专利名称：：加减玉女煎在制备治疗甲状腺功能亢进症的药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及口服中药经典复方加减玉女煎的新的医药用途。
背景技术：
：甲状腺功能亢进症，简称"甲状腺功能亢进"，一般是指由于甲状腺自身病变所引起的基础代谢率(BMR)增高、自主神经系统失常等一系列综合征。甲状腺功能亢进症是由于各种原因引起甲状腺激素分泌增多，造成机体多系统的兴奋性增高及代谢亢进的临床综合征，其临床表现主要有烦躁易怒、心悸多汗、易饥消瘦、手指震颤、甲状腺肿大或眼球突出等。甲状腺功能亢进是现代社会的多发病、难治病之一，严重危害了现代人的身体健康，目前，临床中所用抗甲状腺药物以硫脲类化合物为主，其作用机制为抑制甲状腺激素的合成，临床使用中起效较慢，疗程较长，且副作用多，甚至有部分患者无法耐受。随着社会、工作压力的增大，生活节奏的加快，甲状腺功能亢进的发病率明显增加。流行病学调査发现，我国甲状腺功能亢进的总发病率竟高达3%。由于新陈代谢率增高，甲状腺功能亢进患者有怕热、多汗、心慌、心率快、多食、消痩、大便次数增多等症状；由于交感神经兴奋性增高，还常表现有神经过敏、容易激动、手抖、失眠等。90%左右的患者伴有甲状腺增大，部分病人还有突眼。甲状腺功能亢进病人的5%10%在甲状腺功能亢进病的基础上出现心律失常、心脏增大、心力衰竭等一系列心脏病症状，出现甲状腺功能亢进性心脏病。有研究表明，甲状腺功能亢进患者的发病率还在继续增加。甲状腺功能亢进在传统中医药古籍中并没有相应的病名记载，根据其主要临床表现，该病归属于中医"肝火"、"瘿病"等范畴。随着现代对甲状腺功能亢进研究的不断深入，越来越多的学者认为，先天禀赋不足(素体阴虚)和情志剌激是导致甲状腺功能亢进的主要发病原因。对甲状腺功能亢进的病机，有学者强调该病是"以肝郁为中心，与五脏失调相关"，并认为"痰浊瘀血之形成在于脏腑之失调，虽以肝郁为中心，但又必影响到心肺脾肾诸脏"，因此甲状腺功能亢进的病机特点属"本虚标实"，以"肝肾心脾亏虚"为本，"肝郁胃热、化火生风、痰瘀停滞"为标。亦有学者认为甲状腺功能亢进的病机重点为本虚标实，本虚以气阴亏虚为主，标实为燥热、痰浊及瘀血为主。发病初期多以心肝火郁(旺)，燥热炽盛，阴津灼伤为主；病久则以气阴两伤，阴虚火旺为主要特点。尽管各家众说纷纭，但甲状腺功能亢进之病机总离不开"本虚标实"之症结所在，本虚总以阴虚为其最根本立足点，标实则以气结、郁火、痰浊、瘀血为主。中医在临床治疗中则多从病机出发，标本兼顾，采用益气养阴、理气、化痰、活血等治疗方法。通过研究发现，许多单味中药如龟版、龙胆草、知母、生地等都具有一定降低甲状腺功能亢进动物模型升高的T3、L的作用，并可缓解因甲状腺功能亢进所引起的各种症状。更多的学者则从复方中药出发，将临床中行之有效的复方，如复方甲状腺功能亢进胶囊、消瘿颗粒剂、亢心宁胶囊等，进行实验研究，探讨其对实验性甲状腺功能亢进动物模型的药效，以便为甲状腺功能亢进治疗提供一些新的依据。更有学者从甲状腺功能亢进患者的阴虚火旺体质出发，研究其阴虚火旺证的实质所在，认为甲状腺功能亢进阴虚火旺与交感一肾上腺髓质功能、cAMP和胃泌素水平及免疫系统、微量元素、血流动力学等都有密切关系，从而为甲状腺功能亢进的中医分型治疗及中药抗甲状腺功能亢进的机制研究提供了思路。加减玉女煎乃清代名医吴鞠通所著《温病条辨》中的一张名方，全方由石膏、知母、玄参、生地、麦冬五味药组成，功能清气凉血、滋阴润燥，可用于治疗太阴温病之口渴、脉数等症。该方是从《景岳全书》之玉女煎化裁而成，又名玉女煎去牛膝熟地加生地玄参方，全方以石膏之辛凉清热，合知母、生地、麦冬之甘寒滋阴，又加玄参之凉血解毒，共奏滋阴、清热、解毒、凉血之效。石膏，味辛甘，性大寒，归肺、胃经，功能清热泻火、除烦止渴、收敛生肌。《别录》谓.."除时气头痛身热，三焦大热，皮肤热，肠胃中膈热……"为临床常用之清热泻火要药。