Her抗体的固定剂量给药的制作方法

专利名称：Her抗体的固定剂量给药的制作方法
技术领域：
本发明涉及HER抗体，如pertuzumab的固定剂量给药。
背景技术：
HER等体和杭HER等体的杭体受体酪氨酸激酶的HER家族是细胞生长、分化和存活的重要介导物。所述受体家族包括四个确定的成员，包括表皮生长因子受体(EGFR、ErbBl、或HER1)、HER2(ErbB2或 pl85neu)、HER3 (ErbB3)和 HER4 (ErbB4 或 tyro2)。在因果关系上，由erbBl基因编码的EGFR已经牵涉于人类恶性疾病中。特别地，已经观察到EGFR在乳腺癌、膀胱癌、肺癌、头部癌、颈癌和胃癌以及恶性胶质瘤中表达增加。 EGFR受体表达的增强通常与相同肿瘤细胞生产EGFR配体、转化生长因子a (TGF- α )的增加有关，所述相同肿瘤细胞生产EGFR配体、转化生长因子α (TGF-α)的增加引起通过自分泌刺激途径的受:体激活。Baselga and Mendelsohn, Pharmac. Ther. 64 127-154(1994)。 已经将抗EGFR或其配体TGF- α和EGF的单克隆抗体作为治疗这些恶性疾病的治疗剂进行了评估。参见，例如，Baselga and Mendelsohn,同上；Masui et al. Cancer Research 44: 1002-1007(1984);和 Wu et al. J. Clin. Invest. 95 :1897-1905 (1995)。HER家族的第二个成员pl85neu最初被鉴定为来自化学处理大鼠成神经细胞瘤的转化基因的产物。neu原癌基因的活化型源于所编码蛋白的跨膜区中的点突变(缬氨酸突变为谷氨酸)。在乳腺和卵巢癌中观察到neu的人同源物的扩增，其与不良预后有关(Slamon et al.，Science,235 :177-182(1987) ；Slamon et al.，Science,244 707-712(1989);和美国专利4，968，603)。迄今为止，对于人类肿瘤还没有报导与neu原癌基因中的类似的点突变。还在其它癌症包括胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肺癌、肾脏癌、结肠癌、甲状腺癌、胰腺癌和膀胱癌中观察到HER2的过表达(通常但不完全归因于基因扩增)。其中参见 King et al. , Science, 229 :974 (1985) ；Yokota et al. , Lancet :1 : 765-767(1986) ；Fukushige et al.，Mol Cell Biol.，6 :955-958(1986) ；Guerin et al.， Oncogene Res. ,3 :21-31 (1988) ；Cohen et al. , Oncogene,4 :81-88(1989) ；Yonemura et al. , Cancer Res. ,51 1034(1991) ；Borst et al. , Gynecol. Oncol. ,38 :364(1990)； Weiner et al. , Cancer Res. ,50 :421-425 (1990) ；Kern et al. , CancerRes. ,50 5184 (1990) ；Park et al., Cancer Res. ,49 :6605(1989) ；Zhau et al. , MoI. Carcinog., 3 :254-257 (1990) ；Aasland et al. Br. J. Cancer 57:358-363(1988) ；ffilliams et al.，Pathobiology 59:46-52(1991) ；and McCann et al. , Cancer, 65 :88-92(1990)。HER2 可能在前列腺癌中过表达(Gu et al.，Cancer Lett. 99 185-9 (1996) ；Ross et al.，Hum. Pathol. 28 :827-33(1997) ；Ross et al. , Cancer 79:2162-70(1997)；和 Sadasivan et al.，J. Urol. 150 :126-31 (1993))。已经描述了抗大鼠pl85neu和人HER2蛋白产物的抗体。Drebin及其同事已制备了抗大鼠neu基因产物，pl85neu的抗体，参见，例如，Drebin et al. , CelI 41 :695-706 (1985) ；Myers et al. , Meth. Enzym. 198 277-290(1991);和 TO94/22478。Drebin et al. Oncogene 2 :273-277 (1988)报导与 pl85neu 的两个确定区域反应的抗体的混合物对植入到裸鼠中的neu转化的NIH-3T3细胞产生协同性抗肿瘤效应。也可参见1998年10月20日授权的美国专利5，824，311。Hudziak et al.，Mol. Cell. Biol. 9 (3) :1165-1172 (1989)描述了用人乳腺肿瘤细胞系SK-BR-3表征的一系列HER2抗体的生产。72小时后通过单层细胞的龙胆紫染色测定暴露于所述抗体之后SK-BR-3细胞的相对增殖。利用该测试方法，用称为4D5的抗体获得了最大抑制，4D5抑制细胞增殖的百分比为56%。在该测试中，该组中的其它抗体将细胞增殖减小到更低程度。进一步发现抗体4D5使HER2-过表达乳腺肿瘤细胞系对 TNF-α的细胞毒性效应敏感。也可参见1997年10月14日授权的美国专利5，677，171。 Fendly et al.Cancer Research 50:1550-1558(1990) ；Kotts et al. In Vitro 26(3) 59A(1990) ；Sarup et al. Growth Regulatton 1:72-82(1991) ；Shepard et al. J. Clin. ImmumoI. 11 (3) :117-127(1991) ；Kumar et al. Mol. Cell. Biol. 11(2) :979-986(1991)； Lewis et al. Cancer ImmumoI. Immumother. 37 :255-263(1993) ；Pietras et al. Oncogene 9 1829-1838(1994) ；Vitetra et al. Cancer Research 54:5301-5309(1994) ；Sliwkowski et al. J. Biol. Chem. 269 (20) :14661-14665(1994) ；Scott et al. J. Biol. Chem. 266 14300-5(1991) ；D 1 souza et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 91 :7202-7206(1994) ；Lewis et al. Cancer Research 56:1457-1465(1996)；和 Schaefer et al. 0ncogenel5 1385-1394(1997)中进一步表征了 Hudziak et al.中讨论的 HER2 抗体。鼠HER2抗体4D5的重组人源化型式(huMAb4D5_8、rhuMAb HER2、曲妥单抗 (trastuzumab)或HERCEPTIN ;美国专利5，821，337)在HER2-过表达转移性乳腺癌病人中是具有临床活性的，所述病人先前已接受了大量的抗癌治疗剂(Baselga et al., J. Clin. Oncol. 14 :737-744(1996))。曲妥单抗(trastuzumab)于 1998 年 9 月 25 日自食品药品管理局获得了用于治疗转移性乳腺癌病人的市场准入，所述转移性乳腺癌的肿瘤过表达HER2蛋白。其它具有不同特性的HER2抗体已描述于Tagliabue et al. Int. J. Cancer47 933-937 (1991) ；McKenzie et al. Oncogene 4:543-548(1989) ；Maier et al. Cancer Res.51 :5361-5369(1991) ；Bacus et al. Molecular Carcinogenesis3 :350-362(1990)； Stancovski et al. PNAS(USA)88 :8691-8695(1991) ；Bacus et al.Cancer Research 52 :2580-2589 (1992) ；Xu et al. Int. J. Cancer 53 :401-408 (1993) ；W094/00136 ； Kasprzyk et al. Cancer Research 52:2771-2776 (1992) ；Hancock etal. Cancer Res.51 :4575-4580 (1991) ；Shawver et al.Cancer Res.54 :1367-1373 (1994); Arteaga et al. Cancer Res. 54 :3758-3765(1994) ；Harwerthet al.J.Biol. Chem. 267
415160-15167(1992) ；U.S. Patent No. 5, 783, 186 ；和 Klapper et al. Oncogene 14 2099-2109(1997)。同源性筛选已鉴定了两种其它HER受体家族成员HER3(美国专利5，183,884 和 5，480，968 以及 Kraus et al.，PNAS (USA) 86 :9193-9197 (1989))和 HER4 (EP 专利申请 599, 274 ；Plowman et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:1746-1750(1993);和 Plowman et al. ,Nature, 366 :473-475 (1993))。这两种受体在至少一些乳腺癌细胞系上都显示增强的表达。通常发现HER受体在细胞中以不同组合存在，认为异源二聚化增加针对多种 HER 配体的细胞反应的多样性(Earp et al. Breast Cancer Research and Treatment 35:115-132(1995))。EGFR被六个不同的配体结合表皮生长因子(EGF)、转化生长因子α (TGF-α)、双调蛋白(amphiregulin)、肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)、β细胞调节素(betacellulin)和上皮调节蛋白(epiregulin) (Groenen et al. Growth Factors
11:235-257 (1994)) 源于单个基因的交替拼接(alternative splicing)的调蛋白蛋白家族是HER3和HER4的配体。调蛋白家族包括α、β和Y调蛋白(Holmes et al.， Science, 256 :1205-1210(1992);美国专利 5，641，869 ;和 Schaefer et al. Oncogene 15: 1385-1394(1997)) ;neu分化因子(NDFs)、神经胶质生长因子(GGFs);乙酰胆碱受体活性诱导蛋白(acetylcholine receptor inducing activity, ARIA);和感觉与运动神经元衍生因子(SMDF)。综述参见 Groenen et al. Growth Factors 11:235-257(1994); Lemke, G. Molec. & CelI. Neurosci. 7 :247-262 (1996)和 Lee et al. Pharm. Rev. 47 51-85(1995)。最近鉴定了另外三个HER配体神经调节蛋白_2 (NRG-2)，据报导其结合 HER3 或 HER4(Chang et al. Nature 387 509-512(1997);和 Carraway et alNature 387 :512-516(1997));神经调节蛋白-3，其结合 HER4 (Zhang et al. PNAS (USA) 94 (18) 9562-7(1997));和神经调节蛋白-4，其结合 HER4 (Harari et al. Oncogene 18 2681-89 (1999))HB-EGF、β 细胞素(betacellulin)和上皮调节蛋白(epiregulin)也结合 HER4。虽然EGF和TGF α不结合HER2，但EGF刺激EGFR和HER2形成异二聚体，其激活 EGFR并在所述异二聚体中引起HER2的转磷酸作用。二聚化和/或转磷酸作用看起来激活 HER2酪氨酸激酶。参见Earp et al.，同上。同样，当HER3与HER2—起共表达时，形成活性信号复合体，抗HER2的抗体能够破坏该复合体(Sliwkowski et al. , J. Biol. Chem. , 269 (20) 14661-14665(1994))。此外，当与HER2 —起共表达时，HER3对调蛋白(HRG)的亲合力提升到更高的亲合力状态。关于HER2-HER3蛋白复合体也可参见，Levi et al. , Journal of Neuroscience 15:1329-1340(1995) ；Morrissey eta I. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 1431-1435(1995);和 Lewis et al.，Cancer Res.，56 :1457-1465 (1996)。HER4 象 HER3 — 样与 HER2—起形成活性信号复合体(Carraway and Cantley, Cell 78:5-8(1994))。与HER 抗体有关的专利文献包括US 5,677, 171, US 5，720，937，US5，720，954， US 5，725，856，US 5,770，195，US 5，772，997，US 6，165，464，US6, 387，371，US 6,399,063， US2002/0192211A1, US 6，015，567，US 6，333，169，US4, 968，603，US 5,821,337， US 6，054，297，US 6，407，213，US 6，719，971，US6, 800，738，US2004/0236078A1， US 5，648，237， US 6，267，958， US 6，685，940， US 6,821,515, W098/17797, US6，127，526，US 6，333，398，US 6,797,814，US6, 339，142，US 6，417，335，US 6,489,447， W099/31140, US2003/0147884A1, US2003/0170234A1, US2005/0002928A1, US 6,573,043， US2003/0152987A1, W099/48527, US2002/0141993A1， W001/00245, US2003/0086924, US2004/0013667A1, W000/69460, W001/00238, W001/15730, US6, 627，196B1, US6, 632，979B 1， W001/00244, US2002/0090662A1, W001/89566, US2002/0064785, US2003/0134344, WO 04/24866， US2004/0082047, US2003/0175845A1， W003/087131, US2003/0228663, W02004/008099A2, US2004/0106161, W02004/048525, US2004/0258685A1, US 5,985,553， US5, 747，261，US 4，935，341，US 5，401，638，US 5，604，107，WO 87/07646，W089/10412, WO 91/05264，EP 412，116B1, EP 494，135B1, US 5,824,311，EP444, 181B1, EP 1,006，194A2, US 2002/0155527A1, WO 91/02062, US5,571,894, US 5,939,531, EP 502,812B1, WO 93/03741，EP 554, 441B1, EP656, 367A1, US 5，288，477，US 5，514，554，US 5,587,458， WO 93/12220, W093/16185, US 5, 877,305, WO 93/21319, WO 93/21232，US 5,856,089， W094/22478, US 5，910，486，US 6,028,059, WO 96/07321，US 5，804，396，US5, 846，749， EP 711, 565, WO 96/16673，US 5，783，404，US 5，977，322，US6, 512，097，WO 97/00271， US 6，270，765，US 6，395，272，US 5，837，243，W096/40789, US 5，783，186，US 6，458，356， WO 97/20858, WO 97/38731，US6, 214，388，US 5, 925, 519, WO 98/02463，US 5, 922, 845, WO 98/18489，W098/33914，US 5, 994, 071, WO 98/45479，US 6，358，682B1，US 2003/0059790， WO 99/55367,WO 01/20033，US 2002/0076695A1,WO 00/78347, W001/09187,WO 01/21192， WO 01/32155， WO 01/53354， WO 01/56604， WOO1/76630, W002/05791, WO 02/11677， US 6，582，919， US2002/0192652A1， US 2003/0211530A1, WO 02/44413， US 2002/0142328， US 6, 602, 670B2, W002/45653, WO 02/055106，US 2003/0152572，US 2003/0165840, WO 02/087619，WO 03/006509，W003/012072, WO 03/028638，US 2003/0068318，W003/041736, EP 1,357，132，US 2003/0202973，US 2004/0138160，US 5，705，157，US 6,123,939， EP 616,812B1, US 2003/0103973， US 2003/0108545， US6,403，630B1， WO 00/61145， WO 00/61185, US 6,333,348B1, WO 01/05425, WO 01/64246， US 2003/0022918, US 2002/0051785A1, US 6，767，541， W001/76586， US 2003/0144252, WO 01/87336, US 2002/0031515A1, W001/87334, WO 02/05791， WO 02/09754， US 2003/0157097， US 2002/0076408, WO 02/055106, WO 02/070008, WO 02/089842 和 WO 03/86467。