专利名称：一种鳄鱼血冻干粉及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种鳄鱼血冻干粉及其制备方法和在抗肿瘤、抗病毒或增强免疫方面 的用途。
背景技术：
对鳄鱼血的研究始于1998年，研究结果发现这种爬行动物血液中含有的几种蛋 白质抗体可以杀死如金黄葡萄球菌(Staphy-lococcusaureus)等具有抗药性的病毒。据 美国科学家马克·麦钱特研究表明，鳄鱼血液中所含的某些蛋白质能够杀死对盘尼西林有 抗药性的细菌。马克说“鳄鱼在争斗时会把对方的肢体撕扯下来，尽管它们生活在一个充 满微生物的环境中，但它们的伤口却可以很快愈合，通常情况下不会受到任何感染。” Emily Ackiss是加州Scripps Mercy医院的一名临床流行病学家，他也熟悉这个研究结果。他说 在这篇文章中研究讨论只是基础的研究。在药物被开发出来前还需要更加广泛的研究和实 验。可能在十年内变成人类的一种药物来源。
发明内容
本发明目的在于公开一种鳄鱼血冻干粉，本发明的目的还在于公开该冻干粉的制 备方法，本发明的目的还在于公开该冻干粉在抗肿瘤、抗病毒或增强免疫方面的用途。本发明目的是通过如下方法实现的。本发明鳄鱼血冻干粉由如下方法制备而成A.无菌条件下，在健康鳄鱼颈部抽取动脉血，放至含浓度为3. 2%枸橼酸钠抗凝 剂采血袋中，密闭，在摇床内摇勻；置低温高速离心机中，在2-6°C下以5000 20000转/分 钟的转速分离20-90分钟，静置，分层；抽取上清液得血浆，收集沉淀液得血细胞，分别置无 菌容器中，称重，备用；B.血浆中加入33%山梨醇，于40-80°C下，静置5-15小时后，充氮气；灭活病毒， 病理检疫符合《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》的规定，将灭活病毒的 鳄鱼血浆装入托盘，置冷冻干燥机搁板上，铺量为8-12mm，以每分钟降1°C的速度慢冻使血 浆温度达到-20 V -40 V，启动冷凝器，0. 5-2小时后，使捕水器内温度达到-30 V -50 V 后，启动真至泵抽真空，气压达到10-20MPa后开启加热系统，缓慢加热至20-40°C，12-24小 时后取出血浆，充氮气；此时冷凝器捕水量占血浆水分总量的90-98%，粉碎；过100目筛， 得血浆细粉，待用；C.血细胞中加入等体积的脱盐去离子水，搅拌均勻，静置20-90分钟，使血细胞膨 胀，用超微胶体磨粉碎，使粉碎后的粒度小于5微米；灭活病毒，病理检疫符合《血液制品去 除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》的规定，将灭活病毒的血细胞放入冷冻干燥机冻 干仓内，以每分钟降10-50°C的速度速冻使血细胞温度达到-30°C -50°C后，启动冷凝器， 1-3小时后，使捕水器内温度达到_40°C _60°C后，启动真至泵抽真空，气压达到l-6MPa后 开启加热系统，缓慢加热至20-40°C，18-30小时后取出血细胞，充氮气；此时冷凝器捕水量占总量的90-98% ；粉碎，过100目筛，待用；或者血细胞中加入等体积的脱盐去离子水，搅拌均勻，静置20-90分钟，使血细胞 膨胀，置l_30L800MPa小型静态超高压机中，以水为加压介质，于400_600MPa，50_80°C下加 压6-14分钟，减压，气压正常后取出，滤过，微孔滤膜滤过，粒度小于5微米，将血细胞放入 冷冻干燥机冻干仓内，以每分钟降10-50°C的速度速冻使血细胞温度达到-30°C -50°C 后，启动冷凝器，1-3小时后，使捕水器内温度达到-40°C -60°C后，启动真至泵抽真空，气 压达到1-6MPA后开启加热系统，缓慢加热至20-40°C，18-30小时后取出血细胞，充氮气；此 时冷凝器捕水量占总量的90-98% ；粉碎，过100目筛，待用；D.将血浆细粉和血细胞细粉混勻，再粉碎，过200目细筛，得本发明鳄鱼血冻干 粉；密闭，低温储存。本发明鳄鱼血冻干粉优选由如下方法制备而成A.