还原型辅酶Q₁₀的稳定方法

专利名称：还原型辅酶Q₁₀的稳定方法
技术领域：
本发明涉及还原型辅酶Qltl (reduced coenzyme Q10)的稳定方法和利用它的保存方法、分离(结晶)方法以及组合物，还涉及还原型辅酶Acl的制备方法。与现已用作食品等的氧化型辅酶Acl相比，还原型辅酶仏。表现出高的口服吸收性，它是可以用作优质食品、营养功能食品、特定保健用食品、营养辅助剂、营养剂、动物药物、饮料、饲料、化妆品、药品、治疗药物、预防药物等的化合物。
背景技术：
生物界中广泛分布的苯醌衍生物——氧化型辅酶( 1(1，由于其维生素样功能也被称为维生素Q，是作为使减弱的细胞活性恢复健康状态的营养源而使机体恢复活力的的成分。另一方面，还原型辅酶是氧化型辅酶Qltl的二电子还原体，氧化型辅酶Qltl为橙色结晶，而还原型辅酶Qltl为白色结晶。已知还原型辅酶Qltl和氧化型辅酶Qltl存在于线粒体、溶酶体、高尔基体、微粒体、过氧化物酶体或细胞膜等，作为电子传递系统的构成成分，参与ATP的生成活化、机体内的抗氧化作用、膜稳定化，是维持机体机能必不可少的物质。还原型辅酶( 1(ι容易被分子氧氧化成氧化型辅酶Qltl，在工业规模的制备、保存和处理中极难完全除去或阻断氧，并且，各操作所需的时间不同于实验室规模的制备，需要极长的时间，因此，还原型辅酶( 1(ι被残留氧氧化成氧化型辅酶( 1(ι等的不良影响大。这样就难于在工业规模上获得高质量的还原型辅酶的结晶，即使制备了高品质的还原型辅酶( 1(1，在加工成食品、营养功能食品、特定保健用食品、营养辅助剂、营养剂、动物药物、饮料、饲料、化妆品、药品、治疗药物、预防药物等或这些的原材料或组合物时，和/或加工后保存时，还原型辅酶Acl的氧化稳定性是极其重要的问题。在上述加工和保存时也极难完全除去或阻断氧，特别是加工时的加热或长期保存的过程中，残留或混入的氧造成很大的不良影响。上述制备、保管、处理以及加工、保存中的氧化防护及其重要。上述还原型辅酶( 1(ι氧化产生的副产物氧化型辅酶Qltl降低还原型辅酶Qltl的收率，并且，氧化型辅酶Ao难于从还原型辅酶Q10中分离，因此作为杂质混入产品还原型辅酶Qltl中，出现纯度降低，或者结晶变黄而给消费者和顾客不好的感觉的问题。已知还原型辅酶Giltl可以通过下述方法获得(特开平10-109933好公报)例如，通过合成、发酵、从天然物提取等以外公知的方法得到辅酶( 1(ι后，将还原型辅酶Qltl的色谱洗脱液进行浓缩的方法等。该公开公报中记载，此时可以用硼氢化钠、连二亚硫酸钠等普通还原剂将上述还原型辅酶Qltl中作为杂质存在的氧化型辅酶( 1(ι还原，然后通过色谱法进行浓缩，另外，也可以通过上述还原剂作用于现有的高纯度辅酶的方法获得还原型辅酶Q10O还已知用锌作为还原剂的方法(Journal of Lavelled Compounds，第6卷，1970年，66-7 。但是，还原型辅酶( 1(ι的上述制备方法不一定能满足要求。例如，使用色谱法的方法在工业规模使用中比较麻烦，上述还原剂在工业规模使用时，或者在制备用于食品、营养功能食品、特定保健用食品、营养辅助剂、营养剂、动物药物、饮料、饲料、化妆品、药品、治疗药物、预防药物等的还原型辅酶Qltl时，存在产生气体(氢、二氧化硫等)、臭气、安全性、使用后的处理、处理困难等问题，因此不一定是优选的。通过色谱法获得辅酶Qltl的级分后用上述还原剂获得还原型辅酶( 1(ι的方法离优选的工业制备方法就更远了。当工序和后处理的复杂时后述分子氧引起的氧化导致质量降低的原因。进一步地，即使想分离通过上述方法获得的还原型辅酶( 1(ι，从还原型辅酶( 1(ι对分子氧的不稳定性方面考虑，以高纯度的状态进行分离并不一定容易，例如，多得到含有以氧化型辅酶Qltl为首的杂质的低纯度结晶、半固体状或油状物。这样，即使通过还原反应得到了完全或几乎不含氧化型辅酶Qltl的还原型辅酶Qltl的反应混合物，也极难获得高质量的还原型辅酶Ao的结晶。因此，稳定还原型辅酶( 1(ι，即保护其不被氧化是非常重要的课题，但是迄今为止还原型辅酶Acl没有上市，有关稳定保持还原型辅酶Qici的方法等的研究基本上尚未进行。只发现上述W001/5^22A1稍微涉及了包含还原剂的组合物及其制备方法。上述W001/5^22A1公开了下述方法用维生素C(即抗坏血酸、棕榈酸抗坏血酸酯、硬脂酸抗坏血酸酯等抗坏血酸类)或维生素E等多种还原剂作为可以用于食品等的更优选的还原剂进行还原，由此制备还原型辅酶( 1(ι。另外，还提出了 将还原型辅酶( 1(ι、还原剂和表面活性剂或植物油或它们的混合物等组成的组合物、以及用于将上述组合物制成明胶胶囊或片剂进行口服的组合物，进一步地，作为获得上述组合物的方法，提出了用氧化型辅酶Acl和还原剂通过进行原位制备的方法。上述组合物及其制备方法复杂、麻烦，这是由于期待上述组合物有多种作用(即，第一，用于将氧化型辅酶Acl还原成还原型辅酶Acl的反应的组合物；第二，用于稳定保持还原型辅酶Ao的组合物)的原因。换而言之，在极特殊的环境中，将氧化型辅酶Ao还原成还原型辅酶Acl的同时，可以稳定地保持还原型辅酶^)。但是，该方法是在表面活性剂或植物油等高沸点成分或脂溶性成分中进行还原的方法，还原反应后还原型辅酶Acl的分离很困难，实质上限制了上述稳定方法和组合物直接应用到食用等方面。上述方法仅在反应混合物中可以保持还原型辅酶Qltl的纯粹状态，是原位制备。上述W001/5^22A1记载的组合物中，作为溶剂，可以根据需要含有例如甘油、1，2-丙二醇等多元醇或乙醇等有机溶剂0. 25 50重量％，优选1 25重量％，更优选1. 5 15-20重量％。但是，上述多元醇或乙醇不是必需成分，本发明说明书的实施例中，实施例2记载了不含这些物质的组合物，实施例4记载了含甘油或丙二醇1. 63重量％的组合物，实施例1和3中分别记载了含甘油4重量％、3. 55重量％的组合物。本发明对还原型辅酶( 1(ι的稳定化进行了预备研究，结果发现，维生素C类有稳定效果，但维生素E没有稳定效果，另外，维生素C类与甘油等3元或3元以上的醇一起使用时，稳定效果非常小。上述W001/5^22A1中没有详细记载组合物中所含的还原型辅酶Glltl的质量和稳定效果等，也没有特别公开与一元醇的组合发挥极其优良的稳定效果。进一步地，对利用维生素C类与一元和/或二元醇的并用产生的稳定效果的结晶方法、组合物以及处理、保存(包括在通常遇到的温度下的长期稳定保存)也没有描述。
因此，在还原氧化型辅酶( 1(ι来制备还原型辅酶( 1(ι并稳定保存的方法中，现有方法并不一定能满足要求。在这种情况下，亟待开发克服了上述问题的适用性高的稳定方法和利用该方法的保存方法、分离(结晶)方法以及组合物。另外，也希望开发不仅以反应混合物的形式得到高质量的还原型辅酶兑0、还可以方便地获得结晶，便于用于各种用途的制备方法。

发明内容
鉴于上述问题，本发明的目的是提供还原型辅酶Qltl的简便并且合适的稳定方法、利用该方法的保存方法、分离(结晶)方法和组合物。进一步地，本发明的目的是提供利用上述稳定方法制备具有广泛应用性的还原型辅酶Qltl的方法。本发明认为，如果能够建立优良的稳定方法，则可以将该稳定方法恰当地用于保存方法、分离(结晶、制备)方法或组合物。因此，进行悉心研究，发现以下结果，从而完成本发明(1)在枸橼酸类和/或抗坏血酸类的存在下，可以很好地保护还原型辅酶Qltl不被分子氧氧化，特别是在一元或二元醇类和/或醇类以外的水溶性溶剂的存在下，可以很好地防护。(2)通过在枸橼酸类和/或抗坏血酸类的存在下进行结晶，还原型辅酶可以在使氧化型辅酶的附带生成最小化的状态下转化成结晶状态，从而获得高质量的还原型辅酶Qltl结晶，特别是在一元或二元醇类和/或醇类以外的水溶性溶剂的存在下，可以很好地结晶。(3)用抗坏血酸类将氧化型辅酶( 1(ι还原成还原型辅酶后，通过使生成的还原型辅酶在抗坏血酸类的存在下继续结晶，可以在使氧化型辅酶Qici的附带生成最小化的状态下转化成结晶状态，从而获得高质量的还原型辅酶结晶，特别是在一元或二元醇类和/或醇类以外的水溶性有机溶剂的存在下，可以很好地实施。S卩，本发明涉及还原型辅酶( 1(ι的稳定方法，其特征在于，使还原型辅酶( 1(ι与枸橼酸类共存。本发明还涉及还原型辅酶Qltl的稳定方法，其特征在于，该方法是通过使还原型辅酶Qltl与抗坏血酸类共存将还原型辅酶( 1(ι稳定化的方法，所述共存在一元或二元醇和/或醇以外的水溶性溶剂的存在下进行，一元或二元醇和/或醇以外的水溶性溶剂占全部混合物的5重量％或以上。