诊断学选择用HER2抗体曲妥单抗(trastuzumab)治疗过的病人用于基于HER2过表达 / 扩增的治疗。参见，例如，W099/31140 (Paton et al.), US2003/0170234A1 (Hellmann, S·)，和 US2003/0147884(Paton et al.)；以及 TO01/89566，US2002/0064785，和 US2003/0134344 (Mass et al.)。也可参见，US2003/0152987，Cohen et al.，涉及检测 HER2 过表达和扩增的免疫组化(IHC)和荧光原位杂交(FISH)。W02004/053497 (Bacus et al.)涉及测定或预测对 HERCEPTIN 治疗的应答。US2004/013297A1 (Bacus et al.)涉及测定或预测对ABX0303EGFR抗体治疗的应答。 W02004/000094 (Bacus et al.)涉及测定对 GW572016、小分子、EGFR-HER2 酪氨酸激酶抑制剂的应答。W02004/063709，Amler et al.，涉及用于测定对EGFR抑制剂盐酸埃罗替尼的敏感性的生物标记物和方法。US2004/0209290, Cobleigh et al.，涉及乳腺癌预后的基因表达标记。可以选择用pertuzumab治疗过的病人用于基于HER激活或二聚化的治疗。涉及pertuzumab和用其选择用于治疗的病人的专利文献包括W001/00245 (Adams et al.) ；US2003/0086924(Sliwkowski, M.) ；US2004/0013667A1(Sliwkowski, Μ.)；以及 W02004/008099A2，和 US2004/0106161(Bossenmaier et al.)。Cronin et al.，Am. J. Path. 164(1) :35-42(2004)描述了石蜡包埋的组织中基因表达的测量。Ma et al. Cancer Cell5 :607-616 (2004)描述了利用来自肿瘤组织切片的分离的RNA通过基因寡核苷酸微阵列进行的基因测谱法(profiling)，所述肿瘤组织切片取自保存的原始活检组织切片。抗癌药和HER抗体的给药方案讨论抗癌药的给药方案(dosing)的论文包括Egorin,M. J Clin 0ncol2003 ；21 182-3 (2003) ；Baker et al. J Natl Cancer Inst 94 1883-8(2002) ；Felici et al. Eur J Cancer 38 1677-84 (2002) ；Loos et al.Clin. Cancer Res. 6 :2685-9 (2000) ；de Jongh et al. J. Clin Oncol. 19 :3733-9(2001) ；Mathijssen et al. J. Clin Oncol. 20 81-7(2002);和 de Jong et al. Clin Cancer ReslO :4068-71(2004)。典型地，已经根据基于体重(mg/kg)或者基于体表面积(BSA)的给药方案施用了商业上可获得的人源化IgG单克隆抗体(即曲妥单抗(trastuzumab)、和贝伐单抗 (Bevacizumab) ,Genentech Inc. , South San Francisco^Pgemtuzumab ozogomicin, Wyeth Pharmaceuticals, Philadelphia)和肿瘤学中的细胞毒性小分子药物。Cetuximab (ERBITUX )是结合EGF受体的抗体，被批准用于结肠直肠癌的治疗。在结肠直肠癌中，cetuximab 400mg/m2通过2小时的静脉内输注作为负载剂量(loading dose)给予。之后每周一次在I小时期间给予250mg/m2的维持剂量。参见cetuximab处方信息。曲妥单抗(trastuzumab)(HERCEPTIN )以4mg/kg的负载剂量施用于转移性乳腺癌病人，之后每周2mg/kg的剂量。参见曲妥单抗(trastuzumab)处方信息。也可参见W099/31140 ;US2003/0147884A1 ;US2003/0170234A1 ; US2005/0002928A1 ；W000/69460 ；W001/15730 和 US 6，627，196B1，其涉及曲妥单抗给药方案。Pertuzumab (也称为重组人单克隆抗体 2C4 ;0MNITARG , Genentech, Inc, South San Francisco)代表称为HER 二聚化抑制剂(HDI)的一类新试剂中的第一种，其发挥作用抑制HER2与其它HER受体(如EGFR/HER1、HER3和HER4)形成活性异二聚体的能力，并且活性与 HER2 表达水平无关。参见，例如，Harari and Yarden Oncogene 19:6102-14(2000)； Yarden and Sliwkowski. Nat Rev Mol Cell Biol 2 127-37 (2001) ；Sliwkowski Nat Struct Biol 10 :158-9(2003) ；Cho et al. Nature 421:756-60(2003)；和 Malik et al. Pro Am Soc Cancer Res 44:176-7(2003)。已经显示Pertuzumab在肿瘤细胞中阻断HER2-HER3异二聚体的形成抑制至关重要的细胞信号转导，所述细胞信号导致肿瘤增殖和存活减少(Agus et al. Cancer Cell 2 127-37(2002))。Pertuzumab已经作为单一试剂在门诊中用Ia期试验和II期试验进行了测试,所述Ia期试验在晚期癌症(advanced cancer)病人中进行，II期试验在卵巢癌和乳腺癌以及肺和前列腺癌病人中进行。在I期研究中，用每3周静脉内给予的pertuzumab治疗病人，所述病人患有标准治疗期间或之后发展为不能治愈的(incurable)、局部晚期(locally advanced)、复发的或转移性实体瘤。Pertuzumab通常被很好地耐受。在可对应答进行评价的20个病人中的3个获得了肿瘤退化。两个病人已确认部分应答。在21个病人中的6个中观察到持续超过2. 5个月的疾病稳定(Agus et al. Pro Am Soc Clin 0ncol22 192(2003))。在2. 0-15mg/kg的剂量pertuzumab的药代动力学是线性的，平均清除率从 2. 69 到 3. 74mL/天/kg,平均终点消除半衰期(mean terminal elimination half-life)从 15. 3 到 27. 6 天。没有检测到针对 pertuzumab 的抗体(Allison et al. Pro Am Soc Clin Oncol 22 197 (2003)) I期试验中基于体重(mg/kg)进行Pertuzumab给药。已经利用固定剂量启动II期试验。发明概述本发明提供固定剂量给药(fixed dosing)人源化IgGl单克隆抗体对药代动力学和目标药物浓度的影响和应用的首次重要评估。此HER抗体pertuzumab分析的首要目的是1)评估pertuzumab在癌症病人中的群体药代动力学(population pharmacokinetic) 和预测协变量(predictive covariante),和2)检测固定的、或基于体重、和基于体表面积 (BSA)的给药方案之后的暴露以及稳态谷浓度(steady-state trough concentrations)的可变性(variability)。相应地，第一个方面，本发明提供治疗癌症的方法，包括以有效治疗所述癌症的量为病人施用一个或多个固定剂量的HER抗体。另一方面，本发明提供治疗病人癌症的方法，包括为所述病人施用至少一个固定剂量的pertuzumab,其中所述固定剂量选自大约420mg、大约525mg、大约840mg、和大约 1050mg 的 pertuzumab。本发明还涉及包括含有固定剂量HER抗体的管形瓶的制品，其中所述固定剂量选自大约420mg、大约525mg、大约840mg和大约1050mg HER抗体。本发明涉及下述各项I.治疗癌症的方法,包括以有效治疗所述癌症的量为病人施用一个或多个固定剂量的HER抗体。2.项I的方法，其中所述抗体结合选自下组的HER受体EGFR、HER2、和HER3。3.项2的方法，其中所述抗体结合HER2。4.项3的方法，其中所述HER2抗体结合HER2胞外结构域的结构域II。5.前述项中任一项的方法，其中所述抗体结合HER2胞外结构域的结构域1、11和 III之间的连接处。6.前述项中任一项的方法，其中所述HER抗体抑制HER2与EGFR或HER3的异源二聚化。7.前述项中任一项的方法，其中所述HER抗体分别包含SEQ ID Nos. 3和4中的可变轻链和可变重链氨基酸序列。8.前述项中任一项的方法,其中所述HER抗体是pertuzumab。9.前述项中任一项的方法，其中所述固定剂量在大约20mg至大约2000毫克HER 抗体范围内。
10.前述项中任一项的方法，其中所述固定剂量选自大约420mg、大约525mg、大约 840mg和大约1050mg HER抗体。11.项10的方法，其中所述固定剂量为大约420mg HER抗体。12.项10的方法，其中所述固定剂量为大约1050mg HER抗体。13.前述项中任一项的方法，其中大约每周、大约每2周、大约每3周、或者大约每 4周为病人施用固定剂量的HER抗体。14.项13的方法，其中大约每3周为病人施用固定剂量的HER抗体。15.前述项中任一项的方法，其中所述HER抗体为裸抗体。16.前述项中任一项的方法，其中所述HER抗体为完整抗体。17.项I至15中任一项的方法，其中所述HER抗体为包含抗原结合区的抗体片段。18.前述项中任一项的方法，其中所述HER抗体为人源化的或人的IgGl抗体。19.前述项中任一项的方法，其中所述癌症显示HER表达、扩增、或活化。20.前述项中任一项的方法，其中所述癌症为卵巢癌、腹膜癌、或输卵管癌。21.项I至19中任一项的方法，其中所述癌症是转移性乳腺癌(MBC)。22.项I至19中任一项的方法，其中所述癌症是非小细胞肺癌(NSCLC)。23.项I至19中任一项的方法，其中所述癌症是前列腺癌。24.项I至19中任一项的方法，其中所述癌症是结肠直肠癌。25.前述项中任一项的方法，其包括为病人施用第二治疗剂。26.项25的方法，其中所述第二治疗剂选自化疗剂、不同的HER抗体、抗不同肿瘤相关抗原的抗体、抗激素化合物、心脏保护剂、细胞因子、EGFR-靶向药物、抗血管生成剂、 酪氨酸激酶抑制剂、COX抑制剂、非类固醇抗炎药、法呢基转移酶抑制剂、结合癌胚蛋白CA 125的抗体、HER2疫苗、另一种HER靶向治疗剂、Raf或ras抑制剂、盐酸多柔比星脂质体注射剂、托泊替康、紫杉烷、双重酪氨酸激酶抑制剂、TLK286、EMD-7200、治疗恶心的药剂、预防或治疗皮疹的药剂或标准的痤疮治疗剂、降低体温的药剂、和造血生长因子。27.项26的方法，其中所述第二治疗剂是化疗剂。28.项27的方法，其中所述化疗剂是抗代谢物化疗剂。29.项28的方法，其中所述抗代谢物化疗剂是吉西他滨。
30.项26的方法，其中所述第二治疗剂是曲妥单抗、盐酸埃罗替尼、或贝伐单抗。31.治疗病人癌症的方法，包括为所述病人施用至少一个固定剂量的 pertuzumab,其中所述固定剂量选自大约420mg、大约525mg、大约840mg、和大约1050mg的 pertuzumabο32.项31的方法，其中大约每3周为病人施用固定剂量的pertuzumab。33.项31或项32的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、腹膜癌、输卵管癌、转移性乳腺癌(MBC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、前列腺癌、和结肠直肠癌。34.包括含有固定剂量HER抗体的管形瓶的制品，其中所述固定剂量选自大约 420mg、大约525mg、大约840mg和大约1050mg的HER抗体。35.项34的制品，其中所述HER抗体是pertuzumab。36.项34或项35的制品，其进一步包括指导用户为癌症病人施用所述固定剂量的包装插页。
37.项36的制品，其中所述癌症选自卵巢癌、腹膜癌、输卵管癌、转移性乳腺癌 (MBC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、前列腺癌、和结肠直肠癌。38.项36或项37的制品，其中所述包装插页进一步指导用户为癌症病人施用所述固定剂量，所述癌症病人的癌症显示HER表达、扩增、或活化。39.项34至38中任一项的制品，其包括两个管形瓶，其中第一个管形瓶含有大约 840mg固定剂量的pertuzumab,第二个管形瓶含有大约420mg固定剂量的pertuzumab。40.项34至38中任一项的制品，其包括两个管形瓶，其中第一个管形瓶含有大约 1050mg固定剂量的pertuzumab,第二个管形瓶含有大约525mg固定剂量的pertuzumab。附图简述图I提供HER2蛋白质结构示意图，及其胞外结构域的结构域1_IV的氨基酸序列 (分别为 SEQ ID Nos. 19-22)。图2A和2B列出了鼠单克隆抗体2C4的轻链可变区(\)(图2A)和重链可变区(Vh) (图2B)的氨基酸序列(分别为SEQ ID Nos. I和2)的比对；人源化2C4574型的Vl和Vh结构域(分别为SEQ ID Nos. 3和4)，以及人\和Vh共有框架(hum κ 1，轻链kappa亚组I ; humlll，重链亚组III)(分别为SEQ ID Nos. 5和6)。星号表明人源化2C4574型(humanized 2C4version 574)和鼠单克隆抗体2C4之间或者人源化2C4574型和人框架之间的不同。括号中为互补决定区(⑶Rs)。图3A和3B显示pertuzumab轻链和重链的氨基酸序列(分别为SEQ ID Nos. 13 和14)。CDRs以粗体表示。计算的轻链和重链分子量为23，526. 22Da和49，216. 56Da(半胱氨酸为还原形式)。碳水化合物部分附着于重链的Asn299。图4示意性地列出2C4于HER2的异源二聚体结合部位的结合，由此以活化的EGFR 或HER3阻止异源二聚化。图5列出HER2/HER3与MAPK和Akt途径的偶联。图6比较曲妥单抗和pertuzumab的不同活性。图7A和7B分别显示曲妥单抗轻链(图7A ；SEQ ID No. 15)和重链(图7B ；SEQ ID No. 16)的氨基酸序列。图8A和8B分别列出变异的pertuzumab轻链序列(图8A ；SEQ ID No. 17)和变异的 pertuzumab 重链序列(图 8B ；SEQ ID No. 18)。图9A和9B为通过一个-(图9A)或二个-(图9B)区域模型(compartmental model)拟合的单个患者的PK数据的代表性图谱。开放的环显示观测到的浓度。实线和点线分别表示预测的群体和预测的个体浓度。图IOA和IOB表示模型诊断图。图IOA显示观测到的pertuzumab浓度相对于预测的pertuzumab浓度。实线为连续的线。图IOB显示加权残值(weighted residuals)相对于预测的pertuzumab浓度。虚线为数据的LOESS平滑(smooth)。图IIA和IIB显示基础模型(

图11A)和最终模型(图11B)在以体表面积(BSA)计的中央区域(Vc),以重量(WT)和体积计的清除率(CL)的随机效应(random effect) ( η)。图12A-12F 显不利用在后模型检查(posterior model check)进行的 pertuzumab 最终群体药代动力学模型的模型评估。检验统计的在后预测分布和观测值图12A-2. 5th ； 图12B-5th ;图12C-50th,图12D_90th，图12E_95th，图12F—97. 5th。每个直方图上的垂直线代表检验统计的观测值。图13图示1000个模拟患者在固定的、基于体重(WT)或BSA的剂量之后，依照最终模型的预测的 pertuzumab 稳态谷浓度(steady state trough concentration)(第 84 天)，其中所述患者是从初始药代动力学(PK)数据组随机抽样(bootstrapped)选出的。图14A 和 14B 显示彡 IOth(50. 4kg)(图 14A)或彡 90th(88. 5kg)(图 14B) WT 值的病人群体在固定的、基于体重(WT)或BSA的剂量之后，预测的pertuzumab稳态谷浓度(第84 天)O优选实施方案的详细描述I.定义本文中治疗剂的“固定的(fixed) ”或“单一的(flat) ”剂量指在不考虑病人的体重(WT)或体表面积(BSA)的情况下为所述病人施用的剂量。因此所述固定的或单一的剂量不是以mg/kg剂量或mg/m2剂量提供的，而是以治疗剂的绝对量提供的。本文“负载(loading) ”剂量通常包括施用于病人的治疗剂的初始剂量，以及之后它的一个或多个维持剂量。通常施用单个负载剂量，但本文也包括多个负载剂量。通常，所施用的负载剂量的量超过所施用的维持剂量的量和/或比维持剂量更频繁地施用负载剂量，以便比利用维持剂量更早地获得所需的治疗剂的稳态浓度。本文中“维持(maintenance) ”剂量指在治疗期间施用于病人的一个或多个治疗剂剂量。通常在被隔开的治疗时间间隔施用所述维持剂量，如大约每周、大约每2周、大约每 3周、或大约每4周。“HER受体”指属于HER受体家族的受体蛋白酪氨酸激酶，包括EGFR、HER2、HER3和 HER4受体。HER受体通常会包括胞外结构域，其可以结合HER配体和/或与另一种HER受体分子二聚化；亲脂性跨膜结构域；保守的胞内酪氨酸激酶结构域；和含有几个可以磷酸化的酪氨酸残基的羧基末端信号结构域。所述HER受体可以是“天然序列” HER受体或其 “氨基酸序列变体”。优选所述HER受体为天然序列人HER受体。本文中术语“ErbBl”、“HERl”、“表皮生长因子受体”和“EGFR”可互换使用，并且如 Carpenter et al. Ann. Rev. Biochem. 56 :881-914 (1987)中所公开的，称为 EGFR,包括其天然发生的突变形式(例如Humphrey et a I. PNAS (USA) 87 =4207-4211(1990)中的缺失突变体EGFR)。erbBl指编码EGFR蛋白质产物的基因。本文中措辞“ErbB2”和“HER2”可互换使用，指例如Semba et al (1985) PNAS (USA)， 82 :6497-6501 和 Yamamoto et al (1986) Nature，319 :230-234 (Genbank 登录号 X03363)中描述的人HER2蛋白。术语“erbB2”指编码人ErbB2的基因，“neu”指编码大鼠pl85neu的基因。优选的HER2是天然序列人HER2。HER2的胞外结构域包括四个结构域“结构域I” (约1-195位氨基酸残基SEQ ID NO :19)、“结构域II”(约196-319位氨基酸残基SEQ ID NO :20)、“结构域III”(约 320-488位氨基酸残基SEQ ID NO 21)、和“结构域IV” (约489-630位氨基酸残基=SEQ ID NO :22)(残基编号不含信号肽)。参见 Garrett et al. Mol. Cell. · 11 :495-505 (2003)， Cho et al. Nature 421 :756-760(2003),Franklin et al. Cancer Cell5 :317-328(2004), 和 Plowman et al. Proc. Natl. Acad. Sci. 90 :1746-1750 (1993)，以及本文中的图 I。