无菌条件下，在健康鳄鱼颈部抽取动脉血，放至含3. 2%枸橼酸钠抗凝剂采血 袋中，密闭，在摇床内摇勻；置低温高速离心机中，在4°C下以5000 20000转/分钟的转 速分离30-60分钟，静置，分层；抽取上清液得血浆，收集沉淀液得血细胞，分别置无菌容器 中，称重，备用；B.血浆中加入33%山梨醇，于60°C下，静置10小时后，充氮气；灭活病毒，病理检 疫符合《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》的规定，将灭活病毒的鳄鱼血 浆装入托盘，置冷冻干燥机搁板上，铺量为10mm，以每分钟降1°C的速度慢冻使血浆温度达 到-28°C -32°C，启动冷凝器，1小时后，使捕水器内温度达到-40°C后，启动真至泵抽真 空，气压达到15MPa后开启加热系统，缓慢加热至25 30°C，18小时后取出血浆，充氮气； 此时冷凝器捕水量占血浆水分总量的92 96%，粉碎；过100目筛，得血浆细粉，待用；C.血细胞中加入等体积的脱盐去离子水，搅拌均勻，静置30-60分钟，使血细胞膨 胀，用超微胶体磨粉碎，使粉碎后的粒度小于5微米；灭活病毒，病理检疫符合《血液制品去 除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》的规定，将灭活病毒的血细胞放入冷冻干燥机冻 干仓内，以每分钟降10-50°C的速度速冻使血细胞温度达到-40°C _45°C后，启动冷凝器， 1. 5 2. 0小时后，使捕水器内温度达到-50°C _55°C后，启动真至泵抽真空，气压达到 1. 5 5MPa后开启加热系统，缓慢加热至25 30°C，22 24小时后取出血细胞，充氮气； 此时冷凝器捕水量占总量的92 96% ；粉碎，过100目筛，待用；或者血细胞中加入等体积的脱盐去离子水，搅拌均勻，静置30-60分钟，使血细胞 膨胀，置l_30L800MPa小型静态超高压机中，以水为加压介质，于500MPa，65°C下加压10分 钟，减压，气压正常后取出，滤过，微孔滤膜滤过，粒度小于5微米，将血细胞放入冷冻干燥 机冻干仓内，以每分钟降10-50°C的速度速冻使血细胞温度达到-40°C -45°C后，启动冷 凝器，1. 5 2. 0小时后，使捕水器内温度达到-50°C _55°C后，启动真至泵抽真空，气压达 到1. 5 5MPa后开启加热系统，缓慢加热至25 30°C，22 24小时后取出血细胞，充氮 气；此时冷凝器捕水量占总量的92 96% ；粉碎，过100目筛，待用；D.将血浆细粉和血细胞细粉混勻，再粉碎，过200目细筛，得本发明鳄鱼血冻干 粉；密闭，低温储存。本发明公开了一种鳄鱼血冻干粉的制备方法，在本发明方法中，采取了冷冻干燥 的方法，通过实验筛选得出冷冻干燥的具体工艺参数，如冷冻温度、冷凝温度、气压、捕水量的比例等，使本发明鳄鱼血冻干粉的质量达到最优化。另外，通过药效学实验表明，本发明 鳄鱼血冻干粉对四种肿瘤细胞增殖均有明显的抑制作用；灌胃本发明鳄鱼血后，荷瘤小鼠 的生存质量明显改善，毛色光滑，活动正常，胸腺系数较阴性对照增加，S180实体瘤缩小，显 著实现了对肿瘤的抑制作用；本发明鳄鱼血具有较好的抗甲型流感病毒的作用，在所试剂 量内对流感病毒引起的小鼠肺炎均有明显抑制作用；同时，本发明鳄鱼血还有增强机体免 疫的功能，显著提高吞噬细胞的吞噬百分率及吞噬指数，有很好的促淋巴细胞增值的能力， 对小鼠NK细胞活性有明显促进作用。下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例1本发明鳄鱼血冻干粉制备工艺考察实验按照本发明实施例1所述方法，其中B步骤中水汽凝结温度(°C )、典型压力(Pa) 和干燥时间(h)参数不固定，以B步骤中水汽凝结温度(°C)、典型压力(Pa)和干燥时间 (h)为考察因素，按正交设计L9(34)表安排实验，筛选冻干工艺参数，见表1 表IL9 (34)因素水平表
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权利要求
