专利名称：：一种柴胡提取物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
：本发明属于一种中药提取物，具体涉及一种柴胡提取物及其制备方法和含有该柴胡提取物的药物组合物以及在制备治疗肝、胆疾病药物上的应用。
背景技术：
：瘀胆型肝炎属中医黄疸范畴，可由多种原因导致，其主要特点是肝内胆汁淤滞。本病发病率高，预后较差，严重影响人们的劳动能力和生活质量。瘀胆型肝炎按其临床表现分为急性和慢性两种类型。急性瘀胆型肝炎一般可自愈，而慢性瘀胆型肝炎如不及时治疗，部分病人将发展为肝硬变，肝衰竭及肝癌。西医认为瘀胆型肝炎的病机是由于胆盐形成和运转不良，使胆汁乳化及排入微细胆管内的水分减少，造成胆汁不易排出，胆汁在微细胆管内形成胆栓而发生胆汁滞留，常用药物有糖皮质激素、苯巴比妥、熊去氧胆酸、胰泌素、强力宁等，但是长期应用会产生较强的副作用。超生理量的糖皮质激素具有抗感染、抗过敏和抑制免疫反应等多种药理作用，常被运用于治疗各类炎症状态。但是不适当的使用或长期大剂量使用可导致多种不良反应和并发症，如库欣综合征，诱发溃疡，骨质疏松，类固醇糖尿病等,甚至危及生命；苯巴比妥单独使用有头晕，嗜睡等后遗症，长期服用可产生耐药性，依赖性和蓄积性中毒，停药后可出现撤药综合征；熊去氧胆酸的不良反应有便秘、腹泻、过敏、头痛等症状；强力宁(Potenline)为甘草酸(甘草甜素)制剂，其主要成分为甘草酸单胺、L-半胱氨酸和甘氨酸，具有退黄、抗炎、抗过敏、保护肝细胞、促进胆红素代谢等多种药理作用，临床用于病毒性肝炎、流行性出血热等疾病的治疗。强力宁长期使用会导致严重过敏反应、低血钾麻痹、消化道麻痹、牙龈出血、泌乳、精神症状等症状。中药治疗瘀胆型肝炎的机制是通过增加肝胆汁流量，促进胆汁分泌和松弛奥狄氏括约肌来实现的。中药能通过多途径多环节多系统多耙点作用，使机体内外环境协调，发挥利胆退黄、保肝、免疫调节、抗炎及抗病毒的作用，基本上4无不良反应，医疗成本相对较低。中药制剂以其疗效确切、能调节整体机能、毒副作用小等优点，被患者广泛接受和应用。但到目前为止，尚未有比较理想的治疗瘀胆型肝炎的中药及天然药物的制剂上市。
发明内容本发明目的在于提供一种柴胡提取物，该提取物对于肝病有很好的治疗效果。本发明第二目的提供上述柴胡提取物的制备方法。本发明第三目的是提供含有上述柴胡提取物的药物组合物。本发明第四目的是提供上述柴胡提取物在治疗肝病上的应用。实现本发明的技术方案如下一种柴胡提取物，按照如下方法制备(1)将柴胡，拉丁文名禾尔为万w;/ewn/附s附"/h'z'^Pavw^^ww57za"ef7!丄"的茎和/或叶干燥粉碎，得柴胡粗粉；加810倍重量的7595。％醇溶液在7585X:中回流提取l3次，每次提取24小时，合并提取液，过滤，回收乙醇并浓縮，浓縮至相对密度为l.O—l.l;(2)向浓縮液中加入810倍体积的水，放置12小时，过滤，得到滤液；(3)将步骤(2)获得的滤液通过DIOI型大孔树脂柱，流速为2-5ml/min，水洗脱，以Molishi反应为阴性判定水洗脱终点；70%乙醇洗脱，收集洗脱液，TLC检测芦丁不再出现来判定终点，回收乙醇，7(TC真空干燥，得到柴胡提取物粉末。所述醇溶液为乙醇溶液。上述柴胡提取物的制备方法，按照如下步骤进行-.