一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血匀浆复合物及其制备方法

专利名称：一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血匀浆复合物及其制备方法
技术领域：
本发明属于美容保健和医药生物技术领域，涉及一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物及其制备方法。
背景技术：
关于人体表皮的技术背景表皮是人体的第一道防护屏障，其主要组成细胞为角朊细胞，为了完成其屏障功能，角朊细胞必须进行复杂而且受到严密调控的分化过程，最终形成包括基底层、棘层、颗粒层、透明层及角质层的复层结构。1、基底层是表皮的最底层，借基膜与深层的真皮相连。基底层细胞皆附在基底膜上，它是表皮中唯一可以分裂复制的细胞，并可以直接摄取微血管内的养分，以补充细胞分裂复制之所需。基底层是一层矮柱状上皮细胞。细胞较小、排列整齐，核呈卵圆形胞质中常含有黑色素颗粒。矮柱状上皮细胞之间有黑色素细胞。黑色素细胞略呈圆形，有树枝状突起，胞核较小，能产生黑色素颗粒。黑色素颗粒的多少与皮肤颜色的深浅有关。黑色素颗粒能够吸收紫外线，使深层组织免受紫外线辐射的损害。基底层的细胞分裂比较活跃，不断产生新细胞并向浅层推移，以补充衰老、脱落的角质细胞。2、棘细胞层位于基底层的浅面，由4-10层多边形细胞组成，细胞较大，由许多棘状突起，胞核呈圆形。较老的细胞往上送达棘细胞层。在这儿他们会扩大呈扁平状，并长出棘状物，以便牢固地攀靠在一起。3、颗粒层位于棘层的浅面，由2-3层梭形细胞组成。胞质中有大小不等的透明角质颗粒。普通染色呈强嗜碱性，胞核较小，染色较淡。老化的细胞继续被推送到颗粒层里。 至此，细胞内已充满着含角质素的颗粒。随着角质素的增加，细胞会逐渐地角质化而死亡。4、透明层位于颗粒层的浅面，由2-3层无核的扁平细胞组成。胞质中含有嗜酸性透明角质，它由颗粒层细胞的透明角质颗粒变性而成。5、角质层位于表皮的最浅层，由几层到几十层扁平无核角质细胞组成，细胞质内充满嗜酸性的角蛋白，对酸、碱，摩擦等因素有较强的抵抗力。角质层的表面细胞常呈小片脱落，形成皮屑。角质层是表皮的最上层，由已经完全角质化的死细胞所构成的。这些紧密相连的死细胞，构成了最重要的保护屏障层，能防止外界化学、物理、微生物等的侵犯。关于人体表皮屏障功能的技术背景表皮位于皮肤的最外层，是和美容关系最密切的结构，皮肤的完整性、厚度、质地和水合程度在一定程度上决定着皮肤的美观和皮肤的生理功能。对于各种原因(年龄、日晒、药物、美容等)引起的角质层面部表皮的变薄或损伤，容易导致皮肤的生理功能失调， 引起皮肤疾病，如皮肤潮红、毛细血管扩张、色素沉着、皮肤老化，甚至引起某些皮肤疾病。1、在内外界各种因素的刺激剂、致敏剂的作用下，使表皮细胞间的间质受到破坏， 细胞与细胞间的粘接性丧失，表皮角质形成细胞排列紊乱、错位。真皮和表皮内的水分大量逸出，水分丢失。皮肤丢失水分后皮肤就干燥、缺水，潮红，龟裂，鳞屑，严重者发生皲裂，出血。2、表皮屏障功能障碍，将使得表皮角质形成细胞的细胞与细胞之间的细胞间质遭到破坏、丢失，粘合力消失，角质形成细胞就会脱落。真皮内和表皮水分丢失，皮肤干燥，表皮细胞更换时间就会缩短。脱落下来的角质形成细胞是角化过度或角化不全细胞。大量角质细胞堆积，不断地脱落，这就成了银屑病。3、当表皮屏障功能丧失，大量水分丢失。表皮丧失了保湿功能，皮肤干燥、鳞屑、龟裂，形成皮肤干燥症。表皮水分大量丢失，表皮细胞层次变薄，真皮内胶原纤维减少，排列紊乱，从而导致皮肤干燥，萎瘪，老化，缺乏弹性，出现皱纹。进而发生皮肤灰暗，色素沉着和发生各种老年疣。4、皮肤屏障功能障碍，细胞间隙加大，皮肤完整性被破坏。从而对外界环境中各种物理，化学，微生物的刺激敏感性增高。由此引起皮肤病和皮肤干燥症、皮肤瘙痒症、湿疹、 异位性皮炎、银屑病等。这些疾病可以归结为干燥性皮肤病。因此，表皮作为人体肌肤的第一道天然屏障，对机体的保护具有以下多方面的作用。