1.一种鳄鱼血冻干粉，其特征在于该冻干粉由如下方法制备而成A.无菌条件下，在健康鳄鱼颈部抽取动脉血，放至含浓度为3.2%枸橼酸钠抗凝剂采 血袋中，密闭，在摇床内摇勻；置低温高速离心机中，在2-6°C下以5000 20000转/分钟 的转速分离20-90分钟，静置，分层；抽取上清液得血浆，收集沉淀液得血细胞，分别置无菌 容器中，称重，备用；B.血浆中加入33%山梨醇，于40-80°C下，静置5-15小时后，充氮气；灭活病毒，病理 检疫符合《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》的规定，将灭活病毒的鳄鱼 血浆装入托盘，置冷冻干燥机搁板上，铺量为8-12mm，以每分钟降1°C的速度慢冻使血浆温 度达到-20°C _40°C，启动冷凝器，0. 5-2小时后，使捕水器内温度达到_30°C _50°C后， 启动真至泵抽真空，气压达到10-20MPa后开启加热系统，缓慢加热至20-40°C，12-24小时 后取出血浆，充氮气；此时冷凝器捕水量占血浆水分总量的90-98%，粉碎；过100目筛，得 血浆细粉，待用；C.血细胞中加入等体积的脱盐去离子水，搅拌均勻，静置20-90分钟，使血细胞膨胀， 用超微胶体磨粉碎，使粉碎后的粒度小于5微米；灭活病毒，病理检疫符合《血液制品去除 /灭活病毒技术方法及验证指导原则》的规定，将灭活病毒的血细胞放入冷冻干燥机冻干仓 内，以每分钟降10-50°C的速度速冻使血细胞温度达到-30°C -50°C后，启动冷凝器，1-3 小时后，使捕水器内温度达到_40°C -60°C后，启动真至泵抽真空，气压达到l-6MPa后开 启加热系统，缓慢加热至20-40°C，18-30小时后取出血细胞，充氮气；此时冷凝器捕水量占 总量的90-98% ；粉碎，过100目筛，待用；或者血细胞中加入等体积的脱盐去离子水，搅拌均勻，静置20-90分钟，使血细胞膨 胀，置l-30L800MPa小型静态超高压机中，以水为加压介质，于400_600MPa，50_80°C下加压 6-14分钟，减压，气压正常后取出，滤过，微孔滤膜滤过，粒度小于5微米，将血细胞放入冷 冻干燥机冻干仓内，以每分钟降10-50°C的速度速冻使血细胞温度达到-30°C -50°C后， 启动冷凝器，1-3小时后，使捕水器内温度达到-40°C -60°C后，启动真至泵抽真空，气压 达到1-6MPA后开启加热系统，缓慢加热至20-40°C，18-30小时后取出血细胞，充氮气；此时 冷凝器捕水量占总量的90-98% ；粉碎，过100目筛，待用；D.将血浆细粉和血细胞细粉混勻，再粉碎，过200目细筛，得鳄鱼血冻干粉；密闭，低温 储存。
2.如权利要求1所述的鳄鱼血冻干粉，其特征在于该冻干粉由如下方法制备而成A.无菌条件下，在健康鳄鱼颈部抽取动脉血，放至含3.2%枸橼酸钠抗凝剂采血袋中， 密闭，在摇床内摇勻；置低温高速离心机中，在4°C下以5000 20000转/分钟的转速分离 30-60分钟，静置，分层；抽取上清液得血浆，收集沉淀液得血细胞，分别置无菌容器中，称 重，备用；B.血浆中加入33%山梨醇，于60°C下，静置10小时后，充氮气；灭活病毒，病理检疫 符合《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》的规定，将灭活病毒的鳄鱼血 浆装入托盘，置冷冻干燥机搁板上，铺量为10mm，以每分钟降1°C的速度慢冻使血浆温度达 到-28°C -32°C，启动冷凝器，1小时后，使捕水器内温度达到-40°C后，启动真至泵抽真 空，气压达到15MPa后开启加热系统，缓慢加热至25 30°C，18小时后取出血浆，充氮气； 此时冷凝器捕水量占血浆水分总量的92 96%，粉碎；过100目筛，得血浆细粉，待用；C.血细胞中加入等体积的脱盐去离子水，搅拌均勻，静置30-60分钟，使血细胞膨胀， 用超微胶体磨粉碎，使粉碎后的粒度小于5微米；灭活病毒，病理检疫符合《血液制品去除 /灭活病毒技术方法及验证指导原则》的规定，将灭活病毒的血细胞放入冷冻干燥机冻干 仓内，以每分钟降10-50°C的速度速冻使血细胞温度达到-40°C _45°C后，启动冷凝器， 1. 