左亚叶酸钠及其制备方法及药物组合物的制作方法

专利名称：：左亚叶酸钠及其制备方法及药物组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种制备左亚叶酸钠的方法，通过该方法得到的左亚叶酸钠及稳定的药物组合物，属于药物制剂领域。
背景技术：
：恶性肿瘤目前已成为我国最常见的疾病之一。我国有关部门对70年代至80年代末的统计资料提示，我国城市癌症死亡率为128.03/10万人口，在各类死因中占第二位。据估算，全国每年新发生的癌症病人约160万，每年约有130万人死于癌症，大约每死亡5人中就有1人死于癌症。随着人口老化、城市人口增长、环境恶化，全国癌症的发生与死亡人数将会继续增加。虽然癌症的死亡率较高，但并非不治之症。随着化疗、放疗等治疗手段的发展，癌症患者的五年生存率逐年提高。因此，合理有效地利用各种治疗手段和资源，提高治疗效果，以期达到最佳疗效，无疑是医务工作者的重要课题。当前，化疗是肿瘤综合治疗的主要手段之一，随着新型化疗药和辅助化疗药的不断涌现，如何合理选择和搭配各种抗肿瘤的药物资源，对于提高治愈率，延长患者的生存期，提高其生存质量具有重要的意义。其中活性成分左亚叶酸为较好抗巨幼细胞贫血和肿瘤化疗的辅助用药。左亚叶酸的药理作用与亚叶酸相似，但其用药剂量是亚叶酸的1/2。左亚叶酸不需要被二氢叶酸还原酶还原即可参加利用叶酸盐作为一碳单位来源的反应，且左亚叶酸可以主动或被动地通过细胞膜，左亚叶酸基本作用和叶酸相同，但效果优于叶酸，因为叶酸在肝及骨髓中先变为亚叶酸才能起作用，而左亚叶酸为亚叶酸的活性形式，也具有剌激白细胞生长成熟的作用，能改善巨幼细胞性贫血。左亚叶酸钙由美国惠氏药品公司首先研制成功，94年首先英国上市，并已在意大利、加拿大、日本、南非、芬兰、冰岛等10多个国家上市，其制剂有片剂、水针剂及冻干针剂。左亚叶酸钙具有药效和安全性方面的优势，具有确切的效果，在治疗直肠癌、胃癌等方面具有一定疗效。左亚叶酸钙中左亚叶酸为活性成分，由于钙离子没有药理作用，对左亚叶酸的活性没有帮助，并且左亚叶酸钙需缓慢滴注，避免血浆中过高的钙离子浓度而引起的不必要副作用。而左亚叶酸钠的溶解性优于左亚叶酸钙，其溶液的兼容性也优于左亚叶酸钙。因为左亚叶酸钠的药效和安全性明显优于亚叶酸钠和左亚叶酸钙，所以用于临床更安全，更有效。公开号为CN1559412的中国专利在2005年1月5日公开了亚叶酸钠冻干粉针剂及其制备方法，公开号为CN101229167的中国专利公开了药物左亚叶酸钠的制备方法和制备治疗肿瘤药物中的应用。在公开号为CN1456561的中国专利申请中2003年11月19日公开了左亚叶酸及其钙盐的制备方法，其制备方法是将混旋的亚叶酸及其钙盐溶解后上柱，再用水、有机溶剂或P朋.0-11.0的缓冲溶液及其混合溶液作为洗脱剂进行冲洗，收集左亚叶酸及钙盐含量大于80%的溶液，调节pH值为7.0，加入乙醇析出左亚叶酸及左亚叶酸钙，再用水重结晶1_3次，得到99%以上的左亚叶酸及左亚叶酸钙。通过这种方法得到的左旋亚叶酸的光学纯度高，但是分离设备复杂，分离成本高。
发明内容本发明的一目的是提供一种制备左亚叶酸钠的方法，左亚叶酸钠的纯度可以达到98.5%-99.9%。本发明的另一目的提供了一种通过本发明制备方法得到的左亚叶酸钠，所述左亚叶酸钠的光学纯度为98.5%-99.9%。本发明的再一目的提供了一种注射用的左亚叶酸钠药物组合物，该药物组合物以左亚叶酸钠为活性成分，具有很好的稳定性。本发明一方面提供了一种制备左亚叶酸钠的方法，所述的左亚叶酸钠的光学纯度为98.5%-99.9%，该方法包括以下步骤a.首先将左亚叶酸钙加入水中，接着将左亚叶酸钙水溶液加热到50-6(TC;b.用无机酸调节加热的左亚叶酸钙水溶液的pH值为1-2，并在0-25t:冷却；c.将步骤b得到的冷却溶液在冷却温度下放置l-24小时，从溶液中析出左亚叶酸晶体，过滤，分别用水和有机醇洗涤左亚叶酸晶体；d.将步骤c洗涤得到的左亚叶酸晶体加入钠的碱性水溶液中，并向该溶液中加入有机醇，去除有机醇和水，室温下，析出晶体，过滤，干燥晶体得到所述的左亚叶酸钠。左亚叶酸钙可以从商业上购买，也可以按照