另外，本发明还涉及还原型辅酶( 1(ι的结晶方法，其特征在于，使还原型辅酶(^在含有枸橼酸类和/或抗坏血酸类的溶剂中结晶。进一步地，本发明还涉及还原型辅酶( 1(ι的制备方法，其特征在于，用抗坏血酸类将氧化型辅酶Ao还原成还原型辅酶Aci后，生成的还原型辅酶仏。的枸橼酸类和/或抗坏血酸类的存在下继续结晶。另外，本发明还涉及将通过上述方法稳定的还原型辅酶Gjici在50°C或50°C以下保存的还原型辅酶Qltl的保存方法。本发明进一步涉及含有还原型辅酶( 1(ι的组合物，其特征在于，含有还原型辅酶和枸橼酸类。本发明和涉及含有还原型辅酶Acl的组合物，其特征在于，含有还原型辅酶Α。、抗坏血酸类以及一元或二元醇和/或醇以外的水溶性溶剂，并且一元或二元醇和/或醇以外的水溶性溶剂占全部混合物的5重量％或以上。具体地，本发明涉及如下方面1、还原型辅酶Qltl的稳定方法，其特征在于使还原型辅酶Qltl与枸橼酸类共存。2、项1所述的稳定方法，其中枸橼酸类选自枸橼酸、其酯和其盐中的至少一种。3、项1或2所述的稳定方法，其特征在于，相对100重量份还原型辅酶Glltl，存在0. 1重量份或0. 1重量份以上的枸橼酸类。4、项1 3中任意一项所述的稳定方法，其中枸橼酸类以固相形式存在于包含还原型辅酶Aci的液相中。5、项1 3中任意一项所述的稳定方法，其中还原型辅酶Glltl以固相形式存在于包含枸橼酸类的液相中。6、项1 3中任意一项所述的稳定方法，其中还原型辅酶Glltl与枸橼酸类同时为液相，或共同存在于液相中。7、项4 6中任意一项所述的稳定方法，其中液相为均一相。8、项4 7中任意一项所述的稳定方法，其特征在于液相中的溶剂是选自烃类、脂肪酸酯类、醚类、醇类、脂肪酸类、酮类、氮化合物类、硫化合物类和水中的至少一种。9、项4 7中任意一项所述的稳定方法，其特征在于液相中的溶剂是一元或二元醇类和/或醇类以外的水溶性溶剂。10、项4 7中任意一项所述的稳定方法，其特征在于液相中的溶剂是乙醇、1，
2-丙二醇、聚乙二醇。11、项1 10中任意一项所述的稳定方法，除枸橼酸类外，还存在抗坏血酸类。12、还原型辅酶( 1(ι的保存方法，将通过项1 11中任意一项所述的方法稳定化的还原型辅酶Qiq在50°C或50°C以下保存。13、项12所述的方法，其中还原型辅酶Qltl的保存在脱氧的气氛中进行。14、还原型辅酶Qltl的稳定方法，其特征在于，该方法是通过使还原型辅酶和抗坏血酸类共存而使还原型辅酶Ao稳定化的方法，所述共存在一元或二元醇和/或醇以外的水溶性溶剂的存在下进行，一元或二元醇和/或醇以外的水溶性溶剂的占全部混合物的5
重量％或5重量％以上。15、项14所述的方法，其中抗坏血酸类是选自抗坏血酸、鼠李糖型抗坏血酸、阿拉伯糖型抗坏血酸、葡糖型抗坏血酸、岩藻糖型抗坏血酸、葡庚糖型抗坏血酸、木糖型抗坏血酸、半乳糖型抗坏血酸、古洛糖型抗坏血酸、阿洛糖型抗坏血酸、赤藓糖型抗坏血酸、6-脱氧抗坏血酸以及它们的酯和盐中的至少一种。16、项14或15所述的稳定方法，其特征在于，相对100重量份还原型辅酶Glltl，存在0. 1重量份或0. 1重量份以上的抗坏血酸类。17、项14 16中任意一项所述的稳定方法，其中抗坏血酸类以固相形式存在于包含还原型辅酶Ac1的液相中。18、项14 16中任意一项所述的稳定方法，其中还原型辅酶Qltl以固相形式存在于包含抗坏血酸类的液相中。19、项14 16中任意一项所述的稳定方法，其中还原型辅酶Glltl与抗坏血酸类同时为液相，或共同存在于液相中。20、项17 19中任意一项所述的稳定方法，其中液相为均一相。21、项17 20中任意一项所述的稳定方法，其特征在于液相中的溶剂是选自乙醇、1，2-丙二醇和聚乙二醇中的至少一种。22、项14 21中任意一项所述的稳定方法，除抗坏血酸类外，还存在枸橼酸类。23、还原型辅酶Qltl的保存方法，将通过项14 22中任意一项所述的方法稳定化的还原型辅酶Qltl在50°C或50°C以下保存。24、项23所述的保存方法，其中还原型辅酶Qltl的保存在脱氧的气氛中进行。25、还原型辅酶Qltl的结晶方法，其特征在于，使还原型辅酶在含有枸橼酸类和/或抗坏血酸的溶剂中结晶。26、项25所述的结晶方法，其中枸橼酸类是选自枸橼酸、其酯或其盐中的至少一种。27、项25或沈所述的结晶方法，其特征在于，相对100重量份的溶剂，存在0. 01重量份或0.01重量份以上的枸橼酸类。28、项25所述的结晶方法，其中抗坏血酸类是选自抗坏血酸、鼠李糖型抗坏血酸、阿拉伯糖型抗坏血酸、葡糖型抗坏血酸、岩藻糖型抗坏血酸、葡庚糖型抗坏血酸、木糖型抗坏血酸、半乳糖型抗坏血酸、古洛糖型抗坏血酸、阿洛糖型抗坏血酸、赤藓糖型抗坏血酸、6-脱氧抗坏血酸以及它们的酯和盐中的至少一种。29、项25或28所述的结晶方法，其特征在于，相对100重量份溶剂，存在0. 01重量份或0.01重量份以上的抗坏血酸类。30、项25 四中任意一项所述的结晶方法，其中溶剂是选自烃类、脂肪酸酯类、醚类、醇类、脂肪酸类、酮类、氮化合物类、硫化合物类和水中的至少一种。31、项30所述的结晶方法，其中溶剂是一元或二元醇类和/或醇类以外的水溶性溶剂。32、项31所述的结晶方法，其特征在于，一元或二元醇类和/或醇类以外的水溶性溶剂以一元或二元醇类和/或醇类以外的水溶性有机溶剂和水的混合溶剂的形式使用，一元或二元醇类和/或醇类以外的水溶性有机溶剂的比例为90 99. 5%。33、项31或32所述的方法，其中一元或二元醇类和/或醇类以外的水溶性有机溶剂为乙醇、丙酮或它们的混合物。34、项30所述的结晶方法，其中溶剂是选自烃类、脂肪酸酯类、醚类和腈中的至少一种。35、项25 34中任意一项所述的结晶方法，结晶中单独或组合实施冷却、浓缩、溶剂置换或弱溶剂的使用。36、项35所述的结晶方法，其中结晶温度为25°C或25°C以下。37、项35或36所述的结晶方法，其中结晶单独使用或并用冷却晶析。38、项38所述的结晶方法，其中冷却速度为40°C /小时或以下。39、项25 38中任意一项所述的结晶方法，在相对100重量份的溶剂含有1重量份或1重量份以上的还原型辅酶Qltl的浓度下使还原型辅酶Acl结晶。40、项39所述的结晶方法，在相对100重量份的溶剂含有5 10重量份的还原型辅酶Qltl的浓度下使还原型辅酶Ao结晶。41、项25 40中任意一项所述的结晶方法，结晶在单位体积的搅拌所需动力为0. 01kff/m3或以上的强制流动下进行。42、项25 41中任意一项所述的结晶方法，结晶时添加晶种。43、项25 42中任意一项所述的结晶方法，结晶在脱氧的气氛中进行。44、项25 43中任意一项所述的结晶方法，其中从母液中除去杂质。45、项44所述的结晶方法，其中除去的杂质是选自还原型辅酶％、还原型辅酶％和还原型辅酶Gl7中的至少一种。46、还原型辅酶( 1(ι结晶的制备方法，其特征在于，用抗坏血酸类将氧化型辅酶( 1(ι还原成还原型辅酶后，生成的还原型辅酶( 1(ι在枸橼酸类和/或抗坏血酸类的存在下继续结晶。47、项46所述的制备方法，其中抗坏血酸类是选自抗坏血酸、鼠李糖型抗坏血酸、阿拉伯糖型抗坏血酸、葡糖型抗坏血酸、岩藻糖型抗坏血酸、葡庚糖型抗坏血酸、木糖型抗坏血酸、半乳糖型抗坏血酸、古洛糖型抗坏血酸、阿洛糖型抗坏血酸、赤藓糖型抗坏血酸、6-脱氧抗坏血酸以及它们的酯和盐中的至少一种。48、项46或47所述的制备方法，还原反应中所用的抗坏血酸类的用量为可以将氧化型辅酶( 1(ι变成还原型辅酶Qltl的有效量。49、项48所述的制备方法，其中有效量是相对氧化型辅酶Qltl为1倍摩尔量或以上。50、项46 49中任意一项所述的制备方法，其中在碱性物质或亚硫酸氢盐的存在下进行还原。51、项46 50中任意一项所述的制备方法，其特征在于，结晶时，相对100重量份溶剂，存在0. 01重量份或0. 01重量份以上的枸橼酸类和/或抗坏血酸类。52、权利要求46 51中任意一项所述的制备方法，其中所用溶剂是选自烃类、脂肪酸酯类、醚类、醇类、脂肪酸类、酮类、氮化合物类、硫化合物类和水中的至少一种。53、项52所述的制备方法，其中所用溶剂是一元或二元醇类和/或醇类以外的水溶性溶剂。54、项53所述的制备方法，其特征在于，结晶在一元或二元醇类和/或醇类以外的水溶性有机溶剂与水的混合溶剂中进行，一元或二元醇类和/或醇类以外的水溶性有机溶剂的含量为90 99. 5%。55、项53或M所述的制备方法，其中一元或二元醇类和/或醇类以外的水溶性有机溶剂为乙醇、丙酮、水或它们的混合物。56、项55所述的制备方法，结晶温度为25°C或25°C以下。57、项46 56中任意一项所述的制备方法，其中在30°C或30°C以上进行还原反应后，在25°C或25°C以下进行结晶。58、项46 57中任意一项所述的制备方法，其中结晶时单独使用或者并用冷却晶析。59、项58所述的制备方法，冷却晶析过程中的冷却速度为40°C /小时或以下。60、项46 59中任意一项所述的制备方法，其在脱氧的气氛中进行。CN 102381948 A
