtcc七gttctccctgctcctgctggcctctgtcttctcsctsggc721gaccacatggggtgtctccagtcccaagaatgtgcagggcttgtc;gggatcctgcctg781eattccctgcatcttcagctacc:ctgccgatgtcccagtgtccaatggcatcacagcc841ctggtact:stgact:actcgggcasgcggcaggt.ggtaatccactcaggggaccecaag901ggtggacaagcgtttcaggggtcgagctga在ctgatggggascatggaccacaaggtg961caacctgttgctcaaagacttgaagcctgaagactctggcacctacaacttccgcttt1021gatcagtgattgacaacggs1081tcccsgcccca,gagg^ctt1141C33ctgttccsgtggcgagg1201ccaggaccccctggcgtcta1261tcac.csgac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sypavssikwlkdgvrlqtk"tgvlhlpqaawsdagvytcqaengvgslvspp工slh工fmaevqvspagpile恥tvtlvcntpneapsdlryswyknhvlledahshtlrlhlatradtgfyfcevqnvhgsersgpvsvvvnhppltpvltafletqagilvgiilhcswseplatwlshgghilastsgdsdhsprfsgtsgpnslrleirdleetdsgeykcsatnslgnatstldfranaarllispaaewegqavtiiscrsglisptpdarfswylngallhegpgsslllpaasSTDAGSYHCRARDGHSASSSPAVL1VIjYPPRGPTFTTR!LDIDAAGAGAGRRG.KL]jCRVDSDPPARLQLIiHKDRWATSLPSGGGCSTCGGCSPRMKVTKAP肌IiRVEI柳P:l:LEeeglylceasralgnastsmtisigqatvlaiapshtlqegteanltcnvsreaagspanfswfrngvlwaqgpletvtllpvar1daalyacr工lteagaqlstpvllsvlyppdrpklsakldmgqghmalfictvdsrplallalfhgehllatslgpgvpshgrfqakaeaNSLKLEVRELGLGDSGSYRCEATNVLGSSNTSLjFFQVRGAWQVSPSPELQEGQAVVLscqvhtgvpegtsyrwyrdgqplqestsatlrfaaitltqagayhcqaqapgsattslaapislhtoyaprhvtlttlmdtgpgrlglllcrvdsdppaqlrllhgdrlvastlqgvqvwpgatvregqlvnltclvwithpaqltytwyqdgqqrldahs工plpnvtvrdatsYRCGVGPPGRAPRiSRPITLDVLYAPRNLRLTYliESHGGQLALCTVDSRPPAQLAlshagrllasstaasvpntlrlelrgpqprdegfyscsarsplgqantslelrlegvrVILAPEAAVPEGAPITVTCADPAAHAPTLYTWYHNGRWLQEGPAASLSFLVATRA.HAGAYSCQAQDAQGTRSSRPAALQVLYAPQDAVLSSFRDSRARS舰V-工QCTVDSEPPAELALSHDGKVLATSSGVHSIASGTGHVQVARNALRLQVQDVPAG.DDTWCTAQNLLGSISTI&R3LQVEGARWAEPGVPEGAAIWCRLiGGPGPVGNSTF.腸F丽DRRLHAEPVPTLAFTHVARAQAGMYHCLAELPTGAAASAPVMLRVLYPPKTPTMMVFVEPEGGLRGILDCRVDSEPLASLTLHLGSRLVASSQPQGAPAEPHIHVLASPNAKRVDIEALRPSDQGEYICSASWLGSASTSTYFGVRALHRLHQFQQLLW/LGLLVGLLLIXLGLGACYTWRRRRVCKQSMGENSVEMAFQKETTQLIDPDAATCETSTCAPPLG序列IDNo.lO是编码GenBank获取号为NM-023068的小鼠人唾液酸粘附素的核苷酸序列。