第一，能防护机械性、物理性刺激，这是因为表皮的角质层致密而坚韧，在经常受到摩擦和压力的部位能增厚，以抵抗摩擦与压迫。另外，表皮角质层和色素可以防止紫外线损伤， 角质层可将大部分日光反射回去，日晒会使角质层增厚，此为防护紫外线的保护性反应，而黑色素有较好的吸收和遮断紫外线的作用，阻止紫外线穿透皮肤，使深部组织器官不致受到伤害；第二，可以防护化学物质的腐蚀，这是由于角质层细胞为无细胞核和含大量水分的扁平形细胞，似房顶瓦片互相交错，紧密结合，形成一层几乎不可渗透的屏障，能阻止多数化学物质的吸收，并防止表皮下面的液体渗透出来。如角质层受到损伤，除失去水分外，渗透性也会发生变化，皮肤屏障作用丧失。第三，正常的皮肤经常接触细菌等微生物，在健康情况下不发生感染。除皮肤面上的毛囊口是相对的弱点外，一般说皮肤是有抵抗细菌侵袭能力的。有人认为这是与正常皮肤的酸性反应(PH5.5左右)有关。皮肤表面上形成的“酸性膜”，不利于细菌、霉菌和病毒的生长和繁殖。皮肤不仅仅对机体具有保护作用，同时对机体生理功能具有调节作用。比如，正常角质层中的脂质、天然保湿因子使角质层保持一定的含水量，对皮肤具有保湿功能，保持皮肤的柔软性、弹性；另外健康的皮肤既可防止过多的体内热外散，又可防止过高的体外热传入。所以，表皮的重建及修复对于皮肤的保护是非常重要的。关于当前表皮重建及修复的技术背景如何重建或修复表皮屏障功能是处理皮肤问题的首选。修复表皮屏障功能最简单的方法就是外用保湿剂化妆品。所谓保湿化妆品，就是能够能增加皮肤水分，湿度的就是保湿化妆品，其主要的功能是增加表皮角质细胞的含水量，使用之后可以覆盖在表皮上形成一层油，防止水分的丢失以及吸收外界水分输入皮肤，可以很快纠正皮肤干燥、皲裂，但是， 这些单纯的保湿化妆品不能从根本上修复表皮屏障功能，且容易导致皮肤油腻。当前，市场上很多的表皮屏障重建及修复产品，大多是通过添加相关细胞因子，促进表皮细胞的增殖、 生长，从而重建及修复表皮屏障。1、一些表皮重建及修复产品通过添加相关的细胞生长因子来促进表皮细胞的重建和修复。如表皮生长因子(EGF)作为表皮修复和重建的主要成分，是人体内存在的一种生长因子，它的主要功能是促进皮肤细胞的分裂。研究表明极微量的EGF即能强烈刺激上皮细胞、成纤维细胞的增殖、生长，抑制衰老基因表达，阻止皮肤衰老，使皮肤各组成份保持最佳生理状态。此外，它还能刺激细胞外一些大分子(如透明质酸和胶原蛋白等)的合成与分泌，滋润皮肤，是决定皮肤活力和健康的关键因素。其作用机制是EGF主动与表皮细胞膜上的特异性受体相结合，从而激活蛋白酶，加快蛋白质的合成，促进成纤维细胞的生长， 促进表皮细胞增殖分化，促进弹性纤维细胞的发育及增强其功能，激活老化细胞的再生，加速细胞的新陈代谢和更新，快使衰老死亡的细胞得以及时补充，更多地合成和分泌胶原蛋白、透明质酸等大分子；改善皮肤微循环，提供良好的营养环境，使损伤的表皮得以即时修复和重建，同时还能达到消除皱纹、抗衰老、淡化色斑、滋润补水的效果，使肌肤恢复光洁和平滑。2、角质细胞生长因子(KGF)作为另一种用于表皮重建和修复的细胞因子，通过与上皮细胞膜上的相应受体(KGFR)结合，特异性地刺激皮肤表皮层细胞的生长、分化和迁移，使皮肤光滑细腻，消除皱纹，抗表皮老化，增加皮肤弹性；能够促进老化和受损细胞的修复，调节细胞新陈代谢；使表皮血管丰富，为皮肤细胞提供更多的营养成分和氧分子，促进皮肤恢复到最佳生理状态，使皮肤红润白嫩；另外，KGF可明显刺激人成熟角质细胞的生长，并具有防辐射和抗炎作用，能够显著加强皮肤抵御外界不良刺激的能力。其作用机制包括①促有丝分裂可能与促有丝分裂的基因(如c-myC、C-f0S)和生长因子(如转录生长因子)，以及核苷酸合成的调节酶(如腺苷琥珀酸裂解酶)有关。②激活信号通路角质细胞生长因子可能通过PKC和MAH(来完成防护作用的信号转导。③调节酶活性角质细胞生长因子可能通过诱导一些解毒酶的表达，如非硒依赖性谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化物还原酶VI、核呼吸因子和肺部表皮型脂肪酸结合蛋白等，参与活性氧簇的解毒作用。