专利名称：：一类萘内酰胺衍生物及其在肿瘤细胞增殖抑制上的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一类萘内酰胺衍生物及其在肿瘤细胞增殖抑制上的应用，属于药物化学
技术领域：
。技术背景萘内酰胺以其特殊的内酰胺结构具有特别的生物活性，一直吸引生物有机化学家们的兴趣和关注。Man'aL.Lo'pez-Rodn'guez等将结构优化的N-取代萘内酰胺与5-HT7R受体作用，其pKi值均小于7.3(man'aL.Lo'pez-Rodn'guez,etal.J.Med.Chem.2003,46,5638-5650)。YansongGu等在萘内酰胺6位引入烷基取代的1，4-环庚二胺，合成了用于调节5-HT2C受体的紊乱或缺乏的萘内酰胺系列衍生物(Guetal.U.S.Patent6,667,303Bl)。然而基于萘内酰胺的固有结构不容易进行修饰，虽然其具有广泛且良好的的生物活性，目前已经见诸报道的萘内酰胺衍生物数量仍然有限。
发明内容为了克服现有技术中的不足，本发明提供一类萘内酰胺衍生物及其在肿瘤细胞增殖抑制上的应用。以萘内酰胺为母体做进一步修饰，以期筛选出具有更强肿瘤细胞增殖抑制活性的新衍生物。本发明的技术方案是一类萘内酰胺衍生物具有化学结构通式为其中\^~NU2=N-(\';~COOHRi为=C(CN)2、=C(COOCH3)2、R2为—H、_C1、—Br、一CN或-N02;R3为一CH2CH20CH、—CH2CH2Br、—CH2CH2NH2、一CH2CH2NHCH2CH2N(CH3)2、一CH2CH2NHCH2CH2N(CH2CH3)2、-NNH一CH2CH2NCH2CH2CH2CH3或,HN」把所述萘内酰胺衍生物配制成具有不同浓度的药液，用四氮唑盐还原法对7721人体肝癌细胞、MCF-7人体乳腺癌细胞、Hela人体宫颈癌或BGC-823人体胃癌细胞进行试验，方法是按不同肿瘤生长速度，将一定数量处于对数生长期的肿瘤细胞以90^1/孔接种于96孔微量培养板内，培养24h后加入配制好的药液10nl/孔，对每个细胞株，每个浓度均为三个复孔。另设无细胞调零孔。如果配制好的药液有颜色要做相应药液浓度无细胞调零孔。肿瘤细胞在37°C、5%(202条件下培养48小时后，加用生理盐水配制的5mg/ml四氮唑盐液20inl/孔；继3续培养4小时后，加入由10。/。十二烷基磺酸钠-5。/。异丁醇-0.01mol/lHCl配制的三联液50pl/孔，于C02培养箱中过夜。然后用酶标仪测OD570值。按下列公式计算所述萘内酰胺衍生物对癌细胞生长的抑制率肿瘤抑制率=(对照组OD值-治疗组OD值)/对照组OD值xlOO°/。。所述的衍生物如下2-[(l-炔丙基-苯并[c,d]吲哚)-2(lH)-叉]丙二腈(衍生物1)、2-[(1-溴乙基-苯并[c,d]吲哚)-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物2)、2-{[(2-氨基乙基)-苯并[c,d]吲哚]-2(1H)-叉}丙二腈(衍生物3)、(E)-N-([l-(2-氨基乙基)-苯并[(:，(1]吲哚]-2(1H)-叉}-4-硝基苯胺(衍生物4)、(E)-N-[(l-炔丙基-苯并[c,d]吲哚)-2(1H)-叉]-4-硝基苯胺(衍生物5)、(E)-N-{[1-(2-氨基乙基)-苯并[<;,￡1]吲哚]-2(1H)-叉}-4-羧基苯胺(衍生物6)、(E)-N-[(l-炔丙基-苯并[c,d]吲哚)-2(1H)-叉]-4-羧基苯胺(衍生物7)、2-[(l-炔丙基-苯并[c，d]口引哚)-2(1H)-叉]丙二酸二甲酯(衍生物8)、2-{[2-(N,N'-二甲基-乙二胺)-乙基-苯并[c，d]口引哚]-2(1H)-叉}丙二腈(衍生物9)、2-{[2-(N，N，-二乙基-乙二胺)-乙基-苯并[c,d]吲哚]-2(m)-叉}丙二腈(衍生物10)、2-[(2-丁胺-乙基-苯并[c,d]吲哚)-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物ll)、2