序列IDNo.10:1atgggcttcttgccc改agcttctcctcctggcc.tcaitt;ctt:occagoaggccaggcetcs61tggggcgtctccsigtcccc^ggacgtgcagggtgtgwggggtcttgcctgdttetcccc121tgc改tct.t:cagcttecctgccg这cgt;gg改gfgtgGc:c:gacggcatescrggcc:atctggtsc181taegactactcgggccagcggcaggtggtgagccactcggcggaccecaagctggtggag241gcecgcttcc.gcggccgcaccgagttcatggggaaccccgageacagggtgtgcaacctg301cngctgaagg改cctgcagcccgaggactc'tggttcctacascttccgcttcgagatcagt.361g8ggtca3GCgctggtc^gaitgtga^8ggcaccttggtca.C6tgtd3e3g3ggeigGcc3gg42:1gcgcceaccattgoctccccggtgga.gcttctcg3gggcatc5tg3ggtgg3cttcaactgc481tccactcectacgtatgcctgcaggagcagg'tcagac'tgcagtggca3ggecaggacGCt541gctcgctcitgtcaccttcaseagccagaagtttgagcccacc:ggcgtc:ggceaectggag601改ccctcc改catggccatgtcctggcaggstecacggccggatcetgcgctgccsgctetcc661gtggccwtcacsgggctcag3gcgag3tteacctccaagtg3agtatgcccccaagggt721g七gaagateetecteagcecet.eggggaggaae改七eettceaggtgagetggteac:acte781acctgccaggtgaacagcagctaccctgcagtc;sgfttceattaagtggctcaaggatggg841gtacgcctce改a&ccaagactggtgtgctgcaectgccccaggcagcctggagcgstgct9Q1ggcgtctac^cctgecaagctgagaacggcgtgggctctttggtctc3cc2ccccatcagc961ctccacatcttcatggetgaggtcc:aggtg3gccc叫c3ggtccc3tc:ctggag^ccaig1021acagtgscsct5gtctg。3acaeacccaatgaggcacccagtgatetc:c:g1081tac:asgasicc.atgUcctgctggaggat.gcccsctcccat:accctccggctgcscttggcc1141act3gggctgatactggcttctacttctgtgsggtgeagaacgtccetgg1201tcgggcectgtcagcgtggtagtcascc;acccgcctctcactcc这gtcctgacagccttc1261ctggagscccaggcgggact:gtgggcatcettcactgctctgtggtcag1321gccacactggtgctgtcsc為tgggggtcatatcctggcctce為cctccg"gggacagtgat.1381c3cagcoc^cgcttcsgtggt3cctctggtccc33Ctccctgcgoctgg3gatccgdgac1M1ctgg3ggaat3ctgscsgtggggsgtscssgtgctc3gcc3ccnaictccct15013cctccacc:ctggactt:ccatgccsatgccgcccgtctcctcstl:cagcc:cggcagccgag1561gtggtgg33ggacaggicagtgacactgagctgcsg犯gcggcctSL3gccc1621gcccgcttctcctggt改cctgaatggagccctgcttcscgagggtcccggcsgca^gcctc1681ctgctcccegcggcctccagcactgdcgccggctcstsccsctgcegggc1361741cacagcgec:accc'tcgscas1801CC3dC￡L=tCa1861ctcc:ttxgt1921cgcg二tgtgggggct;gttcc1981cc^cgcatga2041ctggaagaggrcgoctccscc2101:c3gccscct2161gagggc;3C的CEgccctgct2281ctgctgcccg2341ggtgcecsgc2401ctgtcagccccac二gtggac2461agccgccccccsccdgcctg2521ggtccccaggctccccgsag2581ttag改ggtcc旭lgttcttggat2701tcaccatcaic2761ggatgt:occ3g2821ac:ctcggcc古2881csatgccceiggcctcc3cgtg2941tcctstgfccctggacgaict:g3001ggccxcetcc3061gstcgcct