“ErbB3” 和 “HER3” 指例如美国专利 5，183，884 和 5，480，968 以及 Kraus etal. PNAS(USA)86 :9193-9197(1989)中公开的受体多肽。本文中术语“ErbB4”和 “HER4” 指例如 EP 专利申请 599，274 ；Plowman et al.， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90 1746-1750 (1993)；和 Plowman et al. , Nature,366 473-475(1993)中公开的受体多肽，包括其同种型，例如公开于1999年4月22日的 W099/19488中披露的。“HER配体”指结合和/或激活HER受体的多肽。此处特别感兴趣的HER配体为天然序列人HER配体如表皮生长因子(EGF) (Savage et al. , J. Biol. Chem. 247 7612-7621 (1972));转化生长因子 a (TGF-a )(Marquardt et al.，Science223 1079-1082(1984));双调蛋白，也称为神经鞘瘤(schwanoma)或角化细胞自分泌生长因子(Shoyab et al. Science 243:1074-1076(1989) ；Kimura et al. Nature 348 257-260(1990)；和 Cook et al. Mol. Cell. Biol. 11 :2547-2557(1991)) ； β 细胞调节素(betacellulin)(Shing et al. , Science 259:1604-1607(1993)；和 Sasada et al. Biochem. Biophys. Res. Commun. 190 :1173 (1993));肝素结合表皮生长因子(HB-EGF) (Higashiyama et al. , Science 251 :936-939 (1991));上皮调节蛋白(epiregulin) (Toyoda et al. , J. Biol. Chem. 270 7495~7500(1995)；和 Komurasaki et al. Oncogene 15 :2841-2848(1997));调蛋白(参见下文)；神经调节蛋白-2 (NRG-2) (Carraway et al. , Nature 387:512-516(1997));神经调节蛋白-3 (NRG-3) (Zhang et al.， Proc. Natl. Acad. Sci. 94 :9562-9567(1997));神经调节蛋白-4(NRG-4)(Harari et al. 0ncogenel8 :2681-89 (1999));和 cripto (CR-I) (Kannan et al. J. Biol. Chem. 272 (6) 3330-3335(1997))。结合EGFR的HER配体包括EGF、TGF-α、双调蛋白、β细胞调节素、 HB-EGF和上皮调节蛋白(epiregulin)。结合HER3的HER配体包括调蛋白(heregulin)。能够结合HER4的HER配体包括β细胞调节素、上皮调节蛋白、HB-EGF、NRG-2、NRG-3、NRG_4、 和调蛋白。本文使用"调蛋白(heregulin)" (HRG)时指由如公开于美国专利5，641，869、 或Marchionni et al.，Nature，362 :312-318 (1993)中的调蛋白基因产物所编码的多肽。调蛋白的例子包括调蛋白_α、调蛋白-β I、调蛋白-β2和调蛋白-β 3(Holmes et al.，Science, 256 :1205-1210(1992);和美国专利 5，641，869) ;neu 分化因子(NDF) (Peles et al. Cell69 :205-216 (1992));乙酰胆碱受体活性诱导蛋白(ARIA) (Falls et al. Cell72 :801-815(1993));神经胶质生长因子(GGFs) (Marchionni et al.，Nature, 362 :312-318(1993));感觉和运动神经元衍生因子(SMDF) (Ho et al. J. Biol. Chem. 270 14523-14532(1995)) ;γ-调蛋白(Schaefer et al. 0ncogenel5 :1385-1394(1997))。本文中"HER 二聚体"指包括至少两个HER受体的非共价联结的二聚体。当表达两种或多种HER受体的细胞暴露于HER配体时可以形成这些复合体，可以通过免疫沉淀和 SDS-PAGE分析分离，例如Sliwkowski et al. , J. Biol. Chem. ,269(20) :14661-14665(1994) 中所述。这种HER 二聚体的例子包括EGFR-HER2、HER2-HER3和HER3-HER4异二聚体。另外，HER 二聚体可以包含与不同HER受体如HER3、HER4或EGFR组合的两种或多种HER2受体。其它的蛋白，如细胞因子受体亚基(例如gpl30)可以与所述二聚体联结。“HER抑制剂”指干扰HER活化或功能的药剂。HER抑制剂的例子包括HER抗体(例如EGFR、HER2、HER3、或HER4抗体)；EGFR-靶向药物；小分子HER拮抗剂；HER酪氨酸激酶抑制剂；HER2和EGFR双重酪氨酸激酶抑制剂如lapatinib/GW572016 ;反义分子(参见，例如，W02004/87207);和/或结合或干扰下游信号分子如MAPK或Akt的功能的药剂(参见图 5)。优选所述HER抑制剂是结合HER受体的抗体或小分子。“HER抗体”指结合HER受体的抗体。任选所述HER抗体进一步干扰HER活化或功能。优选所述HER抗体结合HER2受体。本文中特别感兴趣的HER2抗体是pertuzumab。 HER2抗体的另一个例子是曲妥单抗。EGFR抗体的例子包括cetuximab和ABX0303。“HER活化”指任何一个或多个HER受体的活化、或磷酸化。通常，HER活化引起信号转导(例如由HER受体或底物多肽中的HER受体磷酸化酪氨酸残基的胞内激酶结构域所引发的)。HER活化可以由结合HER 二聚体的HER配体所介导，所述HER 二聚体包含感兴趣的HER受体。结合HER 二聚体的HER配体可以激活二聚体中一个或多个HER受体的激酶结构域，由此引起一个或多个HER受体中的酪氨酸残基的磷酸化和/或其它底物多肽如Akt 或MAPK胞内激酶中的酪氨酸残基的磷酸化。例如，参见图5。“磷酸化”指向蛋白质如HER受体、或其底物添加一个或多个磷酸基。“抑制HER 二聚化”的抗体是抑制、或干扰HER 二聚体形成的抗体。优选这样的抗体在其异源二聚体结合部位结合HER2。本文中最优选的二聚化抑制性抗体是pertuzumab或 MAb 2C4。2C4与HER2的异源二聚体结合部位的结合图示于图4。其它抑制HER 二聚化的抗体的例子包括结合EGFR并抑制其与一个或多个其它HER受体二聚化的抗体(例如EGFR 单克隆抗体806, MAb 806,其结合已激活或解除限制的(untethered)EGFR ;参见Johns et al.，J. Biol. Chem. 279(29) :30375-30384(2004));结合 HER3 并抑制其与一个或多个其它 HER受体二聚化的抗体；和结合HER4并抑制其与一个或多个其它HER受体二聚化的抗体。“比曲妥单抗更有效地抑制HER 二聚化”的抗体指比曲妥单抗更有效地减少或消除HER 二聚体的抗体(例如有效性至少约2倍)。优选这种抗体抑制HER2 二聚化至少与选自下组的抗体一样有效鼠单克隆抗体2C4、鼠单克隆抗体2C4的Fab片段、pertuzumab、 和pertuzumab的Fab片段。人们可以通过直接研究HER 二聚体、或者通过评估HER活化、 或来自HER 二聚化的下游信号、和/或通过评估抗体-HER2结合部位等等来评估HER 二聚化抑制。筛选具有比曲妥单抗更有效地抑制HER 二聚化的能力的抗体的试验描述于Agus et al. Cancer Cell2 :127-137 (2002)和 W001/00245 (Adams et al.)。仅仅是举例说明， 人们可以通过评估，例如，HER 二聚体形成的抑制(参见,例如,Agus et al. Cancer Cell2 127-137(2002)的图IA-B ;和WOO1/00245);减弱表达HER 二聚体的细胞的HER配体活化 (例如，W001/00245 和 Agus et al. Cancer Cell2 :127-137 (2002)的图 2A-B);阻断 HER 配体与表达HER 二聚体的细胞的结合(例如，W001/00245 JPAgus et al. Cancer Cell2 127-137(2002)的图2E);在册1 配体存在(或不存在)时表达HER 二聚体的癌细胞(例如 MCF7, MDA-MD-134, ZR-75-1，MD-MB-175，T-47D 细胞)的细胞生长抑制(例如，W001/00245 和 Agus et al. Cancer Cell 2 :127-137 (2002)的图 3A-D);下游信号的抑制(例如，HRG-依赖的AKT磷酸化的抑制或者HRG-或TGFa -依赖的MAPK磷酸化的抑制)(例如，参见， WOO1/00245, Agus et al. Cancer Cell 2:127-137(2002)的图 2C-D)来测试 HER 二聚化的抑制。人们也可以通过研究抗体-HER2结合部位来评估所述抗体是否抑制HER 二聚化，例如通过评估结合于HER2的抗体的结构或模型，如晶体结构来研究(参见，例如，Franklin et al. Cancer Cell 5:317-328(2004))。
HER2上的“异源二聚体结合部位”指HER2的胞外结构域中的区域，一旦与其形成二聚体，该区域与EGFR、HER3或HER4的胞外结构域中的区域接触或接合(interface)。该区域发现于 HER2 的结构域 II 中。Franklin et al. Cancer Cell 5:317-328(2004)。HER2抗体可以比曲妥单抗更有效地“抑制HRG-依赖的AKT磷酸化”和/或抑制“HRG-或TGF α -依赖的MAPK磷酸化”(例如至少2倍更有效)(参见，例如，Agus et al. Cancer Cell 2:127-137(2002)和 W001/00245)。HER2抗体可以是确实“不抑制HER2膜外区(ectodomain)裂解”的抗体(Molina et al. Cancer Res. 61 :4744-4749(2001))。结合HER2的异源二聚体结合部位的HER2抗体结合于结构域II中的残基(也任选结合于HER2胞外结构域的其它结构域，如结构域I和III中的残基)，并且能够至少一定程度地在空间上阻碍HER2-EGFR、HER2-HER3、或HER2-HER4异二聚体的形成。Franklin et al. Cancer Cell 5 :317-328(2004)鉴定了 HER2_pertuzumab 晶体结构，保存于 RCSB 蛋白质数据库(ID号IS78)，其显示结合HER2的异源二聚体结合部位的示例性抗体。结合HER2的结构域II的抗体结合结构域II中的和任选HER2的其它结构域，如结构域I和III中的残基。优选结合结构域II的抗体结合HER2的结构域I、II和III之间的连接点。“天然序列”多肽指具有与源于自然界的多肽(例如，HER受体或HER配体)相同的氨基酸序列的多肽。这样的天然序列多肽可以从自然界分离，或者可以通过重组或合成手段生产。因此，天然序列多肽可以具有天然发生的人多肽、鼠多肽、或来自任何其它哺乳动物物种的多肽的氨基酸序列。此处术语"抗体"以其最广义使用，特别涵盖完整的单克隆抗体、多克隆抗体、至少由两种完整抗体所形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)、以及抗体片段，只要它们具有所需的生物学活性。此处所用术语"单克隆抗体"指由基本上同质的抗体群体获得的抗体，即所述群体包含的各个抗体是相同的和/或结合相同表位，除了可能在生产单克隆抗体期间发生的可能的变体之外，这种变体通常少量存在。这种单克隆抗体典型地包括包含结合目标的多肽序列的抗体，其中通过这样的方法获得目标结合多肽序列，所述方法包括从大量多肽序列选择单个目标结合多肽序列。例如，所述选择方法可以是从大量克隆，例如从一组杂交瘤克隆、噬菌体克隆或重组DNA克隆选择独特的克隆。应当理解可以进一步改变所选择的目标结合序列，例如以改善对目标的亲合力、以人源化目标结合序列、以改善其在细胞培养中的生产、以减轻其体内免疫原性、以构建多特异性抗体等等，并且包含改变的目标结合序列的抗体也是本发明的单克隆抗体。与典型地包括针对不同决定簇(表位) 的不同抗体的多克隆抗体制品相反，单克隆抗体制品的每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。除了其特异性之外，由于单克隆抗体制品典型地不被其它免疫球蛋白所污染， 因而它们具有优势。所述修饰语“单克隆”指从基本上同质的抗体群体获得的抗体的特征，不能理解为需要以任何特定方法生产所述抗体。例如，按照本发明使用的单克隆抗体可以通过多种技术包括例如杂交瘤方法(e. g.，Kohler et al.，Nature, 256 :495(1975)； Harlow et al., Antibodies A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press,2nd ed. 1988) ；Hammerling et al. , in Monoclonal Antibodies and T-CellHybridomas 563-681，(Elsevier，N. Y.，1981))、重组 DNA 方法(参见，例如，美国专利 4，816，567)、噬菌体展示技术(参见，例如，Clackson et al. ,Nature, 352 :624-628(1991)； Marks et al.，J. Mol. Biol.，222 :581-597 (1991) ；Sidhu et al. , J. Mol. Biol. 338(2) 299-310(2004) ；Lee et al. , J. Mol. Biol. 340(5) :1073-1093(2004) ；Fellouse,Proc. Nat. Acad. Sci. USAlOl (34) :12467-12472(2004);和 Lee et al. J. Immunol. Methods284 (1-2) 119-132(2004)、和生产人或动物中的类人抗体的技术(其中所述动物具有部分或所有人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因)(参见，例如，WO 1998/24893 ；W0 1996/34096 ;TO 1996/33735 ;W0 1991/10741 Jakobovits et al. , Proc.Natl. Acad. Sci. USA,90 :2551 (1993) ；Jakobovits et al. , Nature,362 :255-258(1993) ；Bruggemann et al.，Year in Immuno.，7 :33 (1993);美国专利 5，545，806 ；5, 569，825 ；5, 591，669 (所有都是 GenPharm 的);美国专利 5，545，807 ；W0 1997/17852 ;美国专利 5，545，807 ;5，545，806 ； 5, 569, 825 ;5，625, 126 ;5，633,425 ；和 5，661, 016 ；Marks et al. , Bio/Technology, 10 :779-783(1992) ；Lonberg et al. , Nature,368 :856-859(1994) ；Morrison, Nature, 368 :812-813 (1994) ；Fishwild et al. , Nature Biotechnology,14 :845-851 (1996)； Neuberger, Nature Biotechnology, 14 826 (1996) ；and Lonberg and Huszar, Intern. Rev.Tmmunol. ,13 :65-93(1995)。本文中单克隆抗体特别包括“嵌合”抗体，以及这些抗体的片段，其中重链和/或轻链的一部分与源于特定物种或属于特定抗体类或亚类的抗体中的相应序列等同或同源， 而链的其余部分与源于其它物种或属于其它抗体类或亚类的抗体中的相应序列等同或同源，只要它们显示所需的生物学活性(美国专利4，816，567 JPMorrison et al.，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81 :6851-6855 (1984))。此处感兴趣的嵌合抗体包括“灵长类化的”抗体，其包含源于非人灵长类(例如，旧世纪猴(Old World Monkey)、猿(Ape)等等)的可变区抗原结合序列和人恒定区序列。"抗体片段"包括完整抗体的一部分，优选包括其抗原结合区。抗体片段的例子包括Fab、Fab' >F(ab/ )2、以及Fv片段；双功能抗体；线性抗体；单链抗体分子；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。此处“完整抗体”指包含两个抗原结合区、和Fe区的抗体。优选所述完整抗体具有一种或多种效应器功能。依据其重链恒定区的氨基酸序列，可以将完整抗体指定为不同的“类别”。有五种主要的完整抗体类别IgA、IgD、IgE、IgGjP IgM，其中几种可以进一步分为“亚类”(同种型)，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、以及IgA2。对应于不同抗体类别的重链恒定区分别称为α、δ、ε、Y、和μ。不同类别免疫球蛋白的亚单位结构和三维构象是熟知的。抗体“效应器功能”指可归因于抗体的Fe区(天然序列Fe区或氨基酸序列变体 Fe区)的那些生物学活性。抗体效应器功能的例子包括Clq结合；补体依赖的细胞毒；Fe 受体结合；抗体依赖的细胞介导的细胞毒(ADCC);吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体；BCR)的下调等等。"抗体依赖的细胞介导的细胞毒"和"ADCC"指细胞介导的反应，其中表达Fe 受体(FcRs)的非特异性细胞毒性细胞(例如天然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞、和巨噬细胞)识别靶细胞上结合的抗体，随后导致靶细胞裂解。介导ADCC的主要细胞，NK细胞，只表达Fe ^1 111，而单核细胞表达？(^1 1、FcyRII和FcyRIII。造血细胞上FcR的表达概括于 Ravetch and Kinet,Annu. Rev. Tmmunol 9:457-92(1991)第 464 页表 3。为了评估感兴趣分子的ADCC活性，可以进行体外ADCC测试，如美国专利5，500, 362或5，821，337中所描述的。用于此测试的可用的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。