专利名称：一种治疗hpv感染的药物以及该药物在制备治疗hpv感染药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种生物制品，特别是涉及一种含有人用狂犬病疫苗的治疗人乳头瘤病毒(HPV)感染的药物，以及人用狂犬病疫苗在制备治疗人乳头瘤病毒(HPV)感染药物中的应用，属于生物医药技术领域。
背景技术：
人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)属于乳头瘤病毒科的乳头瘤病毒属，为球形无包膜的小型双链环状DNA病毒。目前已发现其有120余种型别。根据其是否致癌可将HPV分为高危型和低危型。2003年的一项流行病学分类研究定义了 15种高危型 HPV (如 HPV-16, HPV-18)和 12 种低危型 HPV (如 HPV-6、HPV-11)。HPV是较常见的病毒，在人群中广泛传播，由于大多数HPV感染不引起症状，且为自限性。根据目前流行病学资料，人类对多种型别的HPV普遍易感，且认为性活跃的年轻人群患HPV感染的危险性最高。患者及潜伏感染的病毒携者为HPV感染的主要传染源，密切接触是主要传播途径，其中性接触最重要。近年来，HPV感染率明显增加，尤其是在年轻的性活跃人群中。美国2006年调查显示，全国有2千万HPV感染者，其中每年62万为新发感染者(Trottier H，FrancoEL. Human papillomavirus and cervical cancer :Burden of illness and basisfor prevention. Am J Manag Care,2006,12(17suppl))。 流行病学调查估计，每年新发HPV感染者中74%为年龄在14 24岁的群体。妊娠妇女感染HPV的危险性增加，免疫功能抑制者和人免疫缺陷病毒(HIV)感染者感染HPV及发生相关病变的危险性增加。HPV的致病机制是HPV对皮肤和黏膜上皮细胞有高度亲嗜性，其在感染宿主皮肤或黏膜上皮细胞后，可在细胞核内自我复制或整合到宿主细胞DNA中，并随宿主细胞同步复制并转录。病毒复制诱导上皮增殖，使表皮变厚伴棘层增生和某种程度表皮角化，最终导致上皮增殖形成乳头状瘤，亦称为疣。疣一般是良性的，而其中HPV DNA是游离的。但某些型别的HPV具有诱导细胞转化的能力，其DNA可整合到宿主上皮细胞的染色体中，促进细胞DNA的合成，使皮肤特别是黏膜上皮细胞变为永生化细胞，从而诱发癌前病变或恶性肿瘤。HPV感染可导致多种病变，其临床表现亦多种多样。孕妇和免疫力低下的人群感染后病情将更为严重。常见有以下几种宫颈炎、宫颈糜烂、皮肤乳头状瘤、生殖器疣等，甚至导致恶性肿瘤。目前治疗HPV阳性主要是以外治为主，内治为辅。外治的方法很多，有药物治疗， 冷冻治疗，激光治疗，微波治疗，电烧治疗，手术治疗等。药物治疗方便，易于操作，但有些药物有灼伤粘膜的可能。注射昂贵的干扰素，白介素等免疫增强剂会起到一定作用，但其疗效在学术界尚在争议之中，而且大部分人会产生一定的副作用。上述治疗方案均不能避免HPV 感染的复发。人用狂犬病疫苗是用狂犬病病毒，经培养扩增，培养后收获病毒液，灭活，再经适当纯化后，制备成制剂，用于预防狂犬病。其中，人狂犬病疫苗可采用不同狂犬病毒株生产， 包括PV-2061株、PM株、Vnukovo-32株、Flury株、aG株、CTN-1株、CVS株等。此外，狂犬病疫苗的其他功效也倍受关注。早在上世纪初，1912年美国医学杂志就发表过关于“狂犬病毒” 治疗宫颈癌的文章，90年代到本世纪初，陆续有关于病毒治疗肿瘤的文章发表，2003年7月文章(Annals of Surgical Oncology. 