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7/24 页61、项46 60中任意一项所述的制备方法，其中从母液中除去杂质。62、项61所述的结晶方法，其中除去的杂质是选自还原型辅酶％、还原型辅酶％和还原型辅酶Gl7中的至少一种。63、含有还原型辅酶Qltl的组合物，其特征在于，含有还原型辅酶Qltl和枸橼酸类。64、项63所述的含有还原型辅酶Qltl的组合物，其中枸橼酸类是选自枸橼酸、其酯或其盐中的至少一种。65、项63或64所述的含有还原型辅酶Qltl的组合物，其中相对还原型辅酶QltlIOO 重量份，含有枸橼酸类0.1重量份或0.1重量份以上。66、项63 65中任意一项所述的含有还原型辅酶Qltl的组合物，其进一步含有选自乙醇、1，2-丙二醇和聚乙二醇的中至少一种作为溶剂。67、项63 66中任意一项所述的含有还原型辅酶Qltl的组合物，除了枸橼酸类以外，其还含有抗坏血酸类。68、项63 67中任意一项所述的含有还原型辅酶Qltl的组合物，其中还原型辅酶 Qltl为外部添加物。69、项63 68中任意一项所述的含有还原型辅酶Qltl的组合物，其中除了还原型辅酶Qltl外，还含有其它活性物质。70、项63 69中任意一项所述的组合物，其被加工成口服给药的形式。71、项70所述的组合物，其中所述形式为胶囊剂。72、项71所述的组合物，其中胶囊剂为软胶囊。73、项63 72中任意一项所述的组合物，在脱氧的氛围下制备或保存。74、含有还原型辅酶( 1(ι的组合物，其特征在于，含有还原型辅酶Qltl、抗坏血酸类和一元或二元醇和/或醇以外的水溶性溶剂，并且一元或二元醇和/或醇以外的水溶性溶剂为全部组合物的5重量％或以上。75、项74所述的含有还原型辅酶Glltl的组合物，其中抗坏血酸类是选自抗坏血酸、 鼠李糖型抗坏血酸、阿拉伯糖型抗坏血酸、葡糖型抗坏血酸、岩藻糖型抗坏血酸、葡庚糖型抗坏血酸、木糖型抗坏血酸、半乳糖型抗坏血酸、古洛糖型抗坏血酸、阿洛糖型抗坏血酸、赤藓糖型抗坏血酸、6-脱氧抗坏血酸以及它们的酯和盐中的至少一种。76、项74或75所述的含有还原型辅酶Qltl的组合物，其特征在于相对还原型辅酶 Q10IOO重量份，含有抗坏血酸类0. 1重量份或0. 1重量份以上。77、项74 76中任意一项所述的含有还原型辅酶Qltl的组合物，其进一步含有选自乙醇、1，2-丙二醇和聚乙二醇的中至少一种作为溶剂。78、项74 77中任意一项所述的含有还原型辅酶Qltl的组合物，除了抗坏血酸类以外，其还含有枸橼酸类。79、项74 78中任意一项所述的含有还原型辅酶Qltl的组合物，其中还原型辅酶 Qltl为外部添加物。80、项74 79中任意一项所述的含有还原型辅酶Qltl的组合物，其中除了还原型辅酶Qltl外，还含有其它活性物质。81、项74 80中任意一项所述的组合物，其被加工成口服给药的形式。82、项81所述的组合物，其中所述形式为胶囊剂。CN 102381948 A
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8/24 页83、项82所述的组合物，其中胶囊剂为软胶囊。84、项74 83中任意一项所述的组合物，在脱氧的氛围下制备或保存。根据本发明，用安全并且容易处理的试剂，可以根据其目的或用途适当选择溶剂， 可以适用于还原型辅酶( 1(ι的分离或进一步衍生化、食用或药物用等的组合物，是可以广泛使用的方法，因此其益处很大。发明详述下面详细说明本发明。实施本发明时，采用枸橼酸类和/或抗坏血酸类，抑制还原型辅酶氧化成氧化型辅酶( 1(ι，从而使还原型辅酶Acl稳定化，或者稳定地保存还原型辅酶^)。从而获得高质量的还原型辅酶仏。。对枸橼酸类(citric acid or a related compound thereof)没有特别限制,可以列举枸橼酸、枸橼酸异丙酯、枸橼酸乙酯、枸橼酸丁酯、枸橼酸甘油酯等枸橼酸酯和枸橼酸钠、枸橼酸钾等盐。特别优选枸橼酸、枸橼酸异丙酯、枸橼酸甘油酯。本发明还原型辅酶 Qltl的稳定方法、保存方法、结晶方法和组合物中，可以根据其目的或用途自由选择上述枸橼酸类。这些枸橼酸类可以单独或多种混合使用，也可以与后述抗坏血酸类并用。对抗坏血酸类(ascorbic acid or a related compound thereof)没有特别限制， 不仅包括抗坏血酸、还包括例如鼠李糖型抗坏血酸(rhamno-ascorbic acid)、阿拉伯糖型抗坏血酸、葡糖型抗坏血酸、岩藻糖型(fuco)抗坏血酸、葡庚糖型(glucoh印to)抗坏血酸、 木糖型抗坏血酸、半乳糖型抗坏血酸、古洛糖型(gulo)抗坏血酸、阿洛糖型(alio)抗坏血酸、赤藓糖型(erythro)抗坏血酸、6_脱氧抗坏血酸等抗坏血酸衍生物，也可以是它们的酯或盐。这些物质可以是L-构型、D-构型或外消旋体。具体地，可以列举例如L-抗坏血酸、 棕榈酸L-抗坏血酸酯(L-ascorbyl palmitate)、硬脂酸L-抗坏血酸酯、2棕榈酸L-抗坏血酸酯、L-抗坏血酸钠、L-抗坏血酸钙、D-阿拉伯糖型-抗坏血酸等。在本发明的还原型辅酶结晶制备方法中，可以适当使用上述抗坏血酸中的任何一种，但考虑到与生成的还原型辅酶的分离容易性等，上述抗坏血酸系列化合物中，特别优选用水溶性高的物质， 从便于获得、价格等方面考虑，最优选L-抗坏血酸、D-阿拉伯糖型-抗坏血酸等游离体。在本发明还原型辅酶的稳定方法、保存方法、结晶方法和组合物中，可以根据其目的或用途自由选择上述抗坏血酸类。这些抗坏血酸类可以单独或多种混合使用，也可以与前述枸橼酸类并用。本发明还原型辅酶( 1(ι的稳定方法、保存方法、结晶方法和组合物中均可以使用上述枸橼酸类和/或抗坏血酸类。另外，在本发明的还原型辅酶Acl的制备方法中，可以特别优选使用上述抗坏血酸类，根据需要，也可以与上述枸橼酸类并用。还原型辅酶( 1(ι不特别限于与枸橼酸类和/或抗坏血酸类共存的形态，即，使还原型辅酶Qltl与枸橼酸类和/或抗坏血酸类接触的形态。可以列举下述情况，例如，还原型辅酶Ao和枸橼酸类和/或抗坏血酸类一起以固相存在的情况；在含有还原型辅酶Qltl的液相中，至少一种枸橼酸类和/或抗坏血酸类以固相存在的情况；在含有至少一种枸橼酸类和/ 或抗坏血酸类中的液相中，还原型辅酶Qltl以固相存在的情况；还原型辅酶Acl与枸橼酸类和/或抗坏血酸类都为液相，或都存在于液相中的情况等。上述液相可以均勻，也可以不均勻(由不同的多种液相构成)，但优选均勻。当然，还原型辅酶Ao与枸橼酸类和/或抗坏血CN 102381948 A
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酸类接触效率高的系统有利于氧化防护，特别优选还原型辅酶Ao与枸橼酸类和/或抗坏血酸类都为液相，或都存在于液相中的情况，另外，优选液相均勻。当然，包含还原型辅酶Ao 的液相可以是还原型辅酶Qltl的溶液，也可以是还原型辅酶Qltl的熔融液(melt)。对本发明所用的溶剂没有特别限制，可以列举烃类、脂肪酸酯类、醚类、醇类、脂肪酸类、酮类、氮化合物类(包括腈类、酰胺类)，硫化合物类和水等。上述溶剂也可以任意两种或两种以上混合使用。对烃没有特殊限制，可以列举脂肪烃、芳烃、卤代烃等。特别优选脂肪烃、芳烃，更优选脂肪烃。作为脂肪烃、不论环状或非环状，或者饱和或不饱和，对其没有特殊限制，但一般优选使用饱和脂肪烃。通常优选使用碳原子数为3 20，特别优选碳原子数为5 12，更优选碳原子数为5 8的脂肪烃。具体例子可以列举丙烷、丁烷、异丁烷、戊烷、2-甲基丁烷、 己烷、2-甲基戊烷、2，2_ 二甲基丁烷、2，3_ 二甲基丁烷、庚烷、庚烷异构体(例如2-甲基己烷、3-甲基己烷、2，3-二甲基戊烷、2，4_二甲基戊烷)、辛烷、2，2，3-三甲基戊烷、异辛烷、壬烷、2，2，5-三甲基己烷、癸烷、十二烷、2-戊烯、1-己烯、1-庚烯、1-辛烯、1-壬烯、1-癸烯、 环戊烷、甲基环戊烷、环己烷、甲基环己烷、乙基环己烷、对-薄荷烷(p-menthane)和环己烯等。