-[(2-哌嗪-乙基-苯并[c，d]吲哚)-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物12)、2-[苯并[c,d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物13)、2-[6-氯-苯并[c,d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物14)、2-[6-溴-苯并[c，d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物15)、2-[6-氰基-苯并[c,d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物16)、2-[6-硝基-苯并[c,d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物17)、(E)-!^-[苯并["￡1]吲哚-2(1H)-叉]-4-硝基苯胺(衍生物18)、(E)->1-[6-硝基-苯并[(;,d]吲哚-2(1H)-叉]-4-硝基苯胺(衍生物19)、(E)-]^-[6-氰基-苯并吲哚-2(1H)-叉]-4-硝基苯胺(衍生物20)。所述的萘内酰胺衍生物的合成方法如下衍生物1-8的合成分为两步进行即以萘内酰胺为原料，以苯、甲苯或氯苯作为溶剂，加入lmLPOCl3作为脱水剂，反应温度在100-120'C间，分别选择具有活泼亚甲基的丙二腈或丙二酸甲酯，或者带有吸电子基的芳香伯胺如对硝基苯胺或对羧基苯胺进行脱水縮合，得到的相应中间体。其中，与丙二腈的反应得到衍生物13，与对硝基苯胺的反应得到衍生物18。上述中间体经过纯化后，与卤代垸烃如溴乙胺、溴乙炔或二溴乙垸反应，得到相应的脱HBr产物，反应环境按照反应进行难易程度选择乙腈/t-BuOK体系或者DMF/NaOCH3体系。衍生物9-12是以衍生物2为原料，碱性条件催化，分别与相应的胺在乙腈中回流，脱HBr得到相应产物。衍生物14-20合成路线为<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>仍以萘内酰胺为原料，分别与S02Cl2在乙酸中50。C下反应0.5h、与液Br2在1，2-二氯乙烷中50'C下反应0.5h或者与浓HN03在浓H2S04中冰浴下反应3h,得到R2为~0，一Br，一N02的中间体。上述中间体与丙二腈/P0Cl3在10(TC反应，即得衍生物14、15、17。上述中间体中的6-硝基-l,8-萘内酰胺，与对硝基苯胺/POCl3在120。C反应，即得衍生物19。上述中间体中的6-溴-l,8-萘内酰胺与CuCN在N-甲基吡咯烷酮(NMP)中130'C下反应4h，得到6-氰基-I，8-萘内酰胺。6-氰基-l,8-萘内酰胺与丙二腈/POCl3在100'C反应，即得衍生物16。6-氰基l,8-萘内酰胺与对硝基苯膨POCl3在12(TC反应，即得衍生物20。衍生物对肿瘤细胞体外抑制生长活性实验采用四氮唑盐(microculturetetrozolium,MTT)还原法对7721人体肝癌细胞、MCF-7人体乳腺癌细胞、Hela人体宫颈癌细胞和BGC-823人体胃癌细胞进行体外抑制试验。本发明的有益效果是该类衍生物是以萘内酰胺为母体，分别通过用不同卤代烷烃先将2位羰基与具有活泼亚甲基的化合物进行脱氢縮合，并6位引入不同亲电取代基团，然后将l位亚胺的活泼氢进行取代的合成方法，得到一类具有炔键、氰基、胺基或酰胺结构等高生物学活性基团的衍生物。该类衍生物对肿瘤细胞增殖抑制的实验，是选用四氮唑盐还原法，针对7721人体肝癌细胞、MCF-7人体乳腺癌细胞、Hela人体宫颈癌或BGC-823人体胃癌细胞进行，结果表明，该类萘内酰胺衍生物对抑制肿瘤细胞增殖具有良好的活性和选择性。具体实施方式下面通过实施例对本发明做进一步的说明。