七g3121ctgcatgtggtatgc:ggag3181gatg,gtg3241gactccgac:ggcggg柳gg3301cagc二ggtgstGCtccaicrccagggg^cct:cccccsggc:ctgtgccg二gtc:gtggcccct:tcgccagc二cagcgaccec:gatt:gc二gc;ccgcgctcczggggc,ggcggccttgttxzgg二cggt:ccc"ctggggsic31arccgntggsigccaccatcgggcggct:gcatxgct:gcgt:gc3C3二ggecc:tctggcagc二gccg二ggt:cct3tcgggetgcctccggccegtgggggg^gng二ggcccgaccsctcscccgc^gctgcc3為gctgctgggucccctggagccgcatccttgt二cstctgacctcctggcgccagcccccaagetggggctccacggggcgccaggcctcgggctaecgtcggcccagct3361二ggiaccagg3421gtC3ggga^ga^ccccgcctc34S1t:ccagacct:a3541ctggagagccccgeccgccc3601gd。c:3gc:tggagcctctgtc3661cccsdc3ccc3721cgctctgcccgctggaggg:3781gtgcgggtga3841二g二gcggaeccgg二cg七tgg3901ctgcsggaggtcatgcaggc，OiC*1a~^""t"如，"—。t"—J>3(j丄gk、udv^tv^Wtg"gccctg4021c^g二cetct4081t:ccat:ggct:gggccGt3tct4141c:a二g3"tggca>4201ca二gi:ccaggtgcaggtgat:4261gacacctatgcgggcggt:tg4321eaggt:ag^ggggcgctgcc4381ctga3cetca4441nggni:c;tggaCttC3CCC3C4501gtggctcgtgtggggctgct4561gcctctgctc4521ctcgcgga^gceatgcgsgccg46Mctcgccagcc4741gctcctgcsgggtggatc改tc4801gaggcgctga^tgtee二gggc4861二c匸gcc二eta4921cagc二gctctgggciccgggggcagccctcttcc二ggctccgtccagctgctgatacagcgagg二gc::ggctggcccga^3gtgcacgcgtgctgccgcctaxg^ccggegctcs改gctggctgagggtggggcccegcgsgcgcc二gga二ccgc二gcgg;:gc:ggccct:gggaggc二gcccsotgtgg3Ccgccc二acggcctgggtggcgc二gcatcgt:gccgtg:gctccctccggggccc二tggcsg:ecst:g二cctgcc^ggggatad二ggggtcgcgccc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细胞激活和/或发炎的抑制剂选自IL-IO、TGF-P、6-(甲基亚硫酰基)己基异硫氰酸酯、倍半薛色酮以及它们的组合。87.权利要求79的方法，其中所述病理状态为癌症。88.,实质上:^本文所^免疫接种方法。89.—种实质上如本文所述的将货物送递至细胞的方法。90.—种实质上如本文所述的诱导或增强唾液酸粘附素表达的方法。91.一种实质上如本文所述的针对唾液酸粘附素结合活性和/或唾液酸粘附素结合所刺激的细胞内化活性篩选化合物的方法。92.—种实质上如本文所述的包含缀合有货物部分的唾液酸粘附素结合部分的化合物，。93.—种实质上如本文所述的用表达构建体转染细胞的方法。94.一种实质上如本文所述的治疗病理状态的方法。95.—种实质上如本文所述的将货物送递至细胞的试剂盒。全文摘要本发明的实施方案提供了一种将货物部分送递至细胞的方法，所述方法包括将表达唾液酸粘附素的细胞与具有唾液酸粘附素结合部分和货物部分的缀合物相接触。该唾液酸粘附素结合部分结合由细胞表达的唾液酸粘附素，并与该货物部分一起被内化，藉此将该货物部分送递至该细胞内。由本发明所提供的具体方法包括诱导或增强唾液酸粘附素在天然情况下产生少量或不产生唾液酸粘附素的细胞内表达。唾液酸粘附素表达的诱导或增强包括唾液酸粘附素表达构建体的转染和/或有效诱导或增强唾液酸粘附素表达的试剂的给予。具体描述了在受试者内刺激免疫应答的方法和组合物。本发明提供了刺激针对病毒的免疫应答的具体方法和组合物。文档编号A61P37/04GK101678116SQ200780025209公开日2010年3月24日申请日期2007年5月11日优先权日2006年5月11日发明者H·诺英坷,P·德尔皮特申请人:根特大学