阿尔茨海默病中的tau蛋白介导病变的基于蛋白质的疗法和诊断的制作方法

阿尔茨海默病中的tau蛋白介导病变的基于蛋白质的疗法和诊断的制作方法
【专利摘要】本发明提供结合tau蛋白的有助于启始和扩散病理性tau蛋白-tau蛋白相互作用的区域的独特治疗和诊断抗体以及它们的片段、部分、衍生物及其变体以及制备它们的方法。本发明也涉及使用那些抗体诊断、预防和治疗阿尔茨海默病和相关tau蛋白病变的方法。本发明也提供一种用于防治性和治疗性治疗阿尔茨海默病和其它神经变性tau蛋白病变的方法。这个方法需要注射会引发针对患者的脑中的病理性tau蛋白和tau蛋白沉积物的免疫反应的抗体和/或肽疫苗。适合疫苗代表携带本文提供的一种或多种tau蛋白治疗表位的tau肽。
【专利说明】阿尔茨海默病中的TAU蛋白介导病变的基于蛋白质的疗法和诊断
[0001]本发明要求2011年9月19日提交的美国临时申请61/536，339和2012年5月30日提交的美国临时申请61/653，115的优先权益，所述申请的内容均以引用的方式并入本文。
[0002]序列表
[0003]本申请含有已通过EFS网以ASCII格式提交且据此以引用的方式整体并入本文的序列表。2012年9月13日创建的所述ASCII拷贝名为SEQUENCE_LISTING.txt且大小为155,400 字节。
[0004]领域
[0005]本发明的特征在于用于干扰某些形式的tau蛋白的产生和清除的基于蛋白质(例如抗体、肽)方法和手段，所述某些形式的tau蛋白涉及阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease)中的病理性tau蛋白-tau蛋白聚集体的促成和/或进展；以及用于产生适用于诊断和治疗阿尔茨海默病的抗tau蛋白抗体的方法。本发明进一步涉及用于诊断阿尔茨海默病的方法和手段，包括用于分级和评估治疗进展的方法。
[0006]背景
[0007]阿尔茨海默病( AD)是一种破坏高级脑结构，如涉及于记忆和认知中的那些脑结构的进行性神经变性病症。所述疾病导致认知功能缺陷和记忆、学习、语言衰退以及进行有意和有目的活动的能力衰退。AD也伴随相伴行为性、情绪性、人际性和社会性退化。这些认知和行为缺陷致使生活困难(Burns等，2002)。晚期AD患者常不能说话、理解语言和处理他们自己的基本个人护理，最终需要专职护理和监视，且常依赖于家庭成员和疗养院。AD是老年性痴呆的主要病因，且预测随着人口中的年长人士的比例增长，发病率会增加。预测患有AD的人士的总数仅在2000年与2050年之间即会增加至少三倍，从而致使AD成为世界范围内的公共健康问题(Sloane等，2002)。临床管理AD仍主要是支援性的。也就是说，治疗患者的目的是预防、控制或减轻来自AD的并发症和副作用，以及提高他们的生活舒适性和质量。对直接靶向疾病过程且具有疾病改善作用的治疗仍然存在未满足的需要。
[0008]AD的组织学特征在于在脑中存在神经元外斑块以及细胞内和细胞外神经原纤维缠结。斑块主要由β淀粉状蛋白(Αβ)组成，而缠结包含病理性形式的tau蛋白，如病理性tau蛋白构象异构体及其聚集体。斑块和缠结与疾病过程之间的关系仍不清楚，但研究表明淀粉状蛋白与tau蛋白发病机制之间存在关联(Hardy等，1998 ；0ddo等，2004 ；Rapoport 等，2002 ;Roberson 等，2007 ;Shipton 等，2011)。Αβ 在 AD 病变中的主要作用初始是在称为“ A β级联”的假设中提出，其中在A β沉积之后是tau蛋白磷酸化和缠结形成，且接着神经元死亡(Hardy和Allsop, 1991 ；Hardy和Selkoe, 2002 ;对于综述，参见Walsh和Selkoe, 2004 ;也参见Seabrook等2007)。因此，针对AD的初始治疗方法主要集中在靶向A β。然而，有文件证明在AD患者的脑A β病变程度与疾病临床进展之间缺乏关联(Braak和Braak，1991)。此外，无症状个体在尸体解剖时已显示广泛性，常常弥漫性淀粉状蛋白沉积(Braak和Braak, 1991),且至少在早期AD中，神经元损失和淀粉状蛋白沉积发生在不同脑区域中(Carter和Lippa, 2001)。因此,单独祀向Αβ不足以改变任何或所有患者中的疾病过程。然而，正经历在AD患者中进行的临床试验的最先进疾病靶向疗法仍是旨在A β的产生和清除的那些疗法。这些疗法包括被动免疫疗法，例如巴品珠单抗(BAPINEUZUMAB)、苏兰珠单抗(SOLANEUZUMAB)和波恩珠单抗(PONEZUMAB);以及小分子Y -分泌酶抑制剂司马西特(SEMAGACESTAT)(对于综述，参见Citron等，2010)。
[0009]已在众多研究中证明tau蛋白在AD病变中的一公认作用。举例而言，Braak显示AD神经变性的最密切关联是存在tau蛋白缠结而非淀粉状蛋白斑块(Braak和Braak, 1991)。在另一研究中，培养的神经元中的A β神经毒性似乎取决于tau蛋白(Rapoport等，2002)。近来,降低内源性tau蛋白防止了表达人淀粉状蛋白前体蛋白的转基因小鼠的行为缺陷而不改变它们的高A β水平(Roberson等，2007)。Tau蛋白降低也保护转基因小鼠与非转基因小鼠两者免遭兴奋性毒性。同上。Santacruz等在tau蛋白病变模型中证明降低tau蛋白的量恢复了记忆功能(Santacruz等，2005)。因此，旨在降低tau蛋白的疗法可代表一种用于治疗AD和其它tau蛋白相关疾病状况的有效策略。
[0010]Tau蛋白属于固有无序蛋白质家族，所述固有无序蛋白质的特征在于在它们的生理环境中不存在刚性三维结构(Zilka等，2008)。然而，tau蛋白截短和过度磷酸化可导致自固有无序状态向多种可溶性及不溶性错误无序结构(包括成对螺旋纤维(PHF)和其它聚集体)的病理性转化(Wischik 等,1988a ；ffischik 等,1988b ；Novak 等,1993 ；Skrabana等,2006 ；Zilka等,2008 ；Kovacech等,2010)。这些结构变化导致获得毒性功能、损失天然蛋白质的生理功能，或两者(Zilka等,2008 ；Kovacech等,2010)。
[0011]Tau蛋白的生理功能在于介导微管蛋白单体装配成构成神经元微管网状结构的微管(Buee等，2000)。Tau蛋白通过位于蛋白质的C末端部分中的重复区域结合微管。同上。这些重复结构域(R1-R4)彼此不相同，但包含高度保守的31-32个氨基酸(Taniguchi等，2005b)。在人脑中，存在因在tau蛋白的N末端部分中存在或不存在某些氨基酸以及在蛋白质的C末端处的3种(R1、R3和R4)或4种(R1-R4)重复结构域而彼此不同的6种独特tau蛋白亚型。也参见图1，其显示6种人亚型(2N4R、1N4R、2N3R、0N4R、1N3I^P0N3R)。已提出tau蛋白用以诱导微管聚合的最强力部分是覆盖R1-R2的274-KVQIINKK-281区域(SEQID NO: 113) 0同上。此外，tau蛋白的病理和生理功能似乎受由全长蛋白质亚型及其片段所采用的特定结构构象和固有无序结构影响。举例而言，Kontsekova等描述某些截短tau蛋白分子内与那些截短tau蛋白分子关于微管装配的功能具有重大关系的构象区域(涵盖残基 297-1KHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSL-325 (SEQ ID NO: 114)) (W02004/007547)。