实施例12-[(l-炔丙基-苯并[c,d]吲哚)-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物l)的合成(1)1.69g萘内酰胺(O.Olmol)、0,6g丙二腈(O.Olmol)、UmLPOCl3加入到25mL两口瓶中，加入15mL甲苯，磁力搅拌下加热到IO(TC，恒温反应4h后，将反应液倒入甲醇中，冷却后直接抽滤，得到棕色固体粗品。真空干燥后，柱层析法对粗品进行分离，得到黄色绵状晶体1.82g，产率83%，熔点>300°C。ESI-HRMS(m/z):计算值217.064，实验值217.0639。'HNMR(d6-DMSO，400MHz):5(ppm):5.30(s,1H)，7.21(d，J=7.2Hz,1H),7.58(t,J,-7.6Hz，J2=8.0Hz，1H),7.68(d,J=8.0Hz，1H)，7.83(t,J尸8.0Hz,J2=7.2Hz，1H),8.17(d，J:8.0Hz,1H),8.55(d,J=8.0Hz，1H)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(2)将0.217g衍生物13(lmmol)溶入10mLDMF，加入0.067gNaOCH3(1.2mmol)，磁力搅拌下升温至6(TC后，滴加lmL溴乙炔，薄板层析跟踪反应，约45min后，反应完全。将冷却的反应液倾入150mL冰水中，用二氯甲烷对水相萃取，用无水MgS04干燥有机相后，旋转蒸发得到粗品。柱层析法纯化，得到金黄色晶体0.18g，产率71%。熔点>300°C。ESI-HRMS(m/z):计算值255.0796,实验值255.0797。'HNMR(d6-DMSO，400MHz):S(ppm):2.50(s,1H)，5.23(s，2H),7.23(d，J=7.2Hz,1H),7.62(tJ产8.0Hz，J2=7.2Hz，1H),7.70(d,J=8.4Hz，1H),7.81(t,J产8.0Hz,J2=8.4Hz,1H),8.14(d,J=8.0Hz，2H),8.69(d,J=7.6Hz,1H)。将0.217g衍生物13(lmmol)溶于10mL无水乙腈，加入0.2gK2CO3、lmL二溴乙烷，磁力搅拌下加热至回流，5h后反应完全，直接真空蒸发得到固体粗品，水洗后真空干燥，得到黄色固体。柱层析法纯化，得到黄色晶体0.175g，产率80%，熔点232.3°C。ESI-HRMS(m/z):计算值323.0058，实验值323.0067。'HNMR(CDC13，400MHz):5(ppm):3,83(t，J产6.4Hz,J2=6.8Hz,2H),4.85(t，J产6.4Hz，J2=6.8Hz，2H)，7.25(d,J=7.6Hz,1H),7.61(t,J产8.0Hz,J2=7.6Hz,1H),7.70(d,.T=8.0Hz,1H),7.82(t,J「8.0Hz,J2=7.6Hz,1H),8.15(d,J=8.4Hz,2H),8.71(d,J=7.6Hz，1H)。实施例32-{[(2-氨基乙基)-苯并[(;,￡1]吲哚]-2(1H)-叉}丙二腈(衍生物3)的合成实施例22-[(l-溴乙基-苯并[c，d]吲哚)-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物2)的合成:将0.217g衍生物13(lmmol)溶入10mLDMF，加入0.134gNaOCH3(2.4mmol),升温至100'C，反应半个小时后，加入0.243g溴乙胺的氢溴酸盐(1.2mmol)，回流反应4h。将冷却的反应液倾入150mL冰水中，用二氯甲烷对水相萃取，用无水MgS04干燥有机相后，旋转蒸发得到粗品。柱层析法纯化，得到黄色晶体0.176g,产率68%，熔点213.2°C。'HNMR(d6-DMSO，400MHz):5(ppm):1.84(t>N//2，2H),2.54(m,NCH2C//2N,2H),2.87(m，NC//2CH2N，2H)，6.32(d,J=7.6Hz，1H)，6.54(t,Jf7.6Hz，J2=8.8Hz,1H),7.54(d，J=8.8Hz，1H)，7.34(d,J=7.6Hz,1H)，7.35(t，J产7.6Hz，J2=7.2Hz，1H),7.82(d，J=7.2Hz，1H)。