虽然这些细胞因子在表皮重建及修复上发挥了一定的作用，但由于细胞因子属于蛋白质或多肽，因此单纯地添加于化妆品中，不仅会因为它们自身较短的半衰期易导致其生物活性降低，而且，还因为化妆品中配方中的多种化工原料、以及化妆品在制备过程中的加热条件等诸多因素均容易导致细胞因子失活；特别是单一的应用细胞因子，无法全方位、 多层次地重建及修复表皮细胞；另外，当表皮受到紫外线或辐射损伤、皮肤外用某些制剂或药物、或者皮肤组织衰老时，表皮细胞膜上的细胞因子受体表达量降低，且受体活性也下降，所添加的细胞因子无法与足够的受体结合，从而使得细胞因子的生物利用度降低，无法很好地发挥其生物学效应；除此之外，目前所添加细胞因子的化妆品中，缺乏良好的细胞因子保护剂和协同剂，加上添加的细胞因子浓度或含量大多数为理论设计量，并未经过系统和规范的时效-量效及药代动力学等基础研究，因此，实际应用时不仅应用范围局限，而且作用效果也很有限。所以，如何科学、合理、有效的应用细胞因子，提高其生物活性、增加相关功效成分与细胞因子之间的相互协同保护作用、以及强化细胞因子在表皮重建中的复配作用，是我们需要去解决的问题之一。关于全血的基本组分及其功效作用的技术背景血液是流动在心脏和血管内的不透明红色液体，主要成分为血浆、血细胞和血小板三种。血细胞又分为红细胞和白细胞。血浆中含有人体所需最基本、较齐全的营养成分和生物活性物质及细胞生长因子等，如氨基酸、维生素、无机离子、糖类、激素、酶，这些成分能为细胞提供营养，促进细胞的增殖和分化，而血浆中丰富和齐全的细胞生长因子，能够特异性与目的细胞膜上受体结合、并通过细胞信号传导通路促进和加快细胞的增殖及生长代谢及相关因子的表达等，可为体外细胞培养及细胞生长和生存的提供很好的环境条件。血液中的血细胞勻浆后能释放很多的细胞营养物质，如血细胞中含有大量的超氧化物歧化酶，具有抗自由基，达到抗衰老的作用；白细胞释放的内容物可起到抗炎的作用； 血小板中勻浆后能释放生长因子、转移生长因子、血管内皮生长因子、类胰岛素生长因子、 表皮生长因子等，这些生长因子可促进软组织和皮肤的愈合，并且它们之间有着良好的协同作用。加上自体血液是抽取患者本人静脉血经离心分离后所获得的自体成分，来源方便、 制备简便、安全有效、新鲜无污染、无刺激、无过敏、无毒副作用等特点，在现代医学研究及医学美容领域中的应用越来越广泛。近年来，随着自体血浆(血清)在医学美容，整形外科(皮肤修复治疗，外科整形) 中展现出其独特的优势，并得到了良好的效果。另外由于来其源于自体，无免疫排斥，并发症少，安全性高等特点，为其进一步在皮肤美容领域中展现出来广阔的应用前景。但是，由于过低或过高浓度的血清(血浆)制品对细胞的生长并非最佳浓度，因此难以达到最佳的生物学效应；而且，过高的血液浓度有时可能会抑制表皮细胞的增殖、分化，甚至引起细胞毒性，导致表皮细胞损伤(生长迟缓或抑制)，特别需要指出的是，血清(血浆)只是全血的一部分，通常只能提供表皮细胞生长最基本的营养成分和部分微环境条件，而难以提供自体表皮层结构及其屏障重建所需要达到的最佳微环境及细胞生长因子浓度或含量和种类。 事实上，全血中的血细胞含有许多血清(血浆)之中少有的成分，如红细胞中含有丰富的抗氧化酶，如超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)等，对于表皮修复及屏障结构重建过程中的抗氧化及自由基清除至关重要；血细胞中含有的血小板经过激活后可释放多种大量细胞生长因子，这对促进或加快表皮细胞的分裂、增殖及改善表皮细胞活性及细胞膜上相应受体也具有重要意义；血细胞中的白细胞可释放出大量抗炎因子、淋巴细胞因子及其它生物活性成分因子等，对于改善表皮的免疫功能等也具有积极作用。因此，在应用血液制品进行皮肤修复和屏障功能重建时，所应用的自体血液不仅需要确定合适的浓度或剂量，而且，还需要血细胞及其所释放的多种生物活性物质及细胞生长因子等协同作用，使其有效地应用于表皮修复及皮肤屏障功能重建，更好地发挥出自体血液自体应用的最大价值和生物学效应，这也是我们所要解决的重要技术问题。

发明内容