[0012]除它们的生理作用之外，tau蛋白重复序列被认为参与形成病理性tau蛋白聚集体和其它结构。因此，对能够区分生理性重复序列介导活性与病理性重复序列介导活性的tau蛋白靶向治疗和诊断方法存在需要。举例而言，病理性成对螺旋纤维(PHF)的链霉蛋白酶(pronase)抗性核心由3重复tau蛋白亚型和4重复tau蛋白亚型的微管结合区组成(Jakes 等,1991 ；ffischik 等 1988a ；ffischik 等 1988b)。此外，Novak 等显不 PHF 的长度为93-95个氨基酸的蛋白酶抗性核心限于3个串联重复序列(Novak等，1993)。Von Bergen等确定最小tau肽/相互作用基元(306-VQIVYK-311 ;SEQ ID NO: 115)以及tau蛋白上的第二位点(275-VQIINK-280) (SEQ ID NO: 116)，所述基元和所述第二位点形成β折叠且被描述为潜在负责启始病理性tau蛋白聚集体PHF的形成(Von Bergen等，2000 ；EP1214598 ；W02001/18546)。对于tau蛋白的功能图谱，参见图2。因此，当前策略旨在产生不破坏tau蛋白在微管稳定化方面的细胞内作用的抗聚集药物。
[0013]此外，尽管在生理情况下，tau蛋白被视为细胞内细胞质蛋白，但细胞内tau蛋白可被释放至细胞外间隙中且促进神经变性(G0meZ-RamOS等，2006)。实际上，神经元损失已与神经原纤维缠结(由tau蛋白组成)在AD脑中的局部解剖分布相关联(West等，1994 ；Gomez-1sla等，1996，1997)。此外，总tau蛋白和磷酸化tau蛋白的水平在AD患者的脑脊髓液(CSF)中增加(Hampel等，2010)，且细胞外tau蛋白已被描述为脑中指示细胞内tau蛋白释放至细胞外间隙中的“鬼影缠结(ghost tangle) ”(Frost和Diamond, 2009)。此外,细胞外tau蛋白聚集体可进入细胞且刺激细胞内tau蛋白纤维化,从而进一步播种(seeding)用于产生病理性tau蛋白聚集体的tau蛋白单体(Frost等，2009)。所述研究已强调细胞外不溶性tau蛋白可充当可传播剂来以朊病毒样方式遍及脑散布tau蛋白病变(Frost等，2009 ；Frost和Diamond, 2009)。清除细胞外tau蛋白缠结可减轻tau蛋白相关细胞外和细胞内病变。参见例如Asuni等，2007。因此，对能够通过阻碍细胞外tau蛋白的形成、促进其清除，或两者来降低细胞外tau蛋白的治疗以及对降低细胞内疾病tau蛋白的治疗存在需要。
[0014]总而言之，尽管tau蛋白似乎在AD的临床显现方面起病理性作用,但针对tau蛋白起作用的药物的开发已落后，此部分归因于tau蛋白在生理性微管动力学中的重要性和其复杂生物学(Dickey和Petrucelli, 2006)。然而,对潜伏在病理性tau蛋白转化以下的分子机制的了解增加已开启出于治疗目的特异性靶向病理性tau蛋白修饰的可能性。因此，已出现直接或间接祀向tau蛋白级联的许多治疗方法(对于综述文章,参见例如Dickey和 Petrucelli, 2006 ；Schneider 和 Mandelkow, 2008 ；Zilka 等,2008)，包括预防或逆转 tau蛋白聚集的化合物(Wischik 等,1996 ；Necula 等 2005 ；Pickhardt 等,2005 ；Taniguchi等，2005a ；Larbig等，2007)、抑制tau蛋白激酶或活化tau蛋白磷酸酶的小分子型药物(Iqbal 和 Grundke-1qbal, 2004 ；Noble 等,2005 ；Iqbal 和 Grundke-1qbal, 2007)、微管稳定化药物(Zhang等，2005)、有助于错误折叠tau蛋白的蛋白水解降解的药物(Dickey等,2005 ；Dickey 等 2006 ；Dickey 和 Petrucelli, 2006)和免疫抑制药物(Zilka 等,2008)以及包括主动和被动免疫的免疫治疗策略(Schneider和Mandelkow等，2008 ；Zilka等，2008 ;Tabira, Τ.Immunizat1n Therapy for Alzheimer disease:A ComprehensiveReview of Active Immunizat1n Strategies.Tohoku J.Exp.Med.，220:95-106(2010))。
[0015]更一般而言，自2007年以来，新型单克隆抗体(mAb)已以每年超过40种的速率进入临床研究。在2010年结束时，在美国有至少25种mAb和5种Fe融合蛋白处于2/3期或3期临床研究中(Reichert，2011)。这个趋势说明被动免疫疗法是治疗包括AD的人病症中的一种发展方法。参见例如Citron等，2010。实际上，尽管AD治疗面对克服血脑屏障(BBB)的障碍，但日益增长数目的临床前和临床研究报道抗体介导的疗法可自脑清除AD聚集体，且提出多种作用机制，如(i)抗体通过在AD中改变的BBB渗透性或BBB泄漏而摄取至脑中；(ii)抗体充当可溶性斑块形成性淀粉状蛋白物质的“外周血沉槽(peripheralsink)”;(iii)抗体分泌性细胞自外周进入脑中，从而局部递送抗体；以及(iv)在细胞内和跨越细胞转运IgG。对于综述,参见例如Citron等，2010以及Asuni等，2007。因此,革巴向疾病形式的tau蛋白的治疗抗体代表一种治疗和/或诊断AD和其它tau蛋白病变的有希望方法(W02004/007547、US2008/0050383)。
[0016]一种用以靶向tau蛋白病变的免疫疗法方法基于抗tau蛋白抗体可防止tau蛋白聚集、清除tau蛋白聚集体，或两者的见解。尽管研究已描述结合tau蛋白序列的抗体，且那些抗体中的一些据报道会干扰tau蛋白聚集和清除(Asuni等，2007),但尚无单克隆抗tau蛋白抗体据报道正经历AD的体内临床前或临床试验。实际上，预测一种mAb在鼠类tau蛋白的微管结合结构域内具有3个结合位点(即在R3、R4和可能Rl处)，但其不阻断微管结合。(Dingus等，1991)。Dingus未描述这个抗体对tau蛋白聚集的作用，且因此没有理由相信Dingus将阻断tau蛋白聚集。在其它报道中，产生区分tau蛋白亚型的mAb,但又未暗示这些mAb将对tau蛋白聚集具有任何影响(DeSilva等，2003 ;Ueno等，2007)。Taniguchi等证明某些针对Rl或R2的抗tau蛋白mAb在体外抑制tau蛋白聚集成PHF,同时促进tau蛋白诱导的微管蛋白装配(Taniguchi等，2005b)。Taniguchi的RTA-1和RTA-2抗体分别特异性结合Rl和R2。两种抗体皆不结合一个以上tau蛋白重复序列且两种抗体皆未被报道针对对tau蛋白聚集或清除的体内影响加以测试。尽管在AD的基于被动免疫疗法(即向患者施用抗体的疗法)的临床试验中存在至少3种抗淀粉状蛋白抗体，但尚无用于AD的基于被动tau蛋白免疫疗法的临床测试报告可用。
[0017]在AD的若干APP转基因小鼠研究中发现一种主动免疫方法(即患者的身体自身产生针对靶标的免疫性的方法)有效清除A β沉积物且逆转神经病理性病变(参见例如Schenk 等，1999 ；Janus 等，2000 ；Morgan 等，2000 ；Sigurdsson 等，2001)。近来，在 tau 蛋白缠结病变的小鼠模型中，采用磷酸化tau表位(Tau蛋白379-408[P-Ser396、404])的主动免疫疗法降低了聚集tau蛋白在脑中的程度且减缓了行为表型的进展(Asuni等，2007 ；Boutajangout 等 2010 ；US2008/0050383 ；US/2010/00316564)。所治疗的动物产生在脑中检测到且与识别病理性tau蛋白的抗体共定位的抗tau蛋白抗体(Asuni等，2007)。这个免疫治疗方法在动物中的功能性损伤的早期阶段(5个月)实质上比后期阶段(8个月)更有效，表明清除早期阶段病理性tau蛋白可具有治疗益处(Asuni等，2007 ；Zilka等，2008)。实际上，了解到并非所有tau蛋白都易受影响或可能甚至适于破环和清除。一些研究者已表明破坏tau蛋白聚集体可增加毒性中间体物质的丰度，而其它研究者已表明可检测tau蛋白聚集体不必定有毒且可甚至起保护作用(Lee等，2005)。因此，尽管用以靶向tau蛋白的免疫治疗方法已显示临床前希望，但对特异性靶向消除其会产生提高的持续益处的早期异常形式的tau蛋白的治疗剂仍然存在需要。然而，也仍然需要鉴定作为免疫疗法的适合靶标的那些tau蛋白种类。