现代药理研究表明，生石膏对发热具有明显的解热效果，并可减轻发热所引起的口渴状态。知母，味苦甘，性寒，归肺、胃、肾经，功能清热泻火、滋阴润燥。《本经》云"主消渴热中，除邪气，肢体浮肿，下水，补不足，益气。"现代药理实验证明，知母主要成分菝葜皂苷元能使甲状腺素所致大鼠升高的肝、肾、小肠粘膜^+-1(+47酶恢复正常水平，从而使产热减少，实现解热作用。另有相关报道，甲状腺功能亢进模型e受体一cAMP系统对P受体激动剂异丙肾上腺素的反应性显著增强，肾脏P受体最大结合容量也显著增加，知母水提液能使两者降至正常水平，但对3受体的亲和力无影响，而且，知母还可降低甲状腺功能亢进模型动物的耗氧量。玄参，味苦甘咸，性寒，归肺、胃、肾经，功能清热凉血、滋阴解毒。《别录》载"下水，止烦渴，散颈下核，痈肿。"现代药理实验发现，玄参能够增强实验小鼠的耐缺氧能力，同时，其对小鼠的自发活动亦有一定的抑制作用。生地，味甘苦，性寒，归心、肝、肺经，功能清热凉血、养阴生津。《珍珠囊》有云"凉血，生血，补肾水真阴。"现代药理研究实验表明，鲜地黄汁、鲜地黄水煎液能使甲状腺素诱发的类阴虚小鼠的脾脏淋巴细胞碱性磷酸酶表达能力明显增强，还可以增强ConA诱导的脾脏淋巴细胞转化，提示其对B淋巴细胞、T淋巴细胞功能有促进作用。麦冬，味甘微苦，性微寒，归心、肺、肾经，功能养阴润肺、益胃生津、清心除烦。《别录》载"疗虚劳客热，口干燥渴。"现代实验研究表明，用山麦冬水煎醇沉法制备的注射液对小鼠进行耐缺氧实验中，在常压下小鼠耐缺氧时间分别延长15.4%和31.7%;在减压下，小鼠存活时间亦显著延长。文献中未见加减玉女煎具有防治甲状腺功能亢进的报道。
发明内容本发明所要解决的技术问题是提出经典方加减玉女煎在制药中的新用途。本发明涉及加减玉女煎在制备治疗甲状腺功能亢进的药物中的甩途。本发明还涉及加减玉女煎在制备治疗与甲状腺功能亢进症相关的甲亢性心脏病的药物中的用途。本发明以经典古方加减玉女煎为对象，采用国内外学术界已广泛应用的皮下注射左旋甲状腺素钠造模及观察吸碘率和促甲状腺素实验等方法、及可靠的药效学检测手段，按本领域公知技术，小鼠皮下注射甲状腺素钠350ug/kg/d。造模与给药同时进行，每日1次。连续给药8d，观察加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠心率、自发活动的影响，连续给药lld，观察吸1251率的变化，连续给药12d，观察耗氧量，T3、T4的变化，肌肉注射促甲状腺激素(促甲状腺激素)IIU测量吸碘率。本发明实验发现口服加减玉女煎颗粒剂可缓解甲状腺功能亢进模型动物体重减轻症状，减慢其心率，降低心脏重量指数，并能减少模型动物的自发活动，降低耗氧量，降低模型动物体内血清T3、T4水平。本发明实验结果显示加减玉女煎能够缓解甲状腺功能亢进症的临床症状，如烦躁多动、心率加快、代谢增加、体重减轻等，与模型组比较，阳性药他巴唑组和加减玉女煎小鼠体重明显高于模型组(代0.05);心脏重量指数，心率、自发活动，耗氧量，血清T3、T,水平显著性降低(代0.05)，进而产生改善甲状腺功能亢进的作用。本发明实验结果证实加减玉女煎对实验性甲状腺功能亢进症具有明显的抑制作用，能够明显改善甲状腺功能亢进动物模型的症状表现，并能显著降低甲状腺功能亢进模型动物体内的甲状腺素水平。其作用机制可能主要是通过拮抗甲状腺激素的作用或抑制甲状腺激素的释放，从而改善甲状腺功能亢进症的各种临床表现，降低甲状腺激素水平。因此，加减玉女煎在甲状腺功能亢进的治疗机制上可与现有化学药物互相补充，在临床应用中可与化学药物互相协同，以减少化学药物的用量，同时对无法耐受化学药物不良反应的患者，亦可能成为有价值的替代治疗手段。因此，本发明为治疗甲状腺功能亢进症、与甲状腺功能亢进症相关的甲亢性心脏病的中药新药开发提供了新的有价值的实验依据。另外，加减玉女煎方中的五味中药均价廉、易得，未见明显急性毒性。