10 (6) :596-605, New Approaches to theTreatment of Hepatic Malignancies ViralOncolysis for Malignant LiverTumors)中也提到狂犬病毒、腺病毒、单纯胞疹病毒等所具有的抑瘤作用，而将这些病毒统称为“溶瘤病毒”。公开号为CN1778389的中国发明专利申请给出了《一种治疗肿瘤的药物及该药物在制备治疗肿瘤药物中应用》，叙述了一种狂犬病疫苗在治疗肿瘤方面的应用，具体地说是一种以人用狂犬病纯化疫苗为单一成分的治疗肿瘤的药物及该药物在制备治疗肿瘤病药物中的应用。公开号为CN1015M539的中国发明专利申请给出了一种《狂犬病人免疫球蛋白在制备防治乙型脑炎药物中的新用途及狂犬病与乙脑联合疫苗》，叙述了狂犬病人免疫球蛋白制备防治乙型脑炎药物的新用途。然而，本发明人尚未检索到人用狂犬病疫苗对HPV感染的治疗报道。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种新的治疗人乳头瘤病毒感染的药物，该药物的活性成分为人用狂犬病疫苗，对人乳头瘤病毒感染有明显的治疗作用，无毒副作用；本发明的目的之二在于提供这种药物在治疗人乳头瘤病毒感染药物中的应用，即人用狂犬病疫苗在制备治疗人乳头瘤病毒感染药物中的新用途。本发明给出的技术解决方案是这种治疗人乳头瘤病毒感染的药物，其特征在于该药物的活性成分为人用狂犬病疫苗，并添加药学上可接受的载体制成。为更好的实现本发明的目的，所述人用狂犬病疫苗可由以下任意一种狂犬病毒株制备:PV-2061 株、PM 株、Vnukovo-32 株、Flury 株、aG 株、CTN-1 株、CVS 株。为更好的实现本发明的目的，所述治疗人乳头瘤病毒感染的药物为注射剂、喷雾剂、凝胶剂或栓剂，其中每剂量含人用狂犬病疫苗0. 1 15IU。本发明给出的该药物在制备治疗HPV感染药物中的应用，即人用狂犬病疫苗的新用途，其特点是在制备治疗人乳头瘤病毒感染药物中的应用。为更好的实现本发明的目的，所述人用狂犬病疫苗为注射剂、喷雾剂、凝胶剂或栓剂，人临床用量为0. 1 15IU/剂量。为更好的实现本发明的目的，所述人用狂犬病疫苗的人临床用量优选2. 5 7. 5IU/剂量，肌肉注射或粘膜给药。与现有技术相比，本发明的有益效果是本发明的药物具有安全，有效，治愈后不易复发等特点。对人乳头瘤病毒感染阳性患者治疗的阴转率可达90%。
具体实施例方式本发明可以通过以下实施例实现，但不受以下实施例中比例、组成、方法、步骤的限制。应该理解，这里讨论的实施例和实施方案只是为了说明，对熟悉该领域的人可以提出各种改进和变化，这些改进和变化将包括在本申请的精神实质和范围以及所附的权利要求范围内。实施例1 用狂犬病毒PV-2061株生产人用狂犬病疫苗狂犬病病毒PV-2061株，接种于真核细胞，(包括Vero细胞、地鼠肾细胞、人二倍体细胞、鸡胚细胞，优选Vero细胞)，收获病毒液，经灭活，纯化后，加入药学上可接受的载体， 制备成人用狂犬病疫苗制剂，剂量为0. 5 10. 5IU/剂量。实施例2 用狂犬病毒PM株生产人用狂犬病疫苗狂犬病病毒PM株，接种于真核细胞，(包括Vero细胞、地鼠肾细胞、人二倍体细胞、 鸡胚细胞，优选人二倍体细胞)，收获病毒液，经灭活，纯化后，加入药学上可接受的载体，制备成人用狂犬病疫苗制剂，0. 5 10. 5IU/剂量。实施例3 用狂犬病毒Vnukovo-32株生产人用狂犬病疫苗狂犬病病毒Vnukovo-32株，接种于真核细胞，(包括Vero细胞、地鼠肾细胞、人二倍体细胞、鸡胚细胞，优选地鼠肾细胞)，收获病毒液，经灭活，纯化后，加入药学上可接受的载体，制备成人用狂犬病疫苗制剂，0. 5 10. 5IU/剂量。