优选戊烷、2-甲基丁烷、己烷、2-甲基戊烷、2，2_ 二甲基丁烷、2. 3-二甲基丁烷、庚烷、 庚烷异构体(例如2-甲基己烧、3-甲基己烷、2，3_ 二甲基戊烷、2，4_ 二甲基戊烷)、辛烷、 2，2，3-三甲基戊烷、异辛烷、壬烷、2，2，5-三甲基己烷、癸烷、十二烷、环戊烷、甲基环戊烷、 环己烷、甲基环己烷、乙基环己烷和对薄荷烯等。特别优选戊烷、2-甲基丁烷、己烷、2-甲基戊烷、2，2_ 二甲基丁烷、2，3_ 二甲基丁烷、庚烷、庚烷异构体(例如2-甲基己烷、3-甲基己烷、2，3_ 二甲基庚烷、2，4_ 二甲基庚烷)、辛烷、2，2，3_三甲基戊烷、异辛烷、环戊烷、甲基环戊烷、环己烷、甲基环己烷、乙基环己烷等。一般来说，优选庚烷，优选使用具有7个碳原子的甲基环己烷等多种庚烷或它们的多种混合物。通常优选使用碳原子数为5的戊烷类(例如戊烷等)、碳原子数为6的己烷类(例如己烷、环己烷等)、碳原子数为7的庚烷类(例如庚烷、甲基环己烷等)，但最优选庚烷类(例如庚烷、甲基环己烷等)，特别优选庚烷。对芳烃没有特别限制，但通常优选使用碳原子数为6 20，特别优选碳原子数为 6 12，更优选碳原子数为7 10的芳烃。具体例子可以列举苯、甲苯、二甲苯、邻二甲苯、 间二甲苯、对二甲苯、乙基苯、枯烯、均三甲苯、四氢萘(tetralin)、丁基苯、对甲基异丙基苯、环己基苯、二乙基苯、戊基苯、二戊基苯、月桂基苯和苯乙烯等。优选甲苯、二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、乙基苯、枯烯、均三甲苯、四氢萘、丁基苯、对甲基异丙基苯、环己基苯、二乙基苯、戊基苯等。特别优选甲苯、二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯、枯烯和四氢萘等。最优选枯烯。作为卤代烃，不论环状或非环状，或者饱和或不饱和，对其没有特殊限制，但一般优选使用非环状的卤代烃。通常优选使用氯代烃、氟代烃，特别优选氯代烃。适合使用碳原子数为1 6，特别优选碳原子数为1 4，更优选碳原子数为1 2的卤代烃。具体例子可以列举二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1，1-二氯乙烷、1，2-二氯乙烷、1，1，1-三氯乙烷、1，1， 2-三氯乙烷、1，1，1，2-四氯乙烷、1，1，2，2-四氯乙烷、五氯乙烷、六氯乙烷、1，1-二氯乙烯、 1，2-二氯乙烯、三氯乙烯、四氯乙烯、1，2-二氯丙烷、1，2，3-三氯丙烷、氯苯、1，1，1，2-四氟乙烷等。优选二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1，1- 二氯乙烷、1，2- 二氯乙烷、1，1，1-三氯乙烷、CN 102381948 A
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1，1，2_三氯乙烷、1，1-二氯乙烯、1，2-二氯乙烯、三氯乙烯、1，1，1，2-四氟乙烷等。特别优选二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷、三氯乙烯、氯苯、1，1，1，2-四氟乙烷等。对脂肪酸酯类没有特殊限制，可以列举丙酸酯、醋酸酯、甲酸酯等。特别优选醋酸酯、甲酸酯，更优选乙酸酯。没有特别限制，但一般使用碳原子数为1 8的烷基酯或芳烷基酯，优选碳原子数为1 6的烷基酯，更优选碳原子数为1 4的烷基酯。丙酸酯的具体例子可以列举丙酸甲酯、丙酸乙酯、丙酸丁酯、丙酸异戊酯等。醋酸酯的具体例子可以列举醋酸甲酯、醋酸乙酯、醋酸丙酯、醋酸异丙酯、醋酸丁酯、醋酸异丁酯、醋酸仲丁酯、醋酸戊酯、 醋酸异戊酯、醋酸仲己酯、醋酸环己酯、醋酸苄酯等，优选醋酸甲酯、醋酸乙酯、醋酸丙酯、醋酸异丙酯、醋酸丁酯、醋酸异丁酯、醋酸仲丁酯、醋酸戊酯、醋酸异戊酯、醋酸仲己酯、醋酸环己酯等，最优选醋酸甲酯、醋酸乙酯、醋酸丙酯、醋酸异丙酯、醋酸丁酯、醋酸异丁酯等，尤其优选醋酸乙酯。甲酸酯的具体例子可以列举甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸异丙酯、甲酸丁酯、甲酸异丁酯、甲酸仲丁酯、甲酸戊酯等。优选甲酸甲酯、甲酸乙酯、甲酸丙酯、甲酸丁酯、甲酸异丁酯、甲酸戊酯等，最优选甲酸乙酯。作为醚类，不论环状或非环状，或者饱和或不饱和，对其没有特殊限制，但一般优选使用饱和醚类。通常优选使用碳原子数为3 20，特别优选碳原子数为4 12，更优选碳原子数为4 8的醚类。具体例子可以列举乙醚、甲基叔丁基醚、二丙基醚、二异丙基醚、 二丁基醚、二己基醚、乙基乙烯基醚、丁基乙烯基醚、苯甲醚、苯乙醚、丁基苯基醚、甲氧基甲苯、二噁烷、呋喃、2-甲基呋喃、四氢呋喃、四氢吡喃、乙二醇二甲基醚、乙二醇二乙基醚、乙二醇二丁基醚、乙二醇一甲基醚、乙二醇一乙基醚、乙二醇二丁基醚等。优选乙醚、甲基叔丁基醚、二丙基醚、二异丙基醚、二丁基醚、二己基醚、苯甲醚、苯乙醚、丁基苯基醚、甲氧基甲苯、二噁烷、2-甲基呋喃、四氢呋喃、四氢吡喃、乙二醇二甲基醚、乙二醇二乙基醚、乙二醇二丁基醚、乙二醇一甲基醚、乙二醇一乙基醚等。特别优选乙醚、甲基叔丁基醚、苯甲醚、二噁烷、四氢呋喃、乙二醇一甲基醚、乙二醇一乙基醚等。最优选乙醚、甲基叔丁基醚、苯甲醚、二噁烷、四氢呋喃等。尤其优选二噁烷、四氢呋喃。作为腈类，不论环状或非环状，或者饱和或不饱和，对其没有特殊限制，但一般优选使用饱和腈类。通常优选使用碳原子数为2 20，特别优选碳原子数为2 12，更优选碳原子数为2 8的腈类。具体例子可以列举乙腈、丙腈、丙二腈(7 π 7 二卜U >)、丁腈、异丁腈、丁二腈、戊腈、戊二腈、己腈、庚基腈、辛基腈、十一烷基腈、十二烷基腈、十三烷基腈、 十五烷基腈、硬脂腈、氯代乙腈、溴代乙腈、氯代丙腈、溴代丙腈、甲氧基乙腈、氰基乙酸甲酯、氰基乙酸乙酯、甲苯基腈、苄腈、氯代苄腈、溴代苄腈、氰基苯甲酸、硝基苄腈、茴香腈、对苯二甲腈、溴代甲苯基腈、甲基氰基苯甲酸酯、甲氧基苄腈、乙酰基苄腈、萘甲腈、二苯基腈、 苯基丙腈、苯基丁腈、甲基苯基乙腈、二苯基乙腈、萘基乙腈、硝基苯基乙腈、氯苯乙腈、环丙烷腈、环己烷腈、环庚烷腈、苯基环己烷腈、甲苯基环己烷腈等，其中优选乙腈。作为醇类，不论环状或非环状，或者饱和或不饱和，对其没有特殊限制，但一般优选使用饱和醇类。通常使用碳原子数为1 20，特别是碳原子数为1 12，尤其是碳原子数为1 6的醇类，其中优选碳原子数为1 5的一元醇或优选碳原子数为2 5的二元醇。 这些醇类的具体例子可以列举甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1- 丁醇、异戊醇、叔戊醇、3-甲基-2- 丁醇、新戊醇、 1-己醇、2-甲基-1-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-乙基-1-丁醇、1-庚醇、2-庚醇、3-庚醇、CN 102381948 A
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11/24 页1-辛醇、2-辛醇、2-乙基-1-己醇、1-壬醇、1-癸醇、Ι-i^一烷醇、1-十二烷醇、烯丙醇、炔丙醇、苄醇、环己醇、1-甲基环己醇、2-甲基环己醇、3-甲基环己醇、4-甲基环己醇、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、2-(甲氧基甲氧基)乙醇、2-异丙氧基乙醇、2-丁氧基乙醇、2-(异戊氧基)乙醇、2_(己氧基)乙醇、糠醇、二乙二醇单甲基醚、二乙二醇单乙基醚、二乙二醇单丁基醚、三乙二醇单甲基醚、1-甲氧基-2-丙醇、1-乙氧基-2-丙醇、二丙二醇单甲基醚、二乙二醇单乙基醚、三乙二醇单甲基醚、1，2-乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，2- 丁二醇、 1,3- 丁二醇、1，4- 丁二醇、2，3- 丁二醇、1，5-戊二醇、2- 丁烯-1，4- 二醇、2-甲基-2，4-戊二醇、2-乙基-1，3-己二醇、二乙二醇、三乙二醇、四乙二醇、聚乙二醇、二丙二醇、聚丙二醇寸。一元醇优选甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1- 丁醇、2- 丁醇、异丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1- 丁醇、异戊醇、叔戊醇、3-甲基-2- 丁醇、新戊醇、1-己醇、
