一种精制银杏叶提取物、粉针及其制备方法

专利名称：：一种精制银杏叶提取物、粉针及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种精制银杏叶提取物及其制备方法，含有该提取物的制剂及其制备方法。
背景技术：
：银杏叶为银杏科植物银杏Giw紐oWto&L的干燥叶。秋季叶尚绿时采收，及时干燥。其性状多皱折或破碎，完整者呈扇形，长35m，宽58cm。绿色或黄绿色，上缘呈不规则的波状弯曲，有的中间凹入，可达2cm。具二叉状平行叶脉，叶基楔形，叶柄长26cm。体轻。气微，味微涩。其功能主治为"敛肺，平喘，止痛。用于肺虛咳喘、冠心病，心绞痛，高血脂"。银杏叶提取物为银杏科植物银杏G/力A^oZ/toZ^丄.的干燥叶经加工制成的提取物。浅棕色至棕褐色的粉末；味微苦。其功能主治为"活血化瘀通络。用于瘀血阻络引起的胸痹、心痛、中风、半身不遂、舌强语蹇；冠心病稳定型心绞痛、脑梗塞见上述证候者"。银杏提前物中主要有效成分为黄酮醇苷和萜内酯类化合物，其具有扩张冠状血管、改善脑循环、消除氧自由基、抑制血小板活化因子等作用，临床上用于治疗冠心病、脑血栓、脑缺血、脑功能障碍、脑伤后遗症、神经系统疾病和哮喘等。中国药2005年版要求银杏叶提取物中含总黄酮醇苷不得少于24.0%，含总内酯不得少于6.0%,美国药典对此的要求是含总黄酮醇苷为2227%，含总内酯为5.412.0%，德国药典对此要求是总黄酮醇苷为2227%，含总内酯为5.07.0%。山此可见，控制好总黄酮醇苷和总内酯的含量是银杏叶提取物质量的关键因素。为了解决此问题，已经提出了增加有效成分量的银杏叶提取物。现有技术中存在很多合适的提取方法的方案，以及具有高成分含量的提取物制备方案。CN1315481C公开了一种银杏叶提取物及其提取方法，该提取物中总黄酮醇苷达40%以上，总内酯含量达10%以上。该发明提取方法包括回流提取，加絮凝剂离心分离，低浓度515%乙醇洗脱后乙酸乙酯萃取，高浓度7080%乙醇洗脱，合并两次洗脱液，调pH离心分离，上大孔树脂洗脱，洗脱液浓縮干燥等步骤。操作步骤比较繁琐。CN100469371C公开了一种银杏叶提取物的制备工艺，制得的银杏叶提取物组份为3140%黄酮苷和11~15%内酯。其提取工艺采用60%丙酮提取，经离子交换树脂，将黄酮和内酯两种成分分别洗脱，再用化学方法分别精制后按百分含量进行调配。方法中采用了丙酮，毒性较大，需控制提取物中的残留量，另外分别洗脱分别精制后再进行配比，歩骤相对复杂。CN101199560A公开了了一种银杏叶提取物，其中黄酮醇苷的含量大丁74%，内酯含量大于6%。其制备方法是将市售银杏叶提取物经过脱酚酸、AB-8树脂及聚酰胺树脂、氧化铝分别纯化分别值得含黄酮90%及含内酯50%以上的两种组分，然后按6:1的比例混合。工艺中先后用到石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇等有机试剂。己经报道的银杏叶提取物的现有工艺技术还有微波提取法、超临界提取法等。现有技术中存在的技术问题是只关注于提取物的纯化，忽视了提取物中有效成分的配比，而对于中药提取物而g，有效成分的含量与比例都将影响到药物临床安全性和有效性。其次，现有技术中提取纯化的工艺歩骤较多，或者用到毒性较大的有机溶剂，为提取物后续的临床应用存在安全性隐患。