ESI-HRMS(m/z):计算值260.1062，实验值260.1045。(E)-N-U1-(2-氨基乙基)-苯并[c，d]吲哚]-2(1H)-叉}-4-硝基苯胺(衍生物4)的合成(1)1.69g萘内酰胺(O.Olmol)、1.65g对硝基苯胺(0.012mol)加入到25mL两口瓶中，加入10mL氯苯，磁力搅拌下加热到120°C。向搅拌均匀的反应体系中滴加l.lmLPOCl3，恒温反应2h后，溶液呈棕色，冷却到室温后，向反应液滴加2mL甲醇，混合均匀并冷却后，直接抽滤，用大量甲醇洗，水洗，得到红色固体粗品。真空干燥后，用乙酸重结晶，得到红色品体2.62g，产率卯％。(2)将0.289g衍生物18(lmmol)溶入10mL乙腈，加入0.269gt-BuOK(2.4mmo1)，升温至回流，反应半个小时后，加入0.243§漠乙胺的氢溴酸盐(1.2mmo1)，回流反应5h。将冷却的反应液倾入150mL冰水中，抽滤，真空干燥得到粗品。柱层析法纯化，得到红棕色晶体200mg，产率60%，熔点152.3453.6°C。'HNMR(d6-DMSO，400MHz):5(ppm):2.05(t，N//2，2H),2.94(m，NCH2C//2N，2H),3.07(m，NC//2CH2N，2H),6.85(d,J=7.6Hz,1H),7.10(d,J-7.6Hz，1H),7.24(d,J=8.4Hz，2H)，7.428(t,实施例4J产8.0Hz，J尸7.6Hz，1H)，7.46(d,J=7.6Hz，1H),7.51(t,J尸7.6Hz,J2=8.4Hz，1H),7.89(d,J=8.0Hz，1H),8.31(d，J=8.4Hz，2H)。ESI-HRMS(m/z):计算值332.1273，实验值332.1258。实施例5E)-N-[(l-炔丙基-苯并[c，d]吲哚)-2(1H)-叉]-4-硝基苯胺(衍生物5)的合成将0.289g衍生物18(lmmol)溶入10mLDMF，加入0.067gNaOCH3(1.2mmol)，磁力搅拌下升温至8(TC后，滴加lmL溴乙炔，薄板层析跟踪反应，2h后，反应完全。将冷却的反应液倾入150mL冰水中，用二氯甲垸对水相萃取，用无水MgS04干燥有机相后，旋转蒸发得到粗品。柱层析法纯化，得到棕色颗粒晶体0.27g，产率70%，熔点170.5-171.8°C。ESI-H脂S(m/z):计算值327.1008，实验值327.0988。"HNMR(CDC13,400MHz):S(ppm):2.3l(s，2H)，4.90(s，2H)，6.96(d,J=7.2Hz,1H),7.07(d，J=7.2Hz，1H),7.22(d，J=8.8Hz,2H),7.38(t，J产7.6Hz,J2=8.0Hz，1H),7.46(d,J-8.4Hz，1H)，7.51(t,J尸8.8Hz,J2=7.2Hz,1H),7.89(d,J=8.0Hz,1H)，8.31(d，J=8.8Hz，2H)。(E)-N-{[1-(2-氨基乙基)-苯并[c,d]吲哚]-2(1H)-叉}-4-羧基苯胺(衍生物6)的合成(1)1.69g萘内酰胺(O.Olmol)、1.63g对氨基苯甲酸C0.012mo1)加入到25mL两口瓶中，加入10mL氯苯，向搅拌均匀的反应体系中滴加l.lmLPOCl3,磁力搅拌下，回流反应4h.冷却到室温后，向反应液滴加2mL甲醇，混合均匀并冷却后，直接抽滤，用大量甲醇洗，水洗，得到棕色固体粗品。真空干燥后，用乙酸重结晶，得到棕色固体1.7g，产率59%。(2)将0.288g歩骤(1)所得中间体(lmmol)溶入10mL乙腈，加入0.269gt-BuOK(2.4mmo1)，升温至回流，反应半个小时后，加入0.243g溴乙胺的氢溴酸盐(1.2mmd)，回流反应5h。将冷却的反应液倾入150mL冰水中，用二氯甲烷萃取，旋转蒸发得到褐色粗品。柱层析法纯化，得到棕色晶体150mg，产率45%，熔点176.8-178.rC。实施例6COOHESI-H腿S(m/z):计算值331.1231，实验值331.1274。'