[0018]为此,开发针对tau蛋白的mAb的另一考虑是鉴定和表征各种结构形式的tau蛋白(生理性、早期疾病性、晚期疾病性)和tau蛋白病变的所靶向阶段。Oddo等观察到在AD的转基因小鼠模型中，尽管A β免疫疗法清除A β斑块和早期tau蛋白病变，但成熟tau蛋白聚集体保持完整(Oddo等，2004)。类似地，尽管神经原纤维缠结继续积累，但在tau蛋白病变的P301L tau蛋白模型中，tau蛋白表达的遗传性(非免疫治疗性)降低改善了记忆力(Santacruz 等，2005)。
[0019] 尽管AD盛行，但其仍是神经学中的最大未满足医学需要(Citi*On，2010)。最普遍医学方法在于提供甚至在治疗数年之后也不有效的对症疗法。用于AD的新型治疗方法和策略需要超越针对症状的治疗以预防认知衰退且抵抗疾病的基础病理性过程。具体来说，需要开发单独或与其它AD靶向药物组合干扰疾病的至少一些最早期阶段的分子。所述分子将提供早期诊断(此可自身提高治疗结果)、预防和治疗AD的新型有利选项。
[0020]发明概述
[0021]在一个实施方案中，本发明提供一种分离的抗体，其中所述抗体结合一种或多种tau表位且能够展现两种或更多种以下性质:
[0022]a)显示对病理性tau蛋白的亲和力高于对生理性tau蛋白的亲和力；
[0023]b)抑制tau蛋白-tau蛋白聚集；以及
[0024]c)介导由小神经胶质细胞对病理性tau蛋白的摄取和降解；
[0025]且其中各tau表位包含tau蛋白的聚集促进区。
[0026]在一实施方案中，这个分离的抗体是如此以致一种或多种表位各自独立地选自以下位置内的表位:
[0027]1.相对于 tau441 的位置 267-273 或残基 KHQPGGG (SEQ ID NO: 98)；
[0028]i1.相对于 tau441 的位置 298-304 或残基 KHVPGGG (SEQ ID NO: 99)
[0029]ii1.相对于 tau441 的位置 329-335 或残基 HHKPGGG (SEQ ID NO: 100);和
[0030]iv.相对于 tau 441 的位置 361-367 或残基 THVPGGG (SEQ ID NO: 101)。
[0031]在某些实施方案中，具有先前段落的实施方案中所述的性质的分离的抗体能够结合选自以下的一种或多种形式的病理性tau蛋白:人阿尔茨海默病患者的脑活检中、来自阿尔茨海默病的动物模型的脑样本中、或两者中的错序tau蛋白、错误无序tau蛋白、肌氨酰(sarkosyl)不溶性tau蛋白、神经原纤维缠结、神经原纤维网线和神经炎斑块。在某些实施方案中，分离的抗体是如此以致至少一种其识别的表位是构象表位。
[0032]在一个实施方案中，本发明提供一种分离的抗体，其中所述抗体结合一种或多种tau表位且能够展现两种或更多种以下性质:
[0033]a)显示对病理性tau蛋白的亲和力高于对生理性tau蛋白的亲和力；
[0034]b)抑制tau蛋白-tau蛋白聚集；以及
[0035]c)介导由小神经胶质细胞对病理性tau蛋白的摄取和降解；
[0036]且其中各tau表位包含tau蛋白的聚集促进区。
[0037]在一实施方案中，这个分离的抗体是如此以致一种或多种表位各自独立地选自以下位置内的表位:
[0038]1.相对于 tau441 的位置 268-273 或残基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)；
[0039]i1.相对于 tau441 的位置 299-304 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)
[0040]ii1.相对于 tau441 的位置 330-335 或残基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和
[0041]iv.相对于 tau441 的位置 362-367 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
[0042]在一实施方案中，这个分离的抗体是如此以致一种或多种其结合的表位各自独立地选自以下位置内的表位:
[0043]1.相对于 tau441 的位置 268-273 或残基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)；
[0044]i1.相对于 tau441 的位置 299-304 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)
[0045]ii1.相对于 tau441 的位置 330-335 或残基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和
[0046]iv.相对于 tau441 的位置 362-367 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)；
[0047]且所述抗体包含:
[0048]a)抗体轻链可变区，所述抗体轻链可变区包含:
[0049]1.用于 CDRl 的 QSLLNSRTRKNY (SEQ ID NO: 117)或 SEQ ID NO: 247 ；
[0050]i1.用于 CDR2 的 WAS (SEQ ID NO: 118)或 SEQ ID NO: 253 ;和
[0051]ii1.用于 CDR3 的 KQSFYLRT (SEQ ID NO: 119)或 SEQ ID NO: 255、257、258、259 和260的任一者；以及
[0052]b)抗体重链可变区，所述抗体重链可变区包含:
[0053]iv.用于CDRl 的GYIFTDYVIS(SEQ ID NO:120),SEQ ID NO:261 或SEQ ID NO:262 ；
[0054]V.用于 CDR2 的 IFPRSGST (SEQ ID NO: 121),SEQ ID N0:264 或 SEQ ID NO:265 -M
[0055]v1.用于 CDR3 的 ARDYYGTSFAMDY (SEQ ID NO:122), SEQ ID NO: 266, SEQ ID NO:267或 SEQ ID NO:269。
[0056]本发明也提供一种以构象特异性方式结合tau蛋白上的一种或多种表位的分离的抗体，其中:
[0057]a)所述一种或多种表位各自独立地选自以下位置内的表位:
[0058]1.相对于 tau441 的位置 267-273 或残基 KHQPGGG (SEQ ID NO: 98)；
[0059]i1.相对于 tau44 1 的位置 298-304 或残基 KHVPGGG (SEQ ID NO: 99)
[0060]ii1.相对于 tau441 的位置 329-335 或残基 HHKPGGG (SEQ ID NO: 100);和
[0061]iv.相对于 tau441 的位置 361-367 或残基 THVPGGG (SEQ ID NO: 101)；
[0062]b)所述表位的零者、一者、两者或三者是线性表位；以及
[0063]c)所述表位的零者、两者、三者或四者是构象表位。
[0064]本发明也提供一种以构象特异性方式结合tau蛋白上的一种或多种表位的分离的抗体，其中:
[0065]a)所述一种或多种表位各自独立地选自以下位置内的表位:
[0066]1.相对于 tau441 的位置 268-273 或残基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)；