背景技术：
和本发明中公开的方法制备得到。将左亚叶酸f丐水溶液加热到50-6(TC，用无机酸调节加热的左亚叶酸^水溶液的pH值为l-2，并在0-25t:冷却以及在冷却温度下将冷却溶液放置l-24小时，采用该操作的原因是左亚叶酸钙在水中的溶解性不好，用无机酸调节pH值并放置后，从溶液中析出的常常是左亚叶酸和左亚叶酸钙的混和物，影响了左亚叶酸的收率，所以本发明中严格控制左亚叶酸钙的水溶液的加热温度，无机酸调节水溶液的pH值、冷却温度和冷却温度下放置时间，从而提高溶液中析出的左亚叶酸晶体的光学纯度和左亚叶酸晶体的收率。此外，本发明制备的左亚叶酸钠的结构确证图谱见附图1、附图2、附图3、附图4、附图5。优选地，步骤a中所述左亚叶酸钙的光学纯度为98.5-99.9%。优选地，步骤b得到的冷却溶液中左亚叶酸的浓度为0.l-2mo1/1。此浓度范围的左亚叶酸在冷却条件下析出晶体的收率最大，达到70-85%。优选地，步骤b中的所述的无机酸选自盐酸、稀硫酸和磷酸中的一种。优选地，步骤b中所述的无机酸为盐酸。优选地，步骤d中所述钠的碱性水溶液的浓度为0.5-5mo1/1，并且左亚叶酸晶体溶解于钠的碱性水溶液后得到的溶液的pH值为8-12，所述的钠的碱性溶液为NaOH水溶液或乙醇钠的水溶液。控制步骤d中钠的碱性水溶液的摩尔浓度的目的是得到的左亚叶酸钠的收率最高，达到90%，光学纯度最高，达到99%。优选地，所述的有机醇为乙醇、甲醇或异丙醇，并且步骤d中有机醇和左亚叶酸晶体的体积比为5-20:1。优选地，所述的左亚叶酸f丐是通过以下方法得到的将混旋亚叶酸f丐溶解于55-6(TC的水中，向混旋的亚叶酸f丐水溶液中加入亚叶酸f丐0.5-3倍摩尔数的CaCl2搅拌溶解，用氨水调节PH值8-12，室温冷却，放置2-5小时，过滤，干燥，制得光学纯度为80%左亚叶酸钙I，再将左亚叶酸钙I溶解于55-6(TC水中，向左亚叶酸钙I的水溶液加入CaCl2，100-105t:下回流，用10-30X氢氧化钠溶液调节pH值7-9，室温冷却，放置1_24小时，过5滤，干燥，得到光学纯度为98.5-99.9%的左亚叶酸钙。本发明另一方面还提供了一种左亚叶酸钠，所述的左亚叶酸钠通过本发明的制备方法得到，所述左亚叶酸钠的光学纯度为98.5-99.9%。本发明再一方面提供了一种注射用的左亚叶酸钠药物组合物，该药物组合物中含有光学纯度为98.5-99.9%的左亚叶酸钠、pH值调节剂和稳定剂，所述的稳定剂选自精氨酸、葡甲胺、泊洛沙姆、卡波姆、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、磷酸二氢钠、十二烷基硫酸钠和三羟甲基氨基甲烷中的一种或几种。本申请的发明人发现含有左亚叶酸钠的药物组合物在储存中稳定性差、容易出现可见异物，并且随着储存时间的增长，注射用的药物组合物会发生渗透压不合格的现象，从而影响了药物的使用安全性。因此，为了提高药物的安全性，本申请发明人经过屡次实验，找到了上述用于左亚叶酸钠药物组合物的稳定剂，解决了随着储存时间增长，药物安全性降低的问题。优选地，所述的注射用的左亚叶酸钠药物组合物为冻干粉针剂、注射液或输液剂。优选地，所述的左亚叶酸钠药物组合物冻干粉针剂中含有其总重量0.1_49%的左亚叶酸钠、50-90%的水溶性填充剂、0.01-10X的pH值调节剂、0.001-2%的稳定剂和余量的渗透压调节剂。将冻干粉针剂中的左亚叶酸钠、水溶性填充剂、pH值调节剂、稳定剂和渗透压调节剂的范围控制在上述范围的目的是得到的左亚叶酸钠药物组合物冻干粉针剂具有很好的储存稳定性。