发明内容本发明提供一种精制银杏叶提取物，其特征在于，该提取物含有总黄酮醇苷为44~80%，总内酯11~20%。本发明所述的精制银杏叶提取物，其特征在于，该提取物含有总黄酮醇苷为48~80%，总内酯12~20%。本发明所述的精制银杏叶提取物，其特征在于，该提取物中总黄酮醇苷和总内酯的重量比为4:1。本发明所述的精制银杏叶提取物的制备方法，其特征在于，将银杏叶粗粉用812倍(W/W)50%65%乙醇浸润后，加热回流提取24次，每次13小时，滤过，合并滤液；滤液减压浓縮，室温静置，滤过；滤液通过大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，后用55%70%乙醇(w/W)洗脱，收集富集有银杏叶总黄酮醇苷及总内酯的乙醇洗脱液；减压浓縮，浓缩液过聚酰胺柱，用50%70%乙醇洗脱，洗脱液浓縮干燥即得。木发明所述的精致银杏叶提取物的制备方法，其特征在于，将银杏叶粗粉用812倍(W/W)50%65%乙醇浸润后，加热回流提取24次，每次13小时，滤过，合并滤液；滤液减压浓縮，室温静置，滤过；滤液通过大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，后用55%70%乙醇(w/w)洗脱，收集富集有银杏叶总黄酮醇苷及总内酯的乙醇洗脱液；减压浓缩，加入加入浓縮液13倍水和乙酸乙酯萃取23次，水相液浓縮，过葡聚糖凝胶，用50%90%乙醇梯度洗脱，洗脱液浓縮干燥总黄酮醇苷，乙酸乙酯相浓縮，干燥得银杏内酯，将总黄酮醇苷和银杏内酯按照一定的比例配比即得。本发明所述的精制银杏叶提取物的注射剂，其特征在于，含有治疗有效量的精制银杏叶提取物和医药上可接受的辅料。本发明所述的精制银杏叶提取物注射剂，其特征在于，所述的医药上可接受的辅料为填充剂、pH调节剂、抗氧化剂中的一种或几种，所述的填充剂为甘露醇、右旋糖酐、乳糖、甘氨酸中的一种或几种，所述的pH调节剂为拧檬酸、酒石酸、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢钠、磷酸氢二钠中的1巾或几种，所述的抗氧化剂为依地酸二钠、依地酸钙钠、盐酸半胱氨酸、维斗:素C、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠中的一种或几种。本发明所述的精制银杏叶提取物注射剂，其特征在于，其剂型为粉针剂，包括精制银杏叶提取物为1040%，填充剂为5080%，pH调节剂为5409fc本发明所述的注射剂的制备方法，其特征在于，取精制银杏叶提取物加注射用水溶解，加入针用活性炭，加热煮沸1530分钟，过滤，加入辅料，混匀后调节pH值5.57.5，加注射用水补充至总体积，滤过，分装，冻干，轧盖，即得。相对现有技术来说，本发明所采用的提取工艺歩骤少，并且未采用毒性人的有机试剂，所制备的提取物更容易达到临床药用的要求。采用精制银杏叶提取物制备的粉针性状有明显改善，本发明制备的粉针复溶后为淡黄色或浅黄色澄明液体，而现有的市售品为黄色或深黄色澄明液体。1、过敏试验取精制银杏叶提取物用生理盐水溶解制成lml含10mg的溶液，即得。取粉针1支，加注射用水3ml溶解。取体重250-300g的健康豚鼠6只，连续3次，间日腹腔注射供试品溶液0.5ml，然后分为两组，每组3只，分别在第一次注射后第14天及第21天静脉注射供试品溶液lml，在注射后15分钟内，均不得出现过敏反应，如有竖毛、呼吸困难、喷嚏、干呕或咳等现象中的两种或两种以上者，或有抽搐，虚脱或死亡现象应列为阳性。经检查均未出现过敏反应。2、溶血试验取精制银杏叶提取物用生理盐水溶解制成lml含10mg的溶液，即得。取粉针1支，加注射用水3ml溶解。2%红血球混悬液的制备取兔或羊血数毫升，放入成有玻璃珠的三角瓶中振摇10分钟，或用玻璃珠搅动血液，除去纤维蛋白质，使成脱纤维血液，加约10倍量的生理盐水，摇匀，离心，除去上清液，沉淀的红血球再用生理盐水如法洗涤2-3次，至上清液不显红色为止，将所得红血球用生理盐水配成2%混悬液，供试验用。