[0067]i1.相对于 tau441 的位置 299-304 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)
[0068]ii1.相对于 tau441 的位置 330-335 或残基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和
[0069]iv.相对于 tau441 的位置 362-367 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
[0070]b)所述表位的零者、一者、两者或三者是线性表位；以及
[0071]c)所述表位的零者、两者、三者或四者是构象表位。
[0072]在一个实施方案中，这个抗体是DC8E8，其中DC8E8是一种由在美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collect1n)专利保藏号PTA-11994下保藏的杂交瘤产生的抗体。
[0073]在某些实施方案中，分离的抗体结合tau蛋白上与由DC8E8结合的那些表位相同的表位的一者或多者。在一实施方案中，分离的抗体与单克隆抗体DC8E8竞争结合tau蛋白。
[0074]本发明也提供一种分离的抗体，所述分离的抗体在其表位结合结构域中包含一种或多种选自以下的互补决定区(CDR)序列:
[0075]1.QSLLNSRTRKNY(SEQ ID NO:117)
[0076]i1.WAS (SEQ ID NO: 118)
[0077]ii1.KQSFYLRT(SEQ ID NO:119)
[0078]iv.GYIFTDYVIS(SEQ ID NO: 120)
[0079]v.1FPRSGST (SEQ ID NO: 121);和
[0080]v1.ARDYYGTSFAMDY (SEQ ID NO:122)。
[0081]本发明也规定先前段落中所述的任何实施方案中所述的任何抗体都可是如此以致分离的抗体包含:
[0082]a)抗体轻链可变区，所述抗体轻链可变区包含:
[0083]1.用于 CDRl 的 QSLLNSRTRKNY (SEQ ID NO: 117)；
[0084]i1.用于 CDR2 的 WAS(SEQ ID NO: 118);和
[0085]ii1.用于 CDR3 的 KQSFYLRT (SEQ ID NO: 119);以及
[0086]b)抗体重链可变区，所述抗体重链可变区包含:
[0087]iv.用于 CDRl 的 GYIFTDYVIS(SEQ ID NO: 120)
[0088]V.用于 CDR2 的 IFPRSGST (SEQ ID NO: 121);和
[0089]v1.用于 CDR3 的 ARDYYGTSFAMDY (SEQ ID NO: 122)。
[0090]本发明也规定先前实施方案中所述的任何抗体都可是如此以致分离的抗体包含:
[0091]a) 一种或多种来自单克隆抗体DC8E8的轻链⑶R序列或一种或多种在与这些轻链⑶R之一最优比对之后具有至少80%、90%或95%同一性的序列；和
[0092]b) 一种或多种来自单克隆抗体DC8E8的重链⑶R序列或一种或多种在与这些重链⑶R之一最优比对之后具有至少80%、90%或95%同一性的序列；
[0093]且其中:
[0094]1.所述轻链 CDR 包含选自 QSLLNSRTRKNY (SEQ ID NO: 117)、WAS (SEQ ID NO: 118)和 KQSFYLRT (SEQ ID NO: 119)的序列；以及
[0095]i1.所述重链 CDR 包含选自 GYIFTDYVIS (SEQ ID NO: 120)、IFPRSGST (SEQ IDNO: 121)和 ARDYYGTSFAMDY (SEQ ID NO: 122)的序列。
[0096] 本发明也规定先前实施方案中所述的任何抗体都可由以下组成或包含以下:Fab、Fab’、F(ab’)2、Fabc、Fv片段、任何其它抗原结合片段；或其抗原结合抗体部分；具有一种或多种以下免疫结合特征:
[0097]1.抗体以构象特异性方式结合一种或多种tau表位，其中:
[0098]a)所述一种或多种tau表位各自独立地选自以下位置内的表位:
[0099]1.相对于 tau441 的位置 267-273 或残基 KHQPGGG (SEQ ID NO: 98)；
[0100]i1.相对于 tau441 的位置 298-304 或残基 KHVPGGG (SEQ ID NO: 99)
[0101]ii1.相对于 tau441 的位置 329-335 或残基 HHKPGGG (SEQ ID NO: 100);和
[0102]iv.相对于 tau441 的位置 361-367 或残基 THVPGGG (SEQ ID NO: 101)；
[0103]b)所述表位的零者、一者、两者或三者是线性表位；
[0104]c)所述表位的一者、两者、三者或四者是构象表位；
[0105]2.抗体结合两种或更多种tau表位且能够显示对病理性tau蛋白的亲和力高于对生理性tau蛋白的亲和力,其中所述两种tau表位选自以下位置内的表位:
[0106]V.相对于 tau441 的位置 267-273 或残基 KHQPGGG (SEQ ID NO:98)；
[0107]v1.相对于 tau441 的位置 298-304 或残基 KHVPGGG (SEQ ID NO:99)
[0108]Vi1.相对于 tau441 的位置 329-335 或残基 HHKPGGG (SEQ ID NO: 100);和
[0109]vii1.相对于 tau441 的位置 361-367 或残基 THVPGGG (SEQ ID NO: 101)。
[0110]本发明也规定先前实施方案中所述的任何抗体都可由以下组成或包含以下:Fab、Fab’、F(ab’)2、Fabc、Fv片段、任何其它抗原结合片段；或其抗原结合抗体部分；具有一种或多种以下免疫结合特征:
[0111]1.抗体以构象特异性方式结合一种或多种tau表位，其中:
[0112]a)所述一种或多种tau表位各自独立地选自以下位置内的表位:
[0113]1.相对于 tau441 的位置 268-273 或残基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)；
[0114]i1.相对于 tau441 的位置 299-304 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)
[0115]ii1.相对于 tau441 的位置 330-335 或残基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和
[0116]iv.相对于 tau441 的位置 362-367 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
[0117]b)所述表位的零者、一者、两者或三者是线性表位；
[0118]c)所述表位的一者、两者、三者或四者是构象表位；
[0119]2.抗体结合两种或更多种tau表位且能够显示对病理性tau蛋白的亲和力高于对生理性tau蛋白的亲和力,其中所述两种tau表位选自以下位置内的表位:
[0120]1.相对于 tau441 的位置 268-273 或残基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)；
[0121]i1.相对于 tau441 的位置 299-304 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)
[0122]ii1.相对于 tau441 的位置 330-335 或残基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和
