专利名称：一种提取蕨麻中总黄酮的方法
技术领域：
本发明属于蕨麻总黄酮提取技术领域，尤其涉及一种提取蕨麻中总黄酮的方法。
背景技术：
蕨麻主要产于青海、西藏、甘南等海拔1700 4300m的高寒地区，学名鹅绒委陵菜，蔷薇科，属多年生匍匐草本植物，它不但含有氨基酸、维生素及微量元素等营养素，而且含有黄酮类等生物活性物质。黄酮类物质具有消除疲劳、保护血管、防止动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗衰老等功能。近年来，人们对黄酮类化合物的抗氧化功能和机理进行了比较深入的研究，证实黄酮类化合物是一种很强的活性氧自由基清除剂，所以黄酮类化合物的研究日益引起了人们的重视。传统提取黄酮的方法主要有:溶剂浸提法、碱提取酸沉淀法等，微波辅助萃取技术，是20世纪80年代兴起的一种新型萃取技术，具有高效快速、选择性好、溶剂用量少、回收率高、重现性好等优点，是目前国内外天然产物提取的研究热点。表面活性剂是一类即使在浓度很低时也能显著降低表(界)面张力的物质。现在有研究者利用表面活性剂的增溶、润湿作用，开展了表面活性剂协同提取天然产物的研究，极大提高了提取率。关于微波萃取提取蕨麻中黄酮类物质的研究报道极少，特别是表面活性剂协同微波萃取的方法未见文献报道。本文旨在研究表面活性剂协同微波萃取蕨麻中总黄酮的工艺条件，以便为蕨麻的利用提供理论依据。
发明内容
本发明提供了一种提取蕨麻中总黄酮的方法，旨在解决现有技术提供的提取蕨麻中总黄酮的方法，工艺过程复杂、提取成本较高，总黄酮的提取率较低的问题。本发明的目的在于提供一种提取蕨麻中总黄酮的方法，该方法包括步骤:步骤一，取适量蕨麻，干燥后进行粉碎处理，过40目筛；步骤二，称取适量蕨麻粉，加入一定质量分数的表面活性剂水溶液，在80°C水浴锅中预煮10分钟；步骤三，微波处理后在80°C水浴锅中放置30分钟，提取液趁热抽滤，收集液体，减压蒸馏浓缩，并进行定容处理。进一步，该方法提取蕨麻中总黄酮的最佳工艺条件为:以水为提取剂，在预处理条件下，加入质量分数为0.35%的三乙醇胺溶液、微波处理时间2分钟、微波功率373瓦。进一步，预处理条件为:料液比(g/ml) I: 60，80°C预煮10分钟。进一步，在此工艺条件下蕨麻总黄酮提取率为1.326%。本发明提供的提取蕨麻中总黄酮的方法，该方法以水为提取剂，在料液比(g/ml) I: 60、80°C预煮10分钟的预处理条件下，加入质量分数为0.35%的表面活性剂三乙醇胺溶液、微波处理时间2分钟、微波功率373瓦，在此工艺条件下蕨麻总黄酮提取率为
1.326%，工艺过程简单、对生产设备及技术的要求较低、提取成本较低、总黄酮的提取率较高，具有较强的推广与应用价值。
图1是本发明实施例提供的提取蕨麻中总黄酮的方法的实现流程图；图2是本发明实施例提供的芦丁标准品的对照曲线；图3是本发明实施例提供的不同表面活性剂对提取率影响的流程图；图4是本发明实施例提供的表面活性剂用量对蕨麻中总黄酮提取率影响的曲线示意图；图5是本发明实施例提供的微波功率对蕨麻中总黄酮提取率影响的曲线示意图；图6是本发明实施例提供的微波时间对蕨麻中总黄酮提取率影响的曲线示意图；图7是本发明实施例提供的料液比对蕨麻中总黄酮提取率影响的曲线示意图。
具体实施例方式为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步的详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定发明。图1示出了本发明实施例提供的提取蕨麻中总黄酮的方法的实现流程。该方法包括步骤:步骤S101，取适量蕨麻，干燥后进行粉碎处理；步骤S102，称取适量蕨麻粉，加入一定质量分数的表面活性剂水溶液，在80°C水浴锅中预煮10分钟；步骤S103，微波处理后在80°C水浴锅中放置30分钟，提取液趁热抽滤，收集液体，减压蒸馏浓缩，并进行定容处理。在本发明实施例中，该方法提取蕨麻中总黄酮的最佳工艺条件为:以水为提取剂，在预处理条件下，加入质量分数为0.35%的三乙醇胺溶液、微波处理时间2分钟、微波功率373 瓦。在本发明实施例中，预处理条件为:料液比(g/ml) I: 60，80°C预煮10分钟。在本发明实施例中，在此工艺条件下蕨麻总黄酮提取率为1.326%。下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。材料与试剂:蕨麻、芦丁标准品(纯度> 98% )、无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、三乙醇胺、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基硫酸钠、十六烷基三甲基溴化铵均为分析纯。仪器:
722型可见分光光度计、L500台式低温离心机、旋转蒸发器、SHB-1II循环水式多用真空泵、微波炉、电热恒温水浴锅、电子天平、移液器、电热恒温鼓风干燥箱、三角瓶。工艺流程:蕨麻一干燥一粉碎一预处理一微波提取一水浴一过滤一浓缩一定容一测定取适量蕨麻，在60°C的烘箱中干燥2h，粉碎后过40目筛，准确称取1.5g蕨麻粉放于三角瓶中，加入一定质量分数的表面活性剂水溶液，在80°C水浴锅中预煮10分钟，微波处理后在80°C水浴锅中放置30分钟。提取液趁热抽滤，收集液体，减压蒸馏浓缩，定容至25ml，用分光光度计测定滤液的吸光度值，计算提取率。标准曲线的绘制:准确称取0.1326g芦丁标准样品，用30%乙醇溶解并定容于500mL棕色容量瓶中，待用。分别移取上述芦丁标准液0.0、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mL于6只50mL容量瓶中，各加入1.0mL 50g/L NaNO2溶液混匀，放置6min后加入1.0mL 100g/L Al (NO3) 3溶液混匀，放置6min,再加入10.0mL 40g/L NaOH溶液,最后用30%乙醇定容至刻度,混勻，静置15min后于500nm波长处吸光度值A，空白试剂作参比，以吸光度值A为纵坐标，芦丁质量浓度C (mg/ml)为横坐标绘制标准曲线。图2为所绘制的标准曲线，吸光值A与芦丁浓度C的回归方程为:A = 10.1464C-0.0006，R2 = 0.9997。蕨麻总黄酮提取率的测定:精确吸取样液Iml于25ml具塞试管中，加入1.0mL 50g/L NaNO2溶液混匀，放置6111；[11后加入1.01]11^ 100g/L Al (NO3) 3 溶液混勻，放置 6min,再加入 10.0mL40g/L NaOH 溶液，最后用30%乙醇定容至刻度,再放置15min,同时做试剂空白为对照，于500nm波长测定吸光值并按回归方程计算。蕨麻中总黄酮提取率按下列公式计算:总黄酮提取率(％) = c X V1X n/ (wX 1000) X 100 %式中:c-根据回归方程计算得到的黄酮浓度，mg/ml ；V1-为样品液总体积，ml ；η-为稀释倍数；W-为蕨麻质量，go单因素试验:表面活性剂种类对提取率的影响准确称取等量的蕨麻粉末1.5g，以质量分数为0.40%的三乙醇胺、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基硫酸钠、十六烷基三甲基溴化铵水溶液为提取剂，预处理后，在料液比为
I: 30 (g/ml)，微波功率为480w，提取时间为3min的条件下进行微波提取，试验重复三次，考察表面活性剂种类对提取率的影响。由图3可以看出，同样条件下，试验所用的几种表面活性剂中，提取率从大到小的顺序依次为:三乙醇胺、十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十六烷基三甲基溴化铵。三乙醇胺提取效果最好，故确定三乙醇胺为实验使用表面活性剂。表面活性剂用量对提取率的影响准确称取等量的蕨麻粉末1.5g，以质量分数分别为0.05%、0.2%、0.35%、0.5^^0.65%的三乙醇胺水溶液为提取剂，预处理后，在料液比为1: 30(g/ml)，微波功率为480w，提取时间为3min的条件下进行微波提取，试验重复三次，考察表面活性剂用量对提取率的影响。由图4可以看出，随着三乙醇胺溶液质量分数的增大， 提取率不断增大，当溶液质量分数达到0.2%时，提取率达到最大值，继续增加溶液质量分数，提取率反而下降。由此可知，三乙醇胺溶液质量分数过高或过低都达不到最佳提取效果，表面活性剂的浓度越大，越易形成胶束结构，从而增加有效成分的水溶性，使黄酮溶出增多。然而，随着表面活性剂质量分数的进一步增加，提取率呈下降趋势，这可能是由于表面活性剂不仅对黄酮有增溶作用，同时对其他杂质也有增溶作用，导致纯度降低。