专利名称：：一种治疗乙型肝炎的中药及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药及其制备方法，特别是涉及一种治疗乙型肝炎的中药及其制备方法，属于新药
技术领域：
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背景技术：
：乙型肝炎是全球性的公共卫生问题，广泛流行于世界各国，是由乙肝病毒(HBV)引起的、以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种传染病。我国属乙型肝炎高感染区。随着医疗水平的不断提高，虽然乙肝感染率有所下降，但我国目前仍有乙肝感染者9700余万人，感染率达7.18%。乙肝病毒慢性感染的远期后果为肝硬化和肝癌，已成为严重威胁人类健康的世界性疾病。调査显示，乙肝感染率有10%20%可发展为肝硬化，1%5%可演变为肝癌，男性HBV感染者最终死于相关肝病的危险为50%，女性为15%。据世界卫生组织(WHO)统计，全球60亿人口中，约1/2的人生活在HBV高流行区，乙肝病毒携带者超过20亿人，全球每年有1000万至3000万人感染乙肝病毒，3.6亿乙肝慢性患者的病情正在恶化，其中25%40%最终将死于肝硬化和肝癌，在全球前10位疾病死因中，乙肝占第7位，每年因乙肝死亡者约为75万例。乙型肝炎潜伏期长、病情变化多端、流行范围广、危害性强、治疗周期长、迁延难愈、复发率高，且需长期用药，医疗费用巨大，给患者身心健康造成巨大伤害，给社会和家庭带来巨大的经济负担。然而，与乙肝治疗药物的巨大市场需求相比，虽然治疗乙肝新药种类繁多，但迄今为止还没有一种能够完全治愈乙肝的药物，更重要的是，目前已上市药物在临床治疗中存在易产生耐药性(如核苷类药物拉米夫定、阿德福韦酯等)、病毒清除效果低等不足，成为世界肝炎治疗领域的一大难题。
发明内容本发明目的之一在于提供一种治疗乙型肝炎的中药，该中药具有清热解毒，舒肝理气，祛瘀通络之功效，用于治疗急、慢性乙型肝炎。本发明目的之二在于提供该中药的制备方法。本发明运用现代药物研究方法，经提取、浓縮、精制等加工工艺，制成临床可接受的药物剂型，有效成分含量高，生物利用度高，疗效确切，无毒副作用。本发明提供的治疗乙型肝炎的中药，是由下述重量配比的原料组成虎杖816重量份白花蛇舌草816重量份丹参412重量份金钱草412重量份3黄芩39重量份五味子39重量份本发明提供的治疗乙型肝炎的中药，优选为由下述重量配比的原料组成虎杖1014重量份白花蛇舌草1014重量份丹参610重量份金钱草610重量份黄苳48重量份五味子48重量份进一步，本发明提供的治疗乙型肝炎的中药，是由下述重量配比的原料组成虎杖总苷0.20.4重量份白花蛇舌草1014重量份丹参610重量份金钱草610重量份黄芩提取物0.81.2重量份五味子48重量份本发明提供的治疗乙型肝炎的中药，最佳为按下述重量配比的原料组成虎杖总苷0.3重量份白花蛇舌草12重量份丹参8重量份金钱草8重量份黄芩提取物1.0重量份五味子6重量份上述中药中的虎杖总苷是采用以下方法制备取虎杖，加6—10倍量的50%95%乙醇，回流提取23次，每次12小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓縮至1.101.20(507(TC)，上聚酰胺柱，以水、20%乙醇、恥％乙醇洗脱，收集90%乙醇洗脱液，减压回收乙醇并浓缩，干燥，即得。上述虎杖总苷中虎杖苷的含量不低于50%，白黎芦醇的含量不低于10%。本发明可加工制成多种临床药物剂型，如丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊、滴丸及口服液体制剂中的一种。本发明中药制剂主要用于治疗急、慢性乙型肝炎，具有清热解毒，舒肝理气，祛瘀通络之功效，通过抗乙型肝炎病毒、提高免疫功能、保肝降酶等作用达到治疗乙肝的目的。下述实验例和实施例进一步证明但不限于本发明。实验例一本发明胶囊体外抗病毒作用-对HBsAg、HBeAg分泌和HBV-DNA复制的抑制作用l.