本发明的目的是针对背景技术中存在的缺点和问题加以改进、创新，提供一种用于皮肤表皮层屏障重建的新产品，这种产品可以从根本上解决表皮屏障障碍的问题，完全可以满足人们的需求。①本发明产品主要成分来源于抽取自体静脉血经全血勻浆后所获得的自体成分，来源方便、制备简便、安全有效、新鲜无污染、无刺激、无过敏、无毒副作用；② 本发明科学、合理、有效的应用细胞因子，提高其生物活性、并增加相关功效成分与细胞因子之间的相互协同保护作用、以及强化细胞因子在表皮重建中的复配作用；③本发明确定了自体血液合适的浓度或剂量，而且，还有血细胞及其所释放的多种生物活性物质及细胞生长因子等协同作用，使其有效地应用于表皮修复及皮肤屏障功能重建，更好地发挥出自体血液自体应用的最大价值和生物学效应。本发明通过发挥了自体全血勻浆液和细胞因子各自的优势，同时屏蔽了它们之间不足，制备出了一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物，用于皮肤表皮层屏障的重建。本发明的目的是提供一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物。 本发明的另一目的是提供该用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物的制备方法。1、为了实现上述目的，本发明采用下述技术方案(1)本发明所述的一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物，其
特征在于它是由下述重量配比的原料组成
新鲜自体全血5 95
重组人表皮细胞生长因子冻干粉0.001 0.050
重组人角质细胞生长因子冻干粉0.001 0.050
枸橼酸三钠1.5 4.2
磷酸二氢钠0.20 0.35
葡萄糖3.0 4.5
枸橼酸(U0 0.52
腺嘌呤0.015 0.07
生理盐水5 35。(2)本发明所述的一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物，其特征在于它是由下述优选重量配比的原料组成
新鲜自体全血70
重组人表皮细胞生长因子冻干粉0.01
重组人角质细胞生长因子冻干粉0.01
枸橼酸三钠2.73
磷酸二氢钠0.22
葡萄糖3.20
枸橼酸0.327
腺嘌呤0.028
生理盐水23.475。
(3)本发明所述的一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物，其特征在于所述的一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物的制备方法包括以下步骤①按上述一种用于表皮重建的血液勻浆复合物的原料配比，用分析天平分别准确称取配方量的枸橼酸三钠、磷酸二氢钠、葡萄糖、枸橼酸、腺嘌呤置于经过洗消过的容器中， 加入配方量的生理盐水进行充分溶解，混合均勻，过滤除菌备用；②在准备用于盛血的容器中先加入上述配制的液体，然后严格按照人体抽血的规范化要求，将采集到的受术者的肘中静脉血液按配方量加入后颠倒混勻，然后混勻的全血进行勻浆处理，勻浆之后再使用超声破碎处理，勻浆及超声破碎过程要在低温环境中或在冰上操作进行；③将获得的自体全血勻浆物加入配方量的重组人表皮细胞生长因子冻干粉和重组人角质细胞生长因子冻干粉，充分溶解，轻轻混合均勻后，即为一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物，置于4°C冰箱中保存和备用。(4)本发明产品使用方法净面后，用热毛巾敷面或喷雾机蒸面10分钟，待毛孔张开，表皮温度提高后使用；取适量制备好的自体全血勻浆复合物自，均勻地涂抹于面部或患处，30分钟后洗净即可。2、本发明的主要技术优点与以往的皮肤表皮屏障重建产品相比，本发明的产品能从根本上解决表皮屏障功能的问题。基于自体全血勻浆液的生物学特性，其含有大量皮肤所需的营养成分，能达到保湿、抗氧化、促进相关细胞的增殖及蛋白的合成。尤其是能促进表皮层细胞的形成，预防及解决由于表皮屏障功能损害而引起的皮肤疾病，效果十分理想。