(1)3每柴古月，拉丁文名禾尔为5wp/ewn/msm"/z"fTo断ar.i^vi^/oZ/wm5Tza"dK丄/，的茎和/或叶干燥粉碎，得柴胡粗粉；加810倍重量的7595%醇溶液在7585。C中回流提取l3次，每次提取24小时，合并提取液，过滤，回收乙醇并浓縮，浓縮至相对密度为l.O—l.l;(2)向浓縮液中加入810倍体积的水，放置12小时，过滤，得到滤液；(3)将步骤(2)获得的滤液通过D101型大孔树脂柱，流速为2-5ml/min，水洗脱，以Molishi反应为阴性判定水洗脱终点；70%乙醇洗脱，收集洗脱液，TLC检测芦丁不再出现来判定终点，回收乙醇，70。C真空干燥，得到柴胡提取物粉末。含有上述柴胡提取物的药物组合物，所述的药物组合物为有效剂量的柴胡提取物与药剂学上常用辅料混合，制成药剂学上可接受的剂型。本发明的柴胡提取物可以加入制备不同剂型时所需的各种常规辅料，如崩解剂、润滑剂、粘合剂等以常规的中药制剂方法制备成任何一种常用口服剂型，如丸剂、散剂、片剂、胶囊剂、口服液等。所述的药物组合物含有下列重量百分比的组份上述柴胡提取物50-75%;PEG-40015—60%;甘油0.5—25%;吐温801—15%;剂型优选软胶囊。上述柴胡提取物在制备治疗肝病药物上的应用。上述柴胡提取物在制备治疗瘀胆性肝炎、胆囊炎或黄疸型肝炎药物上的应用。上述柴胡提取物药物组合物在制备治疗肝病药物上的应用。上述柴胡提取物药物组合物在制备治疗瘀胆性肝炎、胆囊炎或黄疸型肝炎药物上的应用。上述提取物经下述方法分析可知该提取物中含有的主要黄酮类化合物。(1)提取取柴胡茎和叶部分9.9千克粉碎成粗粉(20目)，10倍量85%乙醇回流两次，各1小时，合并提取液，浓縮至成稀浸膏。稀浸膏依次用石油醚(6090。C)和乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，得浸膏。(2)分离浸膏以聚酰胺柱色谱分离，以水、10%乙醇、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇梯度洗脱，每500ml—瓶收集，聚酰胺薄膜检识，合并成份相近的流份,得到七个溶剂洗脱部分，分别为Fr.I、Fr.II、Fr.IH、Fr.IV、Fr.V、Fr.VI、Fr.W。将Fr.II浓縮，有黄色固体析出，过滤得黄色固体，将过滤后的溶液浓縮得浸膏2.71g，黄色固体以乙醇重结晶，得化合物II(236mg)。浸膏以硅胶柱色谱进一步纯化分离，以氯仿一甲醇一水梯度洗脱，得化合物I(10mg)、化合物II(40mg)，Fr.V以S印hadexLH-20柱色谱分离，用l:l的甲醇一水洗脱，得化合物IV(32mg)和化合物V(22mg)，Fr.VI浓縮，有黄色固体析出，过滤得黄色固体，黄色固体经S印hadexLH-20柱色谱分离，用甲醇洗脱，得化合物III(39mg)和化合物V(10mg)。Fr.VE经S印hadexLH-20柱色谱分离，用甲醇洗脱，得化合物VI(32mg)。本实验从柴胡茎叶中分离得到了六个化合物，鉴定了这六个化合物的结构，它们分别是5,7，4'-三羟基-3'-甲氧基黄酮醇-3-(9-芸香糖苷(I);5,7,3'，4'-四羟基黄酮醇-3-0-芸香糖苷(II);异鼠李素(III);5,7,3'，4'-四羟基黄酮醇-3-O-0t-L-阿拉伯呋喃糖苷(IV);槲皮素(V);虫漆酸(VI)。