知母总皂苷作为加减玉女煎中的有效成分之一，在一定剂量范围内，亦具有一定程度的抗甲状腺功能亢进作用，如可缓解甲状腺功能亢进动物体重减轻的症状，减慢心率，减少自发活动等。具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例11.加减玉女煎抗甲状腺功能亢进作用的实验研究1.1实验药物的制备加减玉女煎组成及成人每日剂量生石膏30g，知母12g，玄参12g，生地黄18g，麦门冬18g。中药饮片购自上海养和堂药业有限公司。本实施例实验所用药物为加减玉女煎水煎剂经过浓缩、真空干燥等处理后的颗粒剂，该颗粒剂由上海中医药大学科技实验中心制备提供，lg颗粒剂中约含有2.7g生药。1.2其他药品他巴唑片，北京太洋药业有限公司，批号060501。左旋甲状腺素钠(L-ThyroxineSodiumsalt),美国sigma公司，批号WA13381。1.3试剂碘[1251]三碘甲腺原氨酸(T3)放射免疫分析药盒；碘[1251]甲状腺素(T4)放射免疫分析药盒，均购于北京普尔伟业生物科技有限公司。Na^I溶液，上海中医药大学核医学实验室。促甲状腺激素(ThyrotropichormonefromBovinePituitary),美国sigma公司，批号027K0726。2.实验仪器及设备ECG-92C心电图机，上海光电医用电子仪器有限公司。SN-682放射免疫y计数器，中国科学院上海原子核研究所日环仪器厂。YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪，山东省医学科学院设备站。小鼠心电感应盒，由上海中医药大学实验中医学教研室提供。CY-3测氧仪，上海华光仪器仪表厂。3.实验动物KM小鼠，2030克，上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号SCXK(沪)2007—0005。4.实验方法4.1动物分组取小鼠(雌雄各半)72只，体重2030g，随机分为空白对照组、模型对照组、阳性药(他巴唑)组、加减玉女煎低剂量组、加减玉女煎中剂量组和加减玉女煎高剂量组6组，每组12只。4.2造模及给药方法造模除空白对照组外，其余各组每日皮下注射甲状腺素钠350ug/kg体重。空白对照组按体重注射同样剂量的生理盐水。给药灌胃给予他巴唑组10mg/kg/d加减玉女煎低2.17g/kg、中4.33g/kg、高8.66g/kg，模型和空白给予等体积的生理盐水。4.3指标测定及方法4.3.1加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠外观行为的影响实验期间全程观察并记录小鼠的整体情况，包括小鼠的精神状态、毛色变化、行为活动等。4.3.2加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠体重的影响实验前测量并记录各组小鼠的体重，实验过程中隔日测量并记录小鼠体重l次，造模及给药，连续12天，于末次造模、给药后，禁食不禁水12h，测量并记录各组小鼠体重，计算最后一次测量的体重值与实验前测量的体重值之间的差值。4.3.3加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠心脏重量指数的影响造模及给药，连续9天，于末次造模、给药后，禁食不禁水12h，测量并记录各组小鼠体重，取其心脏，记录各组小鼠心脏的重量，计算心脏指数。4.3.4加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠心率的影响造模、给药，连续8天，于末次造模、给药后3h左右，在小鼠清醒状态下，将小鼠置于心电感应盒中，同时感应盒连接心电图仪，用心电图仪描记II导联心电图。