HNMR(d6墨DMSO，400MHz):S(ppm):2.14(t,N//2，2H),2.84(m，NCTLCttN,2H),2.98(t，NC//2CH2N，2H),6.86(d,J=7.2Hz，1H),7.08(d，J=7.2Hz，1H)，7.12(d，J=8.8Hz，2H),7.28(t,J产8.0Hz，J2=7.2Hz，1H)，7.42(d,J=8.4Hz，1H),7.53(t,J产7.2Hz，J2=8.4Hz，1H)，7.89(d，J=8.0Hz，IH)，8.31(d，J=8.8Hz,2H)，8.44(s，O仏1H)。实施例7(E)-N-[(l-炔丙基-苯并[c,d]吲哚)-2(m)-叉]-4-羧基苯胺(衍生物7)的合成<image>imageseeoriginaldocumentpage9</image>将衍生物6步骤(l)中所得的中间体0.288g(lmmol)溶入10mL乙腈，加入0.269gt-BuOK(2.4mmo1)，升温至回流，反应半个小时后，滴加lmL溴乙炔，反应3h。将冷却的反应液倾入150mL冰水中，用二氯甲烷萃取，旋转蒸发得到棕色粗品。柱层析法纯化，得到棕色晶体170mg，产率52%。ESI-H腿S(m/z):计算值326.1055，实验值326.1089。'HNMR(d6-DMSO，400MHz):S(ppm):2.31(s，1H)，4.89(s，NC//2,2H)，6.96(d,J=7.6Hz，1H),7.07(d,J=7.2Hz，1H)，7.22(d,J=8.8Hz，2H),7.38(t,J产8.0Hz,J2=7.6Hz，1H)，7.46(d,J=8.4Hz，1H),7.51(t，J广7,2Hz，J2=8.4Hz，1H)，7'89(d，J=8.0Hz，1H),8.31(d,J=8.4Hz，2H)，8.5(s,0//，1H)。实施例82-[(l-炔丙基-苯并[c,d]吲哚)-2(1H)-叉]丙二酸二甲酯(衍生物8)的合成(1)1.69g萘内酰胺(O.Olmol)、1.32g丙二酸二甲脂(O.Olmol)加入到25mL两口瓶中，加入15mL甲苯，磁力搅拌下加热到120°C。向反应体系中逐滴滴加l.lmLPOCl3，恒温反应4h后，向反应体系加入2mL甲醇中，冷却后，直接抽滤，用大量甲醇洗，水洗，得到棕色固体粗品。真空干燥后，柱层析法对粗品进行分离，得到黄色晶体1.55g，产率54%。<image>imageseeoriginaldocumentpage9</image>(2)步骤(1)中所得中间体0.283g(lmmol)溶入10mLDMF，加入0.067gNaOCH3(1.2mmol)，磁力搅拌下升温至IO(TC后，滴加lmL溴乙炔，反应2h。将冷却的反应液倾入150mL冰水中，抽滤，真空干燥得到粗品。柱层析法纯化，得到黄色晶体0.2g，产率63%，熔点257.6°C。'HNMR(d6陽DMSO，400MHz):S(ppm):1.88(s,1H),3.75(s，NCf/2，2H)，6.58(d,J=7.8Hz，1H)，7.15(t，J产6.8Hz,J2=6.3Hz，1H),7.17(d，J=6.3Hz，1H)，7.52(d,J=7.2Hz，1H)，7.45(t，K.2Hz,J产7.6Hz,1H)，7.63(d,J-7.6Hz，1H)，4.76(s,OCtt，6H)。ESI-HRMS(m/z):计算值321.1001,实验值321.1045。2-{[2-(N，N'-二甲基-乙二胺)-乙基-苯并[c,d][i引哚]-2(1H)-叉}丙二腈(衍生物9)、2-{[2-(N，N，-二乙基-乙二胺)-乙基-苯并["(1]吲哚]-2(1H)-叉}丙二腈(衍生物10)、2-[(2-丁胺-乙基-苯并[c,d]吲哚)陽2(m)-叉]丙二腈(衍生物ll)、2匿[(2-哌嗪-乙基-苯并[c,d]吲哚)-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物12)的合成取0.324g衍生物2(lmmol)溶入10mL乙腈中，加入相应的胺2mmo1和2mL三乙胺，6(TC回流，薄层色谱跟踪反应至完全，一般需要20-30h。