优选地，所述左亚叶酸钠药物组合物冻干粉针剂中含有其总重量10-30%的左亚叶酸钠。优选地，所述的左亚叶酸钠药物组合物注射液中含有其总重量0.1-20%的左亚叶酸钠、0.01-10%的pH值调节剂、0.001-2%的稳定剂、0.1-0.9%的渗透压调节剂和余量的注射用水。将左亚叶酸钠、pH值调节剂、稳定剂和渗透压调节剂的范围控制在上述范围的目的是得到的左亚叶酸钠药物组合物注射液具有很好的储存稳定性。优选地，所述的左亚叶酸钠药物组合物的输液剂中含有其总重量0.01-2%的左亚叶酸钠、0.01-10%的pH值调节剂、0.001-2%的稳定剂、0.1-0.9%的渗透压调节剂和余量的注射用水。更优选地，所述的稳定剂为精氨酸、三羟甲基氨基甲烷或磷酸二氢钠。优选地，所述的pH值调节剂为生理上可接受的酸、碱和盐中的一种或几种。更优选地，生理上可接受的酸选自枸橼酸、磷酸和盐酸中的一种或几种，生理上可接受的碱选自氢氧化钾和氢氧化钠中的一种或两种，生理上可接受的盐选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸铵、碳酸氢钠、碳酸氢钾和碳酸氢铵中的一种或几种。优选地，所述的水溶性填充剂选自甘露醇、山梨醇、聚乙二醇、吐温、葡萄糖、木糖醇、乳糖和半乳糖中的一种或几种。优选地，所述药物组合物在水溶液状态下的pH值为7-9。本发明再一方面提供了一种左亚叶酸钠药物组合物冻干粉针剂的制备方法，称量左亚叶酸钠、水溶性填充剂、稳定剂和渗透压调节剂溶解于注射用水中，用pH值调节剂将PH值调节到7-9，加入活性炭脱色，在20-3(TC下搅拌10-60分钟，脱炭，除菌，在-2(TC_201:冷冻干燥，制得冻干粉针剂。与现有技术不同的是本发明以左亚叶酸钙为原料通过结晶法得到了左亚叶酸，接着以左亚叶酸为原料，通过中和、结晶的方法得到了左亚叶酸钠。在由左亚叶酸钙制备左亚叶酸的过程中，本发明方法特别控制了左亚叶酸钙水溶液的加热温度，从而促进了左亚叶酸钙的溶解。使用无机酸调节pH值、控制冷却结晶的温度和结晶的时间，保证得到左亚叶酸的光学纯度可以达到98.5-99.9%，左亚叶酸相对于左亚叶酸钙的收率达到70-85%;在由左亚叶酸制备左亚叶酸钠的过程中，本发明方法特别控制了钠的碱性水溶液和有机醇的加入量，从而控制左亚叶酸钠的光学纯度为98.5-99.9%，左亚叶酸钠相对于左亚叶酸钙的收率达到80-95%。本发明提供了适合临床治疗巨幼细胞贫血和抗肿瘤病辅助治疗要求的左亚叶酸钠的药物组合物，并以左亚叶酸钠为活性成分，发明了稳定的注射给药的药物组合物，尤其是静脉注射给药的药物组合物，提供了临床上的一种治疗手段。注射用的左亚叶酸钠药物组合物提高了现有的左亚叶酸钠注射液中左亚叶酸钠的光学纯度和药物组合物的稳定性，本发明制备的左亚叶酸钠是通过左亚叶酸钙得到的，制备方法简单易行，成本低。同时由于采用本发明方法制备的左亚叶酸钠化学性质稳定，旋光体稳定，有关物质稳定，重复性好，所以由该活性物质制备的注射用的药物组合物在放置过程中稳定，单个杂质小于0.4%，pH值更稳定，用于静脉给药安全性更高，疗效更好。本发明提供的左亚叶酸钠的药物组合物，其中的活性成分是左亚叶酸钠，辅料包含PH调节剂和稳定剂，辅料还可以包含注射用水、渗透压调节剂和水溶性填充剂，其中所述的药物组合物制剂包括冻干粉针剂、注射液和输液剂。在所述的左亚叶酸钠的药物组合物制剂中a.冻干粉针剂中，左亚叶酸钠活性成分占总量的重量百分比为0.1_49%，优选10-30%。b.注射液中，左亚叶酸钠活性成分的浓度为lmg/ml-200mg/ml，优选20-lOOmg/ml，包括lml、2ml、4ml、9ml和18ml规格。c.输液剂中药物的浓度为O.lmg/ml-20mg/ml，包括50ml、100ml、250ml的规格，与氯化钠、葡萄糖的一种或几种组成的复方输液剂。1.