试验方法取试管6支，按下表配比量依次加入2%红细胞混悬液和生理盐水，混匀后，于37r恒温箱放置半小时，然后分别加入不同的供试品溶液(第6管为对照管)摇匀后，置恒温箱37'C中，丌始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，一般观察4小时，如溶液呈透明红色，表示溶血。如溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，表示有红细胞凝聚作用。5<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>结果判断①一般以0.3ml供试品液(第3管)在2小时内不发生溶血作用判为符合规定。②如有红细胞凝聚现象，可按下法进一歩判断。若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散，或将凝聚物放在载玻片上，在盖玻片边缘滴加两滴生理盐水，在显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝聚，判为符合规定；若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为真凝聚，判为不符合规定。试验结果为均符合规定。3、完全性脑缺血药效实验昆明小鼠105只，分为七组。一组生理盐水组，一组为空白溶剂对照组，三组为精制银杏叶提取物粉针2、4、8mg/kg(以总黄酮醇苷计)组，一组为银杏叶口服液32mg/kg组，一组为市售银杏叶注射剂4mg/kg(以总黄酮醇苷计)组。根据拟临床用药途径，银杏叶口服液组灌胃给药，精制银杏叶提取物粉针低、中、高剂量组、阳性对照组、假手术组和模型对照组均采用尾静脉注射给药。给药后l小时将小鼠断头，记录断头后张嘴喘气持续时间。结果见表1。表l银杏叶粉针对小鼠断头后喘气持续时间的影响(n二l5,X±SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>较；P5，与巿售注射剂比较。结果表明，精制银杏叶提取物粉针剂4、8mg/kg(以总黄酮醇苷计)对小鼠完全性脑血的喘气时间有显著延长作用，且随剂量增大呈量效关系，精制银杏叶提取物粉针剂4mg/kg(以总黄酮醇苷计)与市售注射剂4mg/kg(以总黄酮醇苷计)比较有显著差异，结果表明，精制银杏叶粉针剂疗效优于市售注射剂。4、对人鼠脑血管阻断行为障碍的改善作用Wistar大鼠70只，随机分为七组，每组10只生理盐水对照组(iv);空白溶剂组(iv);精制银杏叶提取物粉针剂(iv)3、6、12mg/kg组；银杏叶口服液(i.g)16mg/kg组；市售银杏叶提取物注射液(iv)3mg/kg组。各组大鼠腹腔注射水合氯醛(350mg/ml)麻醉。侧卧固定，于亚无菌手术条件下，经眼外眦与外耳道连线间开口，剪断颧骨，同定创口，在手术显微镜下，颅骨底处开颅窗，暴露大脑中动脉，用高频电刀灼断，止血后，缝合创口，回笼饲养。术后24小时按表1评定缺血损伤程度，根据分数高低搭配分组，并开始给药。药后2小时评分，以后每天给药一次，并在给药后2小时评分。第三次给药，评分后断头。取大脑组织切成5片，常规下TTC染色，用1%甲醛固定后，根据落点法(100点/cm2)计算梗塞面积占脑切片面积的百分比。各给药组和对照组，给药前及给药期间的每天行为评分如表2所示，结果显示，精制银杏叶提取物粉针剂3-12mg/kg能縮小缺血所致脑梗塞面积，改善脑缺血所致的行为障碍，表明本药对局部缺血损伤有改善作用。增加脑血流量，减少梗塞面积可能是其作用基础之一。本品作用显著优于口服液，与市售银杏叶提取物注射液效果无显著性差异。