实施例4 用狂犬病毒Flury-32株生产人用狂犬病疫苗狂犬病病毒Flury-32株，接种于真核细胞细胞(包括Vero细胞、地鼠肾细胞、人二倍体细胞、鸡胚细胞，优选鸡胚细胞)，收获病毒液，经灭活，纯化后，加入药学上可接受的载体，制备成人用狂犬病疫苗制剂，0. 5 10. 5IU/剂量。实施例5 用狂犬病毒aG株生产人用狂犬病疫苗狂犬病病毒aG株，接种于真核细胞细胞(包括Vero细胞、地鼠肾细胞、人二倍体细胞、鸡胚细胞，优选鸡胚细胞)，收获病毒液，经灭活，纯化后，加入药学上可接受的载体， 制备成人用狂犬病疫苗制剂，0. 5 10. 5IU/剂量。实施例6 用狂犬病毒CTN-I株生产人用狂犬病疫苗狂犬病病毒CTN-I株，接种于真核细胞细胞(包括Vero细胞、地鼠肾细胞、人二倍体细胞、鸡胚细胞，优选鸡胚细胞)，收获病毒液，经灭活，纯化后，加入药学上可接受的载体，制备成人用狂犬病疫苗制剂，0. 5 10. 5IU/剂量。实施例7 狂犬病疫苗注射剂制备人用狂犬病疫苗可制备成注射剂，以下提供几种制备方案，以进一步说明本发明， 但这些方案不应误认为是限制本发明的范围。本领域技术人员应该明白，制备人用狂犬病疫苗可以采用不同辅料、制剂工艺、活性成分含量、制剂的灌装量等。
方案1 不含佐剂的人用狂犬病疫苗注射液，每剂量含以下成分
人用狂犬病疫苗 磷酸氢二钠.12H20 磷酸二氢钠.2H20 氯化钠硫柳汞人血白蛋白注射用水
2. 5IU 4. 5IU 1. 34mg 0. 20mg 4. 25mg 0. 025mg IOmg
补足0. 5ml
用盐酸或氢氧化钠调节pH值为7. 2 8. 0，分装，制备成人用狂犬病疫苗注射剂。
方案2 不含佐剂的人用狂犬病疫苗冻干制剂每剂量含以下成分人用狂犬病疫苗2. 5 4. 5IU磷酸氢二钠.12H201. 34mg磷酸二氢钠.2H200. 20mg氯化钠4. 25mg右旋糖酐15mg人血白蛋白IOmg注射用水补足0. 5ml用盐酸或氢氧化钠调节pH值为7. 2 8. 0，分装，冷冻干燥，制备成人用狂犬病疫苗冻干制剂。方案3 含佐剂的人用狂犬病疫苗注射液，佐剂可以为PICKCa佐剂、AL(OH)3佐剂或磷酸铝
佐剂，每剂量含以下成分人用狂犬病疫苗1. OIU人用狂犬病疫苗2. 5 4. 5IU磷酸氢二钠.12H201. 34mg磷酸二氢钠.2H200. 20mg氯化钠4. 25mgAL(OH)30. 35mg注射用水补足0. 5ml用盐酸或氢氧化钠调节pH值为7. 2 8. 0，分装，制备成人用狂犬病疫苗注射剂。实施例8 狂犬病疫苗栓剂制备人用狂犬病疫苗可制备栓剂，以下提供1种制备方案，但这些方案不应误认为是限制本发明的范围。本领域技术人员应该明白，制备人用狂犬病疫苗可以采用不同辅料、制剂工艺、活性成分含量、栓剂的重量等。每3g可制备人用狂犬病疫苗栓剂中含有以下成分人用狂犬病疫苗0. 5IU明胶0. 6g甘油2. Ig对羟基苯甲酸甲酯5. ^ig对羟基苯甲酸丙酯0.6mg注射用水补足3g实施例9 狂犬病疫苗凝胶剂制备人用狂犬病疫苗可制备凝胶剂，以下提供1种制备方案，但这些方案不应误认为是限制本发明的范围。本领域技术人员应该明白，制备人用狂犬病疫苗可以采用不同辅料、 制剂工艺、活性成分含量等。每10克可制备人用狂犬病疫苗凝胶剂含以下成分人用狂犬病疫苗10. 5IU卡波姆树脂(9；34)30mg
对羟基苯甲酸甲酯对羟基苯甲酸丙酯甘油用氢氧化钠调节pH值为注射用水
18mg 2mg