可选地，或者除此之外，可以体内评估感兴趣分子的ADCC活性，例如在动物模型中，如 Clynes et al. PNAS(USA)95 :652-656(1998)中所公开的。“人效应细胞”为表达一种或多种FcRs并执行效应器机能的白细胞。优选所述细胞至少表达Fe Y RIII并执行ADCC效应器功能。介导ADCC的人白细胞的例子包括外周血单个核细胞(PBMC)、天然杀伤(NK)细胞、单核细胞、细胞毒性T细胞和嗜中性粒细胞；PBMC 和NK细胞是优选的。所述效应细胞可以从其天然来源分离，例如本文所述的从血液或PBMC 分离。术语“Fe受体”或“FcR”用于描述结合于抗体Fe区的受体。优选的FcR为天然序列的人FcR。另外，优选的FcR是结合IgG抗体的FcR (Y受体)，包括Fe Y RI、Fc Y RII、 和Fe Y RIII亚类的受体，包括这些受体的等位变体和可变拼接形式。FcyRII受体包括 FcyRIIA("活化受体")和FcyRIIB("抑制受体")，其具有类似的氨基酸序列，主要在其胞质结构域中有所不同。活化受体Fe Y RIIA在其胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受体Fe Y RIIB在其胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(ITIM)(参见综述 M. Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15 :203-234 (1997))。 Ravetchand Kinet,Annu. Rev. Tmmunol 9:457-92(1991) ；Capel et al. ,Immunomethods4 25-34(1994);和 de Haas et al.，J. Lab. Clin. Med. 126 :330-41 (1995)中综述了 FcRs。 此处术语"FcR"包括其它的FcRs，包括将来要鉴定的那些。所述术语还包括新生儿受体 FcRn，其负责母系 IgG 向胎儿的转移(Guyer et al. , J. Immunol. 117 :587(1976)和 Kim et al.，J. Immunol. 24 :249 (1994))，并调节免疫球蛋白的体内平衡。"补体依赖的细胞毒"或"CDC"指分子在补体的存在下裂解目标的能力。补体激活途径由补体系统的第一个组件(Clq)结合于与同类抗原复合在一起的分子(例如抗体)所启动。为了评估补体活化，可以进行⑶C测试,例如Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202 :163(1996)中所描述的。"天然抗体"通常为约150，000道尔顿的异四聚体糖蛋白，由两条相同的轻(L) 链和两条相同的重(H)链组成。每条轻链由一个共价二硫键连接于重链，然而二硫键的数目在不同免疫球蛋白同种型重链中有变化。每条重链和轻链还具有规则间隔的链内二硫键。每条重链一端具有可变区(Vh)，接下来是许多恒定区。每种轻链在一端具有可变区 (')，在其另一端具有恒定区。轻链的恒定区与重链的第一个恒定区配对，轻链可变区与重链的可变区配对。据信特定氨基酸残基形成轻链和重链可变区之间的接触面。术语"可变的"指抗体中可变区的某些部分在序列中差异非常大，用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性中。然而，可变性在所有抗体的可变区中不是均匀分布的。在轻链和重链可变区中，集中于三个称为高变区的片段。可变区较保守的部分称为框架区(FRs)。天然重链和轻链的可变区各包含四个FRs，大体采用β-片层构象，通过三个高变区相连，形成相连的环，并且在一些例子中形成片层结构的一部分。每条链中的高变区通过FRs非常紧密地结合在一起，并且通过来自另一条链的高变区为抗体的抗原结合部位的形成作出贡献(参见 Kabat et al. , Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))。恒定区不直接涉及抗体与抗原的结合，但显示多种效应器功能，例如抗体依赖的细胞毒(ADCC)中抗体的参与。此处使用术语“高变区”时指负责抗原结合的抗体的氨基酸残基。所述高变区通常包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基(例如，轻链可变区中的残基24-34(Ll)、 50-56 (L2)和 89-97 (L3)以及重链可变区中的 31-35 (HI)、50_65 (H2)和 95-102 (H3) ；Kabat et al. , Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版，Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))和 / 或来自“高变环，， 的那些残基(例如，轻链可变区中的残基26-32(Ll)、50-52(L2)和91-96 (L3)以及重链可变区中的 26-32 (HI)、53-55(H2)和 96_101(H3) ；Chothia and Lesk J. Mol. Biol. ,196 901-917(1987))。"框架区"或"FR"残基是除了此处定义的高变区残基之外的那些可变区残基。抗体的木瓜蛋白酶消化产生两条相同的抗原结合片段，称为"Fab"片段，每条都具有单一的抗原结合部位，和残留的"Fe"片段，其名称反映了其易于结晶的能力。胃蛋白酶处理产生F (ab' ) 2片段，其具有两个抗原结合部位，仍然能够交联抗原。" Fv"是包含完全抗原识别和抗原结合部位的最小抗体片段。该区域由紧密的、 非共价结合的一条重链和一条轻链可变区的二聚体组成。正是以这种每个可变区的三个高变区相互作用的构象确定了 Vh-'二聚体表面上的抗原结合部位。六个高变区共同赋予抗体的抗原结合特异性。然而，即便是单一的可变区(或者是只包含三个抗原特异性高变区的Fv的一半)也具有识别并结合抗原的能力，虽然其亲合力低于完整的结合部位。Fab片段也包含轻链的恒定区和重链的第一个恒定区(CHl)。Fab'片段与Fab 片段不同，其在重链CHl区的羧基末端添加了几个残基，包括一个或多个来自抗体绞链区的半胱氨酸。此处将恒定区的半胱氨酸残基具有至少一个自由硫醇基的Fab'称为 Fab' -SH0 V {ah' )2抗体片段起初以Fab'片段对的形式产生，所述Fab'片段对在Fab' 片段之间具有铰链半胱氨酸。抗体片段的其它化学偶联物也是已知的。可以基于抗体的恒定区将来自任何脊椎动物物种的抗体的"轻链"指定为两种清楚确定的类型，称为kappa O )和lambda ( λ )的其中一种。"单链Fv"或"scFv"抗体片段包含抗体的Vh和'结构域，其中这些结构域存在于单一多肽链中。优选Fv多肽在Vh和\结构域之间进一步包含多肽连接序列，其使 scFv能够形成所需的用于抗原结合的结构。综述参见Pliickthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. ,Springer-Verlag,New York, pp. 269-315(1994)。HER2 抗体 scFv 片段描述于 W093/16185 ;美国专利 5，571，894 ； 和美国专利5，587,458。术语"双功能抗体(diabody)"指具有两个抗原结合部位的小抗体片段，所述片段包括同一多肽链(Vh-VJ中连接到轻链可变区(')的重链可变区(Vh)。通过使用太短而不允许同一条链上的两个结构域配对的连接序列，迫使所述结构域与另一条链的互补结构域配对，产生两个抗原结合部位。例如EP404，097 ;W0 93/11161 ;以及Hollinger et al.， Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90 :6444-6448(1993)中更为充分地描述了双功能抗体。
"人源化"形式的非人(例如，啮齿类动物)抗体指包含源于非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗体。在很大程度上，人源化抗体指其中来自受体高变区的残基被来自非人物种(供体抗体)高变区的残基所置换的人免疫球蛋白(受体抗体)，所述非人物种为例如具有所需特异性、亲合力、和能力的小鼠、大鼠、兔或非人灵长类。一些情况下，人免疫球蛋白的框架区(FR)残基由相应的非人残基所置换。另外，人源化抗体可以包含受体抗体或供体抗体中未发现的残基。构建了这些修饰以进一步改善抗体性能。总的来说，人源化抗体基本上会包含所有的或至少一个、和典型地两个可变区，其中所有的或者基本上所有的高变环相应于非人免疫球蛋白的那些高变环，并且所有的或者基本上所有的FRs均为人免疫球蛋白序列的FRs。人源化抗体任选还将包含免疫球蛋白恒定区(Fe)，典型地人免疫球蛋白恒定区的至少一部分。详情参见 Jones et al. ,Nature 321 :522-525 (1986) ；Riechmann et al. ,Nature332 :323-329 (1988) jPPresta,Curr. Op. Struct. Biol. 2 :593-596 (1992)。人源化HER2抗体包括美国专利5821337(此处特别加入作为参考)的表3中描述的 huMAb4D5-l、huMAb4D5_2、huMAb4D5_3、huMAb4D5_4、huMAb4D5_5、huMAb4D5_6、 huMAb4D5-7 和 huMAb4D5_8 或曲妥单抗(trastuzumab) (HERCEPTIN )；人源化 520C9 (WO 93/21319);和此处所述人源化2C4抗体。为了本文的目的，“曲妥单抗(trastuzumab)”、“HERCEPTIN ” 和 “huMAb4D5-8”指分别包含SEQ ID N0S. 15和16中的轻链和重链氨基酸序列的抗体。本文中，“pertuzumab”和 “0MNITARG ” 指分别包含 SEQ ID N0S. 13 和 14 中的轻
链和重链氨基酸序列的抗体。曲妥单抗和pertuzumab之间的区别示于图6。“裸抗体(naked antibody) ”指未交联于异源分子如细胞毒性部分或放射性标记的抗体。"分离的"抗体指已经从其天然环境组分中鉴别和分离和/或回收的抗体。其天然环境的污染物组分指会干扰抗体的诊断或治疗用途的材料，可能包括酶、激素、和其它的蛋白质或非蛋白质溶解物。在优选实施方案中，所述抗体将被纯化至(I)用Lowry法测定时以重量计大于抗体的95%,最优选以重量计超过99%,纯化至(2)使用旋杯(spinning cup)测序仪测定时达到足以获得N末端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度，或者纯化至(3)在还原性或非还原性条件下进行SDS-PAGE，用考马斯蓝或优选银染时达到均质 (homogeneity)。由于抗体天然环境的至少一种组分不存在，因而分离的抗体包括重组细胞内原位存在的抗体。然而，通常分离的抗体将通过至少一个纯化步骤制备。“亲合力成熟的”抗体指在其一个或多个高变区中有一个或多个改变，与不拥有那些改变的亲本抗体相比，所述改变引起抗体对抗原的亲合力的改善。优选的亲合力成熟抗体对目标抗原将有纳摩尔或者甚至皮摩尔亲合力。亲合力成熟抗体通过本领域已知的方法生产。Marks et al. Bio/TechnologylO :779-783(1992)描述了通过 VH和 VL 结构域改组进行的亲合力成熟。Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813(1994) ；Schier et al. Gene 169:147-155(1995) ；Yelton et al. J. Immunol. 155 :1994-2004 (1995)； Jackson et al. , J. Tmmunol. 154 (7) :3310-9 (1995);和 Hawkins et al, J. Mol. Biol. 226 889-896(1992)描述了⑶R和/或框架残基随机诱变。本文中术语“主要种类抗体(main species antibody) ”指组合物中的抗体结构，其在数量上是所述组合物中的主要抗体分子。在一个实施方案中，所述主要种类抗体是 HER2抗体，例如结合HER2的结构域II的抗体、比曲妥单抗更有效地抑制HER 二聚化的抗体、和/或结合HER2的异源二聚体结合部位的抗体。本文中所述主要种类抗体的优选实施方案是包含SEQ ID Nos. 3和4中的可变轻链和可变重链氨基酸序列，最优选包含SEQ ID Nos. 13和14中的轻链和重链氨基酸序列的抗体(pertuzumab)。本文中“氨基酸序列变体”抗体指具有不同于主要种类抗体的氨基酸序列的抗体。 通常，氨基酸序列变体与所述主要种类抗体将拥有至少约70 %同源性，并且优选它们将与所述主要种类抗体至少约80%、更优选至少约90%同源。所述氨基酸序列变体在所述主要种类抗体的氨基酸序列内或者邻近于所述主要种类抗体的氨基酸序列处的特定位点拥有取代、删除、和/或添加。本文中氨基酸序列变体的例子包括酸式变体(例如脱酰胺抗体变体)、碱式变体、在其一个或两个轻链上具有氨基末端前导序列延伸(例如VHS-)的抗体、在其一个或两个重链上具有C末端赖氨酸残基的抗体等等，并且包括重链和/或轻链氨基酸序列的变异的组合。本文中特别感兴趣的抗体变体是其一个或两个轻链上包含氨基末端前导序列延伸的抗体，任选进一步包含相对于主要种类抗体的其它的氨基酸序列和/或糖基化差异。本文中“糖基化变体抗体”指具有附着于其上的一个或多个碳水化合物部分的抗体，其不同于附着于主要种类抗体上的一个或多个碳水化合物部分。本文中糖基化变体的例子包括具有附着于其Fe区的Gl或G2寡糖结构，而不是GO寡糖结构的抗体，具有附着于其一个或两个轻链的一个或两个碳水化合物部分的抗体，没有附着于抗体的一个或两个重链的碳水化合物的抗体等等，以及糖基化改变的组合。抗体具有Fe区时，如本文图9所示的寡糖结构可以附着于抗体的一个或两个重链，例如在残基299处(298,残基的Eu编号)。对于pertuzumab, GO是主要的寡糖结构， 同时发现在pertuzumab组成(composition)中有其它寡糖结构如GO-F、G_l、Man5> Man6、 Gl-UGl (1-6)、Gl (1-3)和 G2 以较低量存在。除非另有指明，本文中“G1寡糖结构”包括G-1、G1-1、Gl (1-6)和Gl (1-3)结构。本文中“氨基末端前导序列延伸(amino-terminal leader extension) ”指氨基末端前导序列的一个或多个氨基酸残基，所述氨基末端前导序列存在于抗体的任何一个或多个重链或轻链的氨基末端。示例性氨基末端前导序列延伸包含或由三个氨基酸残基VHS组成，其存在于抗体变体的一个或两个轻链上。“脱酰胺(deamidated) ”抗体指其中其一个或多个天冬酰胺残基已被衍生化，例如衍生为天冬氨酸、琥珀酰亚胺、或异天冬氨酸。术语"癌症"和"癌症的"指或者描述典型地以无限制的细胞生长为特征的哺乳动物生理学病症。癌症的例子包括但不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤(包括髓母细胞瘤和视网膜母细胞瘤)、肉瘤(包括脂肪肉瘤和和滑膜细胞肉瘤)、神经内分泌肿瘤(包括类癌肿瘤、胃泌素瘤、和胰岛细胞癌)、间皮瘤、雪旺氏细胞瘤(schwannoma)(包括听神经瘤)、 脑膜瘤、腺癌、黑素瘤、白血病或淋巴恶性肿瘤。这些癌症的更具体的例子包括鳞状细胞癌 (squamous cell cancer)(例如鳞状上皮细胞癌)、肺癌,包括小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、肺腺癌和肺鳞状细胞癌(squamous carcinoma of the lung)、腹膜癌、肝细胞癌(hepatocellular cancer)、胃(gastric)或胃部(stomach)癌症包括胃肠癌、胰腺癌、恶性胶质瘤(glioblatoma)、颈部癌症、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤(h印atoma)、 乳腺癌(包括转移性乳腺癌)、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾腺癌、 肾脏或肾癌(kidney and renal cancer)、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、肛门癌、阴茎癌、睾丸癌、食道癌、胆道肿瘤、以及头颈癌。本文中“病人”指人类病人。所述病人可以是“癌症病人”，即正在经历或处于患一种或多种癌症症状的风险中的病人，或者其它能够受M于用HER抗体治疗的病人。“生物样品” 一般指来自生物来源的细胞或组织样品。“病人样品”指从病人如癌症病人获得的样品。本文中“肿瘤样品”指源于或包含来自病人肿瘤的肿瘤细胞的样品。本文中肿瘤样品的例子包括但不限于肿瘤活组织检查、循环的肿瘤细胞、循环的血浆蛋白、腹水、源于肿瘤或显示肿瘤样特性的原代细胞培养物或细胞系、以及保存的肿瘤样品，如福尔马林固定的、石蜡包埋的肿瘤样品或冷冻的肿瘤样品。“固定的”肿瘤样品指已经利用固定剂组织学保存的样品。“福尔马林固定的”肿瘤样品指已经用福尔马林作为固定剂保存的样品。“包埋的”肿瘤样品指由坚固的以及通常坚硬的介质如石蜡、蜡、火棉 (celloidin)、或树脂包裹的样品。包埋使切割薄片用于显微检查或者用于生产组织微阵列 (TMAs)成为可能。“石蜡包埋的”肿瘤样品指由源于石油(petroleum)的纯化的固体烃类混合物包裹的样品。本文中“冷冻的”肿瘤样品是指冷冻的或者是已经冷冻的肿瘤样品。“显示HER表达、扩增、或活化”的癌症或生物样品指在诊断测试中表达(包括过表达)HER受体、已扩增了 HER基因、和/或以其它方式显示HER受体的活化或磷酸化的样品。 这种活化可以直接(例如通过测量HER磷酸化)或间接(例如通过基因表达制谱或通过检测HER异二聚体，如本文所述)测定。“HER受体过表达或扩增”的癌症指与相同组织类型的非癌细胞相比具有明显更高水平的HER受体蛋白或基因的癌症。这种过表达可以由基因扩增或增强的转录或翻译所致。HER受体过表达或扩增可以在诊断或预后测试中通过评估存在于细胞表面上的提高的 ErbB蛋白水平来测定(例如，通过免疫组化测试；IHC)。或者，或除此之外，可以通过例如荧光原位杂交(FISH ;参见WO 98/45479，公开于1998年10月)、southern印迹、或聚合酶链式反应(PCR)技术如定量实时PCR(qRT-PCR)测定细胞中HER编码核酸的水平。也可以通过测量生物流体如血清中的脱落抗原(例如，HER胞外结构域)来研究HER受体过表达或扩增 (参见，例如，公布于1990年6月12日的美国专利4，933，294 ;公开于1991年4月18日的 W091/05264 ;公布于 1995年3 月 28 日的美国专利 5，401，638 ;以及 Sias et al. J. Immunol. Methods 132 :73-80 (1990))。除了上述测试以外，熟练技术人员还可以采用不同的体内测试方法。例如，可以将病人体内的细胞暴露于抗体，所述抗体任选用可探测的标记，例如，放射性同位素标记，可以评估所述抗体与病人细胞的结合，例如，通过放射性外部扫描或者通过分析活检组织评估，该活检组织取自之前暴露于所述抗体的病人。反之，“不过表达或扩增HER受体”的癌症指与相同组织类型的非癌细胞相比，不具有高于正常HER受体蛋白或基因水平的癌症。抑制HER 二聚化的抗体，如pertuzumab，可用于治疗不过表达或扩增HER2受体的癌症。