反应完后，将冷却的反应液倒入150mL冰水中，用二氯甲垸萃取，有机相用无水MgS04干燥后旋蒸得到粗品。真空干燥后，粗品经过柱层析法纯化，得到相应的纯目标衍生物。衍生物9:'HNMR(d6-DMSO,400MHz):5(ppm):2.31(s,NC私，6H),2.52(t,NCH2C//2N，2H)，2.70(m，NCftCHzN,2H)，4.0(m，N/f，1H),2.82(m，NCILCftN,2H),3.22(t，NCffiCILN，2H)，7.32(d,J=7.6Hz，1H)，7.10(t，Jf7.6Hz，J2=7.6Hz，1H)，7.18(d，J=8.0Hz，1H)，7.34(d,J=8.8Hz，1H)，7.17(t，J产7.6Hz，J2=8.0Hz，1H)，7.75(d,J=8.4Hz，1H)。ESI-HRMS(nVz):计算值331.1797，实验值331.1763。衍生物10:ESI-HRMS(359.2145m/z)，衍生物ll:ESI-HRMS(316.1662m/z)，衍生物12:ESI-HRMS(329.168m/z)。实施例910实施例102-[6-氯-苯并[c,d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物14)的合成(1)将1.69g萘内酰胺(O.Olmol)完全溶于25mL乙酸，升温至50°C，将0.8mLSO2Cl2(0.01mol)缓慢滴加至反应液，反应体系温度升高，突然变黄生成大量固体，继续搅拌0.5h，直接抽滤，干燥的亮黄色固体1.90g,产率94%。Cl(2)实验方法同衍生物l的步骤(1)，产率78%。NCClCl14衍生物12:ESI-HRMS(251.027m/z),熔点〉30(TC。实施例112-[6-溴-苯并[c,d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物15)的合成(1)1.69g萘内酰胺(O.Olmol)溶于20mLl，2-二氯乙垸。取0.51mL液溴(O.Olmol)溶于10mLl,2-二氯乙烷。将此Br2-ClCH2CH2Cl体系滴加至反应体系，缓慢升温至50'C，反应3h。冷却，静置，直接抽滤，得到黄色固体2.05g，产率83%，熔点254.9°C,Br2>(2)实验方法同衍生物l的步骤(1)，产率82。/(uCNCH2C、P0Cl3,甲苯^MR(d6-DMSO，400MHz):S(ppm):7.77(d,J:7.6Hz,1H),7.92(t,J产7.6Hz，J产8.4Hz，1H)，8.60(d，J=8.0Hz，1H),8.29(d，J=8.4Hz，1H),7.03(d,J=8.0Hz,1H)，9.88(s,N//，1H)。ESI-HRMS(m/z):计算值297.9745，实验值297.9711。实施例122-[6-氰基-苯并[c,d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物16)的合成(l)将衍生物15合成步骤(l)所得中间体6-溴-l，8-萘内酰胺1.24g(5mmol)溶于15mLN-甲基吡咯垸酮(NMP)，搅拌下加入0.627g氰化亚铜(7mmo1)，恒温130'C反应4h。反应液冷却后倾入200mL冰水中，抽滤，用氨水洗掉淡绿色，干燥得到黄色固体0.91g，产率94%。CuCNN-甲基吡咯烷酮(2)实验方法同衍生物l的步骤(1)，产率75%。CNCH2CNPOCl3,甲苯—'HNMR(d6-DMSO，400MHz):S(ppm):7.82(d,J=7.6Hz，1H)，7.99(t，J,=7.6Hz，J尸8.4Hz，1H),8.63(d，J=7.6Hz，1H),8.34(d，J=8.4Hz，1H),7.12(d,J=7.6Hz，1H)，9.95(s，N仏1H)。ESI-HRMS(m/z):计算值242.0592，实验值242.0574。