故实验选择质量分数为0.2%三乙醇胺溶液作为提取蕨麻中总黄酮的最佳质量分数。微波功率对提取率的影响:准确称取等量的蕨麻粉末1.5g，以质量分数为0.2%的三乙醇胺水溶液为提取剂，预处理后，在料液比为I: 30 (g/ml)，微波功率分别为160w、267w、373w、480w、587w，提取时间为3min的条件下进行微波提取，试验重复三次，考察微波功率对提取率的影响。由图5可以看出，提取率开始随着微波功率的增加而升高，微波功率为373W时提取率最大。这可能是由于微波功率升高，温度也随之升高，使细胞破裂，利于黄酮类物质的溶出，当微波功率继续增加时，导致温度太高，可能引起黄酮分解，提取率下降，因此选择微波功率为373W作为提取蕨麻中总黄酮的最佳微波功率。微波时间对提取率的影响:准确称取等量的蕨麻粉末1.5g，以质量分数为0.2%的三乙醇胺水溶液为提取齐U，预处理后，在料液比为1: 30 (g/ml)，微波功率为373W，提取时间分别为lmin、3min、5min、7min、9min的条件下，进行微波提取。试验重复三次，考察微波时间对提取率的影响。由图6可以看出，提取率随提取时间的延长而增加，当提取时间为3min时，提取率最大。当提取时间继续增加时，提取率反而下降，原因可能是微波提取能把能量直接传到细胞内部，快速加热，有利于黄酮溶出，但长时间加热不利于黄酮稳定，导致提取率下降，因此选择微波时间为3min作为提取蕨麻中总黄酮的最佳微波提取时间。料液比对提取率的影响:准确称取等量的蕨麻粉末1.5g，以质量分数为0.2%的三乙醇胺水溶液为提取齐U，预处理后，在料液比分别为1: 30、1: 40,1: 50,1: 60,1: 70 (g/ml)，微波功率为373W，提取时间为3min的条件下进行微波提取。试验重复三次，考察料液比对提取率的影响。由图7可以看出，提取率在液料比为1: 50 (g/ml)时最大，此后随着料液比的增加而呈现减小的趋势，可能由于蕨麻中的黄酮已经绝大多数溶出，再增加溶剂体积可能会由于其他一些杂质及色素的增加导致总黄酮提取率的降低，因此选择料液比为:1: 50 (g/ml)作为提取蕨麻中总黄酮的最佳料液比。正交试验:在单因素试验的基础上，设计L9 (34)正交试验研究确定表面活性剂协同微波提取蕨麻黄酮的最佳工艺条件。表I正交试验因素水平表
权利要求
1.一种提取蕨麻中总黄酮的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤: 步骤一，取适量蕨麻，在烘箱中60°c干燥2h，粉碎后过40目筛； 步骤二，称取适量蕨麻粉，加入一定质量分数的表面活性剂水溶液，在80°C水浴锅中预煮10分钟； 步骤三，微波处 理后在80°C的水浴锅中放置30分钟，提取液趁热抽滤，收集液体，减压蒸馏浓缩，并进行定容处理。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该方法提取蕨麻中总黄酮的最佳工艺条件为:以水为提取剂，在预处理条件下，加入质量分数为0.35%的三乙醇胺溶液、微波处理时间2分钟、微波功率373瓦。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，预处理条件为:料液比(g/ml)l: 60,80°C预煮10分钟。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，在此工艺条件下蕨麻总黄酮提取率为·1.326%。
全文摘要
本发明属于蕨麻中总黄酮提取技术领域，提供了一种提取蕨麻中总黄酮的方法，该方法以水为提取剂，在料液比(g/ml)1∶60、80℃预煮10分钟的预处理条件下，加入质量分数为0.35％的表面活性剂三乙醇胺溶液、微波处理时间2分钟、微波功率373瓦，在此工艺条件下蕨麻总黄酮提取率为1.326％，工艺过程简单、对生产设备及技术的要求较低、提取成本较低、总黄酮的提取率较高，具有较强的推广与应用价值。
文档编号A61P39/06GK103169789SQ20121059599
公开日2013年6月26日 申请日期2012年12月18日 优先权日2012年12月18日
发明者师希雄, 韩玲, 张珍, 张丽, 张玉斌, 郭兆斌, 梁楠 申请人:甘肃农业大学