[0123]iv.相对于 tau441 的位置 362-367 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
[0124]本发明也涉及与先前实施方案中所述的任何分离的抗体竞争结合tau蛋白的任何分离的抗体。在一个实施方案中，当相对于分离的DC8E8测试与tau蛋白的结合时，分离的抗体竞争结合tau蛋白。
[0125]在一些实施方案中，抗体包含包括SEQ ID N0.:141的轻链。在一些实施方案中，抗体包含包括SEQ ID N0.: 138的轻链。在一些实施方案中，抗体包含包括SEQ ID N0.: 141的轻链和包括SEQ ID N0.:138的轻链。
[0126]本发明规定由本发明提供的抗体可选自:
[0127]a)单克隆抗体；
[0128]b)多克隆抗体；
[0129]c)重组抗体；
[0130]d)嵌合抗体；
[0131]e)人源化抗体；
[0132]f)人抗体；和
[0133]g) (a)至(f)的任一者的抗原结合片段或抗原结合部分。
[0134]由本发明提供的任何分离的抗体都可在哺乳动物中产生。在某些实施方案中，分离的抗体是由重组动物或由重组宿主细胞产生。
[0135]本发明规定本文提供的任何分离的抗tau蛋白抗体都可是如此以致其用一种或多种标记剂可检测地标记。在某些实施方案中，至少一种标记剂选自酶、放射性同位素、荧光团、核磁共振标记物和重金属。
[0136]在一些实施方案中，抗体包含至少一种连接于抗体分子的药物(组合药剂)。
[0137]本发明也提供编码先前实施方案中所述的任何抗tau蛋白抗体的免疫球蛋白链的至少一种CDR或至少结合结构域或可变区的分离的核酸。也提供包含那些核酸的任一者的分离的载体。在一些实施方案中，本发明提供一种包含这些分离的核酸和载体的一者或多者的分离的宿主细胞。
[0138]在某些实施方案中，本发明提供一种表达先前实施方案中所述的任何抗tau蛋白抗体的分离的细胞系。在一个实施方案中，分离的细胞系是杂交瘤。在一个实施方案中，分离的细胞系是自其产生单克隆抗体DC8E8的杂交瘤，且所述细胞系已于2011年7月13日以ATCC专利保藏编号PTA-11994保藏在美国典型培养物保藏中心(Manassas, VA, USA)。
[0139]本发明提供本文提供的任何抗tau蛋白抗体、核酸和细胞作为药物或制造用于诊断、预防或治疗阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的药剂的用途。
[0140]在一些实施方案中，抗体包含在医药组合物中，所述医药组合物进一步包含药学上可接受的载体和/或稀释剂。在一个实施方案中，医药组合物包含抗体与药学上可接受的载体和/或稀释剂的组合，其中所述组合包含至少两种不同抗体，且其中所述抗体各自独立地选自先前实施方案中所述的抗体。在一个实施方案中，至少一种抗体是DC8E8或人形式的DC8E8或人源化形式的DC8E8。
[0141]在一些实施方案中，抗体包含在组合物中，所述组合物进一步包含稀释剂和/或载体。组合物可为医药组合物、诊断组合物或任何其它组合物。在一些实施方案中，组合物可进一步包含至少一种选自以下的化合物或试剂:可检测标记、匙孔血蓝蛋白(keyholelimpet hemocyanin)、破伤风类毒素或源于其它病原细菌的类毒素、血清白蛋白、牛血清白蛋白、免疫球蛋白分子或其片段、甲状腺球蛋白、卵球蛋白、通用T细胞表位、细胞因子、趋化因子、白介素1- a (IL-1 α )、IL-1 β、IL_2、IL_10、干扰素-Y (IFN_ y )、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞炎性蛋白I α (M I F I a )、M I F I β和RANTES (在活化后受调控，由正常T细胞表达和分泌)。
[0142]本发明也提供一种供医药或诊断使用的制品(例如试剂盒)，所述制品包括包装材料和容器，所述容器包括冻干形式的任何一种或多种本文提供的抗tau蛋白抗体的溶液。在某些实施方案中，容器是用于向受试者递送抗体的装置或系统的组成部分。
[0143]在一些实施方案中，本发明提供一种包括如本文提供的抗tau蛋白抗体(参见上文)的医学装置，其中所述装置适于通过至少一种选自以下的模式接触或施用所述抗体:胃肠外、皮下、肌肉内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内、脑室内、鞘内、结肠内、子宫颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、病灶内、推注、经阴道、经直肠、经颊、舌下、鼻内和经皮。
[0144]在一个实施方案中，本发明涉及一种治疗受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变或预防其进展的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的至少一种本文提供的抗tau蛋白抗体。在一些实施方案中，所述方法能够减轻运动损伤、提高运动功能、减轻认知损伤、提高认知功能或能够实现其组合效果。
[0145] 在某些实施方案中，本发明涉及一种改善至少一种与受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变相关的症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的至少一种本文提供的抗tau蛋白抗体。
[0146]在另一实施方案中，本发明提供一种针对受试者中存在阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变，或针对确定受试者显现阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的风险来诊断或筛选受试者的方法，所述方法包括:
[0147]a)使所述受试者或所述受试者的细胞、组织、器官、流体或任何其它样本与有效量的至少一种如本文提供的抗tau蛋白抗体接触；以及
[0148]b)确定包含病理性tau蛋白和所述抗体的复合物的存在，其中存在所述复合物是对与存在病理性tau蛋白相关的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的诊断。
[0149]在一相关实施方案中，本发明提供一种针对受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的存在、进展、消退或稳定化，或针对确定受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的阶段来监测受试者的方法，所述方法包括:
[0150]a)使所述受试者或所述受试者的细胞、组织、器官、流体或任何其它样本与有效量的至少一种本文提供的抗tau蛋白抗体接触；以及
[0151]b)确定包含病理性tau蛋白和所述抗体的复合物的存在和/或特征，其中存在所述复合物是对与存在病理性tau蛋白相关的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的诊断。
[0152]在一些实施方案中，抗体是静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、鼻内、脑室内、鞘内或以气雾剂形式施用。