表2银杏叶粉针剂对MCAO大鼠行为评分及其改善率的影响(n=10,X±SD)组别剂量药后评分改善率(％)(mg/kg)约HUlT"123生理盐水5.1±0.95.2±1.15.1±1.25.1±1.11.02±0.11空A溶剂5,1±0.95.2±0.94,9±1.14.7±1.30.94±0.12粉针剂"±1.1，1.34.8±1.44.3±1.3**0.90±0.09#粉针剂65.0±1.54.9±1.54.3±1.9*4.1±1.8*0.90±0.12#粉针剂125.2±1.45.0±1.24.4±1.4*3.8±1.1***0.85±0.09##t4服液165.2±1.15.0±1.44.5±1.54.1±1.6*0.88±0.16#市售注射液35.1±1.54.9±1.54.5±1.74.2±1.7*0.88±0.17#*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001与各自给药前相比；#P<0.05，#P<0.01丄jNS组对比。5、对家兔脑血流量的影响将25只家兔进行随机分组，每组5只，共分为5组溶剂对照组、精制银杏叶提取物组(总黄酮醇苷和总内酯重量比例分别为1:0.7，1:1，0.7:1)、银杏叶口服液组(阳性对照)。各组动物耳缘静脉注射25%乌拉坦(4ml/kg)，仰位固定，切丌颈部皮肤，分离两侧颈总动脉，于左侧颈总动脉处插管，以MPU-0.5型压力换能器测血压曲线，于右侧颈总动脉头端进一步分离，接MF-27型电磁流量计，显示右侧颈内动脉血流，可粗略代表前半部血流量。将针形电极插入四肢皮下，测量II导联心电图。上述指标同步记录于RM-46型多导仪上。阳性对照组动物上腹部切口，十二指肠插管，以备给药。待各项指标稳定30分后，各组动物分别静脉注射给药或十二指肠给药，读取红药前后颈内动脉血流量(ICBF)、血压(平均血压，BP)及心率(HR)。实验结束后，取出全脑称重，计算每100g脑组织血流量(CBF)及脑血管阻力(CVR)，结果见表3。结果表明，精制银杏叶提取物组能够显著增加家兔脑血流量、降低脑血管阻力，其中总黄酮醇苷与总内酯比例为1:l时，效果明显好于其他两组。表3银杏叶粉t<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>***P<0.01与给药前比较6、对血小板聚集的影响取健康家兔30只，随机分为5组，每组6只溶剂对照组、精制银杏叶提取物(总黄酮醇苷和总内酯比例分别为1:0.7，1:1，0.7:1)、银杏叶口服液组(阳性对照)。各组家兔固定后，由耳缘静脉取血，按常规方法测定给药前及给药后30分、1小时、2小时、3小时血小板数。取血时用3.8%枸橼酸钠抗凝，1000转/分离心7分钟得PRP血浆，4000转/分离心10分钟得PPP血浆。每200p1血浆加入ADP5路诱导血小板聚集。测定级药前及给药后3小时内血小板的聚集率。结果见表4，结果表明二种不同配比精制银杏叶提取物和口服液，给药后均可抑制因ADP诱导引起的血小板聚集，精制银杏叶提取物组的作用可持续到3个小时，与口服液组比较有显著性差异，且总黄酮醇苷和总内酯比例为1:l的疗效优于其他比例组。表4精制银杏叶提取物对家兔血小板聚集性的影响(n=6,"^±SD)组别剂量给药前最大凝聚率(％)(mg/kg)1/2hlh2h3h空A61.26±12.165.90±12.7367.73±9.2567.09±10.5662.95±10.24*对照(-7.57)(-10.56)(-9.51)(-2.75)4.859.45±28.248.75±9.1151.49±18.5946.60±17.1544.39±21.28精制银杏叶提取物(1:0.7)(l謹)**##(13.39)**#*+(21.61)***#(25.33)**##+4.8(1:1)70.20±7.0550.91±13.97(27.48)**##47.20