4.3.5加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠自发活动的影响[1]造模、给药，连续8天，于末次给药、造模后60min，将小鼠置于小动物自主活动测定仪中，适应5min，记录此后IOmin内小鼠自主活动的次数。4.3.6加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠耗氧量的影响取雌性、雄性小鼠各60只，分为空白对照组、模型对照组、阳性药组、加减玉女煎低、加减玉女煎中和加减玉女煎高6组，每组10只。造模、给药，连续12天，于末次造模、给药后3h左右将小鼠密闭于500ml瓶中，测定并记录雌性小鼠30min，雄性小鼠20min后瓶内氧含量，比较各组小鼠的耗氧量的关巳左升o4.3.7加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠血清T3、L的影响造模、给药，连续12天，于末次造模、给药后，禁食不禁水12h，眼球取血，采用RIA法测定血清中的T3、L含量。4.3.8加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠吸1251率的影响造模、给药，连续11天，末次给药后lh开始给所有动物腹腔注射Na12510.1uCi/10g体重(雌性小鼠平均体重约30g，故每只注射0.3uCi;雄性小鼠平均体重约40g，故每只注射0.4"Ci)，24h后，处死动物，剥离、摘出整个甲状腺，用SN-682放射免疫Y计数器，测定其放射性，同时测定标准源1251的放射性，计算得出甲状腺吸1251率。4.3.9促甲状腺激素实验取小鼠(雌雄各半)30只，分为模型组、加减玉女煎高剂量一组、加减玉女煎高剂量二组，每组10只。每日皮下注射甲状腺素钠350yg/kg体重，高剂量一组和二组均灌胃加减玉女煎8.66g/kg，模型组给予蒸馏水。按上述方法造模、给药9日后，于第10日，给加减玉女煎高剂量二组动物肌肉注射促甲状腺激素1IU，另外两组则分别肌注等容积的生理盐水。24h后，腹腔注射Na1251，再24h后，处死动物，计算吸碘率。5.统计方法所有数据采用"均数土标准差(^士S)"表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验，检验水准为0.05。6.实验结果6.1加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠外观行为的影响实验过程中，空白对照组小鼠精神状况、活动情况、毛色光泽均未见异常。模型组小鼠造模第4天开始出现烦躁不安、易激怒，与空白对照组小鼠比较有明显毛色枯槁现象。治疗组小鼠亦有轻微毛色枯槁现象，但较模型组症状轻，而加减玉女煎给药组较模型组小鼠比较，其表现出一定程度的安静状态，尤其是高剂量组小鼠表现更加明显。6.2加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠体重的影响治疗前(给药、造模前)，各组小鼠体重比较无显著性差异(》0.05)。治疗后，与空白对照组相比，模型组小鼠体重明显低于空白对照组，两者有极其显著性差异(代0.01);与模型组相比，阳性药他巴唑组和加减玉女煎高剂量组小鼠体重明显高于模型组，其差异亦有显著性(代0.05)。治疗后一治疗前体重进行各组间比较。与空白对照组相比，模型组小鼠体重增加明显低于空白对照组，两者比较有极其显著性差异(代0.01);与模型组相比，他巴唑组和加减玉女煎中、高剂量组小鼠体重增加明显高于模型组，其差异亦有显著性(代0.05)。(见表2-1)表2—1加减玉女煎对甲状腺功能亢进小鼠体重的影响(3f±S)组另'JiJlII治疗前(g)治疗后(g)~~治疗后-治疗前(g)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注与空白对照组相比，抑代0.01;与模型组相比，05，▲▲/<().016.3加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠心脏重量指数的影响与空白对照组比较，模型组小鼠心脏指数明显增高，两者有极其显著性差异(代O.OOl)。