①自体全血勻浆来源方便、制备简单，成本低廉；另外，正常情况下，由于来源于自体，所以自体全血勻浆使用副作用小、且自体血液不会出现过敏反应，生物相容性好，安全性高。②自体全血勻浆液能上调表皮细胞上的相关受体，从而使组方中的细胞因子能更好地与其受体结合，从而激活受体产生生物学效应，达到表皮重建的效果；另外，细胞因子和自体全血勻浆液联合使用，产生的这种强化协同作用是单纯细胞因子作用无法比拟的。③因自体全血勻浆经过强化后，除含有表皮细胞生存最基本的全营养成分及最适合的微环境条件之外，还含有表皮细胞生长最需要的细胞生长因子，特别是表皮细胞生长因子和角质形成细胞生长因子，可对表皮修复更好，皮肤屏障功能重建效果更快；自体全血勻浆液除了能强化细胞因子效果外，还能提高细胞因子在外环境中的稳定性，使得细胞因子活性保存时间更长。④用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物具有抗衰老以及保湿效果；同时自体全血勻浆复合物能促进表皮细胞、角朊细胞的增殖、分化，最终形成包括基底层、棘层、颗粒层、透明层及角质层的复层结构。从多方面、多层次、根本上改变人体皮肤各种细胞组织的代谢，改善微循环，恢复皮肤健康，达到表皮层重建的效果。⑤本发明不仅提高了表皮细胞生存所需的天然全营养成分、最适PH条件(6. 0 6. 2)、离子浓度、以及细胞生长、生存、生活的最佳微环境，还提供了激活表皮细胞所需最佳的自体全血勻浆液浓度，更加有利于表皮细胞的分裂和增殖及生命活动。
⑥本发明所应用的自体血液为合适的浓度或剂量，而且，还有血细胞及其所释放的多种生物活性物质及细胞生长因子等协同作用，使其有效地应用于表皮修复及皮肤屏障功能重建，更好地发挥出自体血液自体应用的最大价值和生物学效应。⑦由于过高的血液制品浓度可能会抑制表皮细胞的增殖、分化，甚至引起细胞毒性，导致表皮细胞损伤；过低的浓度又达不到表皮重建的效果。本发明产品组方的自体全血浓度是通过实验反复确认的，所以能更好地应用于表皮屏障功能重建，更好地发挥出其应用价值。⑧本发明制备出的一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物可望成为一个从根本上解决表皮屏障问题的产品，且其制备方法简单、操作方便、简单易学、 易于推广，适合用于有合法医疗美容资格的医疗美容机构。3、本发明的主要创新点①以自体全血勻浆液为原料制备出一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物，能从根本上解决皮肤屏障功能，而不是治标不治本。这是一般保湿剂、营养护肤品无法达到的，克服了当前技术背景存在的不足。②在自体全血勻浆中添加了表皮细胞增殖、分化所需的细胞因子，弥补了自体全血勻浆在表皮重建中的不足，确保了自体全血勻浆液的生物活性，提高了其重建表皮屏障的效果。③自体全血勻浆液能够为组方中表皮细胞生长因子、角质细胞生长因子提供很好的保护屏障，降低这些细胞因子被降解的风险，从而提高其生物活性；另外，自体全血勻浆液能激活、上调表皮细胞上的相关受体，使得表皮细胞生长因子、角质细胞生长因子能更好地与受体结合，产生生物学效应，起到了强化细胞因子的作用，这是细胞因子单独添加于一般基质中使用所无法比拟的。④本发明克服了细胞因子半衰期短，生物活性低的问题，使得细胞因子，可以全方位、多层次地重建及修复表皮细胞；另外，本发明经过系统和规范的时效-量效及药代动力学等基础研究，所以更加科学、合理、有效的应用细胞因子，提高其生物活性、增加相关功效成分与细胞因子之间的相互协同保护作用、以及强化了细胞因子在表皮重建中的复配作用。⑤本发明确定了在应用自体血液进行皮肤修复和屏障功能重建时，所需要的合适浓度或剂量，同时，在血细胞及其所释放的多种生物活性物质及细胞生长因子等的协同作用下，使自体血液有效地应用于表皮修复及皮肤屏障功能重建，更好地发挥出自体血液自体应用的最大价值和生物学效应。⑥组方中自体全血勻浆液和表皮细胞生长因子、角质细胞生长因子以及其它辅助成分之间能相互促进、相互调节，达到了扬长避短、强强联合的作用；加上复合物合适的 PH(6. 0 6.