±9.42(32.86)**#47.5617.99="**+*+(32.25)46.05±12.69(34.40)**#*+4.868.08±6.9654.33±10.2753.69±6.7352,89±10.0149.23±19.32(0.7:1)(20.19)**##(20.63)***#(22.31)**糾(27.69)**#*+银杏叶口服液19.268.75±8.74-54.66±5.22(20.4)**消52.63±5,22'(23.73)***#54.47±8.98(20.70)***#()数字为聚集抑制百分率(％)a组为3只动物；*P<0.05**P<0.01丄j给药前比较；#P<0.05，MP<0.01与空白溶剂对照；+P<0.05与银杏叶口服液比较7、一般药理学实验一般药理学实验表明静脉注射后随剂量的增加，自发活动抑制的程度减少，并逐渐恢复到给药前的水平可显著增加巴比妥钠的睡眠作用；对戊四唑引起的小鼠惊厥现象有拮抗作用；给家猫静脉注射0.85mg'kg—1及1.7mg'kg"(以下均以总黄酮醇甙含量计)，在30分钟内无显著变化，60分钟至120分钟血压显著降低；给家兔静脉注射0.85mg.kg"及1.7mg.kg—1及3.4mg-kg—',在120分钟内未出现异常心律，心电图在给药后也未出现异常，给家猫静脉注射0.85mg，kg—1，60分钟后呼吸频率较给药前减少，但对呼吸深度无影响；注射1.7mg，kg—1，60-120分呼吸深度显著减小；注射3.4mg'kg"时，呼吸频率加快，但5分钟后很快恢复，对呼吸深度无影响。8、毒性试验急性毒性试验LD5o分别为517.13n^kg"(小鼠，腹腔注射)及185.14mg'kg—1(小鼠，静脉注射)。大鼠腹腔注射长期毒性试验(连续60天)，安全剂量为9mg'kg.''d";毒性剂量为18mg-kg-、d—1，表现为体重增长较缓慢和用药60天后肝组织肝小叶细胞出现轻度的空泡变性，其他未出现有意义的改变；36mg-kg—、d"出现的毒性反应，主要表现在进食量减少，体重增长减缓，凝血时间延长，ALT、AST活性升高及肝小叶细胞中出现空泡变性的病理改变，上述变化在停药20天均能恢复正常。狗静脉注射长期毒性试验(连续2月)，安全剂量为4.5mg4^、d"，毒性剂量为9mg.kg1.d1，9mg.kg—.d1和18mg.kg—1.d—1剂量组临床表现为输液过程中动物发生次数不等的呕吐、排便，个别动物在给药初期产生一过性的站立不稳、烦躁和四肢强直症状；心电图上出现的间断性S-T段位移和T波的变化，在停药后消失；病理变化为肝脏细胞的空泡变性，停药一个月后消失；18mg.kg'、(T1剂量组ALT、AST升高明显，停药后有下降的趋势。其中毒作用的主要靶器官是肝脏。9、临床试验以市售银杏叶注射液为对照评价精制银杏叶提取物粉针剂治疗屮风病中经络瘀血阻络证安全性和有效性的随机、盲法、多中心II期临床研究。给药方案试验高剂量组精制银杏叶提取物粉针剂(以总黄酮醇苷计36mg，总内酯9mg，qd);试验低剂量组精制银杏叶提取物粉针剂(以总黄酮醇苷计24mg，总内酯6mgqd);对照组市售银杏叶提取物注射液(以提取物计70mgqd)。以上各组均加于生理盐水或5%的葡萄糖注射液250ml静脉滴注，连续用药14天。首次滴注时控制滴速每分钟10-15滴。9观察指标有效性评价指标(1)患者临床脑神经功能缺损程度及中医瘀血阻络证症候评分的变化。(2)患者总的生活能力状态评价。(3)头部CT检验指标。(4)凝血功能三项。安全性评价指标(1)血、尿、便常规。(2)肝、肾功能检査。(3)心电图检査。(4)不良反应和毒副作用。临床神经功能缺损程度疗效分析结果为高剂量组愈显率为34.6%，总有效率为84.6%(n=78);低剂量组愈显率为21.3%，总有效率为63.8%(n=80);对照组愈显率为25.0%，总有效率为73.8%(n=80)。