对细胞毒性试验用0.06%胰蛋白酶将2.2.15细胞分散成单个细胞悬液，用含10%胎牛血清的DMEM培养配成浓度为3X10VmL的细胞悬液，按O.lml/孔分种于96孔板，置37'C、饱和湿度、5%〔02培养箱内培养，2d后换含药培养液0.lml/孔，每个浓度四孔。将本发明胶囊药液作系列倍比稀释成以下8个浓度4000、2000、1000、500、250、125、62.5、31.25ug/mL。继续培养，并设不加药物的对照；6d后收集上清，用MTT法测药物细胞毒性，计算半数有毒浓度(TC5。)，最大无毒浓度(TC。)。2.对HBeAg、HBsAg抑制试验细胞处理，接种，培养均同前，给药剂量设不加药物的对照和拉米夫定8ug/mL作为阳性对照；后收集上清后ELISA法测定HBSAg、HBeAg。计算抑制率，计算半数有效浓度(IC5。)。3.HBV-DNA抑制试验细胞处理，接种，培养及给药浓度均同前，收集细胞上清液后提取其HBV-DNA，采用实时定量PCR技术分析HBV-DNA，计算对HBV-DNA抑制率。4.结果4.1对细胞的毒性作用经MTT法测定，本发明胶囊体外对2.2.15细胞的TC^896.4ug/mL，TC(p250ug/mL结果见表l。表1本发明胶囊体外对2.2.15细胞的毒性组别浓度(ug/mL)OD值抑制率％IC5Q(ug)对照00.92±0.10一本发明胶囊31.30.91±0.14一62.50,93±0.10一1250.81±0.12—2500.59±0.10**12.05000.38士0.07"35.910000.23士0.05"58.7896.420000.13±0.03**75.040000.09土0.02"85.94.2对HBeAg、HBsAg抑制作用:本发明胶囊在62.5ug/mL浓度以上，对HBsAg有显著抑制作用(p〈0.05，p<0.01),抑制率为90.4%-30.4%，IC50:104.5ug/mL，TI=8.58;本发明在62.5ug/mL浓度以上，对HBeAg有显著抑制作用(p〈0.05，p〈0.01)，抑制率为85.9%-30.4%，IC50=63.2，TI=14.14。量效关系均较好，均在无毒剂量就有显著抑制作用，TI很高，显示药物高效低毒。结果见表2，3。4.3对HBV-DNA的抑制作用本发明胶囊在62.5ug/mL浓度以上，对HBV-DNA合成有显著抑制作用(p〈0.05，p<0.01)，IC50=67.6ug/mL，TI=13.26。量效关系均较好，均在无毒剂量就有显著抑制作用，TI很高，显示药物高效低毒。结果见表2，3。表2本发明胶囊体外对2.2.15细胞HBeAg的抑制作用组别浓度(ug/mL)OD值抑制率Q/。IC5Q(ug)对照2.40±0.55一本发明胶囊31.32.42±0.47—62.51.67土0.44'30.41251.06±0.26"55.8104.52500.80±0.15**66.75000.42±0.09**82.510000.25士0.05"89.620000.24士0.04"90.05<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>与对照组比较*p<0.05;"p〈0.01实验例二本发明胶囊的体内抗病毒活性-对鸭乙型肝炎模型的治疗作用1.分组与给药l日龄雄性上海麻鸭，将动物购回后适应性喂养2d后，用地高辛标记的DHBVDNA探针经斑点杂交检测选出先天自然感染DHBV者作为实验用动物。DHBV感染雏鸭随机分6组进行药物治疗试验，每组6只模型对照组(DHBV)，本发明胶囊50mg/kg，100mg/kg，200mg/kg组，拉米夫定10mg/kg组，口服给药，每日2次，共10d，模型对照组(D朋V)以生理盐水代替药物。在给药前l天(TO)，用药第5天(T5),用药第10天(T10)和停药后第3天(P3)，自鸭腿胫静脉取血，分离血清，-70°0保存待检。2.D朋V-DNA检测方法取上述待检鸭血清，按缺口翻译试剂盒操作说明书，用"P标记作探针，将40pL血清点于硝酸纤维膜上，进行斑点杂交，放射自显影图片斑点，在酶标仪上检测0D值(滤光片为490咖)，以OD值间接代表病毒载量，用t检验进行统计分析。3.