2-甲基-1-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-乙基-1-丁醇、1-庚醇、2-庚醇、3-庚醇、1-辛醇、 2-辛醇、2-乙基-1-己醇、1-壬醇、1-癸醇、1-十一烷醇、1-十二烷醇、苄醇、环己醇、1-甲基环己醇、2-甲基环己醇、3-甲基环己醇、4-甲基环己醇、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、 2-(甲氧基甲氧基)乙醇等，特别优选甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1- 丁醇、异戊醇、叔戊醇、3-甲基-2- 丁醇、 新戊醇、1-己醇、2-甲基-1-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-乙基-1- 丁醇、环己醇等，这其中又优选甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1- 丁醇、2- 丁醇、异丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1- 丁醇、异戊醇、叔戊醇、3-甲基-2- 丁醇、新戊醇等，最优选甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1- 丁醇、2- 丁醇、异丁醇、2-甲基-1- 丁醇、异戊醇等，这其中又优选甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇，特别优选乙醇。二元醇优选1，2_乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、2-丁烯-1，4-二醇、2-甲基-2，4-戊二醇、2-乙基-1，3-己二醇、二乙二醇、三乙二醇、四乙二醇、聚乙二醇、二丙二醇、聚丙二醇等，最优选1，2_丙二醇、聚乙二醇。使用枸橼酸类时，也可以使用三元醇，三元醇优选甘油。脂肪酸类可以列举甲酸、乙酸、丙酸、油酸、亚油酸、亚麻酸等，优选甲酸、乙酸，最优选乙酸。对酮类没有特殊限制，通常适合使用碳原子数为3 6的酮类。具体例子可以列举丙酮、甲基乙基酮、甲基丁基酮、甲基异丁基酮等，特别优选丙酮、甲基乙基酮，最优选丙酮。氮化合物可以列举硝基甲烷、三乙胺、吡啶、甲酰胺、N-甲基甲酰胺、N, N-二甲基甲酰胺、N，N-二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮等。硫化合物可以列举二甲亚砜、环丁砜等。上述溶剂中，烃类、脂肪酸酯类、醚类或腈类，优选水溶性的醚类或腈类(例如四氢呋喃、二噁烷、乙腈等)，是氧化防护效果高的溶剂，因此，它们可以促进枸橼酸类和/或抗坏血酸类的还原型辅酶Acl稳定化效果，抑制副产物氧化型辅酶Qici的产生。另外，上述溶剂中，一元或二元醇和/或醇以外的水溶性溶剂(优选水溶性有机溶剂)发挥抗坏血酸类和/或枸橼酸类的显著的氧化防护效果，最好地发挥本发明的效果。使用抗坏血酸类时，与一元或二元醇和/或醇以外的水溶性溶剂(优选水溶性有机溶剂)共存效果好，其中与一价醇的共存效果特别好。
一元或二元醇可以具体列举甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1-丁醇、异戊醇、叔戊醇、3-甲基-2-丁醇、新戊醇、1-己醇、2-甲基-1-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-乙基-1-丁醇、1-庚醇、2-庚醇、3-庚醇、1-辛醇、2-辛醇、2-乙基-1-己醇、1-壬醇、3，5，5_三甲基-1-己醇、癸醇、^一烷醇、1-十二烷醇、烯丙醇、炔丙醇、苄醇、环己醇、1-甲基环己醇、2-甲基环己醇、3-甲基环己醇、4-甲基环己醇、苄醇、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、2-(甲氧基甲氧基)乙醇、2-异丙氧基乙醇、2-丁氧基乙醇、2-(异戊氧基)乙醇、2-(己氧基)乙醇、糠醇、二乙二醇单甲基醚、二乙二醇单乙基醚、二乙二醇单丁基醚、三乙二醇单甲基醚、1-甲氧基-2-丙醇、1-乙氧基-2-丙醇、二丙二醇单甲基醚、二乙二醇单乙基醚、三乙二醇单甲基醚、1，2-乙二醇、1， 2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，2-丁二醇、1，3-丁二醇、1，4_ 丁二醇、2，3-丁二醇、1，5-戊二醇、 2-丁烯-1，4-二醇、2-甲基-2，4-戊二醇、2-乙基-1，3-己二醇、二乙二醇、三乙二醇、四乙二醇、聚乙二醇、二丙二醇、聚丙二醇等。一元醇优选甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、 2- 丁醇、异丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1- 丁醇、异戊醇、叔戊醇、3-甲基-2-丁醇、新戊醇、1-己醇、2-甲基-1-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-乙基-1-丁醇、1-庚醇、 2-庚醇、3-庚醇、1-辛醇、2-辛醇、2-乙基-1-己醇、1-壬醇、1-癸醇、^一烷醇、1-十二烷醇、苄醇、环己醇、1-甲基环己醇、2-甲基环己醇、3-甲基环己醇、4-甲基环己醇、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、2-(甲氧基甲氧基)乙醇等，特别优选甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、 1- 丁醇、2- 丁醇、异丁醇、叔丁醇、1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1- 丁醇、异戊醇、叔戊醇、3-甲基-2-丁醇、新戊醇、1-己醇、2-甲基-1-戊醇、4-甲基-2-戊醇、2-乙基-1-丁醇、环己醇等，这其中又优选甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、叔丁醇、 1-戊醇、2-戊醇、3-戊醇、2-甲基-1-丁醇、异戊醇、叔戊醇、3-甲基-2-丁醇、新戊醇等，最优选甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、1- 丁醇、2- 丁醇、异丁醇、2-甲基-1- 丁醇、异戊醇等，这其中又优选甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇，特别优选乙醇。二元醇优选1，2_乙二醇、1，2_丙二醇、1，3-丙二醇、2-丁烯-1，4-二醇、2-甲基-2，4-戊二醇、2-乙基-1，3-己二醇、二乙二醇、三乙二醇、四乙二醇、聚乙二醇、二丙二醇、聚丙二醇等，最优选1，2-丙二醇、聚乙二醇。醇以外的水溶性溶剂可以列举四氢呋喃、二噁烷等醚类，丙酮、甲基乙基酮等酮类，乙腈、二甲亚砜等氮化合物和水等，优选四氢呋喃、丙酮，更优选丙酮。其中，用于食用和医药用时，乙醇、1，2-丙二醇、聚乙二醇(优选分子量为300 1000的聚乙二醇)等特别合适，当然，也适合使用它们的混合物。对上述溶剂的用量没有特殊限制，只要是能够产生预期的合适效果和能力的量 (即有效量)即可。一般地，在全部混合物中，例如通常为5重量％或以上，优选10重量％ 或以上，更优选20重量％或以上，特别优选30重量％或以上，尤其优选40重量％或以上， 特别是50重量％或以上，最优选超过50重量％。特别是在抗坏血酸类的情况下，优选上述溶剂的用量为60重量％或以上，更优选 70重量％或以上，进一步优选80重量％或以上。另外，从最大限度地发挥枸橼酸类和/或抗坏血酸类的效果的角度出发，优选简单的组成，优选基本上不含植物油和/或表面活性剂。首先说明还原型辅酶Qltl的稳定方法和保存方法。本发明所用的枸橼酸类和/或抗坏血酸类的用量，例如只要是能够产生预期的合适效果和能力的量(即有效量)即可。