本研究结果表明，精制银杏叶提取物粉针剂对治疗中风病中经络瘀血阻络证疗效确切，其中高剂量组有效率优于对照组，对照组优于低剂量组；三组均安全有效。具体实施例方式下面以具体实施例对本发明作详细说明。本发明所述的精制银杏叶提取物是按如卜'实施例所表示的方法制造或发现的，所涉及到的方法是本领域的技术人员能够掌握和运用的技术手段。但以卜一实施例不得理解为任何意义上的对本发明权利要求的限制。实施例1:将银杏叶粗粉用10倍量50%乙醇浸润后，加热回流提取两次，每次2小时，滤过，合并滤液；滤液减压浓缩，室温静置，滤过；滤液通过大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，后用55%乙醇洗脱，收集富集有银杏叶总黄酮醇苷及总内酯的乙醇洗脱液；减压浓縮，过聚酰胺柱，用50%的乙醇洗脱，洗脱液浓缩干燥，即得。按照中国药典2005年版银杏叶提取物含量测定方法，测得总黄酮醇苷的含量为45.2%，总内酯的含量为11.8%。实施例2将银杏叶粗粉用8倍量65%乙醇浸润后，加热回流提取两次，每次3小时，滤过，合并滤液；滤液减压浓縮，室温静置，滤过；滤液通过大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，后用70%乙醇洗脱，收集富集有银杏叶总黄酮醇苷及总内酯的乙醇洗脱液；减压浓縮，过聚酰胺柱，用70%的乙醇洗脱，洗脱液浓縮干燥，即得。，即得。按照中国药典2005年版银杏叶提取物含量测定方法，测得总黄酮醇苷的含量为48.7%，总内酯的含量为12.2%。实施例3将银杏叶粗粉用12倍量55%乙醇浸润后，加热回流提取两次，每次L5小时，滤过，合并滤液；滤液减压浓縮，室温静置，滤过；滤液通过大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，后用60%乙醇洗脱，收集富集有银杏叶总黄酮醇苷及总内酯的乙醇洗脱液；减压浓縮，加入浓縮液2倍水和乙酸乙酯萃取2次，水相液浓縮，过葡聚糖凝胶，分别用50%、70%、90%乙醇梯度洗脱，洗脱液浓縮干燥总黄酮醇苷，乙酸乙酯相浓縮，干燥得银杏内酯，将总黄酮醇苷和银杏内酯按照一定的比例配比，即得。按照中国药典2005年版银杏叶提取物含量测定方法，测得总黄酮醇苷的含量为60.2%，总内酯的含量为15.1%，两者比例为3.99:1。实施例4将银杏叶粗粉用8倍量60%乙醇浸润后，加热回流提取两次，每次2.5小时，滤过，合并滤液；滤液减压浓缩，室温静置，滤过；滤液通过大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，后用60%乙醉洗脱，收集富集有银杏叶总黄酮醇苷及总内酯的乙醇洗脱液；减压浓缩，加入浓缩液3倍水和乙酸乙酯萃取2次，水相液浓縮，过葡聚糖凝胶，分别用60%、70%、80%乙醇梯度洗脱，洗脱液浓缩干燥总黄酮醇苷；乙酸乙酯相浓縮，干燥得银杏内酯，将总黄酮醇苷和银杏内酯按照定的比例配比，即得。按照中国药典2005年版银杏叶提取物含量测定方法，测得总黄酮醇苷的含量为79.7%，总内酯的含量为19.9%，两者比例为4.01:1。实施例5将银杏叶粗粉用10倍量60%乙醇浸润后，加热回流提取两次，每次2小时，滤过，合并滤液；滤液减压浓縮，室温静置，滤过；滤液通过大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，后用70%乙醇洗脱，收集富集有银杏叶总黄酮醇苷及总内酯的乙醇洗脱液；减压浓縮，加入浓縮液1倍水和乙酸乙酯萃取2次，水相液浓縮，过葡聚糖凝胶，分别用60%、75%、90%乙醇梯度洗脱，洗脱液浓縮干燥总黄酮醇苷；乙酸乙酯相浓縮，干燥得银杏内酯，将总黄酮醇苷和银杏内酯按照一定的比例配比，即得。