与模型组相比，加减玉女煎中剂量组小鼠心脏指数明显降低，两者有显著性差异(代O.05);加减玉女煎高剂量组小鼠心脏指数亦明显降低，与模型组之间差异性极其显著(代O.01)。(见表2-2)表2-2加减玉女煎对甲状腺功能亢进小鼠心脏重量指数的影响U±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注与空白对照组相比，tt雜P〈0.001;与模型组相比，AP〈0.05，▲▲<().01，▲▲▲<().0016.4加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠心率的影响与空白对照组比较，模型组小鼠心率明显加快，两者有显著性差异(代0.05)。与模型组相比，加减玉女煎低、中、高剂量组小鼠心率明显减慢，两者亦有显著性差异(代0.05)。(见表2-3)表2-3加减玉女煎对甲状腺功能亢进小鼠心率的影响(7土S)组别例数剂量(g/kg)心率(次/min)空白组10_682,50±116.42血模型组10一794.50±47.84*他巴唑组100.01763.50±40.53低剂量组102.17736.90±66.57A中剂量组104.33742.10±62.32A高剂量组108.66715.80±102.82A注与空白对照组相比，#P<0.05;与模型组相比，AP〈0.056.5加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠自发活动的影响与空白对照组相比，模型组小鼠自发活动明显增多，两者有显著性差异(代0.05)。与模型组相比，加减玉女煎中、高剂量组及阳性药他巴唑组小鼠自发活动明显减少，两者亦有显著性差异(代O.05)。(见表2-4)表2-4加减玉女煎对甲状腺功能亢进小鼠自发活动的影响(3f±S)组别例数剂量(g/kg)自发活动(10min)空白组10一113.60±73.0"模型组9一180.56±53.04*他巴唑组90.01126.00±45.67A低剂量组102.17142.30±66.29中剂量组104.33123.60±57.47A高剂量组98.66119.11土65.8"注与空白对照组相比，ttP〈0.05;与模型组相比，AP〈0.056.6加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠耗氧量的影响(1)与空白对照组比较，雌性小鼠模型组耗氧量明显增高，两者有极其显著性差异(代o.ooi)。与模型组相比，雌性小鼠加减玉女煎中剂量组耗氧量明显降低，两者有显著性差异(代0.05);他巴哇组、加减玉女煎高剂量组耗氧量亦明显降低，与模型组之间差异性极其显著(代O.Ol)。(见表2-5-1)(2)与空白对照组比较，雄性小鼠模型组耗氧量明显增高，两者有极其显著性差异(代O.Ol)。与模型组相比，雄性小鼠加减玉女煎中剂量组耗氧量明显降低，两者有显著性差异(代0.05);他巴唑组、加减玉女煎高剂量组耗氧量亦明显降低，与模型组之间差异性极其显著(代O.Ol)。(见表2-5-2)表2-5-1加减玉女煎对雌性甲状腺功能亢进小鼠耗氧量的影响(3f±S)组别例数剂量(g/kg)瓶内氧含量(％，30min后)空白组10_14.03±0.88血"模型组10_12.20±0.88鹏他巴唑组100.0113.62±0.90"低剂量组102.1712.28±0.82中剂量组104.3313.35±1.03^高剂量组108.6613.75土0.97"注与空白对照组相比，,P<0.001;与模型组相比，APU5，▲▲<().01，▲▲▲<().001表2-5-2加减玉女煎对雄性甲状腺功