以上六个化合物皆为首次从该植物中分离得到，其中化合物VI为首次从柴胡属属植物中分离得到，也是从柴胡属植物中第一次分离得到蒽醌类成份。本发明中所述的柴胡，拉丁文名称为S甲/ewi/m5m"/z"Wo/^;ar.尸fl葡/oZ/腦eJZ/，本品系伞形科柴胡属植物，经青海省药品检定所鉴定药材为小叶黑柴胡，外观与北柴胡相似，其根黑褐色，有较稀疏的横纹而与之区别，主要分布于河北、山西、陕西、河南、甘肃、青海、内蒙等省区。小叶黑柴胡为长椭圆形，多弯曲，有的具分枝。长510cm，直径0.20.8cm。表面黑褐色，粗糙，具突起的支根痕。皮孔不明显。根头多具25分枝，顶端有残留的茎基及叶基；下侧具两行呈疣状突起的不定芽。质脆，易折断，断面显片状纤维性或略平坦，皮部浅棕色，木部淡黄色，呈放射状，气微香，味微苦辛。鉴别方法(1)本品横切面木栓层为1040余列细胞，木栓细胞扁平，长径约为短径的4倍。木栓层内侧为35层切向延长的薄壁细胞，有油管510个，断续排列呈一环。韧皮部较窄，其中分泌组织较多，内含黄色油状物。形成层由35层扁小的薄壁细胞组成连续的环或不明显。木质部导管呈放射状排列。木质束较宽，束间组织较窄；木纤维群多分布于木质部的外侧，散在或断续排列成环。本品根茎有髓，近木质部处有油管。本发明具有的优点和有益效果(1)本发明对于瘀胆性肝炎、胆囊炎、黄疸型肝炎等有较好的治疗作用；(2)本发明来源于天然植物中药材，对人对环境无害；(3)本发明制备方法简单，成本低。具体实施例方式实施例1-3为柴胡提取物的制备方法，实施例4-6为本发明药物组合物的软胶囊剂的制备，实施例7为本发明柴胡提取物的药效学实验。实施例1(1)将柴胡(5t/p/ewwwjw〖f/H7『0/,^.Pavm/o/^w577朋"7!丄U的茎和叶3000克干燥粉碎成20目左右，加9倍重量的85%乙醇在85。C中回流提取3次，每次提取3小时，合并提取液，过滤，冋收乙醇并浓縮，浓縮至相对密度为l.O一l.l;(2)向浓縮液中加入9倍体积的水，放置12小时，过滤，得到滤液；(3)将步骤2获得的滤液通过D101型大孔树脂柱，流速为5ml/min，水洗脱，以Molishi反应为阴性判定水洗脱终点；70%乙醇洗脱，收集洗脱液，TLC检测卢丁不再出现来判定终点，回收乙醇，70'C真空干燥，得到柴胡提取物粉末600g。实施例2(1)将柴胡的茎和叶3000g干燥粉碎成20目左右，加8倍重量的95%乙醇在8(TC中回流提取2次，每次提取4小时，合并提取液，过滤，回收乙醇并浓縮，浓縮至相对密度为l.O—l.l;(2)向浓縮液中加入10倍体积的水，放置12小时，过滤，得到滤液；(3)将步骤2获得的滤液通过D101型大孔树脂柱，流速为2ml/min，水洗脱，以Molishi反应为阴性判定水洗脱终点；70%乙醇洗脱，收集洗脱液，TLC检测卢丁不再出现来判定终点，回收乙醇，7(TC真空干燥，得到柴胡提取物粉末459g。实施例3(1)将柴胡的茎和叶3000g干燥粉碎成20目，加10倍重量的75%乙醇在75°C中回流提取2次，每次提取3小时，合并提取液，过滤，回收乙醇并浓縮，浓縮至相对密度为l.O—l.l;(2)向浓縮液中加入8倍体积的水，放置12小时，过滤，得到滤液；(3)将步骤2获得的滤液通过D101型大孔树脂柱，流速为4ml/min，水洗脱，以Molishi反应为阴性判定水洗脱终点；70%乙醇洗脱，收集洗脱液，TLC检测戸丁不再出现来判定终点，回收乙醇，7(TC真空干燥，得到柴胡提取物粉末735g。