[0153] 在治疗受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变或预防其进展的方法和改善至少一种与受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变相关的症状的方法的一些实施方案中，各抗体的每剂有效量是所述受试者的每kg体重对应至少Img。在一些实施方案中,各抗体的每剂有效量是每kg受试者体重对应至少10mg。在一些实施方案中，历经至少6个月的时期以多次剂量施用至少一种抗体。在一些实施方案中，向人受试者外周施用抗体以施加其有益作用。在一些实施方案中，在向人受试者外周施用时，抗体结合可溶性tau蛋白、肌氨酰不溶性tau蛋白或两者。在一些实施方案中，在向人受试者外周施用时，抗体结合tau蛋白，其中tau蛋白呈一种或多种选自以下的病理性形式:人阿尔茨海默病患者的脑活检中、来自阿尔茨海默病的动物模型的脑样本中的错序tau蛋白、错误无序tau蛋白、肌氨酰不溶性tau蛋白、神经原纤维缠结、神经原纤维网线和神经炎斑块。在一些实施方案中，在向人受试者外周施用时，抗体施加一种或多种效应子功能介导的对受试者的有益作用。在一些实施方案中，通过将抗体表达性细胞注射/植入至受试者的脑中来将抗体递送至外周中。在一些实施方案中，抗体表达性细胞是杂交瘤细胞。在一些实施方案中，杂交瘤细胞是表达DC8E8的杂交瘤。
[0154]在某些相关实施方案中，本发明提供一种分离的肽，其中:
[0155]a)所述分离的肽是tau蛋白的长度是至少6个氨基酸残基、长度是至少7个氨基酸残基、长度是至少9个氨基酸残基、长度是至少10个氨基酸残基、长度是至少12个氨基酸残基或长度是30个氨基酸残基的片段；以及
[0156]b)所述分离的肽包含tau蛋白治疗表位。
[0157]在一些相关实施方案中，治疗表位包括选自以下位置内的那些的治疗表位:
[0158]1.相对于 tau441 的位置 267-273 或残基 KHQPGGG(SEQ ID NO:98)；
[0159]i1.相对于 tau441 的位置 298-304 或残基 KHVPGGG(SEQ ID NO:99)
[0160]ii1.相对于 tau441 的位置 329-335 或残基 HHKPGGG(SEQ ID NO: 100);和
[0161]iv.相对于 tau441 的位置 361-367 或残基 THVPGGG(SEQ ID NO: 101)。
[0162]在某些相关实施方案中，本发明提供一种分离的肽，其中:
[0163]a)所述分离的肽是tau蛋白的长度是至少6个氨基酸残基、长度是至少7个氨基酸残基、长度是至少9个氨基酸残基、长度是至少10个氨基酸残基、长度是至少12个氨基酸残基或长度是30个氨基酸残基的片段；以及
[0164]b)所述分离的肽包含tau蛋白治疗表位。
[0165]在一些相关实施方案中，治疗表位包括选自以下位置内的那些的治疗表位:
[0166]1.相对于 tau441 的位置 268-273 或残基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)；
[0167]i1.相对于 tau441 的位置 299-304 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)
[0168]ii1.相对于 tau441 的位置 330-335 或残基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和
[0169]iv.相对于 tau441 的位置 362-367 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
[0170]在一些相关实施方案中，治疗表位选自:
[0171]1.相对于 tau441 的位置 268-273 或残基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)；
[0172]i1.相对于 tau441 的位置 299-304 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)
[0173]ii1.相对于 tau441 的位置 330-335 或残基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和
[0174]iv.相对于 tau441 的位置 362-367 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
[0175]在其它实施方案中，分离的肽是选自以下的序列:SEQ ID NO: 1-4, SEQ IDN0:9-101 和 SEQ ID NO: 108-112、NIKAVPGGGS(SEQ ID NO: 200)、NIKHVPGGGS(SEQ IDNO:201), IKHVPGGGS(SEQ ID NO:202)、KHVPGGGSV(SEQ ID NO:203), HVPGGGSVQ(SEQ IDNO:204), VPGGGSVQ(SEQ ID NO:205), GffSIHSPGGGSC(SEQ ID NO:250)、SVFQHLPGGGSC(SEQID NO:251)、ANIKHVPGGGS(SEQ ID NO:144)、DAIKHVPGGGS(SEQ ID NO:146)、DNAKHVPGGGS (SEQ ID NO: 149)、DNIAHVPGGGS (SEQ ID NO: 151)、DNIKAVPGGGS (SEQ IDNO: 159), DNIKHAPGGGS (SEQ ID NO: 161)以及 DNIKHVPGGGS (SEQ ID NO: 171)。
[0176]在其它实施方案中，分离的肽是选自以下的序列:SEQ IDN0:270(TENLKHQPGGGK) ；SEQ ID NO:271(KHQPGGG)、SEQ IDNO:272(HQPGGG) ；SEQ ID NO:275(ENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGS)、 SEQ ID NO:276(KHVPGGG)、 SEQ IDNO:277 (HVPGGG)、SEQ ID NO: 280 (DNIKHVPGGGSVQIVYKPV), SEQ ID NO: 281 (HHKPGGG)、SEQID NO:282(HKPGGG)和 SEQ ID NO:283(THVPGGG)。
[0177]在其它实施方案中，分离的肽是选自以下的序列:SEQ IDN0:270(TENLKHQPGGGK) ；SEQ ID NO: 271 (KHQPGGG)、SEQ ID NO: 272 (HQPGGG) ；SEQ ID NO:275(ENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGS)、SEQ ID NO:276(KHVPGGG)、SEQ IDNO:277 (HVPGGG)、SEQ ID NO: 280 (DNIKHVPGGGSVQIVYKPV), SEQ ID NO: 281 (HHKPGGG)、SEQID NO:282 (HKPGGG)和 SEQ ID NO: 283 (THVPGGG);且治疗表位选自:
[0178]1.相对于 tau441 的位置 268-273 或残基 HQPGGG (SEQ ID NO:223)；
[0179]i1.相对于 tau441 的位置 299-304 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)
[0180]ii1.相对于 tau441 的位置 330-335 或残基 HKPGGG(SEQ ID NO:224);和
[0181]iv.相对于 tau441 的位置 362-367 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
[0182]在其它实施方案中，分离的肽是选自以下的序列:SEQ ID NO: 272 (HQPGGG)和SEQID NO:277(HVPGGG)?