能亢进小鼠耗氧量的影响(3f±S)组别例数剂量(g/kg)瓶内氧含量(％，20min)空白组1015.80±0.67"模型组1014.93±0争49站他巴唑组10().0115.95±0.94"低剂量组102.1715.30±0.54中剂量组84.3315.63±0.70A高剂量组108.6615.65±0.57"注与空白对照组相比，抑P〈0.01;与模型组相比，AP〈0.05，016.7加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠血清T3、L的影响(1)与空白对照组比较，模型组小鼠血清T3水平明显增高，两者有极其显著性差异(代O.OOl)。与模型组相比，加减玉女煎中、高剂量组及他巴唑组血清T3水平亦明显降低，两者有极其显著性差异(代O.Ol)。(见表2-6-1)(2)与空白对照组比较，模型组小鼠血清T4水平明显增高，两者有极其显著性差异(代O.OOl)。与模型组相比，加减玉女煎中剂量组血清L水平明显降低，两者有显著性差异(代0.05);他巴唑组、加减玉女煎高剂量组血清L水平亦明显降低，与模型组之间差异性极其显著(代0.01)。(见表2-6-2)表2-6-1加减玉女煎对甲状腺功能亢进小鼠T3的影响(i±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注与空白对照组相比，tt抑P〈0.001;与模型组相比，▲▲<().01,▲▲▲<().001表2-6-2加减玉女煎对甲状腺功能亢进小鼠T4的影响(i±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注与空白对照组相比，糊ttP〈0.001;与模型组相比，AP〈0.05，▲▲<().01,▲▲▲<().0016.8加减玉女煎对甲状腺功能亢进模型小鼠吸1251率的影响与空白对照组比较，模型组小鼠吸1251率明显降低，两者有极其显著性差异(代O.OOl)。与模型组相比，他巴唑组小鼠吸1251率降低更加明显，两者有极其显著性差异(代O.001);而加减玉女煎各给药组其吸"51率与模型组比较，亦有一定程度的降低，但它们之间的差异不具有显著性意义。(见表2-7)表2-7加减玉女煎对甲状腺功能亢进小鼠吸1251率的影响U±S)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>他巴哗组100.01l.OO士O.62Ai低剂量组102.173.68±2.35中剂量组104.334.61±1.30高剂量组108.664.07±1.51注与空白对照组相比，抑ftP〈0.001;与模型组相比，▲▲▲<().00~~6.9促甲状腺激素实验高剂量一组与模型对照组相比，其吸1251率有一定程度的降低，但其差异不具有显著性(/M).157);高剂量二组与高剂量一组相比，其吸'251率显著性升高，两者之间有显著性差异(代O.Ol)。(见表2-8)表2--8促甲状腺激素实验(3f±S)组别例数促甲状腺激素剂量(g/kg)加)吸碘率(％)模型对照组10_—5.05±1.44高剂量一组108.66—4.07±1.51高剂量二组98.6619.17±4.38**注与高剂量一组相比，**P<0.01实施例2知母总皂苷对甲状腺功能亢进模型小鼠影响的实验研究。1.药品与试剂1.1药品知母总皂苷，纯度>50%，由上海第二军医大学药理教研室提供。他巴唑片，北京太洋药业有限公司，批号060501。左旋甲状腺素钠(L-ThyroxineSodiumsalt),美国sigma公司，批号WA1338L1.2试剂L放射免疫分析药盒，解放军总医院科技开发中心，批号20070330。2.实验仪器及设备ECG-92C心电图机，上海光电医用电子仪器有限公司。SN-682放射免疫y计数器，中国科学院上海原子核研究所日环仪器厂。YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪，山东省医学科学院设备站。小鼠心电感应盒，由上海中医药大学基础医学院实验中医学教研室提供。3.实验动物KM小鼠，2030克，上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号SCXK(沪)2007—0005。4.实验方法4.1动物分组取KM(雌雄各半)60只，体重2030g，分为空白对照组、模型对照组、阳性药(他巴唑)组、知母总皂苷低剂量组、知母总皂苷中剂量组和知母总皂苷高剂量组6组，每组10只。4.2造模及给药方法造模除空白对照组外，其余各组每日皮下注射甲状腺素钠350ug/kg体重。空白对照组按体重注射同样剂量的生理盐水。给药灌胃给予他巴唑组按10mg/kg/d，知母皂苷低、中、高剂量组每日分别按50mg/kg/d体重、100mg/kg/d体重、200mg/kg/d，空白对照组和模型组给予蒸馏水。4.3指标测定及方法4.3.1知母总皂苷对甲状腺功能亢进模型小鼠外观行为的影响实验期间全程观察并记录小鼠的整体情况，包括小鼠的精神状态、毛色变化、行为活动等。4.3.2知母总皂苷对甲状腺功能亢进模型小鼠体重的影响实验前测量并记录各组小鼠的体重，实验过程中隔日测量并记录小鼠体重l次，造模、给药，每日l次，连续9天，末次造模、给药后，于次日早晨测量并记录各组小鼠体重，然后计算最后一次测量的体重值与实验前测量的体重值之间的差值。4.3.3知母总皂苷对甲状腺功能亢进模型小鼠心率的影响造模、给药，连续11天，于末次造模、给药后，在小鼠清醒状态，将小鼠置于心电感应盒中，同时感应盒连接心电图仪，用心电图仪描记II导联心电图，然后通过心电图计算各组小鼠心率。4.3.4知母总皂苷对甲状腺功能亢进模型小鼠自发活动的影响[1]造模、给药，连续7天，于末次给药、造模后60min，将各组小鼠置于小动物自主活动测定仪中，首先适应性放置5min，然后开始记录IOmin内小鼠自主活动的次数。4.3.5知母总皂苷对甲状腺功能亢进模型小鼠血清L的影响造模、给药，连续11天，于末次造模、给药后，禁食不禁水12h，眼球取血，3000r/min离心10min，留取血清，采用放射免疫分析(RIA)法测定血清中的L含量。5.统计方法所有数据采用"均数士标准差(^士S)"表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验，检验水准为0.05。6.实验结果6.1知母总皂苷对甲状腺功能亢进模型小鼠外观行为的影响实验过程中，空白对照组小鼠精神状况、活动情况、毛色光泽均未见异常。模型组小鼠造模第4天开始出现烦躁不安、易激怒，与空白对照组小鼠比较毛色枯槁现象明显，而知母皂苷用药组与模型组小鼠比较，其烦躁不安等精神活动变化明显减轻。6.2知母总皂苷对甲状腺功能亢进模型小鼠体重的影响与空白对照组相比，模型组小鼠体重增加明显低于空白对照组，两者比较有显著性差异(代0.05)。与模型组相比，阳性药他巴唑组和知母皂苷低、中剂量组小鼠体重增加明显高于模型组，其差异亦有显著性(代0.05)。说明模型组小鼠体重明显降低，而他巴唑与知母皂苷低、中剂量能使甲状腺功能亢进小鼠体重的降低有所缓解。(见表1-1)表l一l知母总皂苷对甲状腺功能亢进小鼠体重的影响(3f±S)组别例数(mg/kg)治疗前(g)治疗后(g)治疗后-治疗前(g)空白组10—23.25±2.2725.77±3.022.52±1.12A模型组1023.28±1.7824.76±2.431.48±0.91s他巴唑组10l()23.28±1.8926.00±3.322.72±1.56^低剂量组105022.94±2.0425.75±2.882.81±1.44A中剂量组910023.41±1.7426.42±3.142.81±1.69A高剂量组1020023.44±1.5925.95±2.392.51±1.34注与空白对照组相比，tt代0.05;与模型组相比，▲,<().056.3知母总皂苷对甲状腺功能亢进模型小鼠心率的影响与空白对照组比较，模型组小鼠心率明显加快，两者有显著性差异(代0.05)。