幻以及合适的浓度，使得自体全血勻浆复合物能最大限度地发挥其表皮屏障重建及修复作用。4、本发明的一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物作用原理血液中含有人体所需最基本、较齐全的营养成分和生物活性物质及细胞生长因子等，如氨基酸、维生素、无机离子、糖类、激素、酶，这些成分能为细胞提供营养，促进细胞的增殖和分化，为体外细胞培养及细胞生长和生存的提供很好的环境条件。而通过勻浆后的全血后能释放很多的细胞营养物质，如血细胞中含有大量的超氧化物歧化酶，具有抗自由基，达到抗衰老的作用；白细胞释放的内容物可起到抗炎的作用；血小板中勻浆后能释放生长因子、转移生长因子、血管内皮生长因子、类胰岛素生长因子、表皮生长因子等，这些生长因子可促进软组织和皮肤的愈合，并且它们之间有着良好的协同作用。加上自体血液是抽取患者本人静脉血经离心分离后所获得的自体成分，来源方便、制备简便、安全有效、新鲜无污染、无刺激、无过敏、无毒副作用等特点。全血勻浆后的这些特点为其应用于表皮层屏障提供了得天独厚的条件，能促进表皮细胞的增殖、分化，使得表皮细胞层变厚，增加真皮层内的胶原纤维，使得皮肤水润，富有弹性；增加表皮细胞间的粘接性，保持表皮内的水分，防止皮肤干燥；可以从根本上解决表皮屏障问题。从而能解决由于各种原因引起的角质层面部表皮的变薄或损伤而引起皮肤疾病，如皮肤潮红、毛细血管扩张、色素沉着、皮肤老化等。组方中的表皮生长因子，能促进成纤维细胞、表皮细胞代谢、增殖和生长，促进弹性纤维细胞的发育及增强其功能，激活老化细胞的再生，加速细胞的新陈代谢和更新，快速代谢老化角质，修复断裂的浅表皮成纤维细胞，延缓表皮细胞的老化。即使极微量的表皮生长因子也能强烈刺激细胞生长，抑制衰老基因表达，阻止皮肤衰老，使皮肤各组成份保持最佳生理状态，它还能刺激透明质酸和胶原蛋白等的合成与分泌，增加皮肤含水量，进而增加皮肤弹性，滋润肌肤。表皮生长因子能刺激外胚层和内胚层起源的各种细胞增殖迁移，加快新陈代谢达到皮肤代谢的效果。同时还可以促进皮肤血管壁细胞的新陈代谢，增加毛细血管的密度，改善皮肤微循环，从而使气血通畅，肤色红润。表皮生长因子促进细胞营养物质从细胞外主动运至细胞内，增加细胞内的营养，快速生成新生细胞，使衰老细胞快速角化、 脱落，促进真皮层细胞分泌合成胶原纤维、多糖、糖蛋白等功能分子，使已断裂、变性的胶原纤维和弹性纤维得到修复，肌纤维排列整齐紧密，从而减少和消除皱纹。表皮生长因子对表皮细胞的增殖有较强的促进作用，使用后表皮细胞变得年轻化，使新生细胞比例增加，降低了皮肤中黑色素和有色细胞的含量，使得表皮组织中较少有色素及死亡细胞的残留等累积，使皮肤表现出白皙光滑，消除瘀斑和色素沉着等异常皮肤表现。在去斑的治疗期和恢复期使用表皮生长因子能有效遏止色素斑复发。角质细胞生长因子通过与上皮细胞膜上的相应受体结合，特异性地刺激皮肤表皮层细胞的生长、分化和迁移，使皮肤光滑细腻，消除皱纹，抗表皮老化，增加皮肤弹性；能够促进老化和受损细胞的修复，调节细胞新陈代谢；使表皮血管丰富，为皮肤细胞提供更多的营养成分和氧分子，促进皮肤恢复到最佳生理状态，使皮肤红润白嫩；另外，角质细胞生长因子可明显刺激人成熟角质细胞的生长，并具有防辐射和抗炎作用，能够显著加强皮肤抵御外界不良刺激的能力。其作用机制包括①促有丝分裂可能与促有丝分裂的基因(如 c-myc、c-fos)和生长因子(如转录生长因子)，以及核苷酸合成的调节酶(如腺苷琥珀酸裂解酶)有关。②激活信号通路角质细胞生长因子可能通过PKC和MAH(来完成防护作用的信号转导。③调节酶活性角质细胞生长因子可能通过诱导一些解毒酶的表达，如非硒依赖性谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化物还原酶VI、核呼吸因子和肺部表皮型脂肪酸结合蛋白等，参与活性氧簇的解毒作用。角质层细胞有保护皮肤的重要功能，衰老和角化严重的角质层细胞只能用表皮细胞生长因子这一类的生长因子加速表皮细胞的更新，用新的角层细胞取代老化的角质细胞。