本文中使用"生长抑制剂"时指在体外或体内抑制细胞尤其是HER表达癌细胞的生长的化合物或组合物。因此，所述生长抑制剂可以为显著减小S期HER表达细胞的百分数的生长抑制剂。生长抑制剂的例子包括阻断细胞周期运行(在非S期位置)的试剂，如诱导Gl停滞和M-期停滞的试剂。经典M-期阻断剂包括长春药属(vincas)(长春新碱(vincristine)和长春碱(vinblastine))、紫杉烧(taxane)、和 topo II 抑制剂如多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、柔红霉素(daunorubicin)、依托泊苷(etoposide)和博来霉素(bleomycin)。阻滞Gl的那些药剂也溢出到S-期停滞中，例如，DNA烧化剂如他莫昔芬(tamoxifen)、强的松(prednisone)、达卡巴嗪(dacarbazine)、 氮芥(mechlorethamine)、顺钼、甲氨蝶呤(methotrexate)、5_氟尿卩密唳、和ara_C。可以在 The Molecular Basis of Cancer, Mendelsohn and Israel,编，第 I 章，Murakami et al. (WB Saunders-Philadelphia, 1995)标题为 〃 Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs",尤其是第13页中查找更多信息。"生长抑制性"抗体的例子指结合HER2并抑制过表达HER2的癌细胞生长的那些抗体。优选的生长抑制性HER2抗体以约0. 5至30 μ g/ml的抗体浓度抑制细胞培养物中大于20%、优选大于50% (例如自约50%到约100% )的SK-BR-3乳腺肿瘤细胞生长， 其中所述生长抑制在将SK-BR-3细胞暴露于所述抗体六天后测定(参见公布于1997年10 月14日的美国专利5，677，171)。在所述专利和下文中更详细地描述了 SK-BR-3细胞生长抑制测试。优选的生长抑制性抗体是鼠单克隆抗体4D5的人源化变体，例如，曲妥单抗 (trastuzumab)。"诱导细胞凋亡"的抗体指诱导程序性细胞死亡的抗体，所述程序性细胞死亡通过膜联蛋白V结合、DNA片段化、细胞皱缩、内质网膨胀、细胞破碎、和/或膜囊(称为凋亡体)形成测定。所述细胞通常为过表达HER2受体的细胞。优选所述细胞是肿瘤细胞,例如，乳腺、卵巢、胃、子宫内膜、唾腺、肺、肾、结肠、甲状腺、胰腺或膀胱细胞。在体外，所述细胞可以是 SK-BR-3、BT474、Calu 3 细胞、MDA-MB-453、MDA-MB-361 或 SK0V3 细胞。可以获得多种评估与凋亡有关的细胞事件的方法。例如，可以通过膜联蛋白结合测量磷脂酰丝氨酸(PS)易位；可以通过DNA梯度法(laddering)评估DNA片段化；可以通过亚二倍体 (hypodiploid)细胞的任何增加评估伴随DNA片段化的核/染色质浓缩。优选诱导凋亡的抗体是在膜联蛋白结合测试中利用BT474细胞相对于未处理细胞引起约2至50倍、优选约5至50倍、最优选约10至50倍的膜联蛋白结合诱导的抗体(参见下文)。诱导凋亡的 HER2抗体的例子为7C2和7F3。"表位2C4"指HER2的胞外结构域中抗体2C4所结合的区域。为了筛选结合 2C4表位的抗体,可以实施常规交叉阻断测试,如Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)中所述。优选所述抗体阻断约50%或更多的2C4与HER2的结合。或者,可以以表位做图法(epitope mapping)评估所述抗体是否结合于HER2的2C4表位。表位2C4包含来自HER2胞外结构域中的结构域II 的残基。2C4和pertuzumab于结构域1、11和III的连接处(junction)结合于HER2的胞外结构域。Franklin et al. Cancer Cell5 :317-328 (2004)。"表位4D5"是HER2的胞外结构域中抗体4D5(ATCCCRL 10463)和曲妥单抗(trastuzumab)所结合的区域。该表位靠近HER2的跨膜结构域,位于HER2的结构域IV中。 为了筛选结合4D5表位的抗体，可以实施常规交叉阻断测试，如Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory,Ed Harlow and David Lane (1988)中所述。或者,可以通过表位作图以评估所述抗体是否结合于HER2的4D5表位(例如大约自残基529 到约残基625区域中的任何一个或多个残基，包括于HER2E⑶内，残基编号包括信号肽)。"表位7C2/7F3"指处于结构域I中的HER2胞外结构域N末端的区域，所述7C2 和/或7F3抗体(都保藏于ATCC，参见下文)结合于该区域。为了筛选结合7C2/7F3表位的抗体，可以实施常规交叉阻断测试，如Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory,Ed Harlow and David Lane (1988)中所述。或者，可以进行表位作图以确定所述抗体是否结合于HER2上的7C2/7F3表位(例如大约自HER2ECD的残基22到约残基53区域中的任何一个或多个残基，残基编号包括信号肽)。"治疗"既指治疗性治疗也指预防或阻止措施。需要治疗的包括那些已经患所述疾病的以及要预防所述疾病的那些。因此，本文中所要治疗的病人可以已被诊断为患有所述疾病或者可能有患所述疾病的倾向或对所述疾病易感。术语“有效量”指有效治疗病人癌症的药物的量。药物的有效量可以减少癌细胞的数目；减小所述肿瘤大小；抑制(即，在一定程度上减缓且优选终止)癌细胞浸润到外周器官中；抑制(即，在一定程度上减缓且优选终止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长; 和/或在一定程度上减轻与癌症有关的一种或多种症状。达到药物能够阻止生长和/或杀死存在的癌细胞的程度时，其可能是细胞抑制和/或细胞毒性的。所述有效量可以延长无进展存活(Progression free survival)(例如通过实体瘤的应答评价标准(Response Evaluation Criteria, RECIST)或CA-125变化测量的)、引起目标应答(包括部分应答，PR， 或完全应答，CR)、增加整体存活时间、和/或改善癌症的一种或多种症状(例如通过FOSI 评估的)。“整体存活(overall survival) ”指病人在从诊断或治疗的时间开始保持存活的时间，如I年、5年等等。“无进展存活率(Progression free survival) ”指病人保持存活,而无癌症的进一步恶化。“目标应答(objective response)”指可测的应答，包括完全应答(CR)或部分应答(PR)。“完全应答”或“完全缓解”意思是响应于治疗，所有癌症体征均消失。这不总意味着癌症已被治愈。“部分应答”指响应于治疗，一种或多种肿瘤或病变的大小、或体内癌症的范围减小(减弱)。此处所用术语"细胞毒剂"指抑制或者阻止细胞机能和/或导致细胞破坏的物质。所述术语将包括放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32和 Lu的放射性同位素)、化疗剂、以及毒素如小分子毒素或者细菌、真菌、植物或动物来源的酶学活性毒素，包括其片段和/或其变体。"化疗剂"是对癌症治疗有用的化合物。化疗剂的实例包括烷化剂，例如噻替派(thiotepa)和环憐酸胺(cyclophosphamide) CYTOXAN ；横酸烧基酯类(alkyl sulfonates),例如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan);氮丙卩定类(aziridines)，例如苯佐替派(benzodepa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedepa)和乌瑞替派(uredepa);乙撑亚胺类 (ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撑憐酸胺(trietylene phosphoramide)、三乙撑硫代憐酉先胺(triethiylenethiophosphoramide)和三轻甲蜜胺(trimethylolomelamine) ；TLK 286 (TELCYTA );番蒸枝内酯类(acetogenin)(特别是布拉他辛(bulIatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone)) ； δ -9—四氢大麻酌· (delta-9-tetrahydrocannabinol)(屈大麻酷(dronabinol), MARINOL ) ;β-拉帕醌(beta-lapachone);拉帕醇(Iapachol)； 秋水仙素类(colchicines);白桦脂酸(betulinic acid);喜树碱(camptothecin)(包括合成的类似物托泊替康(topotecan) ( HYCAMTIN )、CPT-11(依立替康(irinotecan)， CAMPTOSAR )、乙酰喜树碱(acetylcamptothecin)、东茛菪亭(scopoletin)和 9_ 氨基喜树减(9-aminocamptothecin));苔藓抑素(bryostatin) ;callystatin ;CC_1065 (包括它的阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin);鬼臼酸(podophyllinic acid);替尼泊苷(teniposide);隐藻素类(cryptophycins)(特别是隐藻素I和隐藻素8);多拉司他汀(dolastatin) ;duocarmycin(包括合成的类似物KW-2189和CBI-TMl);艾植塞洛素 (eleutherobin) ；pancratistatin ；sarcodictyin ;海绵抑素(spongistatin);氮芥类 (nitrogen mustards)，例如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlomaphazine)、胆憐酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基甲胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、 美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲憐胺(trofosfamide)、尿啼唳氮芥(uracil mustard)；亚硝脲类(nitrosoureas)，诸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(Iomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀 (ranimustine) ;二膦酸酉旨(盐)类(bisphosphonates)，如氯膦酸盐(酯)(clodronate);抗生素，例如烯二炔类(enediyne)抗生素(例如加利车霉素(calicheamicin)，特别是加利车霉素 Y II 和加利车霉素 ω (例如，参见Agnew，Chem Intl. Ed. Engl.，33 :183-186(1994)) 和蒽环类抗生素(anthracyclines)如 annamycin、AD 32、alcarubicin、柔红霉素 (daunorubicin)、右雷佐生(dexrazoxane)、DX-52-1、表柔比星(epirubicin)、GPX-100、伊达t匕星(idarubicin)、KRN5500、美诺立尔(menogaril) Λ dynemicin，包括 dynemicin A、埃斯波霉素(esperamicin)、新制癌素发色团(neocarzinostatin chromophore)和相关色素蛋白烯二炔类抗生素发色团、阿克拉霉素(aclacinomysins)、放线菌素(actinomycin)、 氨茴霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycins)、放线菌素 C(cactinomycin)、carabicin、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、 色霉素(chromomycinis)、放线菌素 D (dactinomycin)、地托比星(detorubicin)、6_ 二氮-5-氧-L-正亮氨酸、ADRIAMYCIN 多柔比星(doxorubicin)(包括吗啉代多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、2-卩比咯代多柔比星、多柔比星脂质体(liposomal doxorubicin) 和脱氧多柔比星)、依索比星(esorubicin)、麻西罗霉素(marcelIomycin)、丝裂霉素类(mitomycins)如丝裂霉素 C (mitomycin C)、霉酌·酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、撤揽霉素(olivomycins)、培洛霉素(peplomycin)、potf iromycin、 卩票呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司 (ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、和佐柔比星(zorubicin);叶酸类似物如二甲叶酸 (denopterin)、蝶酉先三谷氨酸(pteropterin)、和三甲曲沙(trimetrexate) J票呤类似物如氟达拉滨(fludarabine)、6_ 巯基票呤(mercaptopurine)、硫咪票呤(thiamiprine)和硫鸟P票呤(thioguanine);啼卩定类似物如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、 6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、 去氧氟尿苷(doxifIuridine)、依诺他宾(enocitabine)和氟尿苷(fIoxuridine);雄激素如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、表硫雄醇(epitiostanol)、美雄焼(mepitiostane)和睾内酯(testolactone);抗肾上腺类如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、和曲洛司坦(trilostane);叶酸补偿物(folic acid replenisher)如亚叶酸(folinic acid)(亚叶酸(Ieucovorin))； 醋葡醒内酯(aceglatone);抗叶酸抗肿瘤剂(anti-folate anti-neoplastic agents) 如ALIMTA 、LY231514培美曲塞(pemetrexed)、二氢叶酸还原酶抑制剂如甲氨蝶呤(methotrexate)、抗代谢物如5_氟尿啼卩定(5-fluorouracil) (5-FU)及其前药如UFT、S-I和卡培他滨(capecitabine)、以及胸苷酸合成酶抑制剂和甘氨酰胺核糖核苷酸甲酰基转移酶抑制剂如雷替曲塞(raltitrexed) (TOMUDEXrm, TDX) ;二氢嘧啶脱氢酶抑制剂如恩尿啼唳(eniIuraciI);醒磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)； 氛基乙酉先丙酸(aminolevulinic acid)；安口丫 P定(amsacrine) ；bestrabucil ；比生群(bisantrene);依达曲沙(edatraxate)；地憐酸胺(defosfamide);地美可辛 (demecolcine);地口丫酉昆(diaziquone) ；elfornithine ;依禾1|醋韦安(elliptinium acetate)； 埃博霉素(epothilone);依托格鲁(etoglucid);硝酸镓；轻脲(hydroxyurea)；香燕多糖(Ientinan);氯尼达明(Ionidamine);美登木素生物碱类(maytansinoids), 例如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin);米托胍腙(mitoguazone)； 米托蒽醌(mitoxantrone);莫哌达醇(mopidamol) ； 二胺硝口丫 P定(nitracrine)；喷司他丁 (pentostatin);蛋氨氮芥(phenamet)；卩比柔比星(pirarubicin);洛索蒽醌 (Iosoxantrone) ;2_ 乙基酉先餅(ethylhydrazide);丙卡巴餅(procarbazine) ； PSK 多糖复合物(JHS Natural Products, Eugene, OR);雷佐生(razoxane);根霉素(rhizoxin)； 西索菲兰(sizofiran);螺旋错(spirogermanium);细交链抱菌酮酸(tenuazonic acid)； 三亚胺醌(triaziquone) ；2,2f，2"-三氯三乙胺；单端孢菌素类(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、抚孢菌素(verrucarin) A、杆孢菌素(roridin) A和蛇行菌素(anguidin))； 乌拉坦(urethan);长春地辛(vindesine) ( ELDISINE ，FILDESIN );达卡巴嗪(dacarbazine);甘露醇氮芥(mannomustine) ; 二溴甘露醇(mitobronitol) ; 二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴焼(pipobroman) ；gacytosine ;阿糖胞苷(arabinoside) (“Ara-C");环憐酸胺(cyclophosphamide);噻替派(thiotepa);类紫杉醇(taxoids) 和紫杉焼类(taxanes)，例如，TAXOL 紫杉醇(paclitaxel) (Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton, N. J.)