专利名称：一种从黄杞叶中制备花旗松素单体的方法及用途的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及采用酶解技术对黄杞叶提取物进行酶解，从酶解产物中分离制备花旗松素单体的方法，并将其用于预防和治疗脂肪肝。
背景技术：
黄杞叶为胡桃科植物黄杞(Engeihardtia roxburghiana Wall)的干燥叶，具有清热解毒止痛之功效。在两广地区民间常作保健茶饮，具有一定的活血化瘀、降血脂、降血糖和提高免疫力等保健功能和抗氧化、抑制肥胖、抗过敏及预防癌症等多种生理活性。花旗松素，又名二氢槲皮素、紫杉叶素，其化学名为-五羟基二氢黄酮，英文名 Taxifolin, Dihydroquercetin, 3, 5, 7, 3 ‘ ,4 ‘ -Pentahydroxyflavanone,分子式为 C15H12O7,分子量为304.洲，结构式如下
权利要求
1.一种从黄杞叶中制备花旗松素单体的方法，包括以下步骤A、提取将干燥黄杞叶粉碎或切段，加入溶剂提取，提取液浓缩得浸膏。B、酶解将上述浸膏按每克加入30-100ml的比例加入一定pH值的缓冲液混悬或溶解， 在一定的温度下加入适量的酶进行酶解反应。C、分离与纯化酶解液醇沉除杂，得上清液或滤液，上清液或滤液浓缩至无醇味。所得上清液或滤液采用一定的分离纯化方法即可得到花旗松素粗品。D、重结晶花旗松素粗品经重结晶，即得纯度>99%的花旗松素单体。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于提取方法可以是回流、超声、渗辘、浸泡等，其中优选回流提取；所用溶剂为质量百分比浓度为30% -90%的乙醇，优选 50% -80%的乙醇。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于B步骤中酶解反应的缓冲液的pH值为3-6，优选pH值为4. 5-5. 5。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于B步骤中所选的缓冲液可以是磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液和柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液中的任意一种。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于B步骤中所用的酶可以是β-糖苷酶、纤维素酶、蜗牛酶、柚苷酶、果胶酶中的一种或几种混合。其中优选糖苷酶和纤维素酶。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于Β步骤中按酶/膏状物质量比= 0. 01-5加入酶进行酶解，其中优选酶/膏状物质量比=0. 1-0. 5。反应的温度为15-70°C， 优选37-50°C，反应时间为4-72h。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于C步骤中的醇沉除杂，所用的醇为乙醇或甲醇。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于C步骤中的一定的分离纯化方法可采用有机溶剂萃取的分离纯化方法。酶解上清液或滤液先用石油醚或与之极性相当的低极性的有机溶剂脱脂，然后再用乙酸乙酯、正丁醇或与之极性相当的有机溶剂反复萃取完全，浓缩萃取液至有固体析出，放置过夜，滤出固体即为花旗松素粗品。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于C步骤中的一定的分离纯化方法可采用色谱分离纯化的方法。其色谱分离介质包括大孔树脂、聚酰胺和硅胶。其中所用的大孔树脂型号可以是 D101，D201, HPD-100, HPD-200, AB-8, NK-9, NK-II, FL-I 中的任意一种。 其中优选树脂型号为FL-1，D101, HPD-100和AB-8。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于大孔树脂和聚酰胺柱具体的分离纯化方法为将水解后的上清液或滤液以2 4倍柱体积的流速通过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱， 直到吸附饱和；用纯水及10%乙醇洗脱杂质，直到洗流出液近无色；再用40%的乙醇洗脱至花旗松素洗脱完全，收集乙醇溶液洗脱液，回收乙醇，继续浓缩回收溶剂至有固体析出， 该固体即为花旗松素粗品。
11.根据权利要求9所述的方法，其特征是硅胶色谱的分离纯化的方法是将水解后的上清液或滤液蒸干，拌样、装柱、有机溶剂洗脱或梯度洗脱至花旗松素洗脱完全，回收溶剂至有固体析出，该固体即为花旗松素粗品。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征是洗脱所用的有机溶剂为石油醚、低碳链的卤代烷、低碳链的醇和低碳链的酯，低碳链的酮，或其中二类溶剂的混合物。其中，低碳链的卤代烷包括卤代甲烷、卤代乙烷等，如三氯甲烷、二氯甲烷、二溴乙烷、三溴乙烷等。低碳链的醇指Cu的醇，如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇等。低碳链的酯指Cp5的酯，如甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯等。低碳链的酮指CV5的酮，如丙酮、丁酮等。
13.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于重结晶溶剂为乙醇、甲醇、丙酮与水的混合溶液。
14.一种花旗松素单体的用途，其特征在于用于脂肪肝的预防和治疗。
全文摘要
本发明公开了一种从黄杞叶中制备花旗松素单体的方法及用途，它是将干燥的黄杞叶粉碎或切段，加入一定浓度的乙醇提取，所得提取液浓缩至膏状物。加入pH＝3-6的缓冲液，在一定温度下，加入适当的酶进行酶解，酶解液再经分离、富集、纯化和重结晶处理即可得到纯度为99％以上的花旗松素单体。本发明的特点是直接对黄杞叶的提取物进行酶解，得到高纯度的花旗松素单体，具有反应专属性强、转化率高、工艺简单易行、污染小、适合大规模工业生产等优点。克服现有技术所存在的对苷元破坏性大、专属性差、转化率低、对设备腐蚀性大、污染严重、工艺繁琐等缺点。本发明所制备的花旗松素单体可用于脂肪肝的预防与治疗。
文档编号A61P3/06GK102477453SQ201010551639
公开日2012年5月30日 申请日期2010年11月22日 优先权日2010年11月22日
发明者侯文彬, 单淇, 周福军, 张新鑫, 徐旭, 高贤 申请人:天津药物研究院