更重要的是皮下组织有丰富的免疫细胞(如树状突细胞、巨噬细胞等)，有效地保护皮肤免遭各种病原对皮肤的侵袭，还能清除各种代谢产物，使代谢产物不容易积累形成暗疮或黑斑，这些免疫细胞本身还能释放各种生长因子，调节各种细胞生长。角质细胞生长因子与表皮细胞生长因子在功能上是类似的，但在深层修复，促进血管和胶原纤维的生长和发育上，角质细胞生长因子优于表皮细胞生长因子，但表皮细胞生长因子分子量小，容易进入表皮细胞，表皮细胞是其主要的靶细胞，故对表皮细胞生长有特别的功能。它们一起是可以兼容并互为补充的，两者配合使用对修复表皮和祛除皱纹的作用更显著。因此利用自体全血勻浆复合物不仅可以给皮肤提供各种需要的营养成分，而且能够给皮肤提供合适的微环境，利于表皮细胞的增殖、分化。总的来说，本发明确定了在应用自体血液进行皮肤修复和屏障功能重建时，所需要的合适浓度或剂量，同时，在血细胞及其所释放的多种生物活性物质及细胞生长因子等的协同作用下，使自体血液有效地应用于表皮修复及皮肤屏障功能重建，更好地发挥出自体血液自体应用的最大价值和生物学效应。另外，自体血液与细胞因子的复配，克服了细胞因子半衰期短，生物活性低的问题，使得细胞因子，可以全方位、多层次地重建及修复表皮细胞；另外，本发明经过系统和规范的时效-量效及药代动力学等基础研究，所以更加科学、合理、有效的应用细胞因子，提高了细胞因子的生物活性、增加了相关功效成分与细胞因子之间的相互协同保护作用、以及强化了细胞因子在表皮重建中的复配作用。通过这样合理的复配，使得自体全血勻浆液复合物可以从整体上，多方面、多层次地改变人体皮肤各种细胞组织的代谢，改善微循环，恢复皮肤健康，创造了一个传统化妆品难以达到的境界。5、本发明制备注意事项(1)自体全血的采血部位通常来源于肘中静脉或其他肘静脉，如肘静脉不明显或采集不便、加上血液用量不是太大时，也可采集手背静脉和外踝静脉等，但采集的最好是空腹静脉血，以减少脂血等。(2)采集血液前，应认真检查血液收集管内是否干燥和消毒，还应仔细检查采血针与血液收集器是否正确合理连接；另外，血液收集管是否放好(严防打碎)。在采血过程中， 尤应将血液沿血液收集管的管壁自然而缓慢流入，严禁剧烈振摇，严防血液产生气泡，以免出现溶血和弓I起血浆纤维蛋白原变性。(3)采血过程中，如遇个别受术者“晕针”或出现抽血眩晕时不要慌张，可立即让其平卧休息片刻即可恢复。必要时，可让其嗅吸芳香氨汀。如仍未恢复，则可针刺(或拇指掐)人中及合谷等穴位，直至苏醒。(4)为了防止抽血时发生低血糖反应及紧张性休克，应首先做好受术者的思想工作，消除其紧张心理。抽血完成后，也可嘱受术者适当饮食一些饮料、稀饭之类的流质食物； 尤其应注意了解和观察受术者全身反应状况，严密防止高血压及心血管病等意外。(5)对于可能遇到患有高脂血症的患者，为了防止出现脂血或乳糜血，建议治疗头几天坚持清淡饮食、同时采集空腹12小时以上的静脉血。通常情况下，脂血或乳糜血、溶血、黄疸血等情况，不适合用于本发明。(6)特别应该注意的是，在抽血时，严禁将采血器的气泡或空气误入至静脉之中， 而且，在抽血时注射器只能向外抽、绝对不能向静脉内推，以免注射空气进去，形成气栓造成严重后果、甚至生命危险。(7)要注意保存好所采集的血液，并及时勻浆。自体全血最好是现采现用、当天或一次用完，以保持血液新鲜和治疗效果。如实在用不完，可密封保存于低温冰箱之中，但时间不要超过3天，且在再次使用或治疗时，应置于37°C恒温水浴中稍加复温及强化。
具体实施例方式下面结合具体实施例子来进一步说明本发明的产品和制备方法实施例1 一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物的制备方法一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物是由下述优选重量配比的原料组成