按照中国药典2005年版银杏叶提取物含量测定方法，测得总黄酮醇苷的含量为49.5%，总内酯的含量为12.4%，两者比例为3.99:1。实施例6精制银杏叶提取物粉针精制银杏叶提取物25g甘露醇100g磷酸氢二钠(含12分子结晶水)适量注射用水加至3000ml制成1000支取精制银杏叶提取物加适量注射用水溶解，加入0.3%针用活性炭(w/v)，加热煮沸，保温30分钟，过滤，加入甘露醇溶解，用磷酸氢二钠水溶液调pH值为5.57，加注射用水补充至总体积，滤过、分装、冻干、轧盖、制成1000支，即得。规格为每支含总黄酮醇苷12mg，总内酯3mg。实施例7精制银杏叶提取物粉针精制银杏叶提取物100g右旋糖酐200g硫代硫酸钠lg碳酸氢钠适量注射用水加至7000ml制成1000支取精制银杏叶提取物加适量注射用水溶解，加入0.2%针用活性炭(w/v)，加热煮沸，保温15分钟，过滤，加入右旋糖酐和硫代硫酸钠，用碳酸氢钠水溶液调pH值为6.80，加注射用水补充至总体积，滤过、分装、冻干、轧盖、制成1000支，即得。规格为每支含总黄酮醇苷60mg，总内酯15mg。实施例8精制银杏叶提取物粉针精制银杏叶提取物75g乳糖150g碳酸钠适量注射用水加至5000ml制成1000支取精制银杏叶提取物加适量注射用水溶解，加入0.2%针用活性炭(w/v)，加热煮沸，保温30分钟，过滤，加入乳糖，用碳酸钠水溶液调pH值为7.23，加注射用水补充至总体积，滤过、分装、冻干、轧盖、制成1000支，即得。规格为每支含总黄酮醇苷36mg，总内酯实施例9精制银杏叶提取物粉针精制银杏叶提取物50g甘氨酸150g依地酸钙钠0.2g磷酸氢钠适量注射用水加至4000ml制成1000支取精制银杏叶提取物加适量注射用水溶解，加入0.2%针用活性炭(w/v)，加热煮沸，保温20分钟，过滤，加入甘氨酸和依地酸钙钠，用磷酸氢钠水溶液调pH值为6.35，加注射用水补充至总体积，滤过、分装、冻干、轧盖、制成1000支，即得。规格为每支含总黄酮醇苷24mg，总内酯6mg。实施例10精制银杏叶提取物水针精制银杏叶提取物15g亚硫酸钠碳酸钠注射用水0.2g加至3000ml制成1000支取精制银杏叶提取物加适量注射用水溶解，加入0.3%针用活性炭(w/v)，加热煮沸，保温30分钟，过滤，加入亚硫酸钠溶解，用碳酸钠水溶液调pH值为6.87，加注射用水补充至总体积，滤过、灌封、灭菌，制成1000支，即得。规格为每支含总黄酮醇苷12mg，总内酯3mg。实施例11精制银杏叶提取物水针精制银杏叶提取物20g盐酸半胱氨酸0.6g磷酸氢二钠(含12分子结晶水)适量注射用水加至3000ml制成1000支取精制银杏叶提取物加适量注射用水溶解，加入0.2%针用活性炭(w/v)，加热煮沸，保温30分钟，过滤，加入盐酸半胱氨酸溶解，用磷酸氢二钠水溶液调pH值为5.72，加注射用水补充至总体积，滤过、灌封、灭菌，制成1000支，即得。规格为每支含总黄酮醇苷12mg，总内酯3mg。实施例12精制银杏叶提取物输液精制银杏叶提取物依地酸钙钠磷酸氢二钠(含12分子结晶水)注射用水60g0.6g适量加至10000ml制成100瓶取精制银杏叶提取物加适量注射用水溶解，加入0.3%针用活性炭(w/v)，加热煮沸，保温30分钟，过滤，加入依地酸钙钠溶解，用磷酸氢二钠水溶液调pH值为6.70，加注射用水补充至总体积，滤过、灌封、灭菌，制成100瓶，即得。规格为每支含总黄酮醇苷36mg，总内酯9mg。实施例13精制银杏叶提取物胶囊精制银杏叶提取物25mg13乳糖25mg微晶纤维素97mg聚维酮乙醇溶液适量硬脂酸镁3mg制成1000粒取精制银杏叶提取物和乳糖、微晶纤维素混合均匀，用聚维酮乙醇溶液制粒，干燥，整粒，加入硬脂酸镁，混合均匀，填充胶囊，即得。