[0183]在某些实施方案中，分离的肽在至少一种选自测量肽的以下能力的测定的测定中具有活性:
[0184]a)与tau蛋白竞争结合单克隆抗体DC8E8的能力；
[0185]b)体内降低肌氨酰不溶性tau蛋白的水平的能力；
[0186]c)体内促进tau蛋白自脑清除的能力；
[0187]d)体内降低AD的至少一种生物化学标记物的水平的能力；
[0188]e)体内降低神经原纤维缠结(NFT)载荷的能力；
[0189]f)体内提高至少一种神经行为参数的能力；
[0190]g)有益改进受试者的AD的过程的能力；
[0191]h)降低脑中、脑脊髓液中或两者中的tau蛋白的水平的能力；和/或
[0192]i)在制备能够与单克隆DC8E8竞争结合tau蛋白的抗体中充当免疫原的能力。
[0193]本发明也涉及包含本文提供的任何分离的肽和部分的化合物。在某些实施方案中，所述部分在肽的N末端、C末端或连接于内部氨基酸，且其中所述部分选自以下一者或多者:半胱氨酸残基、磷酸基团、匙孔血蓝蛋白、破伤风类毒素或源于其它病原细菌的类毒素、血清白蛋白、牛血清白蛋白、免疫球蛋白分子或其片段、甲状腺球蛋白、卵球蛋白、通用T细胞表位、细胞因子、趋化因子、白介素l-α (IL-Ια)、IL-1 β , IL_2、IL-10、干扰素-gamma (IFN-gamma)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞炎性蛋白1α(ΜΙΡ1α)、ΜΙΡ1β和RANTES (在活化后受调控，由正常T细胞表达和分泌)。
[0194]也提供包含一种或多种由本发明提供的分离的肽和/或化合物以及药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或佐剂的医药组合物。在一些实施方案中，医药组合物适合于提供剂量在Ing与1mg之间的肽或化合物。在某些实施方案中，医药组合物适合于提供剂量大于10微克的肽或化合物。
[0195]本发明也涉及一种供医药或诊断使用的制品(例如试剂盒)，所述制品包括包装材料和容器，所述容器包括由本发明提供的冻干形式的肽和/或化合物的溶液。在一些实施方案中，容器是用于向受试者递送肽或化合物的装置或系统的组成部分。
[0196]也提供包括如由本发明提供的肽、化合物和/或肽/化合物组合物的医学装置，其中所述装置适于通过至少一种选自以下的模式接触或施用所述抗体:胃肠外、皮下、肌肉内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内、脑室内、鞘内、结肠内、子宫颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、病灶内、推注、经阴道、经直肠、经颊、舌下、鼻内和经皮。
[0197]在相关实施方案中，本发明提供一种治疗受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变或预防其进展的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如由本发明提供的至少一种肽和/或至少一种化合物。在一些实施方案中，所述方法能够减轻运动损伤、提高运动功能、减轻认知损伤、提高认知功能或能够实现其组合效果。
[0198]在相关实施方案中，本发明提供一种改善至少一种与受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变相关的症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如由本发明提供的至少一种肽和/或至少一种化合物。
[0199]在这些治疗、预防或改善至少一种与受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变相关的症状的方法的一些中，包括一种改善至少一种与受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变相关的症状的方法，所述方法包括向人患者施用如由本发明提供的肽和/或化合物和/或增大免疫反应的佐剂，所述方法实现包含针对病理性tau蛋白的抗体的免疫反应，由此治疗至少一种与所述人患者的AD相关的症状、预防其进展或改善所述至少一种症状。
[0200]本发明也提供一种产生能够与DC8E8竞争结合tau蛋白的抗体的方法，所述方法包括用如由本发明提供的至少一种肽和/或至少一种化合物使受试者免疫。在一些实施方案中，至少一种肽是选自以下任一者的肽:SEQ ID NO: 1-4、SEQ ID N0:9-101和 SEQ ID NO: 108-112、NIKHVPGGGS (SEQ ID NO: 201)、IKHVPGGGS (SEQ ID NO:202),KHVPGGGSV (SEQ ID NO:203), HVPGGGSVQ (SEQ ID NO: 204)、VPGGGSVQ (SEQ ID NO: 205)、GffSIHSPGGGSC (SEQ ID NO: 250)、SVFQHLPGGGSC (SEQ ID NO: 251)、ANIKHVPGGGS (SEQ IDNO:144)、DAIKHVPGGGS(SEQ ID NO:146)、DNAKHVPGGGS(SEQ ID NO:149)、DNIAHVPGGGS(SEQID NO: 151)、DNIKAVPGGGS (SEQ ID NO: 159)、DNIKHAPGGGS (SEQ ID NO: 161)以及DNIKHVPGGGS (SEQ ID NO: 171) ?在一个实施方案中，肽选自SEQ ID N0:l_4。在另一实施方案中，肽是SEQ ID N0.108。在一个实施方案中，肽是GWSIHSPGGGSC(SEQ ID NO: 250) ?在某些实施方案中，肽是SVFQHLPGGGSC (SEQ ID N0:251)。在某些实施方案中，肽选自SEQID N0:270(TENLKHQPGGGK) ；SEQ ID NO:271(KHQPGGG)、SEQ ID NO:272(HQPGGG) ；SEQ ID N0:275(ENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGS), SEQ ID NO:276(KHVPGGG)、 SEQID NO:277(HVPGGG)、SEQ ID NO:280(DNIKHVPGGGSVQIVYKPV), SEQ ID NO:281(HHKPGGG)、SEQ ID NO:282 (HKPGGG)和 SEQ ID NO: 283 (THVPGGG)。在其它实施方案中，肽选自 SEQ IDNO:272(HQPGGG)和 SEQ ID NO:277(HVPGGG)。
[0201]也提供一种分离DC8E8或分离能够与DC8E8竞争结合tau蛋白的抗体的方法，所述方法包括使DC8E8或所述抗体与如由本发明提供的肽和/或化合物接触。
[0202]在相关实施方案中，本发明提供一种针对受试者中存在阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变，或针对确定受试者显现阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的风险来诊断或筛选受试者的方法，所述方法包括:
[0203]a)使所述受试者或所述受试者的细胞、组织、器官、流体或任何其它样本与有效量的至少一种如由本发明提供的抗体接触；以及