实施例132-[6-硝基-苯并[c,d]吲哚-2(1H)-叉]丙二腈(衍生物17)的合成(1)将1.69g萘内酰胺(O.Olmol)溶于lOmL浓硫酸，冰水浴使温度控制低于l(TC，搅拌均匀后，向其滴加2.4mL浓硝酸，溶液颜色变浅，反应3h后，将反应液倾入冰水中，析12出黄色固体，抽滤，真空干燥得固体19.0g，产率89%<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>(2)实验方法同衍生物l的步骤(1)，产率78%<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>ESI-HRMS(m/z):计算值262.0491，实验值262.0434。实施例14(E)-^[6-硝基-苯并[￡;,d]吲哚-2(m)-叉]-4-硝基苯胺(衍生物19)的合成取衍生物7合成歩骤(1)所得中间体6-硝基-l，8-萘内酰胺，实验操作如衍生物4合成步骤(1)，产率72%。ESI-HRMS(m/z):计算值334.0702,实验值334.0775。(E)-1^-[6-氰基-苯并吲哚-2(1H)-叉]-4-硝基苯胺(衍生物20)的合成取衍生物16合成步骤(1)所得中间体6-氰基-l，8-萘内酰胺，实验操作如衍生物4合成步骤(1)，产率68%。ESI-HRMS(m/z):计算值314.0804，实验值314.0844。'HNMR(d6-DMSO,400MHz):S(ppm):4.31(s，1H),6.56(d,J=7.2Hz，1H),7.67(d，J=7.2Hz，1H)，7.28(d，J=8.8Hz，2H),7.50(d,J=8.4Hz，1H)，7.57(t，J尸7.6Hz，J2=8.4Hz，1H)，7.85(d,J=8.0Hz，1H)，8.41(d，J=8.8Hz，2H)。实施例16实施例15测定衍生物的体外抑制肿瘤细胞生长活性用四氮唑盐(microculturetetrozolium,MTT)还原法对7721人体肝癌细胞、MCF-7人体乳腺癌细胞、Hela人体宫颈癌细胞和BGC-823人体胃癌细胞进行体外抑制试验。四氮唑盐(MTT)还原法的具体操作是按不同肿瘤生长速率，将一定数量处于对数生长期的肿瘤细胞90^1/孔接种于％孔微量培养板内，培养24h后加入药液10W/孔，对每个细胞株，每个浓度均为三个复孔。另设无细胞调零孔。如果药物有颜色要做相应药物浓度无细胞调零孔。肿瘤细胞在37。C、5%(:02条件下培养48小时后，力nMTT(Sigma)液5mg/ml用生理盐水配制20pl/孔继续培养4小时后，加入三联液nO。/。SDS-5。/。异丁醇-0.01mol/lHCl)50-孔，于CCb培养箱中过夜。然后用酶标仪测OD570值。按下列公式计算被测物对癌细胞生长的抑制率肿瘤抑制率=(对照组OD值-治疗组OD值)/对照组OD值xi00%从列表数据可以看出，衍生物3、4、9、19表现出良好的抑制肿瘤细胞增殖活性，衍生物7对7721人体肝癌细胞、衍生物11对MCF-7人体乳腺癌细胞都呈现选择性地增殖抑制作用。表1.衍生物对7721人体肝癌细胞的生长抑制率1010.10.01衍生物138.4514.9812.616.54衍生物210.647.793.810衍生物359.2442.2833.1625.86衍生物573.8155.126.443.88衍生物673.5155.142.6536.40衍生物780.0768.5532.9115.89衍生物867.6253.9429.029.76衍生物939.475.613,902.22衍生物1035.1721.2221.293.63衍生物1139.3233.0223.0520.14衍生物1239.0724.5520.4112.89衍生物1341.0528.7410.207.04衍生物1443.5929.2818.458.75衍生物1637.6128.5524.2211.81衍生物1954.7721.5416,877.10表2.