本发明的左亚叶酸钠药物组合物冻干粉针剂的优选配方及制备方法如下组成以下组成均为重量百分比(1)冻干粉针剂左亚叶酸钠0.1%-49%水溶性填充剂50%-90%pH调节剂0.01%-10%稳定剂0.001%-2%渗透压调节剂0.1%-0.9%制备方法取如上配方的左亚叶酸钠、水溶性填充剂、pH调节剂、稳定剂和渗透压调节剂，加入注射用水适量搅拌使其溶解，调pH值至7-9，加水至全量，加入0.1-0.5%活性炭，在20-3(TC下搅拌10-60分钟，脱炭，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液进行分装，采用冷冻干燥法，制得淡黄色疏松块状物，封口即得。2.本发明的左亚叶酸钠药物组合物注射液的优选配方及制备方法如下以下组成均为重量百分比0.1-20%的左亚叶酸钠、0.01-10X的pH值调节剂、0.001-2%的稳定剂、0.1-0.9%的渗透压调节剂和余』左亚叶酸钠pH调节剂稳定剂渗透压调节剂注射用水:的注射用水。0.1%-20.0%0.01%-10%0.001%-2%0.1%-0.9%制备方法取左亚叶酸钠和水溶性填充剂、pH调节剂、稳定剂、渗透压调节剂等，加入注射用水适量，调节pH值至7-9使其溶解，加水至全量，加入0.1-0.5%活性炭，在20-3(TC下搅拌10-60分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌、灌封即得。3.本发明的左亚叶酸钠药物组合物输液剂的配方及制备方法如下以下组成均:百分比左亚叶酸钠0.01%-2%pH调节剂0.01%-10%稳定剂0.001%-2%渗透压调节剂0.1%-0.9%注射用水余量制备方法取左亚叶酸钠、pH调节剂、稳定剂和渗透压调节剂，加入注射用水适量搅拌使其溶解，调节pH值至7-9，加入0.1-0.5%活性炭，在20-3(TC下搅拌10-60分钟，脱炭，加水至全量，采用微孔滤膜过滤除菌，灌封、包装。按照以上配方得到的左亚叶酸钠的药物组合物，包括冻干粉针剂、注射液和输液剂在(TC_81:和室温放置5天、10天进行可见异物、渗透压检查考察，与0天比较结果如下表1本发明的药物组合物样品可见异物考察结果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表2本发明的药物组合物样品渗透压考察结果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表3本发明的药物组合物样品可见异物考察结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表4本发明的药物组合物样品渗透压考察结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>此外，我们还对本发明的药物组合物样品室温长期放置的稳定性进行了考察，结果如下表5本发明的药物组合物样品可见异物考察结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>从表1到表6可以看出，本发明的左亚叶酸钠药物组合物的稳定性好，所以用于静脉给药安全性更高，疗效更好。图1表示本发明实施例3获得的左亚叶酸钠的紫外扫描图。图2表示本发明实施例3获得的左亚叶酸钠的高效液相色谱图。图3表示本发明实施例3获得的左亚叶酸钠的核磁共振氢谱图。图4表示本发明实施例3获得的左亚叶酸钠的差热分析图。图5表示本发明实施例3获得的左亚叶酸钠的红外光谱鉴别图。图6表示本发明实施例3获得的左亚叶酸钠的光学纯度色谱图。具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步的说明，实施例仅为解释性的说明，决不意味着它以任何方式限制本发明的范围。