与模型组相比，知母皂苷中剂量组小鼠心率明显减慢，两者亦有显著性差异(代0.05)。提示甲状腺功能亢进模型小鼠心率明显加快，而中剂量知母皂苷可以在一定程度上缓解甲状腺功能亢进小鼠心率加快的症状。(见表1-2)表l一2知母总皂苷对甲状腺功能亢进小鼠心率的影响(3f±S)组别例数剂量t(mg/kg)心率(次/min)空白组10—654.80±125.54A模型组10_752.40±67.42#他巴唑组1010741.90±67.94低剂量组1050717.60±60.82中剂量组10100665.70±82.2"高剂量组10200675.30±117.46注与空白对照组相比，ttP〈0.05;与模型组相比，AP〈0.056.4知母总皂苷对甲状腺功能亢进模型小鼠自发活动的影响与空白对照组相比，模型组小鼠自发活动明显增多，两者有显著性差异(代0.05)。与模型组相比，知母皂苷中剂量组小鼠其自发活动明显减少，两者亦有显著性差异(代0.05)。说明模型组小鼠其自发活动明显增加，而中剂量知母皂苷可使其自发活动明显减少，提示知母皂苷中剂量可能具有改善甲状腺功能亢进小鼠躁动不安等临床表现的作用。(见表卜3)表l一3知母总皂苷对甲状腺功能亢进小鼠自发活动的影响(3f±S)组别例数剂量t(mg/kg)自发活动(10min)空白组10—87.30±28.11A模型组10—125.20±41.17*他巴哗组101089.10±62.52低剂量组1050100.2±56.49中剂量组910074.67±44.67A高剂量组1020088.40±48.41注与空白对照组相比，ttP〈0.05;与模型组相比，AP〈0.056.5知母总皂苷对甲状腺功能亢进模型小鼠血清L的影响与空白对照组相比，模型组小鼠血清L水平显著升高，两者有极其显著性差异(代O.OOl)。与模型组相比，阳性药他巴唑组和知母皂苷中剂量组小鼠血清T,水平明显降低，其差异有显著性(代0.05)。提示甲状腺功能亢进模型小鼠其血清T4水平显著升高，阳性药他巴唑和中剂量知母皂苷可降低甲状腺功能亢进小鼠的T4水平。(见表l-4)表1一4知母总皂苷对甲状腺功能亢进小鼠血清T4的影响(3f土S)组别例数剂量t(mg/kg)T4(ng/ml)空白组1051.55±13.6""模型组10197.20±32.08,他巴唑组9l()159.68±37.23A低剂量组1050168.69±30.42中剂量组10100150.06±42.18A高剂量组9200195.94±40.58注与空白对照组相比，###P<0.05;与模型组相比，▲▲▲<().001;AP〈0.0权利要求1、加减玉女煎在制备治疗甲状腺功能亢进症的药物中的应用。2、加减玉女煎在制备治疗与甲状腺功能亢进症相关的甲亢性心脏病的药物中的应用。3、知母总皂苷在制备治疗甲状腺功能亢进症的药物中的应用。4、知母总皂苷在制备治疗与甲状腺功能亢进症相关的甲亢性心脏病的药物中的应用。全文摘要本发明公开了加减玉女煎在制备治疗甲状腺功能亢进症的药物中的应用；本发明还公开了加减玉女煎在制备治疗与甲状腺功能亢进症相关的甲亢性心脏病的药物中的应用。加减玉女煎在甲状腺功能亢进的治疗机制上可与现有化学药物互相补充，在临床应用中可与化学药物互相协同，以减少化学药物的用量，同时对无法耐受化学药物不良反应的患者，亦可能成为有价值的替代治疗手段。本发明为治疗甲状腺功能亢进症、与甲状腺功能亢进症相关的甲亢性心脏病的中药新药开发提供了新的有价值的实验依据。文档编号A61K36/8968GK101623432SQ20081004360公开日2010年1月13日申请日期2008年7月8日优先权日2008年7月8日发明者欣李,娟郭,金若敏,陈长勋申请人:上海中医药大学