结果结果显示，本发明胶囊100,200mg/kg组在用药第5d起DHBV-DNA含量开始降低，与对照组及用药前比较，差异均无显著性(P〉0.05);第10dDHBV-DNA含量继续降低，与对照组比较差异非常显著性(P〈0.01)，与自身用药前比较，差异有显著性(P〈0.01);停药后第3dDHBV-DNA含量回升不明显，与对照组比较差异非常显著性(P〈0.05;P<0.01)，与自身用药前比较，差异有显著性P〈0.05;P〈0.01)。结果显示本发明可显著抑制鸭血清中DHBV-DNA滴度，且停药后无明显回升趋势。结果见表5。表5本发明胶囊对鸭血清DHBVDNA滴度的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>与模型对照组比较*P<0.05"P〈0.Q1;与给药前比较AP<0.05AAP〈0.01实验例三本发明胶囊对于实验性急慢性肝损伤的保护作用1.对CC1,致小鼠急性肝损伤的保护作用取小鼠，体重20士2g，雌雄兼用，随机分对照组、模型组、联苯双脂40mg/kg组，本发明胶囊175mg/kg,350mg/kg，700mg/kg组。ig，每日1次，连续7d。第6天除对照组外均ip0.1%CCUOmL/kg,12h后(第7天给药后2h)，各组小鼠摘眼球取血，制取血清，测定ALT、AST，并取肝脏作病理学检查。结果显示与对照组比较，造模后模型组动物两项转氨酶均显著升高(p〈0.01);本发明胶囊350mg/kg，700mg/kg组可明显降低小鼠CC14急性肝损伤的ALT、AST含量(p<0.01)，结果见表6。本发明胶囊还可明显减轻肝组织病理损伤，以1000mg/kg组作用最佳。表6本发明胶囊对小鼠急性肝损伤的保护作用<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>与正常对照组比较^P〈0.01与模型对照组比较**P〈0.01*P〈0.052.对CCl4致大鼠慢性肝损伤的保护作用取大鼠60只，雌雄兼用，除正常对照组10只外，其余动物按0.5ml/100g体重，腹腔注射10X的CCU每周2次。2周后眼眶采血测定血清中GPT，去除GPT含量低于IOO卡门单位的动物，艽余动物根据GPT含量均匀分5组模型组、联苯双脂30mg/kg组，本发明120mg/kg，240mg/kg，480mg/kg组。分组与给药同3.1。分组后各组仍继续用腹腔注射10%的CCU造模，每周2次，连续8周。给药组同时丌始灌胃给药，每日剂量分2次给予，连续8周。正常对照组在同等情况下腹腔注射生理盐水和灌胃给蒸馏水。观察下列指标每周称体重，记录死亡情况；每2周检测血清中GPT含量；分别于给药后6周、8周采血测定血清中GPT、GOT、ALP、ALB、TP、TBIL的含量；病理检査。结果显示对大鼠血清生化指标的影响本发明胶囊240mg/kg，480呢/kg组在给药第6周开始可明显降低血清中ALT含量；本发明胶囊240mg/kg，480mg/kg给药第6周开始、150mg/kg给药第8周开始可明显降低血清中AST含量;本发明胶囊120,240mg/kg,480nig/kg组在给药第6周开始可明显降低血清中ALT含量；本发明胶囊240mg/kg,480mg/kg给药第6周可降低血清中TBIL(总胆红素)的含量，均与对照组比较有显著性差异(P〈0.05)，结果见表7。病理结果显示经HE染色后，给药不同剂量组与模型组比较肝组织纤维增生、汇管[^的炎件细胞浸润、结节的形成均有减轻的趋势，尤其240mg/kg，480mg/kg组的肝组织病变明显好于模型组。经GA染色后给药不同剂量组肝组织间质纤维VG染色呈弱阳性，240mg/kg，480mg/k组肝组织纤维增生呈现明显的弱阳性。肝脏病理程度分级釆用秩和检验进行统计学处理，与模型组比较有显著性差异(P〈0.05)。表7本发明胶囊对大鼠慢性肝损伤的保护作用6周<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>联苯双酯30_98.0&M5.82"340.4ftb31.44"39.17士1.07'35.61±4.6769.7CH6.7713.01+4.11与正常对照组比较糾P〈0.01与模型对照组比较'*P〈0.01*P〈0.05实验例四本发明胶囊的免疫调节作用1.