实施例1左亚叶酸钠的制备方法(1)左亚叶酸钙的制备混旋亚叶酸钙加入水中，加热搅拌溶解，加入CaCl2，搅拌溶解，用氨水调节pH值8-12，室温冷却后，析出大固体，放置2-5h时间后，过滤，干燥，制得光学纯度为80%左亚叶酸钙。再加水，加入CaCl2，加热回流，用10-30X质量浓度的氢氧化钠调节pH值7-9，溶解，室温冷却，放置一定时间，过滤，干燥，如此操作二次，制得光学纯度为99%的左亚叶酸牵丐。[oogo](2)左亚叶酸钠的制备专利CN88102709.X中简单介绍采用离子交换的方法制备左亚叶酸钠，本方法是通过试验获得左亚叶酸钠，并通过核磁，差热等仪器进行了结构的确证。具体制备方法如下方法一、将光学纯度为99%的左亚叶酸钙加入水中，加热后，滴加5N盐酸，用盐酸调节pH值为l-2，冰浴冷却，放置过夜，共计12小时，水层逐渐析出白色固体，过滤，用少量水洗，乙醇洗，干燥，得左亚叶酸晶体。得到的左亚叶酸晶体的光学纯度为99.3%，左亚叶酸晶体相对于左亚叶酸钙的收率为73.4%。将左亚叶酸晶体加入到1_10%的氢氧化钠水溶液中，再加95%乙醇，搅拌溶解，减压浓縮，析出浅黄色固体，过滤，干燥，得左亚叶酸钠，得到的左亚叶酸钠的光学纯度为99.3%，相对于左亚叶酸收率达到90%。方法二、将光学纯度为99%的左亚叶酸钙加入水中，加热溶解后，通过强碱性离子交换树脂，收集馏分，水层浓縮至尽，得黄色固体，加入乙醇洗，干燥，得左亚叶酸钠。实施例2左亚叶酸钙的制备将10g的混旋亚叶酸钙加入120ml的水中，加热至60°C，搅拌溶解，加入20g的CaC^，搅拌溶解，用氨水调节pH值至10.5，室温冷却，析出大量固体，放置3小时，过滤，干燥，制得4.7g光学纯度为80%的左亚叶酸钙。将4.7g80X的左亚叶酸钙加入水中，加入8g的CaCl2，加热回流，用20%的氢氧化钠调节pH值到8.0，溶解，室温冷却，放置4小时，过滤，干燥，制得3.5g光学纯度为95%的左亚叶酸钙。将3.5g95%的左亚叶酸钙加入水中，加入5g的CaCl2，加热回流，用20%的氢氧化钠调节pH值到8.0，溶解，室温冷却，放置4小时，过滤，干燥，制得3.0g光学纯度为99%的左亚叶酸钙，光学收率60%。实施例3左亚叶酸钠的制备将5g的光学纯度为99%的左亚叶酸钙加入50ml的水中，加热至5(TC，滴加5N盐酸，调节pH值至1-2，冰浴0-5t:冷却，在该温度下放置过夜，共1小时，水层逐渐析出白色固体，过滤，用少量水洗，乙醇洗，干燥，得左亚叶酸3.4g，加入到20ml的5%的氢氧化钠水溶液中，搅拌，固体逐渐溶解，溶液颜色为棕黄色，减压浓縮至干，加入95%乙醇15ml，搅拌，逐渐转变为黄色固体，过滤，干燥，得左亚叶酸钠3.3g。左亚叶酸钠的鉴定图1表示获得的左亚叶酸钠的紫外扫描图，图中的1峰表示苯环及其取代基酰胺基团，2峰表示嘧啶基团。图2表示获得的左亚叶酸钠的高效液相色谱图，保留时间为11.967分钟的是左亚叶酸钠，与标准品对照，左亚叶酸钠的纯度达到98.5%以上。图3表示获得的左亚叶酸钠的核磁共振氢谱图，1.7-2.5表示的4个H为CH2基团；3.0_3.7表示的4个H为与氨基相连CH2基团；4.1、4.9表示的2个H为与N相连的CH基团；4.5表示1个活泼H;6.6-6.7表示的2个H为与氨基端相连的苯环H;7.5_7.8表示的2个H为与羰基端相连的苯环H;8.6表示的1个H为醛基H。图4表示获得的左亚叶酸钠的差热分析图，在13.5-17分钟出的峰表示熔点为201°C-205°〇，在21.5-23.5分钟出的峰表示药物完全分解温度276°C-280°C。图5表示获得的左亚叶酸钠的红外光谱鉴别图，在波数为1329cm一1、1280cm—1出的峰为苯环基团，波数为1607cm—\1638cm—1出的峰为羰基团，波数为2968cm—1出的峰为甲基基团，波数为3393cm—1出的峰为羟基和氨基团。图6表示获得的左亚叶酸钠的光学纯度色谱图。从以上六幅图可以看出通过本发明的方法可以获得光学纯度为98.5%以上的左亚叶酸钠。