具体地，只要是可以防止还原型辅酶氧化成氧化型辅酶Qltl的有效量即可。因此，尽管根据枸橼酸类和/或抗坏血酸类的种类有所不同，对其用量没有特别限制，通常相对100重量份的还原型辅酶( 1(1，其用量为0. 1重量份或以上， 优选1重量份或以上，更优选10重量份或以上。有溶剂混合存在时，根据枸橼酸类或抗坏血酸类的种类其用量有所不同，相对100重量份的溶剂，其用量通常为0. 01重量份或以上， 优选0. 1重量份或以上，更优选1重量份或以上。溶剂中还原型辅酶Gjici的氧化防护效果有在还原型辅酶Gjici的高浓度溶液中更高的倾向，因此没有特别限制，对100重量分的溶剂，还原型辅酶( 1(ι通常为1重量份以上，优选 2重量份以上的浓度。另外，保存时可能更有效。实施本发明的稳定方法时，对温度没有特殊限制，但是，为了最大限度地发挥稳定效果，通常为50°C或以下，优选40°C或以下，更优选30°C或以下。因此，将通过上述稳定方法稳定的还原型辅酶仏。在50°C或以下，优选40°C或以下，更优选30°C或以下保存的方案也包括在本发明的范围内。如上所述，根据本发明，通过使用上述枸橼酸类和/或抗坏血酸类，可以防止还原型辅酶被分子氧氧化，从而稳定化。因此，可以在萃取、水洗、浓缩、柱色谱等操作时适当地实施，并且可以稳定地保存还原型辅酶仏0。其次，说明本发明的结晶方法。本发明中，使还原型辅酶在包含枸橼酸类和/ 或抗坏血酸类的溶剂中结晶。结晶所用的还原型辅酶( 1(ι可以通过例如合成、发酵、从天然物中萃取等以外公知的方法获得。优选通过还原还原型辅酶Qltl中所含的氧化型辅酶( 1(ι或氧化型辅酶( 1(ι而获得，更优选利用后述本发明的还原反应获得的还原型辅酶(^。本发明的结晶方法也可以适用于含有较多氧化型辅酶( 1(ι的还原型辅酶( 1(ι，但对通过后述还原方法等制备的高纯度还原型辅酶( 1(ι特别有效。本发明中，一并除去含有还原型辅酶Qltl的反应液或萃取液中所含的杂质的精制晶析特别有效，所述还原型辅酶Acl通过现有公知的方法获得，或者通过后述的还原方法制备。由此可以从母液中除去通常不一定容易除去的结构类似的化合物(具体为还原型辅酶％、还原型辅酶％和还原型辅酶(^等)。 当然，上述精制晶析作为再精制还原型辅酶Qltl的重结晶法也非常有效。还原型辅酶( 1(ι的结晶中，可以将冷却、浓缩、溶剂置换、弱溶剂的使用等一般结晶操作单独或适当组合实施。特别优选使用或并用冷却操作(冷却晶析)。本发明所用的枸橼酸类和/或抗坏血酸类的用量，例如只要是能够产生预期的合适效果和能力的量(即有效量)即可。具体地，只要是可以防止还原型辅酶兑。氧化成氧化型辅酶Qltl的有效量即可。一般地，尽管根据枸橼酸类和/或抗坏血酸类的种类其用量有所变化，对其用量没有特别限制，通常相对100重量份的还原型辅酶Qltl，其用量为0. 1重量份或以上，优选1重量份或以上，更优选10重量份或以上。相对100重量份的溶剂，其用量通常为0.01重量份或以上，优选0. 1重量份或以上，更优选1重量份或以上。其上限没有特别限制，但从经济方面考虑，通常为10重量份或以下，优选5重量份或以下，更优选1重量份或以下即可。还原型辅酶Qltl的结晶优选在强制流动下实施。为了抑制过饱和的形成，顺利成核、使晶体成长，或者，从提供质量的方面考虑，单位容积搅拌所需的动力通常为约0. Olkff/m3或以上，优选约0. lkW/m3或以上，更优选约0.3kW/m3或以上的流动。通常通过搅拌叶的旋转来提供上述强制流动，但不一定必须用搅拌叶来获得上述流动，也可以利用例如液体循环的方法等。结晶时，为了抑制过饱和的形成，顺利成核、使晶体成长，优选添加晶种。还原型辅酶Qltl的结晶温度(结晶时的冷却温度)因结晶溶剂的种类和结晶方法而异，因此不能统一规定，例如，优选25°C或以下，更优选20°C或以下，特别是15°C或以下， 尤其是10°C或以下。下限为体系的固化温度。通常可以在0 25°C左右实施。为了使得到的还原型辅酶Qltl中混入的各种杂质最少，或者为了获得性状良好的浆液，结晶时可以控制单位时间内的析出的结晶量。单位时间内的晶体析出量优选为例如单位时间析出总晶体析出量的约50%量的速度以下(即最大为50%总量/小时)，优选单位时间析出总晶体析出量的约25%量的速度以下(即最大为25%总量/小时)。另外，冷却晶析过程中的冷却速度通常为约40°C /小时以下，优选约20°C /小时以下。溶剂中还原型辅酶Glici的氧化防护效果有在还原型辅酶Glici的高浓度溶液中更高的倾向，因此没有特别限制，对100重量份的溶剂，还原型辅酶( 1(ι通常为1重量份以上，优选 2重量份以上的浓度结晶可能更有效。另外，结晶浓度的上限因结晶溶剂的种类和结晶方法而异，因此不能统一规定，例如，对结晶完毕时的结晶溶剂100重量份，还原型辅酶( 1(ι优选约15重量份或以下，更优选约13重量份或以下，特别是约10重量份或以下。通常可以用约5 10重量份实施。按照上述方法获得的还原型辅酶Qltl优选通过例如离心分离、加压过滤、减压过滤等进行固液分离，进一步地，可以根据需要洗涤滤饼，得到湿体物。另外，将湿体物装入内部用惰性气体置换的减压干燥器(真空干燥器)中，在减压下干燥，可以得到干燥物，优选获得干燥物的形式。上述结晶方法中可以使用的溶剂可以列举上述的烃类、脂肪酸酯类、醚类、醇类、 脂肪酸类、酮类、氮化合物类(包括腈类和酰胺类)、硫化合物类和水等，但最适合使用的溶剂是如上所述的一元或二元醇和/或醇以外的水溶性溶剂。特别优选的溶剂为甲醇、乙醇、 1-丙醇、2-丙醇、丙酮、甲乙酮或水或它们的混合物，特别优选是乙醇、丙酮或它们的混合物。使用一元或二元醇或酮，优选一元或二元醇或水溶性的酮(具体地，甲醇、乙醇、 1-丙醇、2-丙醇、丙酮、甲乙酮等，优选乙醇、丙酮等)时，可以获得浆状物形状或结晶性状的好还原型辅酶Ao结晶。进一步地，从适当降低还原型辅酶( 1(ι的溶解性从而获得高收率、改善浆状物性状、特别值得注意的是大幅改善固液分离性(过滤性)这些方面考虑，特别优选在一元或二元醇和/或醇以外的水溶性有机溶剂中存在少量的水。一元或二元醇和/或醇以外的水溶性有机溶剂与水的比例因溶剂的种类而异，因此不能统一规定。只要是实质上以一元或二元醇和/或醇以外的水溶性有机溶剂为主成分的溶剂，则没有特殊限制，但对于100重量份的总溶剂，上述一元或二元醇和/或醇以外的水溶性有机溶剂的比例下限通常为约90重量份，优选约91重量份，更优选约92重量份，特别优选约93重量份，上限为约99. 5重量份， 优选约99重量份，更优选约98重量份，特别优选约97重量份。通常在约93 97重量份最适合实施。
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溶剂中的还原型辅酶Gjici的氧化防护效果有在还原型辅酶Gjici的高浓度溶液中则更高的倾向，因此没有特别限制，但对于100重量份的溶剂，作为还原型辅酶( 1(ι，通常使之在1 重量份或1重量份以上，优选2重量份或2重量份以上的浓度结晶则更有效。根据本发明，通过使还原型辅酶( 1(ι在抗坏血酸类和/或枸橼酸类的存在下结晶， 可以在使不希望发生的氧副反应最小化的状态下结晶，以高收率获得高质量的还原型辅酶 Qioo通过本发明的结晶方法获得的还原型辅酶( 1(ι结晶质量极高，可以期望还原型辅酶Qiq/氧化型辅酶Qiq的重量比达到98/2或更高，优选99/1或更高。下面说明还原型辅酶( 1(ι的制备方法。本发明中，用抗坏血酸类将氧化型辅酶还原成还原型辅酶后，使生成的还原型辅酶( 1(ι在枸橼酸类和/或抗坏血酸类的存在下继续结晶(直接分离法(7 >《〃卜)。所述“继续结晶”是指对还原反应所得的反应液不进行萃取、洗涤等附加操作便进行结晶。由此使操作简便并且最短，从而可以使分子氧导致的氧化最小化。首先对还原反应进行说明。本发明中，使用上述的抗坏血酸类作为还原剂。上述抗坏血酸类的用量没有特殊限制，例如，只要是可以产生预期的合适效果或能力的量(即有效量)即可，具体地，只要是可以将氧化型辅酶变成还原型辅酶的有效量即可。一般来说，对于氧化型辅酶Qltl,通常为1倍摩尔量或以上，优选1.2倍摩尔量或以上。对上限没有特殊限制，从经济性方面考虑，通常为10倍摩尔量，优选5倍摩尔量，更优选3倍摩尔量。另外，尽管枸橼酸类不起还原剂的作用，但从持续结晶时的稳定效果方面考虑，可以从还原反应时添加枸橼酸类。