，ABRAXANE 不含克列莫佛(Cremophor)、清蛋白改造的纳米颗粒剂型紫杉醇(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg，Illinois)、和TAX0TERE7 多西他塞(docetaxel) ( Rhone -Poulenc Rorer, Antony, France);苯丁酸氮芥(chlorambucil);吉西他滨(gemcitabine) (GEMZAR7) ;6_ 硫鸟嘌呤(thioguanine);疏基嘌呤(mercaptopurine);钼；钼类似物或基于钼的类似物例如顺钼(cisplatin)、奥沙利钼(oxaliplatin)和卡钼(carboplatin);长春碱(vinblastine) ( VELBAN );依托泊苷(etoposide) (VP-16);异环磷酰胺(ifosfamide);米托蒽醌(mitoxantrone);长春新喊(vincristine) ( ONCOVIN );长春喊(vinca alkaloid);长春瑞滨(vinorelbine) (NAVELBINE );能灭瘤(novantrone);依达曲沙(edatrexate);道诺霉素 (daunomycin);氨基蝶呤(aminopterin);希罗达(xeloda);伊本勝酸盐(ibandronate)； 拓扑异构酶抑制剂RFS 2000;二氟甲基鸟氨酸(DMFO);类维A酸(retinoids)，诸如维A 酸(retinoic acid);上述所有物质的药学可接受盐、酸或衍生物；以及上述的两种或更多种的组合，例如CHOP和F0LF0X，CHOP是环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙 (prednisolone)的组合治疗的缩写，F0LF0X是奥沙利钼(EL0XATIN )联合5-FU和亚叶酸 (Ieucovorin)进行治疗的缩写。该定义还包括担负调节或抑制作用于肿瘤的激素的抗激素试剂例如抗雌激素和选择性雌激素受体调节剂(SERMs)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX 他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、 4-轻泰米酌· (4-hydroxytamoxifen)、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、 LY117018、奥那司酮(onapristone)、和 FARESTON 托瑞米芬(toremifene);抑制芳香化酶的芳香化酶抑制剂，其调节肾上腺中雌激素的生产，例如4(5)-咪唑、氨鲁米特(aminoglutethimide)、MKGASK(R)醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)、 AROMASIN 依西美坦(exemestane)、福美司坦(formestanie)、法屈唑(fadrozole)、 RIVISOR 伏罗唑(vorozole)、FEMARA 来曲唑(letrozole)、和 ARIMIDEX 阿那曲唑(anastrozole)；以及抗雄激素例如氟他米特(flutamide)、尼鲁米特 (niIutamide)、比卡米特(bicalutamide)、亮丙瑞林(Ieuprolide)、和戈舍瑞林 (goserelin);以及曲沙他滨(troxacitabine) (I, 3-二氧戍环核苷胞喃唳类似物)；反义寡核苷酸，尤其是抑制与支持细胞增殖有关的信号途径中的基因表达的那些反义寡核苷酸，所述基因如PKC-α、Raf、H_Ras、和表皮生长因子受体(EGF-R);疫苗如基因治疗疫苗， 例如 ALL0VECTIN(疫苗、LEUVECTIN 疫苗、和 VAXID 疫苗；PROLEUKIN rIL-2 ； LURTOTECAN 拓扑异构酶I抑制剂；ABARELIX rmRH ；以及上述任一项的药学上可接受的盐、酸或衍生物。“抗代谢物化疗剂”指在结构上类似于代谢物，但不能由机体以生产方式使用的药剂。许多抗代谢物化疗剂干扰核酸RNA和DNA的生产。抗代谢物化疗剂的例子包括吉西他滨(gemcitabine) (GEMZAR )、5-氣尿啼卩定(5-FU)、卡培他滨(capecitabine) (XEL0DA )、6_巯基嘌呤、甲氨蝶呤、6-硫代鸟嘌呤、培美曲塞(pemetrexed)、雷替曲塞(raltitrexed)、阿拉伯糖胞啼卩定ARA-C阿糖胞苷(CYTOSAR-U )、达卡巴曝(dacarbazine) (DTIC-DOME )、氣胞啼卩定(azocytosine)、脱氧胞啼P定 (deoxycytosine)、pyridmidene、氟达拉滨(fIudarabine) (FLUDARA ) 、cladrabine、 2-脱氧-D-葡萄糖等等。优选的抗代谢物化疗剂是吉西他滨。
“吉西他滨”或“2'-脱氧-2'，2' - 二氟胞苷一氢氯化物(2’ -deoxy-2’， 2’ -difluorocytidine monohydrochloride) (b_异构体)”是显示抗癌活性的核苷类似物。 吉西他滨HCl的经验式(empirical formula)是C9H11F2N304A HC1。盐酸吉西他滨由Eli Lilly出售，商标为GEMZAR 。“基于钼的化疗剂”包括含有作为分子的完整部分的钼的有机化合物。基于钼的化疗剂的例子包括卡钼、顺钼、和奥沙利钼(oxaliplatinum)。“基于钼的化疗”意思是用一种或多种基于钼的化疗剂治疗，任选与一种或多种其它化疗剂组合。“钼抗性”癌症意思是虽然接受了基于钼的化疗但癌症还是进展了的病人(即所述病人是“钼不应性的(platinum refractory) ”)，或者所述病人在完成基于钼的化疗方案后，在12个月内(例如在6个月内)已经进展。"抗血管生成剂"指在某种程度上阻断、或干扰血管发育的化合物。抗血管生成因子可以为例如结合生长因子或生长因子受体的小分子或抗体，所述生长因子或生长因子受体涉及促进血管生成。本文中优选的抗血管生成因子为结合血管内皮生长因子(VEGF) 的抗体，如贝伐单抗(Bevacizumab)
(AVASTIN )。术语"细胞因子"是由一个细胞群体释放的作为细胞间介质而作用于另一细胞的蛋白质的通称。这种细胞因子的例子为淋巴因子、单核因子、和传统多肽激素。细胞因子包括生长激素如人生长激素、N-甲硫氨酰基人生长激素、和牛生长激素；甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素(relaxin);松弛素原(prorelaxin);糖蛋白激素如促卵泡素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)、和促黄体生成素(LH);肝生长因子；成纤维细胞生长因子；催乳素；胎盘催乳素；肿瘤坏死因子-α和;苗勒(mullerian)-抑制物质；小鼠促性腺激素-相关肽；抑制素(inhibin);活化素(activin);血管内皮生长因子；整联蛋白； 促血小板生成素(TPO);神经生长因子如NGF-β ;血小板-生长因子；转化生长因子(TGF) 如TGF-α和TGF-β ;胰岛素样生长因子-I和-II ;促红细胞生成素(EPO);成骨诱导因子；干扰素如干扰素、-β、和-Y ;集落刺激因子(CSF)如巨噬细胞-CSF(M-CSF);粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF);和粒细胞-CSF(G-CSF);白介素(IL)如 IL-I、IL-I a、IL-2、 IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12 ;肿瘤坏死因子如 TNF- a 或 TNF-β ;以及其它多肽因子包括LIF和kit配体(kit ligand) (KL)。本文所用术语细胞因子包括天然来源的或来自重组细胞培养物的蛋白质和天然序列细胞因子的生物学活性等价物。本文所用术语“EGFR-靶向药物”指结合EGFR并且任选抑制EGFR活化的治疗剂。这些药剂的例子包括结合EGFR的抗体和小分子。结合EGFR的抗体的例子包括 MAb 579 (ATCC CRL HB 8506)、MAb 455 (ATCC CRLHB8507)、MAb 225 (ATCC CRL 8508)、 MAb 528 (ATCC CRL 8509)(参见，美国专利 4，943，533，Mendelsohn et al.)及其变体， 如嵌合 225 (C225 或 Cetuximab ； ERBUTIX )和重整型(reshaped)人 225 (H225) (参见，W096/40210, Imclone Systems Inc.);结合II型突变EGFR的抗体(美国专利 5，212，290);美国专利5，891，996中所述的结合EGFR的人源化和嵌合抗体；和结合EGFR，如 ABX-EGF 的人抗体(参见 W098/50433，Abgenix) ；EMD55900 (Stragliotto et al. Eur. J. Cancer 32A :636-640 (1996));和 mAb 806 或人源化 mAb 806 (Johns et al. , J. Biol. Chem. 279 (29) :30375-30384 (2004))。抗EGFR抗体可以与细胞毒剂偶联，由此产生免疫偶联物(参见，例如，EP659，439A2，Merck Patent GmbH)。结合EGFR的小分子的例子包括 ZD1839 或 Gefitinib (IRESSA ;Astra Zeneca) ;CP_358774 或盐酸埃罗替尼(Erlotinib HCL) (TARCEVA ；Genentech/0SI);和 AG1478、AG1571 (SU 5271 ;Sugen)。“酪氨酸激酶抑制剂”指抑制酪氨酸激酶如HER受体的酪氨酸激酶活性的分子。这些抑制剂的例子包括前段所指出的EGFR靶向药物；小分子HER2酪氨酸激酶抑制剂如TAK165，其可由Takeda获得；双重HER抑制剂如EKB-569 (可由Wyeth获得)， 其优先结合EGFR但同时抑制HER2和EGFR过表达细胞；GW572016(可由Glaxo获得)， 其为口服HER2和EGFR酪氨酸激酶抑制剂；PKI_166(可由Novartis获得)；泛-HER抑制剂如 canertinib (CI-1033 ；Pharmacia) ；Raf-1 抑制剂如反义药剂 ISIS-5132，可由 ISISPharmaceuticals获得，其抑制Raf-I信号；非-HER靶向TK抑制剂如甲磺酸伊马替尼(Imatinib mesylate) (Gleevac ),可由Glaxo获得；MAPK胞外调节的激酶I抑制剂 CI-1040(可由Pharmacia获得);喹唑啉类，如PD 153035，4-(3-氯代苯胺)喹唑啉；吡啶并喃卩定；卩密唳并卩密唳(pyrimidopyrimidines);卩比咯并卩密唳(pyrrolopyrimidines),如CGP 59326,CGP 60261 和 CGP 62706 ;吡唑并嘧啶(pyrazolopyrimidines)、4_ (苯氨基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶；姜黄素(curcumin) (二阿魏酰甲烷、4，5_ 二(4-氟代苯胺)酞酰亚胺)；含硝基噻吩部分的tyrphostines ;Η)-0183805 (Warner-Lamber);反义分子(例如结合HER编码核酸的那些反义分子)；喹卩惡啉(美国专利5，804，396) ;tryphostins (美国专利 5，804，396) ；ZD6474 (Astra Zeneca) ；PTK-787 (Novartis/Schering AG) ;S_HER 抑制剂如 CI-1033 (Pfizer) ；Affinitac (ISIS 3521 ；Isis/Lilly);甲横酸伊马替尼(Gleevac ； Novartis) ；PKI 166 (Novartis) ；GW2016(Glaxo SmithKline) ；CI-1033 (Pfizer)； EKB-569 (Wyeth) ;Semaxinib(Sugen) ；ZD6474 (astrazeneca) ；PTK-787 (Novartis/ Schering AG) ；INC-1C11 (Imclone);或者如以下任一专利文献所述的美国专利 5,804,396 ；W099/09016(American Cyanimid) ；W098/43960(American Cyanamid)； W097/38983(Warner Lambert) ；W099/06378(Warner Lambert) ；W099/06396(Warner Lambert) ；W096/30347(Pfizer, Inc) ；W096/33978(Zeneca) ；W096/3397(Zeneca)；和 W096/33980(Zeneca)。“自身免疫病”在本文中指因个体自身组织引起的和针对个体自身组织的疾病或病症或其共分离(co-segregate)或表现或者由此产生的疾患。自身免疫性疾病或病症的例子包括但不限于关节炎(类风湿性关节炎诸如急性关节炎、慢性类风湿性关节炎、 痛风性关节炎、急性痛风性关节炎、慢性炎性关节炎、退行性关节炎、感染性关节炎、莱姆 (Lyme)关节炎、增生性关节炎、银屑病性关节炎、脊椎关节炎和幼发型类风湿性关节炎，骨关节炎，慢性进行性关节炎(arthritis chronica progrediente),变形性关节炎，慢性原发性多关节炎，反应性关节炎，和强直性脊柱炎)，炎性过度增殖性皮肤病，银屑病诸如斑块状银屑病、滴状银屑病、脓疱性银屑病和指甲银屑病，特应性包括特应性疾病诸如干草热和乔布氏(Job)综合征，皮炎包括接触性皮炎、慢性接触性皮炎、变应性皮炎、变应性接触性皮炎、疱疹样皮炎和特应性皮炎，X连锁的高IgM综合征，荨麻疹诸如慢性变应性荨麻疹和慢性特发性荨麻疹包括慢性自身免疫性荨麻疹，多肌炎/皮肌炎，青少年型皮肌炎，中毒性表皮坏死松解症，硬皮病(包括系统性硬皮病)，硬化诸如系统性硬化、多发性硬化(MS)诸如脊髓-眼(spino-opticaDMS、原发性进行性MS (PPMS)和复发性消退性 (relapsing remitting)MS(RRMS)、进行性系统性硬化、动脉粥样硬化、动脉硬化、播散性硬化(sclerosis disseminata)和共济失调性(ataxic)硬化，炎性肠病(IBD)(例如克罗恩氏(Crohn)病，自身免疫介导的胃肠病，结肠炎诸如溃瘍性结肠炎(colitis ulcerosa)、 微观(microscopic)结肠炎、胶原性结肠炎、息肉状结肠炎、坏死性小肠结肠炎和透壁性结肠炎，和自身免疫性炎性肠病)，坏疽性脓皮症，结节性红斑，原发性硬化性胆管炎， 巩膜外层炎，呼吸窘迫综合征包括成人型或急性呼吸窘迫综合征(ARDS)，脑膜炎，整个或部分葡萄膜的炎症，虹膜炎，脉络膜炎，自身免疫性血液学病症，类风湿性脊椎炎，突发性听觉丧失，IgE介导的疾病诸如过敏反应和变应性和特应性鼻炎，脑炎诸如拉斯默森氏 (Rasmussen)脑炎和边缘系和/或脑干脑炎，葡萄膜炎诸如前葡萄膜炎、急性前葡萄膜炎、 肉芽肿性葡萄膜炎、非肉芽肿性葡萄膜炎、晶状体抗原性葡萄膜炎、后葡萄膜炎或自身免疫性葡萄膜炎，具有和没有肾病综合征的肾小球肾炎(GN)诸如慢性或急性肾小球肾炎诸如原发性GN、免疫介导的GN、膜性GN(膜性肾病)、特发性膜性GN或特发性膜性肾病、膜增殖性或膜性增殖性GN(MPGN)包括I型和II型、和急进性GN，变应性疾患和应答，变应性反应，湿疫包括变应性或特应性湿疫，哮喘诸如支气管哮喘(asthma bronchiale)和自身免疫性哮喘，涉及T细胞浸润和慢性炎性应答的疾患，针对外来抗原诸如妊娠期间胎儿 A-B-O血型的免疫反应，慢性肺部炎性疾病，自身免疫性心肌炎，白细胞粘附缺陷，系统性红斑狼疮(SLE) (systemic lupus erythematodes)诸如皮肤SLE、亚急性皮肤红斑狼疮、 新生儿狼疮综合征(NLE)、播散性红斑狼疮、狼疮(包括狼疮肾炎、狼疮脑炎、儿科狼疮、非肾狼疮、肾外狼疮、盘状狼疮、狼疮脱发)，幼发型(I型)糖尿病包括儿科胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)、成人期发作的糖尿病(II型糖尿病)、自身免疫性糖尿病、特发性尿崩症，与细胞因子和T-淋巴细胞介导的急性和迟发型超敏感性有关的免疫应答，结核病，结节病， 肉芽肿病包括淋巴瘤样肉芽肿病、韦格纳氏(Wegener)肉芽肿病，粒细胞缺乏，血管炎病包括血管炎(包括大血管血管炎(包括风湿性多肌痛和巨细胞(高安氏(Takayasu))动脉炎)，中血管血管炎(包括川崎氏(Kawasaki)病和结节性多动脉炎/结节性动脉周围炎)，微观(miCToscopic)多动脉炎，CNS血管炎，坏死性、皮肤性或超敏感性血管炎，系统性坏死性血管炎，和ANCA相关血管炎诸如丘-施二氏(Churg-Strauss)血管炎或综合征 (CSS))，颞动脉炎，再生障碍性贫血，自身免疫性再生障碍性贫血，库姆斯(Coombs)阳性贫血，戴-布二氏(Diamond Blackfan)贫血，溶血性贫血或免疫性溶血性贫血包括自身免疫性溶血性贫血(AIHA),恶性贫血(anemia perniciosa),阿狄森氏(Addison)病，单纯红细胞性贫血或再生障碍(PRCA)，因子VIII缺乏，血友病A，自身免疫性嗜中性粒细胞减少症，全血细胞减少症，白细胞减少症，涉及白细胞渗出的疾病，CNS炎性病症，多器官损伤综合征诸如那些败血症、外伤或出血继发的，抗原-抗体复合物介导的疾病，抗肾小球基底膜病，抗磷脂抗体综合征，变应性神经炎，贝切特氏(Bechet或Behcet)病，卡斯尔曼氏(Castleman)综合征,古德帕斯丘氏(Goodpasture)综合征,雷诺氏(Reynaud)综合征, 斯耶格伦氏(Sjogren)综合征,史-约二氏(Stevens-Johnson)综合征,类天疱疮诸如大疱性类天疱疮和皮肤类天疱疮，天疱疮(包括寻常型天疱疮、落叶型天疱疮、粘膜类天疱疮型天疱疮和红斑性天疱疮)，自身免疫性多内分泌病，莱特氏(Reiter)病或综合征，免疫复合物肾炎，抗体介导的肾炎，视神经脊髓炎，多神经病，慢性神经病诸如IgM多神经病或IgM介导的神经病，血小板减少症(例如心肌梗死患者发生的)包括血栓性血小板减少性紫癜(TTP)、输血后紫癜(PTP)、肝素诱发的血小板减少症、和自身免疫或免疫介导的血小板减少症诸如特发性血小板减少性紫癜(ITP)包括慢性或急性ITP，睾丸和卵巢的自身免疫病包括自身免疫性睾丸炎和卵巢炎，原发性甲状腺功能减退症，甲状旁腺功能减退，自身免疫性内分泌病包括甲状腺炎诸如自身免疫性甲状腺炎、桥本氏(Hashimoto)病、慢性甲状腺炎(桥本氏(Hashimoto)甲状腺炎)或亚急性甲状腺炎，自身免疫性甲状腺病，特发性甲状腺功能减退症，格雷夫斯氏(Graves)病，多腺性综合征诸如自身免疫性多腺体综合征(或多腺性内分泌病综合征)，瘤外综合征包括神经学瘤外综合征诸如兰伯特-伊顿(Lambert-Eaton)肌无力综合征或伊顿_兰伯特(Lambert-Eaton)综合征，僵体或僵人综合征，脑脊髓炎诸如变应性脑脊髓炎(encephalomyelitis allergica)和实验性变应性脑脊髓炎(EAE)，重症肌无力诸如胸腺瘤相关重症肌无力，小脑变性，神经性肌强直， 视性眼阵挛或视性眼阵挛肌阵挛综合征(OMS)，和感觉神经病，多病灶运动神经病，席汉氏 (Sheehan)综合征，自身免疫性肝炎、慢性肝炎、类狼疮肝炎、巨细胞性肝炎、慢性活动性肝炎或自身免疫性慢性活动性肝炎，淋巴样间质性肺炎(LIP)，梗阻性细支气管炎(非移植) 对NSIP，格-巴二氏(Guillain-Barr6)综合征，贝格尔氏(Berger)病(IgA肾病)，特发性IgA肾病，线性IgA皮肤病，原发性胆汁性肝硬化，肺硬变，自身免疫性肠病综合征，乳糜泻，腹部疾病，口炎性腹泻(麸质肠病)，顽固性口炎性腹泻，特发性口炎性腹泻，冷球蛋白血症、肌萎缩侧索硬化(ALS)(卢格里克氏(Lou Gehrig)病)，冠状动脉病，自身免疫性耳病诸如自身免疫性内耳病(AIED)、自身免疫性听觉丧失，视性眼阵挛肌阵挛综合征(OMS)， 