实施例4左亚叶酸钠的制备将5g的光学纯度为99%的左亚叶酸钙加入50ml的水中，加热至5(TC，滴加5N盐酸，调节pH值至l-2，冰浴0-5t:冷却，在该温度下放置过夜，共12小时，水层逐渐析出白色固体，过滤，用少量水洗，乙醇洗，干燥，得左亚叶酸3.4g，加入95%乙醇15ml，搅拌，加入1.5g的乙醇钠，搅拌回流，固体颜色逐渐转变为黄色固体，室温冷却，过滤，干燥，得左亚叶酸钠3.2g，光学纯度达到99.3%。实施例5左亚叶酸钠的制备将5g的光学纯度为99X的左亚叶酸钙加入50ml的水中，加热至50°C，溶解，通过强碱性离子交换树脂，收集馏分，水层浓縮至尽，得黄色固体，加入乙醇洗，干燥，得左亚叶酸钠2.8g。实施例6取实施例3左亚叶酸钠3g，置于容器中，加稳定剂泊洛沙姆0.25g，注射用水80ml，搅拌使溶解，加入甘露醇25g、乳糖10g、氯化钠lg搅拌使溶解，加0.lmol/L的氢氧化钠适量调节pH至7-9.0，补加水至120ml。加入0.5g活性碳，在20-3(TC下搅拌20分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液按每支1ml进行分装，预冻2小时后，冷冻下减压干燥12小时，至样品温度到室温后，再干燥5小时，制得淡黄色疏松块状物，封口即得左亚叶酸钠冻干粉针。实施例7取实施例3左亚叶酸钠3g，置于容器中，加稳定剂卡伯姆0.3g，注射用水25ml，搅拌使溶解，加入甘露醇10g、山梨醇5g、氯化钠0.27g，搅拌使溶解，以0.lmol/L的盐酸适量调节pH至7.0-9.0，补加水至30ml。加入0.lg活性碳，在25"下搅拌20分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液按每支2ml进行分装，预冻2小时后，冷冻下减压干燥18小时，至样品温度到室温后，再干燥5小时，制得淡黄色疏松块状物，封口即得左亚叶酸钠冻干粉针。实施例8取实施例4左亚叶酸钠2.5g，置于容器中，加稳定剂十二烷基硫酸钠0.05g，加注射用水40ml，加入甘露醇30g，半乳糖20g搅拌使溶解，以lmol/L的盐酸或lmol/L氢氧化钠适量调节pH至7.0-9.0，补加水至50ml。加入0.lg活性碳，在25。C下搅拌30分钟，脱碳，采用微孔滤膜过滤除菌，滤液按每支lml进行分装，预冻2小时后，冷冻下减压干燥15小时，至样品温度到室温后，再干燥5小时，制得淡黄色疏松块状物，封口即得左亚叶酸钠冻干粉针。实施例9取实施例2左亚叶酸钠5g，精氨酸lg，加入注射用水450ml中，搅拌溶解，加入2%的碳酸氢钠适量调节PH为7-9，加入2.5g活性炭，室温搅拌吸附30分钟，除炭，补加水至500ml，精滤、以每支lml灌封、灭菌，即得左亚叶酸钠注射液。实施例10取实施例3左亚叶酸钠6g，加入到已溶解0.5g三羟甲基氨基甲烷的注射用水50ml中，加入0.lmol/L的盐酸或0.lmol/L的氢氧化钠溶液适量调节pH为7_9.O，补加水至60ml，加入0.18g活性炭，室温搅拌吸附30分钟，除炭，精滤，以每支2ml灌封、灭菌，即得左亚叶酸钠注射液。实施例11取实施例4左亚叶酸钠3g，加入注射用水50ml中，加0.lg磷酸二氢钠，搅拌使溶解，加入lmol/L的盐酸或氢氧化钠溶液适量调节pH为8.0-9.O，补加注射用水至60ml，加入0.15g活性炭，搅拌吸附30分钟，除炭、采用微孔滤膜过滤除菌，以每支lml灌封，即得左亚叶酸钠注射液。实施例12取实施例4左亚叶酸钠3g，加入注射用水50ml中，加0.Olg焦亚硫酸钠，搅拌使溶解，加入0.lmol/L的盐酸或氢氧化钠溶液适量调节pH为7.0-8.O，补加注射用水至60ml，加入0.15g活性炭，搅拌吸附30分钟，除炭、精滤、以每支2ml灌封、灭菌，即得左亚叶酸钠注射液。