实施例4本发明药物组合物软胶囊剂的制备取实施例l制得的柴胡提取物447g，PEG-400625.8g、吐温8023g、甘油57.7g混合均匀，制得胶囊内容物；胶皮液由42%明胶、20%甘油、37%水及1%色素亮黑混合制得，在胶体磨中压制成软胶囊。每粒胶囊内容物重0.50g，内容物为棕褐色的粘稠液体，气香，味苦。实施例5本发明药物组合物软胶囊剂的制备取实施例l制的柴胡提取物224g，PEG-400358.4g，吐温80179.2g，甘油4.5g混合均匀，胶皮液制备方法同实施例4，最后在胶体磨中压制成软胶囊。每粒胶囊内容物重O.50g,内容物为棕褐色的粘稠液体，气香，味苦。实施例6本发明药物组合物软胶囊剂的制备取实施例3制的柴胡提取物650g，PEG-400270g，吐温8030g，甘油50g混合均匀，胶皮液制备方法同实施例4，最后在胶体磨中压制成软胶囊。每粒胶囊内容物重0.50g，内容物为棕褐色的粘稠液体，气香，味苦。实施例7本发明柴胡提取物对异硫氰酸-a-萘酯(ANIT)模型大鼠的利胆作用ANIT是一种间接肝毒剂，主要损害肝内胆管上皮细胞，引起毛细管增生及小叶间胆管周围产生炎症，从而造成胆管阻塞，形成明显的胆汁淤积性黄疸，出现高胆红素血症和胆汁分泌减少。1)、受试药物实施例2制备的柴胡提取物；阳性药为华沙利胆丸，德国华沙制药厂，产品编号10500。2)、动物Wister大鼠，270-330g，雄性，II级，购于中国生物制品检定所动物中心。3)、实验方法取Wister大鼠，随机分为空白组，模型组，阳性药组(0.54粒/只/日)，柴胡提取物粉末用量分为两个剂量组，高剂量组0.0324g/只/日，低剂量组0.0162g/只/日，每组8只，受试药物均用水溶解，各组大鼠每日灌胃给药2次，每次lml，连续一周。空白组和模型组给相同体积的生理盐水。灌胃3日后，除空白组外，其余各组动物均腹腔注射4y。ANIT植物油溶液按0.1875ml/100g进行造模，造模后继续按剂量灌胃给药。实验结束前，动物禁食不禁水12小时。末次给药lh后，大鼠以复合麻醉剂(氯胺酮地西泮=1:1)0.25ml/100g麻醉，开腹分离总胆管，于近肝脏端封闭，远肝脏端结扎，在封闭段朝肝脏方向剪一V字型缺口，插入口径约为0.6mm的塑料管，结扎固定，并引出腹壁，胆汁流出后，开始计时，计每小时胆汁流量，结果见表l。按照总胆红素测定试剂盒(购自北京首医临床医学科技中心)操作测定总胆红素(TBIL)值，结果见表2。緒IT诱发的大鼠肝损伤类似人的肝内胆汁淤积病变。由表1和2可以看出，动物肝内胆汁淤积病变已经发生，造模成功。测得数据的T检验结果表明，各组与空白组相比较，有显著性差异(P<0.01)。与模型组相比较，本发明的柴胡提取物有明显的利胆退黄作用，提高大鼠胆汁分泌量，并且能降低胆汁中TBIL的含量。高低剂量相比，高剂量能显著提高大鼠胆汁分泌量。表]本发明柴胡提取物对大鼠胆汁分泌量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>PO.Ol，各组与空白对照组比较，有显著性差异。表2本发明柴胡提取物对大鼠胆汁中TBIL的影响单位g<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>P<0.01，各组与空白组对照，有显著性差异。