对免疫性肝损伤的保护作用分组及用药剂量同3.1。灌胃给药，每日剂量分2次给予，连续13d。第3天除生理盐水组外均尾静脉注射新鲜卡介苗2mg/只(5乂106个/只)，注射卡介苗后第10天尾静脉注射LPS7.5Pg/只，12h后各组小鼠摘眼球取血，制取血清，测定ALT、AST,并取肝组织作病理学检査。结果显示造模后，模型组动物ALT，AST活性显著升高(p〈0.01):本发明175mg/mL，350呢AiL，700mg/mL小鼠血清ALT及AST活性比模型组显著降低(p〈0.05;p〈O.Cl)，结果见表8。本发明胶囊还可明显减轻肝组织病理损伤，以700mg/kg组作用最佳。提示本品对小鼠免疫性肝损伤具有显著的保护作用。表8本发明胶囊对小鼠免疫性肝损伤的保护作用组别剂量(mg/kg)动物ALT(IU/L)AST(IU/L)对照组1034.22±12.31157.45±32.67模型组10158.55±29.22sa226.87±44.14**本发明胶囊17510134.09±28.98214.15±40.183501068.77士18.74**180.71±26.12'7001056.60士18.72"165.42士28.43"联苯双酯401050.20士7.74"160.51土30.09"与正常对照组比较^P〈0.01与模型对照组比较"P<0.01'P〈0.052.对免疫抑制小鼠免疫功能的影响2.l对免疫功能低下小鼠碳粒廓淸作用的影响取健康雄性ICR种小鼠，随机分组对照组，模型组，左旋咪唑16呢/kg组，本发明胶囊175rag/kg，350mg/kg，700mg/kg组，分别灌胃给药，每日剂量分2次给予，连续给药10天。空白对照组和模型组在同等条件下给蒸馏水分组与给药同上，在给药第三天，除空白对照组外，其余各组均一次性皮下注射环磷酰胺100mg/kg。空白对照组一次性皮下注射等剂量的生理盐水。给药的第11天以20%印度墨汁O.2ml/只给小鼠尾静脉注射。在注射后的2分钟和10分钟分别眼球后静脉丛取血0.02ml，加到装有2ml0.化碳酸钠溶液的试管中溶解红细胞，然后在波长为600nm的紫外分光光度计测定光密度(OD)值，计算在单位时间内血清中碳粒廓清的速度，并计算校正指数a。结果表明模型组小鼠吞噬指数较正常对照组明显降低(P0.05)。本发明胶囊350mg/kg，700mg/kg能显著增高模型小鼠吞噬指数〔P<0.05)。结果见表9.<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>结果表明模型组对T细胞亚群中的CD4+、CD8+T均有明显抑制作用，与正常组比较有显著性差异(PO.05);各给药组均可明显升高CD4+、CD8+T计数，与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结果见表ll。表11本发明胶囊对免疫功能低下小鼠T淋巴细胞亚群的影响组别剂量t(mg/kg)动物数CD4CD8CD4/CD8正常组—1065.58±5.3717.11±3.793.93±0.98模型组1044.41±7.53##11.43±2.73##3.98±1.24本发明胶囊1751051.19±7.90**13.77士5.1(f3.83±1.423501063.31±4.36**17.44士4.14"3.76±1.687001065.75±7.67**17.81士3.95"3.82±1.91左旋咪唑161061.66±9.71*16.32±4.06*3.89±2.09综上所述本发明胶囊具有明显的体内外抗乙肝病毒作用；对于实验性急慢性肝损伤具有良好的保护作用，可以保肝降酶；此外还可减轻免疫性肝损伤，提高巨噬细胞吞噬功能，具有明显的免疫增强作用。下述实施例均能实现上述实验例的效果。实施例1取虎杖300g、丹参200g、五味子150g，加8倍量70%乙醇回流提取3次，每次2小时，合并滤液，减压回收乙醇并浓縮至相对密度为1.251.30(6CTC)的清膏，药渣备用；取白花蛇舌草300g、金钱草200g、黄芩150g，与上述药渣合并，加10倍量水煎煮2次，每次1小时，煎液合并，滤过，滤液浓縮至相对密度为1.251.30(60°C)的清膏，与上述清膏合并，干燥，加入辅料，按常规制成胶囊1000粒。