多软骨炎诸如顽固性或复发性多软骨炎，肺泡蛋白沉着症，淀粉样变，巩膜炎，非癌性淋巴细胞增多，原发性淋巴细胞增多包括单克隆B细胞淋巴细胞增多(例如良性单克隆丙种球蛋白病和性质未确定的单克隆丙种球蛋白病(MGUS))，周围神经病，瘤外综合征，通道病诸如癫痫、偏头痛、心率失常、肌肉病症、失聪、失明、周期性瘫痪和CNS的通道病，孤独症，炎性肌病，局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)，内分泌性眼病，葡萄膜视网膜炎，脉络膜视网膜炎，自身免疫性肝脏病学病症，纤维肌痛，多发性内分泌衰竭，施密特氏(Schmidt)综合征， 肾上腺炎，胃萎缩，早老性痴呆，脱髓鞘病诸如自身免疫性脱髓鞘病和慢性炎性脱髓鞘性多神经病，糖尿病肾病，德雷斯勒氏(Dressier)综合征，斑秃，CREST综合征(钙质沉着症、 雷诺氏(Raynaud)现象、食道运动功能障碍、指端硬化和毛细管扩张)，男性和女性自身免疫性不孕不育，混合性结缔组织病，恰加斯氏(Chagas)病，风湿热，习惯性流产，农民肺，多形红斑，心脏切开术后综合征，柯兴氏(Cushing)综合征，养鸟者肺，变应性肉芽肿性血管炎，良性淋巴细胞性血管炎，阿尔波特氏(Alport)综合征，肺泡炎诸如变应性肺泡炎和纤维化肺泡炎，间质性肺病，输血反应，麻风，痕疾，利什曼病，锥虫病(kypanosomiasis),血吸虫病，蛔虫病，曲霉病，Sampter氏综合征,卡普兰氏(Caplan)综合征,登革,心内膜炎,心内膜心肌纤维化，弥漫性肺间质纤维化，间质性肺纤维化，肺纤维化，特发性肺纤维化，囊性纤维化，眼内炎，持久隆起性红斑(erythema elevatum et diutinum),胎儿成红细胞增多症， 嗜曙红细胞性筋膜炎(faciitis)、舒尔曼氏(Shulman)综合征,费尔提氏(Felty)综合征, flariasis,睫状体炎诸如慢性睫状体炎、异时性睫状体炎、虹膜睫状体炎(急性或慢性)或Fuch氏睫状体炎，亨诺-许兰二氏(Henoch-Schonlein)紫癜，人免疫缺陷病毒(HIV) 感染，艾柯病毒感染，心肌病，阿尔茨海默氏(Alzheimer)病，细小病毒感染，风疹病毒感染，种痘后综合征，先天性风疹感染，爱泼斯坦-巴尔(Epstein-Barr)病毒感染、腮腺炎， 埃文斯(Evans)综合征，自身免疫性性腺衰竭，西登哈姆氏(Sydenham)舞蹈病，链球菌后肾炎，闭塞性血栓血管炎(thromboangitis ubiterans),甲状腺毒症,脊髓痨,脉络膜炎，巨细胞性多肌痛，内分泌性眼病，慢性超敏感性肺炎，干燥性角膜结膜炎，流行性角膜结膜炎， 特发性肾炎综合征，微小病变肾病，良性家族性和缺血-再灌注损伤，视网膜自身免疫，关节炎症，支气管炎，慢性阻塞性气道疾病，硅沉着病，口疮，口疮性口炎，动脉硬化性病症，无精子发生(aspermiogenese),自身免疫性溶血,伯克氏(Boeck)病,冷球蛋白血症,杜普伊特伦氏(Dupuytren)挛缩，晶体过敏性眼内炎(endophthalmia phacoanaphylactica),变应性小肠炎(enteritis allergica),麻风节结性红斑,特发性面瘫，慢性疲乏综合征，风湿热(febris rheumatica),哈-里二氏(Hamman-Rich)病，感觉神经性听觉丧失，阵发性血红蛋白尿(haemoglobinuria paroxysmatica),性腺功能减退,局限性回肠炎(ileitis regionalis),白细胞减少症,传染性单核细胞增多症,横贯性(traverse)脊髓炎,原发性特发性粘液水肿，肾病，交感性眼炎(ophthalmia symphatica),肉芽肿性睾丸炎(orchitis granulomatosa),胰腺炎，急性多神经根炎，坏疽性脓皮症，奎尔万氏(Quervain)甲状腺炎，获得性脾萎缩，由于抗精虫抗体的不育症，非恶性胸腺瘤，白癜风，SCID和爱泼斯坦-巴尔(Epstein-Barr)病毒相关疾病，获得性免疫缺陷综合征(AIDS)，寄生虫病诸如利什曼虫，中毒性休克综合征，食物中毒，涉及T细胞浸润的疾患，白细胞粘附缺陷，与细胞因子和T-淋巴细胞介导的急性和迟发性超敏感性有关的免疫应答，涉及白细胞渗出的疾病，多器官损伤综合征，抗原-抗体复合物介导的疾病，抗肾小球基底膜病，变应性神经炎，自身免疫性多内分泌病，卵巢炎，原发性粘液水肿，自身免疫性萎缩性胃炎，交感性眼炎，风湿病，混合性结缔组织病，肾病综合征，胰岛炎，多内分泌衰竭，周围神经病，自身免疫性多腺性综合征I型，成人期发作的特发性甲状旁腺功能减退(AOIH)，全秃，扩张型心肌病，获得性大疱性表皮松解(epidermolisis bullosa acquisita, EBA),血色素沉着,心肌炎，肾病综合征，原发性硬化性胆管炎，化脓性或非化脓性鼻窦炎，急性或慢性鼻窦炎，筛窦炎，额窦炎，上颌窦炎或蝶窦炎，嗜曙红细胞相关病症诸如嗜曙红细胞增多症、肺嗜曙红细胞增多性浸润、嗜曙红细胞增多-肌痛综合征、吕弗勒氏(Loffler)综合征、慢性嗜曙红细胞性肺炎、热带肺嗜曙红细胞增多、支气管肺曲霉病、曲霉肿、或含有嗜曙红细胞的肉芽肿，过敏反应，血清阴性脊椎关节炎病，多内分泌自身免疫病，硬化性胆管炎，巩膜、巩膜外层、慢性粘膜皮肤假丝酵母病，布鲁顿氏(Bruton)综合征，婴儿期一过性低丙种球蛋白血症，威斯科特-奥尔德里齐(Wiskott-Aldrich)综合征，共济失调性毛细管扩张，与以下各项有关的自身免疫性病症胶原病、风湿病、神经病学疾病、淋巴结炎、缺血再灌注紊乱、血压应答降低 (reduction in blood pressure response)、血管功能障碍、毛细管扩张(antgiectasis)、 组织损伤、心血管缺血、痛觉过敏、脑缺血和伴随血管化的疾病，变应性超敏感性病症，肾小球肾炎病，再灌注损伤，心肌或其它组织的再灌注损伤，具有急性炎性成分的皮肤病，急性化脓性脑膜炎或其它中枢神经系统炎性病症，眼和眶炎性病症，粒细胞输血相关综合征，细胞因子诱发的中毒，嗜眠发作(narcolepsy)，急性重度炎症，慢性顽固性炎症，肾盂炎，肺硬变，糖尿病性视网膜病，糖尿病性大动脉病症，动脉内增生，消化性溃疡，心瓣炎,和子宫内膜异位症。“良性过度增殖紊乱”意思是与细胞增殖有关并由医学团体成员识别为异常的病人的状况。异常状态以某特性的水平为特征，所述特性的水平在统计学上不同于未患所述紊乱的生物中观测到的水平。细胞增殖指通过细胞的倍增而生长或扩展，并且包括细胞分裂。细胞增殖的速率可以通过统计给定单位时间内产生的细胞数目来测量。良性过度增殖紊乱的例子包括银屑病和息肉(polyps)。“呼吸道疾病”涉及呼吸系统，包括慢性支气管炎、哮喘包括急性哮喘和变应性哮喘、囊性纤维化、支气管扩张、过敏性或其它鼻炎或窦炎、α I-抗胰蛋白酶缺乏、咳嗽、肺气肿、肺纤维化或高反应性气管(hyper-reactive airway)疾病、慢性阻塞性肺病、和慢性阻塞性肺紊乱。“银屑病”指以局限性、离散的和汇合的、微红、银屑斑丘疹的出疹为特征的病症。银屑病病变通常主要发生在肘、膝盖、头皮、和躯干上，显微镜下显示特征性角化不全 (parakerotosis)和表皮突(rete ridges)的延长。所述术语包括多种形式的银屑病,包括所述疾病的红皮、脓疱、中度-严重和顽固形式。“子宫内膜异位”指子宫内膜组织的异位发生，常常形成包含改变的血液的囊肿。本文中术语“血管疾病或紊乱”指影响血管系统包括心血管系统的多种疾病或紊乱。这些疾病的例子包括动脉硬化、血管再阻塞、动脉粥样硬化、术后血管狭窄、再狭窄、血管闭塞或颈动脉阻塞性疾病、冠状动脉病、心绞痛、小血管疾病、高胆固醇血症、高血压、和涉及血管上皮细胞异常增殖或功能的病症。术语"狭窄"指使体内孔道(例如，导管(duct)或管道(canal))狭窄或缢缩。术语"血管狭窄"指血管闭塞或狭窄。血管狭窄通常由脂肪沉积(如在动脉粥样硬化的例子)或血管平滑肌细胞和内皮细胞的过度迁移和增殖引起。动脉对狭窄尤其敏感。本文所用术语“狭窄”特别包括初始狭窄和再狭窄。术语"再狭窄"指初始狭窄治疗有明显成功后狭窄的反复。例如，血管狭窄上下文中的“再狭窄”指其已被明显成功地治疗后血管狭窄的再发，例如通过以血管成形术(例如经皮冠状动脉腔内成形术(percutaneous transluminal coronary angioplasty)、定向冠状动脉经皮腔内斑块旋切术(direction coronary atherectomy)或支架(stent)等等去除脂肪沉积。再狭窄中其中一种起作用的因素是内膜增生。术语"内膜增生(intimal hyperplasia)",可与"新生内膜增生(neointimal hyperplasia)"和"新生内膜形成 (neointima formation)"互换使用，指血管、内膜内部大部分层加厚,其为血管平滑肌细胞和内皮细胞过度增殖和迁移的结果。再狭窄期间发生的许多变化通常一起称为"血管壁改型(remodeling)"。术语"气囊血管成形术(balloon angioplasty)"和"经皮冠状动脉腔内成形术(percutaneous transluminal coronary angioplasty) " (PTCA)通常可互换使用，指非-外科手术的基于导管的治疗以从冠状动脉去除斑块(plaque)。狭窄或再狭窄通常导致高血压，其是血流阻力增加的结果。术语"高血压"指异常高的血压，即超过正常范围的上限值。“息肉”指一团组织从正常表面水平向外或向上凸起或突出，由此从相对宽的基底或纤细的茎生长的肉眼可见为半球体、球形、或不规则隆起样(moundlike)结构。例子包括结肠、直肠和鼻息肉。“纤维腺瘤”指源于腺上皮的良性瘤，其中有增殖性成纤维细胞和结缔组织成分的明显基质(conspicuous stroma)。这通常发生于乳腺组织。“哮喘”指导致呼吸困难的病症。支气管哮喘指其中存在普遍性气管狭窄的肺部病症，其可能是由于平滑肌收缩(痉挛)、粘膜水肿、或支气管和细支气管管腔中的粘液而致。“支气管炎”指支气管粘膜炎症。对于本文的目的，“管形瓶”指保存治疗剂的容器。管形瓶可以用能够用注射器穿透的塞子密封。通常，管形瓶由玻璃材料构成。管形瓶中的治疗剂可以处于多种状态包括液体、冻干的、冷冻的状态等等。术语“包装插页”指习惯上包括在治疗剂商业包装中的说明书，其包含有关适应症、用法、用量、给药方式、禁忌和/或涉及这些治疗产品使用的警告的信息。II.抗体的生产以下涉及生产根据本发明使用的HER抗体的示例性技术。用于生产抗体的HER抗原可以是例如可溶形式的HER胞外结构域或其包含所需表位的部分。或者，在其细胞表面表达HER的细胞(例如经转化过表达HER2的NIH-3T3细胞；或癌细胞系如SK-BR-3细胞， 参见Stancovski et al. PNAS (USA) 88 :8691-8695 (1991))可用于生产抗体。用于生产抗体的其它形式的HER受体对本领域技术人员来说是显而易见的。⑴多克隆抗体多克隆抗体优选在动物中通过多次皮下(SC)或腹膜内(ip)注射相关抗原和佐剂制备。将有关抗原偶联于对所要免疫的物种而言具有免疫原性的蛋白质，例如匙孔血蓝蛋白、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白、或大豆胰蛋白酶抑制剂上可能是有用的，所述交联使用双功能或衍生化试剂进行，例如，马来酰亚胺苯甲酰磺基琥珀酰亚胺酯(通过半胱氨酸残基交联)、N-羟基琥珀酰亚胺(通过赖氨酸残基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl2、或R1N = C = NR，其中R和R1是不同的烷基。用抗原、免疫原性偶联物、或通过将例如100 μ g或5 μ g蛋白质或偶联物(分别用于兔子或小鼠)与3体积的弗氏完全佐剂组合得到衍生物并将所述溶液皮内注射于多个部位而免疫动物。一个月后以弗氏完全佐剂中原始量1/5至1/10的肽或偶联物在多个部位为所述动物皮下注射以加强免疫。7至14天后对动物放血，测定血清的抗体滴度。对动物加强免疫直至滴度稳定在高水平。优选用相同抗原的偶联物为动物加强免疫，但所述抗原偶联于不同的蛋白质和/或通过不同的交联剂交联。偶联物也可以在重组细胞培养物中作为蛋白质融合物制备。同样，凝集化试剂(aggregating agent)如明帆适合用于增强免疫应答。(ii)单克隆抗体本领域可利用多种制备单克隆抗体的方法。例如，单克隆抗体可以用杂交瘤方法制备，杂交瘤方法由Kohler et al.，Nature 256:495(1975)首次描述，或者可以通过重组 DNA方法(美国专利4，816，567)制备。在杂交瘤方法中，如本文以上所述免疫小鼠或其它适当的宿主动物如仓鼠，以激发产生或能够产生抗体的淋巴细胞，所述抗体将特异地结合用于免疫的蛋白质。或者， 可以体外免疫淋巴细胞。然后用适当的融合剂如聚乙二醇将淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，以形成杂交瘤细胞(Goding, Monoclonal Antibodies !Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press,1986))。接种如此制备的杂交瘤细胞并将其培养于适当的培养基中，所述培养基优选包含一种或多种抑制未融合的亲本骨髓瘤细胞生长或存活的物质。例如，如果亲本骨髓瘤细胞缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HGPRT或HPRT)，用于所述杂交瘤的培养基典型地将包括次黄嘌呤、氨基蝶呤、和胸苷(HAT培养基)，这些物质阻止HGPRT-缺陷细胞的生长。优选的骨髓瘤细胞是那些有效融合、支持所选择的抗体生产细胞稳定高水平地生产抗体、并对培养基如HAT培养基敏感的骨髓瘤细胞。其中，优选的骨髓瘤细胞系是鼠骨髓瘤细胞系，如源于M0PC-21和MPC-Il小鼠肿瘤的鼠骨髓瘤细胞系，其可由Salk Institute Cell Distribution Center, San Diego, California USA 获得，以及 SP-2 或 X63_Ag8_653 细胞，其可由美国典型培养物保藏中心，Rockville, Maryland USA获得。也已描述了人骨髓瘤和小鼠-人杂交瘤细胞系用于人单克隆抗体的生产(Kozbor，J. Immunol. , 133 3001(1984)；和 Brodeur et al. , Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp.51-63(Marcel Dekker, Inc., New York,1987))。测试其中培养有杂交瘤细胞的培养基，用于针对所述抗原的单克隆抗体的生产。 优选通过免疫沉淀法或者通过体外结合测试如放射免疫测定(RIA)或酶联免疫吸附测试 (ELISA)测定由杂交瘤细胞生产的单克隆抗体的结合特异性。例如可以通过Munsonet al. ,Anal. Biochem. , 107 :220(1980)的 Scatchard分析测定单克隆抗体的结合亲合力。鉴定了生产具有所需特异性、亲合力、和/或活性的抗体的杂交瘤细胞之后，可以通过有限稀释法亚克隆所述克隆，并以标准方法培养(Goding, Monoclonal Antibodies Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986))。用于该目的的合适的培养基包括例如D-MEM或者RPMI-1640培养基。另外，杂交瘤细胞可以作为动物中的腹水肿瘤体内培养。由所述亚克隆分泌的单克隆抗体适于以传统抗体纯化程序，例如蛋白质 A-Sephar ο s e、轻磷灰石层析、凝胶电泳、透析、或亲合层析从培养基、腹水流体、或血清分离。利用常规程序(例如，通过使用能够特异地结合编码鼠抗体重链和轻链的寡核苷酸探针)可以很容易地分离编码单克隆抗体的DNA并测序。杂交瘤细胞用作这种DNA的优选来源。一旦分离了 DNA，可以将其置于表达载体中，然后将其转染到原本不生产抗体蛋白质的宿主细胞如大肠杆菌细胞、猿猴COS细胞、中华仓鼠卵巢(CHO)细胞、或骨髓瘤细胞中， 以获得单克隆抗体在重组宿主细胞中的合成。有关编码抗体的DNA在细菌中重组表达的综述文献包括 Skerra et al. , Curr. Opinion in Immunol. , 5 :256-262 (1993)和 Pliickthun, Tmmunol. Revs.，130 :151-188(1992)。在另一实施方案中，可以从使用McCaffertyet al. ,Nature, 348 :552-554(1990) 中描述的技术得到的抗体噬菌体文库中分离单克隆抗体或抗体片段。Clackson et al.， Nature, 352 :624-628(1991)和 Marks et al.，J. Mol. Biol.，222 :581-597(1991)分别描述了用噬菌体文库分离鼠和人抗体。后来的出版物描述了高亲合力(nM范围)人抗体的生产，其通过链改组(Marks et al.，Bio/Technology，10 :779-783 (1992))、以及作为构建极大卩遼菌体文库策略的组合感染和体内重组(Waterhouse et al. , Nuc. Acids. Res. ,21 2265-2266(1993))进行。因此，这些技术是分离单克隆抗体的传统单克隆抗体杂交瘤技术的可行性替代技术。也可以修饰DNA，例如通过用人重链和轻链恒定区取代同源鼠序列(美国专利 4，816，567 ;和 Morrison, et al.，Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81 :6851 (1984))，或者通过将非免疫球蛋白多肽的编码序列全部或部分共价连接到免疫球蛋白编码序列来修饰。典型地，这样的非免疫球蛋白多肽被抗体的恒定区所取代，或者被抗体的一个抗原结合部位的可变区所取代，形成嵌合二价抗体，其包括具有抗原特异性的一个抗原结合部位和具有不同抗原特异性的另一个抗原结合部位。(iii)人源化抗体本领域已经描述了人源化非人抗体的方法。优选人源化抗体具有从非人来源导入的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基通常称为"引入的"残基，其典型地从" 引入的"可变区获取。人源化基本上可以按照Winter及其同事(Jones et al. , Nature, 321 :522-525(1986) ；Riechmann et al.，Nature, 332 :323-327(1988) ；Verhoeyen et al.， Science, 239 :1534-1536 (1988))的方法实施，通过用高变区序列取代人抗体的相应序列而完成。因此，这样的"人源化"抗体是嵌合抗体(美国专利4，816，567)，其中基本上小于完整的人可变区已经被来自非人物种的相应序列所取代。在实践中，人源化抗体典型地为人抗体，在该人抗体中，一些高变区残基可能还有一些FR残基被来自啮齿类动物抗体的类似位点所取代。选择用于制备人源化抗体的人轻链和重链可变区对于减少抗原性是非常重要的。按照所谓的"最佳适应(best-fit)"方法，针对已知的人可变区序列完整文库筛选啮齿类动物抗体的可变区序列。然后接受与啮齿类动物的序列最接近的人序列作为人源化抗体的人框架区(FR) (Sims et al.，]. Immunol. , 151 :2296(1993) ；Chothia et al.， J. Mol. Biol. ,196 :901 (1987))。另一种方法使用特定的框架区，所述框架区来源于特定轻链或重链亚组的所有人抗体的共有序列。相同框架可用于几种不同的人源化抗体(Carter etal. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89 :4285 (1992) ；Presta et al. , J. Immunol. , 151 : 2623(1993))。