衍生物对MCF-7人体乳腺癌细胞的生长抑制率0.0114<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>衍生物126.8712.528.042.44衍生物229.2528.2421.0217.55衍生物336.5933.5722.9221.77衍生物536.1626.9915.5814.91衍生物643.6620.3316,1910.25衍生物752.6236.2535.3323.23衍生物833.659,372.520衍生物941.7027.8727.1426.85衍生物1024.7030.6113.318.68衍生物1186.6421.717.960衍生物1339.5424.5323.5217.37衍生物1410.232.710.230衍生物1545.0234.5513.692.42衍生物1632.069.1320.2511.74衍生物1993.0235.01001权利要求1、一类萘内酰胺衍生物，其特征在于该类衍生物具有化学结构通式为其中R1为＝C(CN)2、＝C(COOCH3)2、id="icf0002"file="A2009100122500002C2.tif"wi="36"he="11"top="77"left="87"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>或id="icf0003"file="A2009100122500002C3.tif"wi="40"he="12"top="77"left="129"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>R2为-H、-Cl、-Br、-CN或-NO2；R3为-CH2CH2C≡CH、-CH2CH2Br、-CH2CH2NH2、-CH2CH2NHCH2CH2N(CH3)2、-CH2CH2NHCH2CH2N(CH2CH3)2、-CH2CH2NCH2CH2CH2CH3或id="icf0004"file="A2009100122500002C4.tif"wi="37"he="10"top="113"left="81"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="yes"/>2、据权利要求1所述的一类萘内酰胺衍生物在肿瘤细胞增殖抑制上的应用，其特征在于把所述萘内酰胺衍生物配制成具有不同浓度的药液，用四氮唑盐还原法对7721人体肝癌细胞、MCF-7人体乳腺癌细胞、Hela人体宫颈癌或BGC-823人体胃癌细胞进行试验，方法是按不同肿瘤生长速度，将一定数量处于对数生长期的肿瘤细胞以90^1/孔接种于96孔微量培养板内，培养24h后加入配制好的药液10pl/孔，对每个细胞株，每个浓度均为三个复孔；如果配制好的药液有颜色要做相应药液浓度无细胞调零孔；肿瘤细胞在37°C、5%002条件下培养48小时后，加用生理盐水配制的5mg/ml四氮哇盐液20nl/孔；继续培养4小时后，加入由10。/c)十二烷基磺酸钠-5。/。异丁醇-0.01mol/lHCl配制的三联液50^1/孔，于(202培养箱中过夜；然后用酶标仪测OD570值；按下列公式计算所述萘内酰胺衍生物对癌细胞生长的抑制率肿瘤抑制率=(对照组OD值-治疗组OD值)/对照组OD值x100%。全文摘要一类萘内酰胺衍生物及其在肿瘤细胞增殖抑制上的应用，属于药物化学
技术领域：
。该类萘内酰胺衍生物是以萘内酰胺为母体，分别通过用不同卤代烷烃先将2位羰基与具有活泼亚甲基的化合物进行脱氢缩合，并6位引入不同亲电取代基团，然后将1位亚胺的活泼氢进行取代的合成方法，得到一类具有炔键、氰基、胺基或酰胺结构等高生物学活性基团的衍生物。该类萘内酰胺衍生物对肿瘤细胞增殖抑制的实验，是选用四氮唑盐还原法，针对7721人体肝癌细胞MCF-7人体乳腺癌细胞Hela人体宫颈癌或BGC-823人体胃癌细胞进行，结果表明，该类萘内酰胺衍生物对抑制肿瘤细胞增殖具有良好的活性和选择性。文档编号A61K31/403GK101602707SQ200910012250公开日2009年12月16日申请日期2009年6月23日优先权日2009年6月23日发明者张英利,李晓莲申请人:大连理工大学