Ig 6 8 补足IOg实施例10 人用狂犬病疫苗喷雾剂制备人用狂犬病疫苗可制备成喷雾剂剂，以下提供1种制备方案，但这些方案不应误认为是限制本发明的范围。本领域技术人员应该明白，制备人用狂犬病疫苗可以采用不同辅料、制剂工艺、活性成分含量等。每毫升可制备人用狂犬病疫苗凝胶剂含以下成分人用狂犬病疫苗0. IIU卡波姆树脂(9；34)0. 3mg对羟基苯甲酸甲酯l.ang对羟基苯甲酸丙酯0. ang甘油0. Ig用氢氧化钠调节pH值为 6 8注射用水补足Iml实施例11 人用狂犬病疫苗治疗HPV感染通过一组志愿者参加的临床前试验，研究了人用狂犬病疫苗对HPV感染的治疗作用。40名患者均为女性，年龄从27 62岁，临床检测感染HPV病毒。通过基因检测分型， HPV亚型包括HPV6、11、16、18、31、33、35、45、52、56、58、59、66型，每个病例为单一亚型感染或多个亚型合并感染。所有志愿者随机分为试验组和对照组，实验组每日肌肉注射人用狂犬病疫苗，每天1次，每次2. 5IU，连续30天，部分也采用栓剂或者气雾剂的粘膜给药方式给药，每天一次。对照组不做处理。于2个月后，接受HPV感染情况检查。对照组于停止第一轮试验，并检测HPV感染后，接受人狂犬病疫苗治疗，给药方案同上述，于2个月后，接受 HPV感染情况检查。所有试验组合对照组于停药1年后，接受HPV感染情况检查。本专业的技术人员应该清楚，给药方法也可采用局部粘膜给药，即使用栓剂或气雾剂，通过粘膜接触的方式是药物透过粘膜吸收进体内，给药剂量可从0. 1-10IU/剂量。本专业的技术人员也应该清楚，除上述涉及的HPV亚型外，该药物也可用于其它亚型HPV感染的治疗。研究结果显示，与对照组相比，用药1个月后，试验组20个HPV病毒阳性病例中， 有19个病例转为阴性，转阴率为95%。而对照组20个病例仍为阳性。对照组20个病例用药1个月后，其中的18个病例转为阴性，转阴率为90%。停药1年后，40个病例中，有35 个仍为阴性。在试验期间，未观察到不良反应。表1是试验分组和检测结果汇总。研究结果表明，人用狂犬病疫苗对人乳头瘤病毒感染有明显的治疗作用，且未发现毒副作用。表1 人用狂犬病疫苗治疗人乳头瘤病毒感染试验分组和检测结果
权利要求
1.一种治疗人乳头瘤病毒感染的药物，其特征在于该药物的活性成分为人用狂犬病疫苗，并添加药学上可接受的载体制成。
2.根据权利要求1所述的治疗人乳头瘤病毒感染的药物，其特征在于所述人用狂犬病疫苗由以下任意一种狂犬病毒株制备PV-2061株、PM株、Vnukovo-32株、Flury株、aG株、 CTN-I 株、CVS 株。
3.权利要求1所述的治疗人乳头瘤病毒感染的药物，其特征在于所述治疗人乳头瘤病毒感染的药物为注射剂、喷雾剂、凝胶剂或栓剂，其中每剂量含人用狂犬病疫苗0. 1 15IU。
4.权利要求1所述药物在制备治疗HPV感染药物中的应用，其特征在于人用狂犬病疫苗在制备治疗人乳头瘤病毒感染药物中的应用。
5.根据权利要求4所述人用狂犬病疫苗的新用途，其特征在于所述人用狂犬病疫苗为注射剂、喷雾剂、凝胶剂或栓剂，人临床用量为0. 1 15IU/剂量。
6.根据权利要求5所述人用狂犬病疫苗的新用途，其特征在于所述人用狂犬病疫苗的人临床用量优选2. 5 7. 5IU/剂量，肌肉注射或粘膜给药。
全文摘要
一种治疗HPV感染的药物以及该药物在制备治疗HPV感染药物中的应用，其特点是该药物的活性成分为人用狂犬病疫苗，并添加药学上可接受的载体制成；本发明还给出了该药物在制备治疗HPV感染药物中的应用，即人用狂犬病疫苗在制备治疗人乳头瘤病毒感染药物中的新用途。本发明给出的治疗人乳头瘤病毒感染药物(人用狂犬病疫苗)对人乳头瘤病毒感染具有明显的治疗作用，通过动物实验和临床前观察，均获得满意的有益的效果，并具有安全，有效，治愈后不易复发等特点，对人乳头瘤病毒感染阳性患者治疗的阴转率可达90％。
文档编号A61P31/20GK102416175SQ20111002134
公开日2012年4月18日 申请日期2011年1月18日 优先权日2011年1月18日
发明者于海春, 孙非非, 张庆义, 杨俊伟, 白珠穆, 赵会林, 赵维诚, 高军 申请人:辽宁成大生物股份有限公司