采用上述抗坏血酸类的还原可以使制备还原型辅酶Qltl时作为反应促进剂(例如降低反应温度，缩短反应时间等)的碱性物质或亚硫酸氢盐等具有反应促进效果的添加剂共存而实施。对上述减小物质没有特殊限制，例如，不管是无机化合物或有机化合物都可以使用。对所述无机化合物没有特殊限制，例如金属氢氧化钠(优选碱金属氢氧化物和碱土金属氢氧化物)，碳酸盐和碳酸氢盐。可以列举例如氢氧化钠等碱金属氢氧化物、碳酸钠等碱金属碳酸盐、碳酸氢钠等碱金属碳酸氢盐和碳酸镁等碱土类金属碳酸盐等。对上述有机化合物没有特殊限制，可以列举三乙胺等胺类等。上述碱性物质中，特别优选使用金属(优选碱金属、碱土类金属等)的碳酸盐、碳酸氢盐、铵等无机化合物，三乙胺等胺等有机化合物等弱碱性物质。最优选上述无机化合物，更优选上述弱碱性无机化合物。另外，亚硫酸氢盐可以列举例如亚硫酸氢钠等碱金属亚硫酸氢盐等合适的物质。上述添加剂的量只要是可以发挥预期程度的反应促进效果的量(有效量)即可， 没有特殊限制。一般地，从经济方面考虑，相对抗坏血酸类，通常为20倍摩尔量或以下，优选10倍摩尔量或以下，更优选5倍摩尔量或以下，特别是2倍摩尔量或以下。对下限没有特别限制，通常为0. 01倍摩尔量或以上，优选0. 05倍摩尔量或以上，更优选0. 1倍摩尔量或以上，特别是0. 2倍摩尔量或以上。本发明记载的还原反应优选在强制流动下实施。作为单位体积搅拌所需的动力， 优选通常为约0. 01kff/m3或以上，优选约0. lkff/m3或以上，更优选约0. 3kff/m3或以上的流动。上述的强制流动通常通过搅拌翼的旋转而给与，但为了获得上述流动不一定必须用搅拌翼，也可以利用例如通过液体循环的方法等。还原温度通常为30°C或以上，优选40°C或以上，更优选50°C或以上。上限为体系的沸点。通常可以在30 150°C左右，优选40 120°C左右，更优选50 100°C左右实施。对反应浓度没有特殊限制，一般地，对于100重量份的溶剂，氧化型辅酶( 1(ι的重量通常为约1重量份或以上，优选3重量份或以上，更优选10重量份或以上，特别是15重量份或以上。对上限没有特别限制，通常为约60重量份，优选约50重量份，更优选约40重量份，特别是30重量份。一般地，可以在约2 30重量份，优选约5 30重量份，更优选约 10 30重量份实施。还原反应时间随还原剂种类和/或数量而不同，因此不能绝对限定。但是通常，反应在48小时内完成，优选M小时内，更优选10小时内，还更优选5小时内。在上述方法中，进行还原反应后，继续由上述反应液进行上述结晶。此时，在结晶过程中，体系中可以存在上述结晶方法中记载的有效量的枸橼酸类和/或抗坏血酸类，这些可以是还原反应时添加的抗坏血酸类(和枸橼酸类)。优选还原反应时添加的抗坏血酸类残留并在结晶时共存。上述还原型辅酶Acl制备方法中，结晶方法的优选方案也是上述结晶方法中记载的方案。可以用于上述制备方法的溶剂包括上述烃类、脂肪酸酯类、醚类、醇类、脂肪酸类、 酮类、氮化合物类(包括腈、酰胺类)、硫化合物类和水等，最适合使用的溶剂是如上所述的一元或二元醇和/或醇以外的水溶性溶剂。特别优选的溶剂为甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、 丙酮、甲乙酮、水或它们的混合物，特别是乙醇、丙酮、水或它们的混合物。—元或二元醇或酮中，优选使用一元或二元醇或水溶性酮(具体为甲醇、乙醇、 1-丙醇、2-丙醇、丙酮、甲乙酮等，优选乙醇、丙酮等)时，可以得到浆液性状或结晶好的还原型辅酶Ac1结晶。进一步地，从适当降低还原型辅酶( 1(ι的溶解性从而获得高收率、改善浆状物性状、特别值得注意的是大幅改善固液分离性(过滤性)这些方面考虑，优选在一元或二元醇和/或醇以外的水溶性有机溶剂中存在少量的水。一元或二元醇和/或醇以外的水溶性有机溶剂与水的比例因溶剂的种类而异，因此不能统一规定。只要是实质上以一元或二元醇和/或醇以外的水溶性有机溶剂为主成分的溶剂，则没有特殊限制，但对于100重量份的总溶剂，上述一元或二元醇和/或醇以外的水溶性有机溶剂的比例下限通常为约90重量份， 优选约91重量份，更优选约92重量份，特别优选约93重量份，上限为约99. 5重量份，优选约99重量份，更优选约98重量份，特别优选约97重量份。通常在约93 97重量份最适合实施。溶剂中的还原型辅酶Aci的氧化防护效果有在还原型辅酶Glici的高浓度溶液中则更高的倾向，因此没有特别限制，但对于100重量份的溶剂，作为还原型辅酶( 1(ι，通常使之在1 重量份或1重量份以上，优选2重量份或2重量份以上的浓度结晶则更有效。通过本发明的制备方法可以简便并且稳定地获得高质量，即还原型辅酶( 1(ι/氧化型辅酶Qiq的重量比为98/2或以上，优选99/1或以上的还原型辅酶Qltl结晶。上述制备方法作为由含有氧化型辅酶( 1(ι的还原型辅酶进一步提高还原型辅酶 Q10的重量比的精制方法极为有效。
下面说明本发明的组合物。本发明组合物之一是含有还原型辅酶和枸橼酸类的含还原型辅酶Acl的组合物。本发明的组合物中，可以使用上述的烃类、脂肪酸酯类、醚类、醇类、脂肪酸类、酮类、氮化合物类(包括腈、酰胺类)、硫化合物类和水等作为溶剂，但特别优选上述一元或二元醇和/或醇以外的水溶性溶剂(优选水溶性有机溶剂)。本发明的另一组合物是下述含还原型辅酶( 1(ι的组合物，其含有还原型辅酶Qltl、抗坏血酸类和一元或二元醇和/或醇以外的水溶性有机溶剂，并且一元或二元醇和/或醇以外的水溶性有机溶剂为全部组合物的5重量％或以上上述本发明的组合物中，可以并用抗坏血酸类和枸橼酸类。本发明所用的枸橼酸类和/或抗坏血酸类的用量，例如只要是能够产生预期的合适效果和能力的量(即有效量)即可。具体地，只要是可以防止还原型辅酶氧化成氧化型辅酶Qltl的有效量即可。一般地，尽管根据枸橼酸类和/或抗坏血酸类的种类有所不同， 对其用量没有特别限制，通常相对100重量份的还原型辅酶( 1(1，其用量为0. 1重量份或以上，优选1重量份或以上，更优选10重量份或以上。相对100重量份的溶剂，其用量通常为 0. 01重量份或以上，优选0. 1重量份或以上。其上限没有特别限制，但从经济方面考虑，通常为10重量份或以下，优选5重量份或以下，更优选1重量份或以下即可。本发明组合物中可以使用的溶剂包括上述的烃类、脂肪酸酯类、醚类、醇类、脂肪酸类、酮类、氮化合物类(包括腈、酰胺类)、硫化合物类和水等，但如上所述，最适合使用的溶剂是一元或二元醇和/或醇以外的水溶性溶剂。本发明的组合物可以根据其目的或用途选择、使用适当的溶剂。例如，从分离还原型辅酶Acl或用于将所得反应混合物进一步诱导化(次反应)的观点考虑，特别优选使用沸点为150°C或以下、优选100°C或以下的溶剂。用于食用、医药用途时，优选乙醇、1，2_丙二醇、聚乙二醇(优选分子量为300 1000的聚乙二醇)等。上述一元或二元醇和/或醇以外的水溶性溶剂(优选水溶性有机溶剂)的用量一般为全部组合物的例如5重量％或以上，优选10重量％或以上，更优选20重量％或以上、特别优选30重量％或以上、特别是40重量％或以上，尤其是50重量％或以上，特别优选超过50重量％。特别是在抗坏血酸类的情况下，优选上述溶剂的用量为60重量％或以上，更优选70重量％以上，进一步优选80重量％或以上。本发明的组合物用于食用、医药用途时，优选用于食用、医药用途的口服时，在全部组合物中，上述溶剂的用量下限通常为5 重量％，优选10重量％，更优选20重量％，特别优选30重量％，特别是40重量％，尤其是 50重量％，上限通常为99重量％，优选95重量％，更优选90重量％，特别优选85重量％， 特别是80重量％，尤其是70重量％。还原型辅酶( 1(ι可以以通过本发明方法所得的上述反应混合物的形式供给，另外， 也可以外部添加。外部添加时，可以使用例如从上述反应混合物分离的物质或通过其它途径合成分离的物质。使用反应混合物时，有简便的优点，但不一定适应于身体，还原反应时产生的副产物有可能同时存在于组合物中，从这一观点考虑，与使用上述反应混合物相比，作为还原型辅酶ζ 1(1，更优选使用外部添加的物质。当然，在本发明的组合物中，不妨使还原型辅酶Qltl以外的其它活性物质共存。其它的活性物质包括例如氨基酸、维生素、矿物质、多元酚、有机酸、糖类、肽和蛋白质等。
