胡芦巴总黄酮有效部位制备及应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了胡芦巴中总黄酮有效部位制备方法及应用。本发明在提取过程中先采用渗漉提取法，提取液经乙酸乙酯脱脂后，用大孔吸附树脂进行纯化，得到含量在60％以上的葫芦巴总黄酮有效部位。药理实验结果表明，该胡芦巴中总黄酮有效部位对糖尿病、高血脂方面的疾病具有明显的治疗作用。
【专利说明】胡芦巴总黄酮有效部位制备及应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药提取及应用领域，特别涉及一种从葫芦巴中提取总黄酮的方法及其总黄酮有效部位的应用。
技术背景
[0002]胡芦巴为豆科植物胡芦巴属胡芦巴(Trigonella foenum-graecum L.)的种子，是一种传统的中药材，被多部中药典籍收录，记载其有“温润阳，逐寒湿。”的作用。胡芦巴种子即是一种中草药又是一种调味剂，在我国、印度、地中海国家都有种植和应用。胡芦巴干燥成熟种子作为常用中药已收入《中华人民共和国药典》。
[0003]胡芦巴的报道较多，其中涉及皂苷、黄酮的提取及药理学应用。中国专利200410070104.6公开了一种从胡芦巴提取物，其包括多糖、总黄酮、皂苷三种有效成分，同时记载了其提取物中总黄酮含量低于15%。中国专利200610066235.6公开了一种胡芦巴提取物，其中记载了一种总黄酮的提取方法，但未提及总黄酮的含量。中国专利200410029927.4公开了一种从胡芦巴中提取黄酮的方法，其中未记载黄酮的含量。中国专利201110375609.3公开了一种通过超声波提取，大孔树脂分离纯化得到黄酮的方法，其总黄酮含量低于30%。
[0004]现有技术文献中报道的从胡芦巴中提取得到的总黄酮含量都低于30%，达不到中药5类的标准。
【发明内容】
[0005]为了解决现有技术的缺点，本发明人提出一种新的从胡芦巴中提取总黄酮的方法，包括以下步骤:
[0006]a、将胡芦巴种子按常规方法粉碎后过二号筛；
[0007]b、将胡芦巴粗粉用醇水溶液渗漉提取；
[0008]C、将渗漉液浓缩至无醇得到浓缩液，浓缩液用其体积1/2~1/5的乙酸乙酯萃取I~3次，以便除去其中所含的脂；
[0009]d、萃取过的浓缩液浓缩至无乙酸乙酯，得液体I ;
[0010]e、液体I经大孔树脂(径高比1: 9~1: 15)纯化，洗脱顺序为:
[0011]2~5个柱体积的水洗脱；
[0012]2~5个柱体积20%~40%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得总黄酮。
[0013]本发明的另一个优选方案是步骤b中所述的醇水为甲醇的水溶液、乙醇的水溶液、丙醇的水溶液、异丙醇的水溶液中的一种或几种的混合，优选乙醇的水溶液。
[0014]本发明先用乙酸乙酯萃取提取液中的脂溶性成分，有利于后续纯化，提高总黄酮有效部位的含量。
[0015]本发明的另一个优选方案是步骤e中所用的大孔树脂优选HPD600型大孔树脂。
[0016]本发明的又一个优选方案是步骤e中所述的径高比优选1: 10。[0017]本发明的又一个优选方案是步骤e中所述的20%~40%醇水洗脱液为甲醇的水溶液、乙醇的水溶液、丙醇的水溶液、异丙醇的水溶液中的一种或几种，进一步优选25%~35%的乙醇水溶液。
[0018]本发明的又一个优选方案是按上述方法所得到的提取物中总黄酮含量在60%以上。
[0019]本发明的目的还在于提供一种含有从胡芦巴中提取得到的总黄酮的药物或食品。