5 2. 0小时后，使捕水器内温度达到-50°C -55°C后，启动真至泵抽真空，气压达到 1. 5 5MPa后开启加热系统，缓慢加热至25 30°C，22 24小时后取出血细胞，充氮气； 此时冷凝器捕水量占总量的92 96% ；粉碎，过100目筛，待用；或者血细胞中加入等体积的脱盐去离子水，搅拌均勻，静置30-60分钟，使血细胞膨 胀，置l-30L800MPa小型静态超高压机中，以水为加压介质，于500MPa，65°C下加压10分钟， 减压，气压正常后取出，滤过，微孔滤膜滤过，粒度小于5微米，将血细胞放入冷冻干燥机冻 干仓内，以每分钟降10-50°C的速度速冻使血细胞温度达到-40°C _45°C后，启动冷凝器， 1. 5 2. 0小时后，使捕水器内温度达到-50°C _55°C后，启动真至泵抽真空，气压达到 1. 5 5MPa后开启加热系统，缓慢加热至25 30°C，22 24小时后取出血细胞，充氮气； 此时冷凝器捕水量占总量的92 96% ；粉碎，过100目筛，待用；D.将血浆细粉和血细胞细粉混勻，再粉碎，过200目细筛，得鳄鱼血冻干粉；密闭，低温 储存。
3.如权利要求1所述的鳄鱼血冻干粉的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤A.无菌条件下，在健康鳄鱼颈部抽取动脉血，放至含浓度为3.2%枸橼酸钠抗凝剂采 血袋中，密闭，在摇床内摇勻；置低温高速离心机中，在2-6°C下以5000 20000转/分钟 的转速分离20-90分钟，静置，分层；抽取上清液得血浆，收集沉淀液得血细胞，分别置无菌 容器中，称重，备用；B.血浆中加入33%山梨醇，于40-80°C下，静置5-15小时后，充氮气；灭活病毒，病理 检疫符合《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》的规定，将灭活病毒的鳄鱼 血浆装入托盘，置冷冻干燥机搁板上，铺量为8-12mm，以每分钟降1°C的速度慢冻使血浆温 度达到-20°C _40°C，启动冷凝器，0. 5-2小时后，使捕水器内温度达到_30°C _50°C后， 启动真至泵抽真空，气压达到10-20MPa后开启加热系统，缓慢加热至20-40°C，12-24小时 后取出血浆，充氮气；此时冷凝器捕水量占血浆水分总量的90-98%，粉碎；过100目筛，得 血浆细粉，待用；C.血细胞中加入等体积的脱盐去离子水，搅拌均勻，静置20-90分钟，使血细胞膨胀， 用超微胶体磨粉碎，使粉碎后的粒度小于5微米；灭活病毒，病理检疫符合《血液制品去除 /灭活病毒技术方法及验证指导原则》的规定，将灭活病毒的血细胞放入冷冻干燥机冻干仓 内，以每分钟降10-50°C的速度速冻使血细胞温度达到-30°C -50°C后，启动冷凝器，1-3 小时后，使捕水器内温度达到_40°C -60°C后，启动真至泵抽真空，气压达到l-6MPa后开 启加热系统，缓慢加热至20-40°C，18-30小时后取出血细胞，充氮气；此时冷凝器捕水量占 总量的90-98% ；粉碎，过100目筛，待用；或者血细胞中加入等体积的脱盐去离子水，搅拌均勻，静置20-90分钟，使血细胞膨 胀，置l-30L800MPa小型静态超高压机中，以水为加压介质，于400_600MPa，50_80°C下加压 6-14分钟，减压，气压正常后取出，滤过，微孔滤膜滤过，粒度小于5微米，将血细胞放入冷 冻干燥机冻干仓内，以每分钟降10-50°C的速度速冻使血细胞温度达到-30°C -50°C后，启动冷凝器，1-3小时后，使捕水器内温度达到-40°C -60°C后，启动真至泵抽真空，气压 达到1-6MPA后开启加热系统，缓慢加热至20-40°C，18-30小时后取出血细胞，充氮气；此时 冷凝器捕水量占总量的90-98% ；粉碎，过100目筛，待用；D.将血浆细粉和血细胞细粉混勻，再粉碎，过200目细筛，得鳄鱼血冻干粉；密闭，低温储存。