人源化的抗体保持对抗原的高度亲合力以及其它的有利生物学特性是更为重要的。为了实现此目标，按照优选的方法，用亲本序列和人源化序列的三维模型分析亲本序列和多种概念性人源化产物，通过该分析方法制备人源化抗体。三维免疫球蛋白模型一般是可以得到的，并为本领域技术人员所熟知。说明并展示所选择的候选免疫球蛋白序列可能的三维构象结构的计算机程序是可以获得的。对此展示的观察允许分析残基在候选免疫球蛋白序列行使功能中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。 以这种方法，可以从受者和引入的序列选择并组合FR残基以便获得所需的抗体特性，如增加对目标抗原的亲合力。通常，高变区残基直接地、最本质地影响抗原结合。W001/00245描述了结合HER2并阻断HER受体的配体活化的示例性人源化HER2抗体的生产。本文中特别感兴趣的人源化抗体基本上同鼠单克隆抗体2C4(或其Fab片段) 一样有效地阻断EGF、TGF- α和/或HRG介导的MAPK活化和/或基本上如鼠单克隆抗体 2C4(或其Fab片段)一样有效地结合HER2。本文中人源化抗体可以例如包含掺入到人可变重链结构域的非人高变区残基，并且可以进一步包含选自下组位点的框架区(FR)取代 运用 Kabat et al. , Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD(1991)中提供的可变区编号系统的69H、71H和73H。在一个实施方案中，人源化抗体在位点69H、71H和73H中的两个或所有位点包含FR取代。 本文中感兴趣的示例性人源化抗体包含可变重链结构域互补决定残基 GFTFTDYTMX，其中 X优选为 D 或 S(SEQ ID NO 7) ；DVNPNSGGSIYNQRFKG(SEQ ID NO 8);和 / 或NLGPSFYFDY(SEQ ID NO :9)，任选包含那些⑶R残基的氨基酸修饰，例如其中所述修饰基本上保持或改善抗体的亲合力。例如，感兴趣的抗体变体在上述可变重链CDR序列中可以具有约一个到约七个或约五个氨基酸取代。这些抗体变体可以通过亲合力成熟制备，例如如下所述的。最优选的人源化抗体包含SEQ ID NO :4中的可变重链结构域氨基酸序列。例如除了前段中的那些可变重链结构域⑶R残基之外，人源化抗体还可以包含可变轻链结构域互补决定残基KASQDVSIGVA(SEQ ID NO :10) JASYX1X2X3,其中X1优选为R或 L, X2 优选为 Y 或 E，X3 优选为 T 或 S (SEQ ID NO 11);和 / 或 QQYYIYPYT (SEQ ID NO 12)。 这些人源化抗体任选包含上述⑶R残基的氨基酸修饰，例如其中所述修饰基本上保持或改善所述抗体的亲合力。例如，感兴趣的抗体变体在上述可变轻链CDR序列中可以具有约一个到约七个或约五个氨基酸取代。这些抗体变体可以通过亲合力成熟制备，例如如下所述的。最优选的人源化抗体包含SEQ ID NO :3中的可变轻链结构域氨基酸序列。本申请还预期结合HER2并阻断HER受体的配体活化的亲合力成熟的抗体。亲本抗体可以是人抗体或人源化抗体，例如分别包含SEQ ID Nos. 3和4的可变轻链和/或重链序列的抗体(即变体574)。所述亲合力成熟抗体优选以高于鼠2C4或变体574的亲合力的亲合力结合HER2受体(例如利用HER2-胞外结构域(ECD)ELISA评估时从约二或约四倍到约100倍或约1000倍提高的亲合力)。用于取代的示例性可变区重链⑶R残基包括H28、 H30、H34、H35、H64、H96、H99、或它们中两个或多个(例如这些残基中的二个、三个、四个、 五个、六个、或七个)的组合。用于改变的可变区轻链CDR残基的例子包括L28、L50、L53、 L56、L91、L92、L93、L94、L96、L97或它们中两个或多个(例如这些残基中的两个至三个、四个、五个或直至约十个)的组合。可以预期多种形式的人源化抗体或亲合力成熟抗体。例如，人源化抗体或亲合力成熟抗体可以是抗体片段如Fab，其任选与一种或多种细胞毒剂偶联以产生免疫偶联物。或者，所述人源化抗体或亲合力成熟抗体可以是完整抗体，如完整的IgGl抗体。优选的完整 IgGl抗体包含SEQ ID NO 13中的轻链序列和SEQ ID NO 14中的重链序列。(iv)人抗体作为人源化的替代方案，可以生产人抗体。例如，现在生产转基因动物(例如， 小鼠)是可能的，在没有内源免疫球蛋白生产的情况下，所述转基因动物在免疫时能够生产全套人抗体。例如，已经描述了嵌合的生殖细胞系突变小鼠中纯合删除抗体重链连接区 (Jh)基因导致内源抗体生产的完全抑制。在这种生殖细胞系突变小鼠中，一旦抗原攻击， 人生殖细胞系免疫球蛋白基因阵列的转移将导致人抗体的生产。参见,例如，Jakobovits et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA,90 2551 (1993) ；Jakobovits et al. , Nature,362 255-258 (1993) ；Bruggermann et al. , Year in Immuno. ,7 :33(1993);和美国专利5，591，669,5, 589，369 和 5，545，807。或者，噬菌体展示技术(McCaffertyet al, Nature 348 :552-553(1990))可用于从来自非免疫化供体的免疫球蛋白可变(V)区全套基因体外生产人抗体和抗体片段。依照该技术，将抗体V区基因读框内(in-frame)克隆到丝状噬菌体如M13或fd的主要或次要外壳蛋白基因中，在该噬菌体颗粒表面上将其作为功能性抗体片段展示。因为丝状颗粒包含噬菌体基因组的单链DNA拷贝，所以基于抗体功能特性的选择也导致编码显示那些特性抗体的基因的选择。因此，噬菌体模拟B细胞的一些特性。可以以多种方式完成噬菌体展不；其综述参见，例如，Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J. , Current Opinion in Structural Biology 3:564-571(1993)。V基因片段的几种来源可用于卩遼菌体展示。 Clackson et al.，Nature, 352 :624-628(1991)从源于已免疫过的小鼠脾的小型随机组合文库中分离了多个批次的抗恶唑酮抗体。可以从未免疫化人供体构建全套V基因，可以基本上按照 Marks et al.，J. Mol. Biol. 222 :581-597 (1991)，或 Griffith et al.，EMBO J. 12 :725-734(1993)所述技术分离针对多个抗原(包括自身抗原)批次的抗体。也可参见美国专利 5，565，332 和 5，573，905。如以上所讨论的，也可以通过体外活化的B细胞生产人抗体(参见美国专利 5，567，610 和 5，229，275)。人HER2抗体描述于公布于1998年6月30日的美国专利5，772，997和公开于1997 年 I 月 3 日的 WO 97/00271。(V)抗体片段已经开发了多种生产包含一个或多个抗原结合区的抗体片段的技术。传统上， 这些片段通过完整抗体的蛋白水解消化而衍生(参见，例如，Morimoto et al. , Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117(1992)；和 Brennan et al., Science，229 :81 (1985))。然而，现在可以通过重组宿主细胞直接生产这些片段。例如， 可以从以上讨论的抗体噬菌体文库中分离抗体片段。或者，可以直接从大肠杆菌回收 Fab' -SH片段并进行化学偶联以形成F(ab' )2片段(Carter et al. Bio/Technology 10: 163-167 (1992))。根据另一种方法，可以直接从重组宿主细胞培养物中分离F(ab' )2片段。 其它生产抗体片段的技术对于熟练技术人员来说将是显而易见的。在其它实施方案中，所选择的抗体是单链Fv片段(scFv)。参见WO 93/16185 ;美国专利5，571，894 ;以及美国专利5，587，458。例如，抗体片段也可以是“线性抗体”，例如美国专利5，641，870中所述。这种线性抗体片段可以是单特异性的或双特异性的。(vi)双特异性抗体双特异性抗体是具有针对至少两个不同表位的结合特异性的抗体。示例性双特异性抗体可以结合HER2蛋白的两个不同表位。其它的这种抗体可以将HER2结合部位与EGFR、 HER3和/或HER4的结合部位组合。或者，HER2臂可以与结合白细胞上的激发分子如T细胞受体分子(例如 0)2 或 CD3)、或 IgG 的 Fe 受体(Fe y R)如 Fe y RI (CD64)、Fe Y RII (CD32) 和Fe Y RIII (⑶16)的臂组合，以使细胞的防御机制集中于HER2-表达细胞。双特异性抗体也可用于将细胞毒性试剂定位于HER2表达细胞。这些抗体拥有HER2-结合臂和结合细胞毒性剂(例如皂草素、抗干扰素-α、长春花生物碱、蓖麻毒素A链、氨甲蝶呤、或放射性同位素半抗原)的臂。可以将双特异性抗体制备为全长抗体或抗体片段(例如F(ab' )2双特异性抗体)。WO 96/16673描述了双特异性HER2/Fc y RIII抗体，美国专利5，837，234披露了双特异性HER2/Fc Y RI抗体IDMl (Osidem)。双特异性HER2/Fc α抗体如W098/02463中所示。 美国专利5，821，337教导了双特异性HER2/CD3抗体。MDX-210是双特异性HER2_Fc y RIII Ab。制备双特异性抗体的方法是本领域已知的。全长双特异性抗体的传统生产基于两个免疫球蛋白重链-轻链对的共表达，其中所述两条链具有不同的特异性(Millstein et al.，Nature, 305 :537-539 (1983))。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机分配，这些杂交瘤 (四重杂交瘤(quadromas))生产10种可能的不同抗体分子混合物,其中只有一种具有正确的双特异性结构。正确分子的纯化通常通过亲合层析步骤进行，相当繁琐且产物产率低。WO 93/08829、和 Traunecker et al.，EMBO J.，10 :3655-3659 (1991)中公开了类似的方法。依据不同方法将具有所需结合特异性的抗体可变区(抗体-抗原结合部位)融合于免疫球蛋白恒定区序列。所述融合优选与免疫球蛋白重链恒定区融合，所述免疫球蛋白重链恒定区至少包括部分铰链区、CH2区和CH3区部分。优选在至少一种融合物中具有第一个重链恒定区(CHl)，其包含轻链结合必需的位点。将编码免疫球蛋白重链融合物和，如果需要的话，免疫球蛋白轻链的DNAs插入到单独的表达载体中，共转染到合适的宿主生物中。这在实施方案中为调整三种多肽片段的相互比例提供了很大的弹性，此时构建体中使用的三种多肽链的不同比率提供了最佳产率。然而，将两种或所有三种多肽链的编码序列插入到一种表达载体中也是可能的，此时至少两种多肽链以相同比率表达导致高的产率， 或者此时所述比率没有特定意义。在此方法的优选实施方案中，所述双特异性抗体由具有一个臂中的第一结合特异性的杂合免疫球蛋白重链和另一臂中的杂合免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)组成。发现该不对称结构促进所需双特异性化合物从不需要的免疫球蛋白链组合中分离，这样只以双特异性分子的一半存在的免疫球蛋白轻链提供了很便利的分离方法。此方法公开于WO 94/04690ο生产双特异性抗体的更多详情参见例如,Suresh et al. ,Methods in Enzymology,121 :210 (1986)。依据美国专利5，731，168中描述的另一种方法，工程化一对抗体分子之间的接触面(interface)，以最大化从重组细胞培养物中回收的异源二聚体的百分比。优选的接触面至少包括抗体恒定区的一部分CH3区。在该方法中，来自第一抗体分子接触面的一个或多个小氨基酸侧链被更大的侧链(例如酪氨酸或色氨酸)所替换。通过用较小的氨基酸侧链 (例如丙氨酸或苏氨酸)替换大的氨基酸侧链，在第二抗体分子的接触面上形成了与大型侧链大小相同或相似的补偿"腔"。这提供了增加异二聚体产率的机制，所述产率超过其它不需要的终产物如同二聚体的产率。双特异性抗体包括交联的或"异源偶联的"抗体。例如，可以将异源偶联物中的抗体之一偶联于抗生物素蛋白，另一个偶联于生物素。已建议用这些抗体将免疫系统细胞引导到不需要的细胞(美国专利4，676，980)，用于HIV感染的治疗(W0 91/00360、WO 92/200373 JPEP 03089)。可以用任何适当的交联方法制备异源偶联抗体。合适的交联剂是本领域所熟知的，其公开于美国专利4，676，980，还有许多交联技术。文献中也已描述了从抗体片段生产双特异性抗体的技术。例如，可以用化学键制备双特异性抗体。Brennan et al. , Science, 229 81 (1985)描述了这样的方法,在该方法中通过完整抗体的蛋白水解生产F(ab' )2片段。在二巯基化物络合剂亚砷酸钠的存在下还原这些片段，以稳定附近的二巯基并防止分子间二硫化物的形成。然后将所得到的Fab' 片段转变为三硝基苯磺酸(TNB)衍生物。然后通过巯基乙胺还原，将其中一种Fab' -TNB 衍生物再转变为Fab'-硫醇，并与等摩尔量的另一种Fab' -TNB衍生物混合，形成双特异性抗体。所生产的双特异性抗体可用作酶选择性固定的试剂。最近的发展已经方便了 Fab' -SH片段从大肠杆菌的回收，可以化学偶联所述片段以形成双特异性抗体。Shalaby et al. ,J. Exp. Med.，175 =217-225(1992)描述了完全人源化双特异性抗体F(ab' )2分子的生产。将从大肠杆菌分别分泌的每种Fab'片段在体外直接化学偶合，形成双特异性抗体。如此形成的双特异性抗体能够结合过表达HER2受体的细胞和正常人T细胞，还激发人细胞毒性淋巴细胞针对人乳腺肿瘤目标的裂解活性。已经描述了多种直接从重组细胞培养物中制备分离双特异性抗体片段的技术。 例如，已用亮氨酸拉链生产了双特异性抗体。Kostelny et al. , J. Immunol. , 148 (5) 1547-1553(1992)。通过基因融合将来自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉链肽连接于两种不同抗体的Fab'部分。在绞链区还原抗体同二聚体以形成单体，然后再将其氧化，形成抗体异二聚体。该方法还可用于抗体同二聚体的生产。Hollinger et al. ,Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90 =6444-6448(1993)描述的"双功能抗体"技术提供了制备双特异性抗体片段的替代机制。所述片段包含通过连接序列连接到轻链可变区的重链可变区(Vh)，连接序列非常短，不允许两个结构域在同一条链上配对。因此，迫使一个片段的Vh和'结构域与另一片段的互补'和Vh结构域配对，由此形成两个抗原结合部位。还报导了利用单链 Fv(sFv) 二聚体制备双特异性抗体片段的另一种策略。参见Gruber et al. , J. Immunol., 152 :5368(1994)。可以预期超过二价的抗体。例如，可以制备三特异性抗体。Tutt et al. J. Immunol. 147 :60(1991)。(vii)其它氨基酸序列修饰可以预期本文所述抗体的氨基酸序列修饰。例如，可能希望改善抗体的结合亲合力和/或其它生物学特性。通过向抗体核酸引入适当的核苷酸改变或通过肽合成制备抗体的氨基酸序列变体。这种修饰包括，例如，从所述抗体的氨基酸序列内删除残基、和/或往抗体的氨基酸序列内插入残基和/或取代抗体氨基酸序列内的残基。实施删除、插入、和取代的任意组合以得到最终的构建体，以使所述最终构建体拥有所需的特征。氨基酸变化也可能改变抗体的翻译后进程，例如改变糖基化位点的编号或位置。用于鉴定抗体的特定残基或区域的方法称为"丙氨酸-扫描诱变"，如 Cunningham and Wells Science, 244 :1081-1085 (1989)所述,其中所述的特定残基或区域为优选的诱变部位。此处，鉴定了残基或目标残基组(例如，带电荷的残基如arg、asp、his、 lys、和glu)并用中性的或带负电荷的氨基酸(最优选丙氨酸或聚丙氨酸)取代，以影响氨基酸与抗原的相互作用。然后通过在所述取代位点或者为所述取代位点引入更多的或其它的变体，而优化那些对取代显示出功能敏感性的氨基酸位置。这样，当用于引入氨基酸序列变异的位点预先确定时，突变本身的性质就不必预先确定了。例如，为了分析给定位点突变的性能，在目标密码子或区域进行丙氨酸扫描或随机诱变，根据所需活性筛选所表达的抗体变体。氨基酸序列插入包括从一个残基到包含一百个或更多残基的多肽的氨基和/或羧基末端的融合，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括具有 N-末端蛋氨酰残基的抗体或融合于细胞毒性多肽的抗体。所述抗体分子的其它插入变体包括抗体的N-或C-末端融合于酶(例如对于ADEPT)或多肽，所述酶或多肽提高所述抗体的血清半衰期。另一种类型的变体是氨基酸取代变体。这些变体在抗体分子中至少有一个氨基酸残基被不同的残基所取代。最感兴趣的取代诱变部位包括高变区，但也可预期FR改变。标题为"优选的取代"的表I中显示了保守性取代。如果这些取代导致生物学活性的改变， 那么可以引入表I中命名为"示例性取代"或依照下述的关于氨基酸类别的更多实质性改变，并筛选产物。表I
权利要求
1.治疗癌症的方法，包括以有效治疗所述癌症的量为病人施用一个或多个固定剂量的 HER抗体。
2.权利要求I的方法,其中所述HER抗体是pertuzumab。
3.权利要求I或2的方法，其中所述固定剂量选自大约420mg、大约525mg、大约840mg 和大约1050mg HER抗体。
4.治疗病人癌症的方法，包括为所述病人施用至少一个固定剂量的pertuzumab,其中所述固定剂量选自大约420mg、大约525mg、大约840mg、和大约1050mg的pertuzumab。
5.权利要求4的方法,其中大约每3周为病人施用固定剂量的pertuzumab。
6.权利要求4或权利要求5的方法，其中所述癌症选自卵巢癌、腹膜癌、输卵管癌、转移性乳腺癌(MBC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、前列腺癌、和结肠直肠癌。
7.包括含有固定剂量HER抗体的管形瓶的制品，其中所述固定剂量选自大约420mg、大约525mg、大约840mg和大约1050mg的HER抗体。
8.权利要求7的制品,其中所述HER抗体是pertuzumab。
9.权利要求7或8的制品，其包括两个管形瓶，其中第一个管形瓶含有大约840mg固定剂量的pertuzumab,第二个管形瓶含有大约420mg固定剂量的pertuzumab。
10.权利要求7或8的制品，其包括两个管形瓶，其中第一个管形瓶含有大约1050mg固定剂量的pertuzumab,第二个管形瓶含有大约525mg固定剂量的pertuzumab。
全文摘要
本发明涉及HER抗体的固定剂量给药。本发明涉及HER抗体，如pertuzumab的固定剂量给药。
文档编号A61K39/395GK102580084SQ20121000677
公开日2012年7月18日 申请日期2005年6月15日 优先权日2005年1月21日
发明者勒内.布鲁诺, 卢建丰, 奇.M.恩格, 戴维.E.艾利森 申请人:健泰科生物技术公司