[0020]本发明所述的含有总黄酮的药物具有治疗糖尿病的作用。
[0021]本发明所述的含有总黄酮的食品用于改善糖尿病人的病症。
[0022]本发明所述的胡芦巴提取物与医药上可接受的辅料按常规制剂方法制成口服制剂，优选片剂、胶囊剂。
[0023]胡芦巴提取物中总黄酮含量的测定，胡芦巴当中的黄酮类物质主要为黄酮苷，以荭草素为其标示性成分，通过HPLC法测定。
[0024]HPLC检测条件:用C18柱测定，流动相乙腈:异丙醇:水=8: 4: 88，流动相用磷酸调节PH值等于3.2，检测波长为334nm，理论板数按荭草素计算应不低于3000。
[0025]本发明具有以下优点:提取工艺简单，提取时间短，大孔树脂纯化工艺简单，从胡芦巴中提取得到的总黄酮含量大于60%，符合中药有效部位入药标准。
【具体实施方式】
[0026]实施例1
[0027]本发明葫芦巴总黄酮有效部位的制备:
[0028]称取500克粉碎的葫芦巴，过二号筛，加入渗漉桶中，以60%乙醇浸溃、渗漉，渗漉速度3mL/min，收集IOL渗漉液，浓缩至无醇得浓缩液，用浓缩液体积1/2的乙酸乙酯萃取两次后，浓缩液浓缩至无乙酸乙酯，得液体I。液体I上HPD600大孔树脂(径高比1: 9)，依次用4个柱体积的水，3个柱体积的30 %乙醇洗脱，收集合并30 %的乙醇洗脱液，浓缩、干燥得葫芦巴总黄酮提取物，含总黄酮65%。
[0029]实施例2
[0030]称取500克粉碎的葫芦巴，过二号筛，加入渗漉桶中，以60%乙醇浸溃、渗漉，渗漉速度3mL/min，收集IOL渗漉液，浓缩至无醇得浓缩液，用浓缩液体积1/3的乙酸乙酯萃取一次后，浓缩液浓缩至无乙酸乙酯，得液体I。液体I上HPD600大孔树脂(径高比1: 12)，依次用3个柱体积的水，2个柱体积的40 %乙醇洗脱，收集合并40 %的乙醇洗脱液，浓缩、干燥得葫芦巴总黄酮提取物，含总黄酮70%。
[0031]实施例3
[0032]称取500克粉碎的葫芦巴，过二号筛，加入渗漉桶中，以60%丙醇浸溃、渗漉，渗漉速度3mL/min，收集IOL渗漉液，浓缩至无醇得浓缩液，用浓缩液体积1/5的乙酸乙酯萃取两次后，浓缩液浓缩至无乙酸乙酯，得液体I。液体I上D201大孔树脂(径高比1: 15)，依次用4个柱体积的水，3个柱体积的20 %丙醇洗脱，收集合并20 %的丙醇洗脱液，浓缩、干燥得葫芦巴总黄酮提取物，含总黄酮62%。
[0033]实施例4
[0034]称取500克粉碎的葫芦巴，过二号筛，加入渗漉桶中，以60%乙醇浸溃、渗漉，渗漉速度3mL/min，收集IOL渗漉液，浓缩至无醇得浓缩液，用浓缩液体积1/4的乙酸乙酯萃取三次后，浓缩液浓缩至无乙酸乙酯，得液体I。液体I上NKA-9大孔树脂(径高比1: 10)，依次用5个柱体积的水，5个柱体积的30 %乙醇洗脱，收集合并30 %的乙醇洗脱液，浓缩、干燥得葫芦巴总黄酮提取物，含总黄酮68%。
[0035]实施例5
[0036]片剂制备:从胡芦巴中提取得到的总黄酮提取物180g，羟丙基甲基纤维素160g，微粉硅胶58g，硬脂酸镁2g，混合均匀，过80目筛，干压法制粒，用20目筛整粒，压片。
[0037]实施例6
[0038]胶囊剂制备:胡芦巴中提取的总黄酮提取物200g，加入预胶化淀粉80g，以95%乙醇作为黏合剂，过20目筛制软材，60°C干燥，整粒，干颗粒加入过100目的交联CMC-Nal2g和微粉硅胶3g混匀，测定颗粒中指标成份的含量，装胶囊，制得胶囊剂。
[0039]实施例7
[0040]葫芦巴总黄酮有效部位对糖尿病大鼠的降血糖作用研究实验:
[0041]选体重170~200g的Wistar健康大鼠，雌雄各半。实验组大鼠单次腹腔注射链脲佐菌素50mg/kg(溶于0.lmol/L柠檬酸缓冲液，pH = 4.2)制备糖尿病模型。注射链脲佐菌素3天后检测血糖和尿糖。尿糖> 3+，血糖> 16.7mmol/L列入糖尿病研究对象。对照组同时腹腔注射等体积上述缓冲液。
[0042]实验方法一:将成模的糖尿病大鼠随机分为糖尿病组、阳性对照组和葫芦巴提取物高、中、低剂量组，另设正常对 照组。葫芦巴提取物高、中、低剂量治疗组灌胃给予葫芦巴提取物1.5mL/100g体重(分别相当于葫芦巴提取物400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg体重)。阳性对照药洛汀新灌胃给予15mg/kg体重(1.5mL/100g体重)，对照组合糖尿病组仅灌胃给予1.5mL/100g体重饮用水。每日灌胃I次，共12周。
[0043]实验方法二:将成模的糖尿病大鼠随机分为糖尿病组和葫芦巴提取液治疗组，另设正常对照组。葫芦巴提取液治疗组灌胃给予葫芦巴提取液1.5mL/100g体重(相当于葫芦巴提取物400mg/kg体重)。对照组和糖尿病组仅灌胃给予1.5mL/100g体重饮用水。实验共6周。
[0044]统计学处理:数据结果以X±S表示，组间比较采用方差分析。
[0045]1.葫芦巴提取物对糖尿病大鼠血糖影响的时效关系
[0046]按实验方法一,于给药前及给药后的第3周、4周、6周、8周和12周各检测血糖含量，结果见表1。
[0047]表1葫芦巴提取物对糖尿病大鼠血糖影响的时效关系(f±SD)
[0048]
【权利要求】
1.一种从胡芦巴种子中提取总黄酮有效部位的方法，其特征在于提取包括以下步骤: a、将胡芦巴种子按常规方法粉碎后过二号筛； b、将胡芦巴粗粉用醇水溶液渗漉提取； C、将渗漉液浓缩至无醇得到浓缩液，浓缩液用其体积1/2~1/5的乙酸乙酯萃取I~3次； d、萃取过的浓缩液浓缩至无乙酸乙酯，得液体I; e、液体I经大孔树脂(径高比1: 9~1: 15)纯化，洗脱顺序为: 2~5个柱体积的水洗脱； 2~5个柱体积20%~40%的醇水洗脱，收集醇水洗脱液，浓缩干燥得胡芦巴提取物，其中总黄酮含量在60%以上。
2.根据权利要求1中e步骤所述，其特征在于优选HPD600大孔树脂。
3.根据权利要求1中e步骤所述，其特征还在于优选3~4个柱体积水洗脱。
4.根据权利要求1中e步骤所述，其特征还在于优选3~4个柱体积20%~40 %的醇水洗脱。
5.根据权利要求4所述，其特征在于醇水浓度优选25%~35%。
6.根据权利要求1中`的e步骤所述，其特征在于醇水为甲醇的水溶液、乙醇的水溶液、丙醇的水溶液、异丙醇的水溶液中的一种或几种的混合，优选乙醇的水溶液。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于得到的总黄酮用于制备治疗糖尿病、高血脂的药物。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于得到的总黄酮用于制备改善糖尿病、高血脂的食品。
9.根据权利要求1或7所述，其特征在于从胡芦巴种子中提取得到的总黄酮与药学上可接受的辅料按照常规制剂方法制成口服制剂。
10.根据权利要求9所述，其特征在于口服制剂优选片剂、胶囊剂。
【文档编号】A61P3/06GK103505498SQ201210232186
【公开日】2014年1月15日 申请日期:2012年6月29日 优先权日:2012年6月29日
【发明者】颜克序, 李冠业 申请人:北京星昊医药股份有限公司