4.如权利要求3所述的鳄鱼血冻干粉的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤A.无菌条件下，在健康鳄鱼颈部抽取动脉血，放至含3.2%枸橼酸钠抗凝剂采血袋中， 密闭，在摇床内摇勻；置低温高速离心机中，在4°C下以5000 20000转/分钟的转速分离 30-60分钟，静置，分层；抽取上清液得血浆，收集沉淀液得血细胞，分别置无菌容器中，称 重，备用；B.血浆中加入33%山梨醇，于60°C下，静置10小时后，充氮气；灭活病毒，病理检疫 符合《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》的规定，将灭活病毒的鳄鱼血 浆装入托盘，置冷冻干燥机搁板上，铺量为10mm，以每分钟降1°C的速度慢冻使血浆温度达 到-28°C -32°C，启动冷凝器，1小时后，使捕水器内温度达到-40°C后，启动真至泵抽真 空，气压达到15MPa后开启加热系统，缓慢加热至25 30°C，18小时后取出血浆，充氮气； 此时冷凝器捕水量占血浆水分总量的92 96%，粉碎；过100目筛，得血浆细粉，待用；C.血细胞中加入等体积的脱盐去离子水，搅拌均勻，静置30-60分钟，使血细胞膨胀， 用超微胶体磨粉碎，使粉碎后的粒度小于5微米；灭活病毒，病理检疫符合《血液制品去除 /灭活病毒技术方法及验证指导原则》的规定，将灭活病毒的血细胞放入冷冻干燥机冻干 仓内，以每分钟降10-50°C的速度速冻使血细胞温度达到-40°C _45°C后，启动冷凝器， 1. 5 2. 0小时后，使捕水器内温度达到-50°C -55°C后，启动真至泵抽真空，气压达到 1. 5 5MPa后开启加热系统，缓慢加热至25 30°C，22 24小时后取出血细胞，充氮气； 此时冷凝器捕水量占总量的92 96% ；粉碎，过100目筛，待用；或者血细胞中加入等体积的脱盐去离子水，搅拌均勻，静置30-60分钟，使血细胞膨 胀，置l-30L800MPa小型静态超高压机中，以水为加压介质，于500MPa，65°C下加压10分钟， 减压，气压正常后取出，滤过，微孔滤膜滤过，粒度小于5微米，将血细胞放入冷冻干燥机冻 干仓内，以每分钟降10-50°C的速度速冻使血细胞温度达到-40°C _45°C后，启动冷凝器， 1. 5 2. 0小时后，使捕水器内温度达到-50°C -55°C后，启动真至泵抽真空，气压达到 1. 5 5MPa后开启加热系统，缓慢加热至25 30°C，22 24小时后取出血细胞，充氮气； 此时冷凝器捕水量占总量的92 96% ；粉碎，过100目筛，待用；D.将血浆细粉和血细胞细粉混勻，再粉碎，过200目细筛，得鳄鱼血冻干粉；密闭，低温 储存。
5.如权利要求1或2所述的鳄鱼血冻干粉在制备抗肿瘤药物中的应用。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于其中抗肿瘤是指对肝癌细胞、宫颈癌细胞、卵 巢癌细胞、胃癌细胞或S180实体瘤有抑制作用。
7.如权利要求1或2所述的鳄鱼血冻干粉在制备抗病毒药物中的应用。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于其中抗病毒是指抗甲型流感病毒或抑制流感 病毒引起的小鼠肺炎。
9.如权要求1或2所述的鳄鱼血冻干粉在制备增强免疫药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种鳄鱼血冻干粉的制备方法，在本发明方法中，采取了冷冻干燥的方法，通过实验筛选得出冷冻干燥的具体工艺参数，使本发明鳄鱼血冻干粉的质量达到最优化。另外，通过药效学实验表明，本发明鳄鱼血冻干粉具有显著的抗肿瘤、抗病毒或增强免疫的功效，具有广阔的市场前景。
文档编号A61K35/56GK102106872SQ20101013308
公开日2011年6月29日 申请日期2010年3月26日 优先权日2010年3月26日
发明者张博 申请人:北京洪源澳达生物技术发展有限公司