实施例13取实施例4左亚叶酸钠6g，加入注射用水25ml中，加0.05g亚硫酸钠，搅拌使溶解，加入lmol/L的盐酸或氢氧化钠溶液适量调节pH为7.0-9.O，补加注射用水至30ml，加12入0.lg活性炭，搅拌吸附30分钟，除炭、精滤、以每支1ml灌封、灭菌，即得左亚叶酸钠注射液。实施例14取实施例3左亚叶酸钠钠盐2.5g，加入10g磷酸二氢钠和225g氯化钠，再加注射用水20000ml，搅拌使溶解，调节pH为7-9.O，加入25g活性炭，搅拌吸附30分钟，除炭，补加水至25000ml，精滤、灌封每瓶100ml，灭菌，即得左亚叶酸钠氯化钠输液剂。实施例15取实施例4左亚叶酸钠5g，加入500g葡萄糖，lg三羟甲基氨基甲烷，再加注射用水2000ml，搅拌使溶解，调节pH为8.0_9.0，加入10g活性炭，搅拌吸附30分钟，除炭，补加水至5000ml，精滤、灌封每瓶50ml，灭菌，即得左亚叶酸钠葡萄糖输液剂。实施例16取实施例11进行异常毒性检查限值确定取同一性别体重20g小鼠20只，采用实施例ll制备的注射液(规格lml:50mg)，按照常规注射速度尾静脉注射lml/只，注射速度为0.lml/秒，连续观察5天，动物未出现流涎、分泌物增多、体重下降等毒性反应或死亡，表明本品在最大给药剂量下，未出现毒性反应，具有较好的安全性。因此即以该剂量作为检查限值。实施例17取实施例11进行溶血、过敏、剌激试验结果1.溶血采用直接观察法未发现溶血和红细胞凝聚现象，酶标仪检测亦未发现溶血现象。2.过敏全身主动过敏试验中左亚叶酸钠注射液10mg/kg及25mg/kg剂量组豚鼠过敏反应阴性；被动皮肤过敏试验中左亚叶酸钠注射液10mg/kg及25mg/kg剂量组大鼠过敏反应阴性。实验结果表明左亚叶酸钠注射液过敏性试验结果阴性。3.剌激家兔肌肉给予左亚叶酸钠注射液2mg/kg(药物浓度2mg/ml)及5mg/kg(药物浓度25mg/ml)，对肌肉无明显剌激作用；家兔耳缘静脉给予左亚叶酸钠注射液10mg/kg(药物浓度2mg/ml)及25mg/kg(药物浓度10mg/ml)，对血管无明显剌激作用；组织病理学检查左亚叶酸钠注射液对家兔的肌肉和耳缘静脉无明显剌激性，左亚叶酸钠注射液局部剌激试验结果阴性。权利要求一种制备左亚叶酸钠的方法，所述的左亚叶酸钠的光学纯度为98.5-99.9％，该方法包括以下步骤a.首先将左亚叶酸钙加入水中，接着将左亚叶酸钙水溶液加热到50-60℃，优选地，所述左亚叶酸钙的光学纯度为98.5-99.9％；b.用无机酸调节加热的左亚叶酸钙水溶液的pH值为1-2，并在0-25℃冷却；c.将步骤b得到的冷却溶液在冷却温度下放置1-24小时，从溶液中析出左亚叶酸晶体，过滤，分别用水和有机醇洗涤左亚叶酸晶体；d.将步骤c洗涤得到的左亚叶酸晶体加入钠的碱性水溶液中，并向该溶液中加入有机醇，去除有机醇和水，室温下，析出晶体，过滤，干燥晶体得到所述的左亚叶酸钠。2.根据权利要求l所述的方法，其中步骤b得到的冷却溶液中左亚叶酸的浓度为0.l-2mol/l。3.根据权利要求l或2所述的方法，其中步骤b中所述的无机酸选自盐酸、稀硫酸和磷酸中的一种，优选盐酸。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中步骤d中所述的钠的碱性水溶液的浓度为0.5-5mol/l，并且左亚叶酸晶体溶解于钠的碱性水溶液后得到的溶液的pH值为8-12，所述的钠的碱性溶液为NaOH水溶液或乙醇钠的水溶液。5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述的有机醇为乙醇、甲醇或异丙醇，并且步骤d中有机醇和左亚叶酸晶体的体积比为5-20:1。