实施例2取虎杖130g、丹参200g、五味子50g，加8倍量70%乙醇回流提取3次，每次2小时，提取醇液滤过，合并滤液，减压回收乙醇并浓縮至相对密度为1.251.30(6CTC)的稠膏，药渣备用；取白花蛇舌草130g、金钱草160g、黄芩150g，与上述药渣合并，加10倍量水煎煮2次，每次1小时，滤过，滤液浓縮至相对密度为1.251.30(6(TC)的稠膏，与上述稠膏合并，干燥，加辅料，按常规方法制成颗粒1000g。实施例3取虎杖总苷5g、黄芩提取物30g，粉碎成极细粉，备用；取丹参200g、五味子150g，加8倍量70%乙醇回流提取3次，每次2小时，合并滤液，减压回收乙醇并浓縮至相对密度为1.251.30(6(TC)的稠膏，干燥，粉碎成细粉，备用；取白花蛇舌草300g、金钱草200g，加10倍量水煎煮2次，每次1小时，煎液合并，滤过，滤液浓縮至相对密度为1.251.30(6(TC)的稠膏，干燥，粉碎成细粉，备用；取上述极细粉，混合均匀，加辅料，按常规方法制成软胶囊1000粒。实施例4取虎杖总苷7.5g、黄芩提取物25g，粉碎成细粉，备用；取丹参200g、五味子150g，加8倍量70%乙醇回流提取3次，每次2小时，合并滤液，减压回收乙醇并浓縮至相对密度为1.251.30(6(TC)的稠膏，干燥，粉碎成细粉，备用；取白花蛇舌草300g、金钱草200g，加10倍量水煎煮2次，每次1小时，煎液合并，滤过，滤液浓縮至相对密度为1.251.30(60°C)的稠膏，干燥，粉碎成细粉，备用；取上述细粉，加入辅料，按常规制得片剂iooo片。权利要求1、一种治疗乙型肝炎的中药，其特征在于该中药是由下述重量配比的原料组成虎杖8～16重量份白花蛇舌草8～16重量份丹参4～12重量份金钱草4～12重量份黄芩3～9重量份五味子3～9重量份。2、如权利要求l所述中药，其特征在于该中药是由下述重量配比的原料组成虎杖1014重量份白花蛇舌草1014重量份丹参610重量份金钱草610重量份黄芩48重量份五味子48重量份。3、如权利要求1或2所述中药，其特征在于该中药是由下述重量配比的原料组成虎杖总苷0.20.4重量份白花蛇舌草1014重量份丹参610重量份金钱草610重量份黄芩提取物0.81.2重量份五味子48重量份上述虎杖总苷中虎杖苷的含量不低于50%,白黎芦醇的含量不低于10%。4、如权利要求3所述的中药，其特征在于该中药是由下述重量配比的原料组成虎杖总苷0.3重量份白花蛇舌草12重量份丹参8重量份金钱草8重量份黄芩提取物1.0重量份五味子6重量份上述虎杖总苷中虎杖苷的含量不低于50%，白黎戸醇的含量不低于10%。5、如权利要求3—4所述中药中的虎杖总苷按如下方法制备取虎杖，力Q6—10倍量的50%95%乙醇，回流提取23次，每次12小时，滤过，合并滤液，回收乙醇并浓縮至1.101.20(5070°C)，上聚酰胺柱，以水、20%乙醇、90%乙醇洗脱，收集90%乙醇洗脱液，减压回收乙醇并浓縮，干燥，即得。6、如权利要求l一4所述中药，可制成临床可接受的丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊、滴丸及口服液体制剂。全文摘要本发明公开了一种治疗乙型肝炎的中药及其制备方法，本品由下述重量配比的原料组成虎杖总苷0.2～0.4重量份、白花蛇舌草10～14重量份、丹参6～10重量份、金钱草6～10重量份、黄芩提取物0.8～1.2重量份、五味子4～8重量份。本发明经提取、浓缩、精制、干燥等加工工艺制成丸剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、软胶囊、滴丸及口服液体制剂。本品具有清热解毒，舒肝理气，祛瘀通络之功效，用于治疗急、慢性乙型肝炎等病毒性肝炎。文档编号A61K36/185GK101485753SQ200810246760公开日2009年7月22日申请日期2008年12月31日优先权日2008年12月31日发明者王丽娟申请人:天科仁祥技术(北京)有限责任公司