权利要求1、一种柴胡提取物，其特征在于，按照如下方法制备(1)将柴胡的茎和/或叶干燥粉碎，得柴胡粗粉；加8～10倍重量的75～95％醇溶液在75～85℃中回流提取1～3次，每次提取2～4小时，合并提取液，过滤，回收乙醇并浓缩，浓缩至相对密度为1.0-1.1；(2)向浓缩液中加入8～10倍体积的水，放置12小时，过滤，得到滤液；(3)将步骤(2)获得的滤液通过D101型大孔树脂柱，流速为2-5ml/min，水洗脱，以Molishi反应为阴性判定水洗脱终点；70％乙醇洗脱，收集洗脱液，TLC检测芦丁不再出现来判定终点，回收乙醇，70℃真空干燥，得到柴胡提取物粉末。2、根据权利要求1所述的柴胡提取物，其特征在于，所述醇溶液为乙醇溶液。3、权利要求1所述柴胡提取物的制备方法，其特征在于，包括如下操作步骤(1)将柴胡的茎和/或叶干燥粉碎，得柴胡粗粉；加810倍重量的7595%醇溶液在7585i:中回流提取13次，每次提取24小时，合并提取液，过滤，回收乙醇并浓縮，浓縮至相对密度为l.O—l.l;(2)向浓縮液中加入810倍体积的水，放置12小时，过滤，得到滤液；(3)将步骤2获得的滤液通过D101型大孔树脂柱，流速为2-5ml/min，水洗脱，以Molishi反应为阴性判定水洗脱终点；70%乙醇洗脱，收集洗脱液，TLC检测芦丁不再出现来判定终点，回收乙醇，70。C真空干燥，得到柴胡提取物粉末。4、含有权利要求l所述柴胡提取物的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为有效剂量的柴胡提取物与药剂学上常用辅料混合，制成药剂学上可接受的剂型。5、根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物含有下列重量百分比的组份权利要求l所述的柴胡提取物50-75%;PEG-400或明胶15—60%;甘油0.5—25%;吐温801—15%。6、按照权利要求5所述的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物的剂型是软胶囊剂。7、权利要求1所述的柴胡提取物在制备治疗肝、胆疾病药物上的应用。8、权利要求1所述的柴胡提取物在制备治疗瘀胆性肝炎、胆囊炎或黄疸型肝炎药物上的应用。9、权利要求4所述的柴胡提取物药物组合物在制备治疗肝病药物上的应用。10、权利要求4所述的柴胡提取物药物组合物在制备治疗瘀胆性肝炎、胆囊炎或黄疸型肝炎药物上的应用。全文摘要本发明公开了一种柴胡提取物及其制备方法，属于中药领域。本发明按照如下方法制备将柴胡的茎和/或叶干燥粉碎，得柴胡粗粉；加8～10倍重量的75～95％醇溶液在75～85℃中回流提取1～3次，每次提取2～4小时，合并提取液，过滤，回收乙醇并浓缩，浓缩至相对密度为1.0-1.1；向浓缩液中加入8～10倍体积的水，放置12小时，过滤，通过D101型大孔树脂柱，洗脱，收集洗脱液，70℃真空干燥，得到柴胡提取物粉末。本发明还公开了含有上述柴胡提取物的药物组合物，以及它们在制备治疗肝、胆疾病药物方面的应用。文档编号A61P1/16GK101579375SQ200910087169公开日2009年11月18日申请日期2009年6月10日优先权日2009年6月10日发明者张卓勇,蔡光明申请人:中国人民解放军第三○二医院;首都师范大学