6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述的左亚叶酸钙是通过以下方法得到的将混旋亚叶酸钙溶解于55-6(TC的水中，向混旋的亚叶酸钙水溶液中加入亚叶酸钙0.5-3倍摩尔数的CaCl2，搅拌溶解，用氨水调节pH值8-12，室温冷却，放置2_5小时，过滤，干燥，制得光学纯度为80%左亚叶酸钙I，再将左亚叶酸钙I溶解于55-6(TC水中，向左亚叶酸钙I的水溶液加入CaCl2，100-105C下回流，用10-30%氢氧化钠溶液调节pH值7-9，，室温冷却，放置1-24小时，过滤，干燥，得到光学纯度为98.5-99.9%的左亚叶酸牵丐。7.—种由权利要求1-6中任一项所述方法制备得到的左亚叶酸钠，所述左亚叶酸钠的光学纯度为98.5-99.9%。8.—种注射用的左亚叶酸钠药物组合物，该药物组合物中含有光学纯度为98.5%_99.9%的左亚叶酸钠、pH值调节剂和稳定剂，所述的稳定剂选自精氨酸、葡甲胺、泊洛沙姆、卡波姆、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠、磷酸二氢钠、十二烷基硫酸钠和三羟甲基氨基甲烷中的一种或几种，优选精氨酸、三羟甲基氨基甲烷或磷酸二氢钠，优选地，所述的注射用的左亚叶酸钠药物组合物中还含有水溶性填充剂和渗透压调节剂。9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中所述的注射用的左亚叶酸钠药物组合物为冻干粉针剂、注射液或输液剂。10.根据权利要求8或9所述的药物组合物，其中左亚叶酸钠药物组合物冻干粉针剂中含有其总重量O.1-49%的左亚叶酸钠、50-90%的水溶性填充剂、0.01-10%的pH值调节剂、0.001-2%的稳定剂和余量的渗透压调节剂，优选地，所述左亚叶酸钠药物组合物冻干粉针剂中含有其总重量10-30%的左亚叶酸钠。11.根据权利要求8或9所述的药物组合物，其中左亚叶酸钠药物组合物注射液中含有其总重量O.1-20%的左亚叶酸钠、0.01-10X的pH值调节剂、0.001-2%的稳定剂、·0.1-0.9%的渗透压调节剂和余量的注射用水。12.根据权利要求8或9所述的药物组合物，其中左亚叶酸钠药物组合物的输液剂中含有其总重量0.01-2%的左亚叶酸钠、0.01-10%的pH值调节剂、0.001-2%的稳定剂、0.1-0.9%的渗透压调节剂和余量的注射用水，优选地，所述的稳定剂为精氨酸、三羟甲基氨基甲烷或磷酸二氢钠。13.根据权利要求8-12中任一项所述的药物组合物，其中所述的pH值调节剂为生理上可接受的酸、碱和盐中的一种或几种，优选地，生理上可接受的酸选自枸橼酸、磷酸和盐酸中的一种或几种，生理上可接受的碱选自氢氧化钾和氢氧化钠中的一种或两种，生理上可接受的盐选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸铵、碳酸氢钠、碳酸氢钾和碳酸氢铵中的一种或几种。14.根据权利要求8-13中任一项所述的药物组合物，其中所述的水溶性填充剂选自甘露醇、山梨醇、聚乙二醇、吐温、葡萄糖、木糖醇、乳糖和半乳糖中的一种或几种。15.根据权利要求8-14中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物在水溶液状态下的pH值为7-9。全文摘要本发明提供了一种制备左亚叶酸钠的方法，所述的左亚叶酸钠的光学纯度为98.5％-99.9％，本发明还提供了通过本发明方法制备得到的左亚叶酸钠和左亚叶酸钠药物组合物。通过本发明方法制备的左亚叶酸钠光学纯度达到98.5％以上，得到的左亚叶酸钠药物组合物在放置过程中稳定，单个杂质小于0.4％，pH值更稳定，用于静脉给药安全性更高，疗效更好。文档编号A61K9/19GK101792444SQ20091006780公开日2010年8月4日申请日期2009年2月2日优先权日2009年2月2日发明者任晓文,吴疆,孙歆慧,李祎亮,李鹏旺,邹美香,靳朝东申请人:天津康鸿医药科技发展有限公司