本发明的组合物可以直接使用，也可以将其进一步加工成胶囊剂(硬胶囊、软胶囊)、片剂、糖浆、饮料等口服给药形式后使用。还可以加工成软膏、栓剂和牙膏等形式后使用，特别优选胶囊剂，尤其是软胶囊。对胶囊基质没有特殊限制，可以是以来源于牛骨、牛皮、猪皮、鱼皮等的明胶为首的基质，也可以使用其它基质(例如可以用作食品添加物的包括增粘稳定剂(例如角叉菜胶、藻酸钠等来自海藻的物质或刺槐豆胶或愈疮胶等来自植物种子的物质等)或纤维素类的制造用剂)。通过在脱氧气氛中实施本发明还原型辅酶Qltl的稳定方法、保存方法、结晶方法及制备方法，由此可以提高氧化防止效果。另外，本发明的组合物优选在在脱氧气氛中制备或保管。脱氧气氛可以通过用惰性气体置换、减压、沸腾或将这些方法组合而实现。至少优选使用用惰性气体置换，即惰性气体气氛。所述惰性气体包括例如氮气、氦气、氩气、氢气和二氧化碳等，优选氮气。在上述稳定方法或上述组合物中，在规定期间的保存后，还原型辅酶( 1(ι/(还原型辅酶￠^+氧化型辅酶Acl)的重量比有望保持在90重量％或以上，优选保持在95重量％或以上。所述保存期间为例如1天以上，优选一周以上，更优选一个月以上，特别是半年以上， 尤其是一年以上，特别是2年以上。本发明的方法中使用安全并且易于处理的试剂，或者，可以根据其目的或用途适当选择所用的溶剂，适应于还原型辅酶Qltl的分离或进一步衍生，以食用或药用等的组合物或口服给药形式利用，可以广泛利用，其有许多有利点。
具体实施例方式下面通过实施例进一步详细说明本发明，但本发明不限于这些实施例。实施例中还原型辅酶Qltl的纯度、还原型辅酶Qltl与氧化型辅酶Qltl的重量比通过下述HPLC求出，但所得的还原型辅酶( 1(ι的纯度值并非规定本发明的纯度界限值，同样，还原型辅酶Qltl与氧化型辅酶Qltl的重量比中还原型辅酶Qltl的比例也是对其上限值的限制。(HPLC分析条件)柱SYMMETRYC18 (Waters)，长 250mm，内径 4. 6mm,流动相C2H50H CH3OH = 4 3(v v)，检测波长210nm，流速lml/min，还原型辅酶仏。的保留时间9. lmin，氧化型辅酶Qiq的保留时间13. :3min。实施例1往IOOOg乙醇中加入IOOg氧化型辅酶Qltl (含氧化型辅酶40 %，纯度99. 4 % )、 60g L-抗坏血酸，在78°C搅拌进行还原反应。30小时后，冷却至50°C，保持该温度，同时加入400g乙醇。搅拌该乙醇溶液(含有IOOg还原型辅酶Glltl (含还原型辅酶40% )(搅拌所需动力为0. 3kff/m3)，同时以10°C /小时的冷却速度冷却至2°C，得到白色浆状物。将该浆状物减压过滤，所得的湿结晶依次用冷乙醇、冷水、冷乙醇洗涤(洗涤所用的冷溶剂温度为2V )，然后将湿结晶减压干燥OO 40°C，1 30mmHg)，得到白色干燥结晶95g (含还原型辅酶21%,除去率48% )(有效收率95摩尔％ )。除去减压干燥外，所有的操作均在氮气氛围下进行。所得的结晶的还原型辅酶￠^/氧化型辅酶仏。重量比为99. 5/0. 5，还原型辅酶Ao的纯度为99.2%。实施例2
将IOOg氧化型辅酶Gjici在25°C溶于IOOOg庚烷中，搅拌该氧化型辅酶Gjici的庚烷溶液(搅拌所需动力为0. 3kff/m3)，同时往上述庚烷溶液慢加入IOOg连二亚硫酸钠(纯度75%以上)溶于水(1000ml)的溶液作为还原剂，在25°C、pH = 4 6下进行还原反应。 2小时后，从反应液中除去水相，将庚烷相用脱气的饱和食盐水IOOOg洗涤6次。上述所有操作均在氮气氛围下进行。该庚烷溶液在减压下进行溶剂置换，配制相对乙醇100重量份， 还原型辅酶Qltl为1重量份的乙醇溶液。将上述乙醇溶液分注，分别加入表1所示的抗坏血酸类或枸橼酸类，相对乙醇100 重量份，其添加量为0. 1重量份(相对还原型辅酶QltlIOO重量份为10重量份)，25°C下在空气中搅拌。M小时后，该溶液中的还原型辅酶￠^/氧化型辅酶Q1O的重量比如表1所示。 另外，为了进行比较，把不添加时的结果也一并表示出来。表1
I力口剂RL-抗坏血酸95.3/4.7硬脂酸L-抗坏血酸酯95.8/4.2棕榈酸L-抗坏血酸酯95.4/4.6枸橼酸96.3/3.7枸橼酸异丙酯95.9/4.1不添力口56.0/44.0R 还原型辅酶Gjici/氧化型辅酶Qltl的重量比参考例与实施例同法制备乙醇溶液，相对乙醇100重量份，加入表2所示的抗氧剂0. 1重量份(相对还原型辅酶^1IOO重量份为10重量份)，25°C下在空气中搅拌。M小时后，该溶液中的还原型辅酶( 1(1/氧化型辅酶Qltl的重量比如表1所示。表2
添力口剂R没食子酸正丙酯4.5/95.5维生素E44.2/55.8槲皮黄素(Qurcetin)3.5/96.5芸香苷16.1/83.9γ-谷维醇(γ-oryzanol)55.3/44.7丁基羟基曱苯51.1/48.9丁基羟基苯曱醚56.0/44.0
R 还原型辅酶Gjici/氧化型辅酶Qltl的重量比实施例3用实施例1中所得的还原型辅酶Glltl配制乙醇溶液，相对100重量份乙醇，还原型辅酶Ac1为5重量份。往该乙醇溶液中加入L-抗坏血酸，相对溶剂100重量份，其添加量为 1重量份(相对还原型辅酶GliciIOO重量份为10重量份)，50°C下在空气中搅拌。50小时后， 该溶液中的还原型辅酶Qltl/氧化型辅酶Qltl的重量比以及L-抗坏血酸的残留比例如表3所示。另外，为了进行比较，把还原型辅酶Qltl和L-抗坏血酸各自单独的结果也表示出来。这些结果表明，L-抗坏血酸的存在导致的还原型辅酶( 1(ι的稳定效果不是空气氧化生成的氧化型辅酶Acl基于L-抗坏血酸导致的还原作用而稳定化。表权利要求
1.还原型辅酶Acl的结晶方法，其特征在于，使还原型辅酶在含有抗坏血酸类的溶剂中结晶。
2.权利要求1所述的结晶方法，其中溶剂中含有枸橼酸类和抗坏血酸类。
3.权利要求2所述的结晶方法，其中枸橼酸类是选自枸橼酸、其酯或其盐中的至少一种。
4.权利要求2或3所述的结晶方法，其特征在于，相对100重量份的溶剂，存在0.01重量份或0. 01重量份以上的枸橼酸类。
5.权利要求1所述的结晶方法，其中抗坏血酸类是选自抗坏血酸、鼠李糖型抗坏血酸、阿拉伯糖型抗坏血酸、葡糖型抗坏血酸、岩藻糖型抗坏血酸、葡庚糖型抗坏血酸、木糖型抗坏血酸、半乳糖型抗坏血酸、古洛糖型抗坏血酸、阿洛糖型抗坏血酸、赤藓糖型抗坏血酸、6-脱氧抗坏血酸以及它们的酯和盐中的至少一种。
6.权利要求1或5所述的结晶方法，其特征在于，相对100重量份溶剂，存在0.01重量份或0. 01重量份以上的抗坏血酸类。
7.权利要求1 6中任意一项所述的结晶方法，其中溶剂是选自烃类、脂肪酸酯类、醚类、醇类、脂肪酸类、酮类、氮化合物类、硫化合物类和水中的至少一种。
8.权利要求1 7中任意一项所述的结晶方法，结晶中单独或组合实施冷却、浓缩、溶剂置换或弱溶剂的使用。
9.权利要求1 8中任意一项所述的结晶方法，在相对100重量份的溶剂含有1重量份或1重量份以上的还原型辅酶Qltl的浓度下使还原型辅酶Acl结晶。
10.权利要求1 9中任意一项所述的结晶方法，结晶在单位体积的搅拌所需动力为0. 01kff/m3或以上的强制流动下进行。
11.权利要求1 10中任意一项所述的结晶方法，结晶在脱氧的气氛中进行。
12.权利要求1所述的结晶方法，其特征在于，用抗坏血酸类将氧化型辅酶还原成还原型辅酶^)，生成的还原型辅酶Ao在含有抗坏血酸类的溶剂中继续结晶。
13.权利要求12所述的方法，其中在碱性物质或亚硫酸氢盐的存在下进行还原。
14.权利要求12所述的方法，其中在30°C或30°C以上进行还原反应后，在25°C或25°C以下进行结晶。
全文摘要
本发明提供可以用作营养功能食品、特定保健用食品等的还原型辅酶Q10的稳定方法、保存方法等。另外，本发明还提供适于工业生产还原型辅酶Q10、高质量并且高效率的方法。通过使还原型辅酶Q10与抗坏血酸或其衍生物、枸橼酸或其衍生物接触，由此可以在防止分子氧氧化的状态下处理还原型辅酶Q10，并可以稳定保存，得到稳定的组合物。另外，使之在抗坏血酸或其衍生物等的存在下结晶，使副产物氧化型辅酶Q10的产生最少化，在该状态下变化到结晶状态，制备高质量的还原型辅酶Q10。进一步地，用抗坏血酸类将氧化型辅酶Q10还原成还原型辅酶Q10，生成的还原型辅酶Q10在抗坏血酸类的存在下继续结晶，由此可以使操作简便并且在较短时间内，制备高质量的还原型辅酶Q10。
文档编号A61P3/02GK102381948SQ20111021729
公开日2012年3月21日 申请日期2002年10月10日 优先权日2001年10月10日
发明者上田恭义, 北村志郎, 大野直生, 植田尚宏, 茂吕充俊 申请人:株式会社钟化