新鲜自体全血70重组人表皮细胞生长因子冻干粉0.01重组人角质细胞生长因子冻干粉0.01枸橼酸三钠2.73磷酸二氢钠0.22葡萄糖3.20枸橼酸0.327腺嘌呤0.028生理盐水23.475—种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物的具体制备方法(以配制IOOml为例)(1)按上述一种用于表皮重建的血液勻浆复合物的原料配比，用分析天平分别准确称取配方量的枸橼酸三钠2. 73g、磷酸二氢钠0. 22g、葡萄糖3. 2g、枸橼酸0. 327g、腺嘌呤 0. 028g置于经过洗消过的容器中，加入配方量的生理盐水进行充分溶解，混合均勻，过滤消毒待用；(2)在准备用于盛血的容器中先加入上述配制的液体，然后严格按照人体抽血的规范化要求，将采集到的70ml受术者的肘中静脉血液按配方量加入后颠倒混勻，然后混勻的全血进行勻浆处理，勻浆之后将整个体系在超声振荡器中超声IOmin进行血细胞破碎处理，勻浆及超声破碎过程要在低温环境中或在冰上操作进行；(3)关闭超声振荡器，将获得的自体全血勻浆物加入配方量的重组人表皮细胞生长因子冻干粉IOmg和重组人角质细胞生长因子冻干粉10mg，充分溶解，轻轻混合均勻后， 即为一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物，置于4°C冰箱中保存和备用。
本发明所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行的描述，并非对本发明构思和范围进行限定，在不脱离本发明设计思想的前提下，本领域中的学者或工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变型和改进，均应落入本发明的保护范围，本发明请求保护的技术内容，已经全部记在权利要求书中。
权利要求
1. 一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物，其特征在于它是由下述重量配比的原料组成
2.根据权利要求1所述的一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物， 其特征在于它是由下述优选重量配比的原料组成
3.根据权利要求1或权利要求2所述一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物，其特征在于所述的一种用于表皮重建的血液勻浆复合物的制备方法包括以下步骤(1)按上述一种用于表皮重建的血液勻浆复合物的原料配比，用分析天平分别准确称取配方量的枸橼酸三钠、磷酸二氢钠、葡萄糖、枸橼酸、腺嘌呤置于经过洗消过的容器中，加入配方量的生理盐水进行充分溶解，混合均勻，过滤除菌备用；(2)在准备用于盛血的容器中先加入上述配制的液体，然后严格按照人体抽血的规范化要求，将采集到的受术者的肘中静脉血液按配方量加入后颠倒混勻，然后混勻的全血进行勻浆处理，勻浆之后再使用超声破碎处理，勻浆及超声破碎过程要在低温环境中或在冰上操作进行；(3)将获得的自体全血勻浆物加入配方量的重组人表皮细胞生长因子冻干粉和重组人角质细胞生长因子冻干粉，充分溶解，轻轻混合均勻后，即为一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血勻浆复合物，置于4°C冰箱中保存和备用。
全文摘要
本发明公开了一种用于自体皮肤表皮层屏障重建的自体全血匀浆复合物及其制备方法。自体全血经过匀浆后，在其所释放的多种生物活性物质及细胞生长因子的协同作用下，使自体血液有效地应用于表皮修复及皮肤屏障功能重建，更好地发挥出自体血液自体应用的最大价值和生物学效应；加上自体全血匀浆液能与其它辅助成分起到相互协同保护作用、以及强化细胞因子在表皮重建中的复配作用。因此，自体全血匀浆液复合物对表皮修复、表皮屏障功能重建效果好，能多方面、多层次地改善人体皮肤屏障功能问题，恢复皮肤健康，从根本上解决表皮屏障功能的问题。另外本发明制备方法简单、操作方便、简单易学、易于推广，适合用于有合法医疗美容资格的医疗美容机构。
文档编号A61K8/98GK102188362SQ201110118629
公开日2011年9月21日 申请日期2011年5月9日 优先权日2011年5月9日
发明者丁克祥, 丁宇, 左夏林, 杨永鹏, 罗迎霞, 董萍 申请人:丁克祥, 董萍