实施例14精制银杏叶提取物片精制银杏叶提取物25mg交联羧甲基纤维素钠15mg乳糖57mg聚维酮乙醇溶液适量硬脂酸镁3mg制成1000粒取精制银杏叶提取物和交联羧甲基纤维素钠、乳糖混合均匀，用聚维酮乙醇溶液制颗粒，千燥，整理后加入硬脂酸镁混合均匀，压片即得。1权利要求1、一种精制银杏叶提取物，其特征在于，该提取物含有总黄酮醇苷为44～80％，总内酯11～20％。2、根据权利要求1所述的精制银杏叶提取物，其特征在于，该提取物含有总黄酮醇苷为48~80%，总内酯12~20%。3、根据权利要求1或2所述的精制银杏叶提取物，其特征在于，该提取物中总黄酮醇苷和总内酯的重量比为4:1。4、根据权利要求1或2所述的精制银杏叶提取物的制备方法，其特征在于，将银杏叶粗粉用812倍(W/W)50%65%乙醇浸润后，加热回流提取24次，每次13小时，滤过，合并滤液；滤液减压浓缩，室温静置，滤过；滤液通过大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，后用55%70%乙醇洗脱，收集富集有银杏叶总黄酮醇苷及总内酯的乙醇洗脱液；洗脱液减压浓縮；浓縮液过聚酰胺柱，用50%70%乙醇洗脱；洗脱液浓缩，干燥，即得。5、根据权利要求13任一所述的精致银杏叶提取物的制备方法，其特征在于，将银杏叶粗粉用812倍(W/W)50%65%乙醇浸润后，加热回流提取24次，每次13小时，滤过，合并滤液；滤液减压浓縮，室温静置，滤过；滤液通过大孔树脂柱，先用去离子水洗脱，后用55%70%乙醇洗脱，收集富集有银杏叶总黄酮醇苷及总内酯的乙醇洗脱液；洗脱液减压浓縮，加入浓縮液13倍水和乙酸乙酯萃取23次；水相液浓縮，浓縮液过葡聚糖凝胶，用50%90%乙醇梯度洗脱，洗脱液浓縮，干燥，得总黄酮醇苷；乙酸乙酯相浓縮，干燥，得银杏内酯；将总黄酮醇苷和银杏内酯按照一定的比例配比，即得。6、一种含有权利要求1至3任一所述的精制银杏叶提取物的制剂，其特征在于，含有治疗有效量的精制银杏叶提取物和医药上可接受的辅料。7、根据权利要求6所述的精制银杏叶提取物制剂，其特征在于，所述的制剂为水针、粉针、或输液，所述的医药上可接受的辅料为填充剂、pH调节剂、抗氧化剂中的一种或几种，所述的填充剂为甘露醇、右旋糖酐、乳糖、甘氨酸中的一种或几种，所述的pH调节剂为柠檬酸、酒石酸、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢钠、磷酸氢二钠中的一种或几种，所述的抗氧化剂为依地酸二钠、依地酸钙钠、盐酸半胱氨酸、维生素C、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠中的一种或几种。8、根据权利要求7所述的精制银杏叶提取物制剂，其特征在于，其剂型为粉针剂，包括精制银杏叶提取物为1040%，填充剂为5080%，pH调节剂为540免。9、一种权利要求8所述的粉针剂的制备方法，其特征在于，取精制银杏叶提取物加注射用水溶解，加入针用活性炭，加热煮沸1530分钟，过滤，加入辅料，混匀后调节pH值5.57.5，加注射用水补充至总体积，滤过，分装，冻干，轧盖，即得。全文摘要本发明涉及一种精制银杏叶提取物及其制备方法，以及用该提取物制成的制剂及制剂的制备方法。该提取物含有总黄酮醇苷为44～80％，总内酯11～20％。其制剂含有治疗有效量的精制银杏叶提取物和医药上可接受的辅料。文档编号A61K36/16GK101596222SQ20091008702公开日2009年12月9日申请日期2009年6月22日优先权日2009年6月22日发明者祺万,马红萍,海黄申请人:北京中海康医药科技发展有限公司