[0204] b)确定包含病理性tau蛋白和所述抗体的复合物的存在，其中存在所述复合物是对与存在病理性tau蛋白相关的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的诊断。
[0205]在某些实施方案中，本发明提供一种针对阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的存在、进展、消退或稳定化，或针对确定受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的阶段来监测受试者的方法，所述方法包括:
[0206]a)使所述受试者、或所述受试者的细胞、组织、器官、流体或任何其它样本与有效量的至少一种如由本发明的至少一个实施方案提供的抗体接触(例如施用)；以及
[0207]b)确定包含病理性tau蛋白和所述抗体的复合物的存在和/或特征，其中存在所述复合物是对与存在病理性tau蛋白相关的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的诊断。
[0208]在针对阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的存在、进展、消退或稳定化，或针对确定受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的阶段来监测受试者的方法的一些实施方案中，抗体、肽和/或化合物是静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、鼻内、脑室内、鞘内或以气雾剂形式施用。在一些实施方案中，各肽和/或化合物的有效量是每剂至少I μ g、每剂至少?ο μ g、每剂至少100 μ g。在一些实施方案中，各肽和/或化合物的有效量是在佐剂存在下每剂至少10 μ g,以及在不存在佐剂下每剂至少100 μ g。在一些实施方案中，历经至少6个月的时期以多次剂量施用至少一种肽或化合物。
[0209]根据一相关实施方案，本发明提供一种治疗受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变或预防其进展的方法，所述方法包括与至少一种选自以下的组合药剂组合向所述受试者施用有效量的如由本发明提供的至少一种抗体和/或至少一种肽和/或至少一种化合物:乙酰胆碱酯酶抑制剂、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂、过渡金属螯合剂、生长因子、激素、非类固醇消炎药物(NSAID)、抗氧化剂、脂质降低剂、选择性磷酸二酯酶抑制剂、tau蛋白聚集抑制剂、蛋白质激酶抑制剂、热休克蛋白抑制剂、抗淀粉状蛋白被动和王动免疫剂、抗淀粉状蛋白聚集抑制剂和分泌酶抑制剂。在一些实施方案中，所述方法能够减轻运动损伤、提高运动功能、减轻认知损伤、提高认知功能或能够实现其组合效果。
[0210]在一相关实施方案中，本发明提供一种改善至少一种与受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变相关的症状的方法，所述方法包括与至少一种选自以下的组合药剂组合向所述受试者施用有效量的如由本发明提供的至少一种抗体、至少一种肽和/或至少一种化合物:乙酰胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂、过渡金属螯合剂、生长因子、激素、非类固醇消炎药物(NSAID)、抗氧化剂、脂质降低剂、选择性磷酸二酯酶抑制剂、tau蛋白聚集抑制剂、蛋白质激酶抑制剂、热休克蛋白抑制剂、抗淀粉状蛋白被动和主动免疫试剂、抗淀粉状蛋白聚集抑制剂和分泌酶抑制剂。
[0211]在治疗、预防或改善至少一种与受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变相关的症状的方法的一些实施方案中，所述方法包括与至少一种选自以下的组合药剂组合向人患者施用有效量的如由本发明提供的至少一种抗体、至少一种肽和/或至少一种化合物和/或增大免疫反应的佐剂:乙酰胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂、过渡金属螯合剂、生长因子、激素、非类固醇消炎药物(NSAID)、抗氧化剂、脂质降低剂、选择性磷酸二酯酶抑制剂、tau蛋白聚集抑制剂、蛋白质激酶抑制剂、热休克蛋白抑制剂、抗淀粉状蛋白被动和王动免疫剂、抗淀粉状蛋白聚集抑制剂和分泌酶抑制剂；其中所述方法实现包含针对病理性tau蛋白的抗体的免疫反应，由此治疗至少一种与所述人患者的AD相关的症状、预防其进展或改善所述至少一种症状。
[0212]在治疗、预防或改善至少一种与受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变相关的症状的方法的一些实施方案中，在施用如由本发明提供的抗体、肽和/或化合物之前、与之同时、或之后施用组合药剂。
[0213]在一相关实施方案中，本发明也提供一种医药组合物，所述医药组合物包含药学上可接受的载体和/或稀释剂；和
[0214]a)如由本发明提供的抗体；和/或
[0215]b)如由本发明提供的肽；和/或
[0216]c)如由本发明提供的化合物；
[0217]以及至少一种选自以下的组合药剂:乙酰胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂、过渡金属螯合剂、生长因子、激素、非类固醇消炎药物(NSAID)、抗氧化剂、脂质降低剂、选择性憐Ife酷酶抑制剂、tau蛋白聚集抑制剂、蛋白质激酶抑制剂、热休克蛋白抑制剂、抗淀粉状蛋白被动和主动免疫试剂、抗淀粉状蛋白聚集抑制剂和分泌酶抑制剂。在一些实施方案中，抗体是DC8E8。在某些实施方案中，抗体包含至少一个来自DC8E8的⑶R。在一些实施方案中，抗体包含至少一个来自DC8E8的可变链(轻链或重链)。在某些实施方案中，可使用人源化或人形式的DC8E8。在一些实施方案中，至少一种肽选自以下任一者:SEQ ID NO: 1-4、SEQ ID NO:9-101 和 SEQ ID NO: 108-112、NIKHVPGGGS (SEQ ID N0:201)、IKHVPGGGS (SEQ ID NO: 202)、KHVPGGGSV (SEQ ID NO:203),HVPGGGSVQ(SEQ ID NO:204)、VPGGGSVQ(SEQ ID NO:205)、GWSIHSPGGGSC(SEQ ID NO:250)、SVFQHLPGGGSC (SEQ ID NO: 251)、ANIKHVPGGGS (SEQ ID NO: 144)、DAIKHVPGGGS (SEQ IDNO:146)、DNAKHVPGGGS(SEQ ID NO:149)、DNIAHVPGGGS(SEQ ID NO:151)、DNIKAVPGGGS(SEQID NO: 159)、DNIKHAPGGGS (SEQ ID NO: 161)以及 DNIKHVPGGGS (SEQ ID NO: 171)。在一个实施方案中，肽选自SEQ ID NO: 1-4。在另一实施方案中，肽是SEQ ID N0.:108。在一个实施方案中，肽是GWSIHSPGGGSC (SEQ ID NO:250) ?在某些实施方案中，肽是SVFQHLPGGGSC (SEQID NO: 251)。在某些实施方案中，肽选自 SEQ ID NO: 270 (TENLKHQPGGGK) ；SEQ IDNO:271(KHQPGGG)、SEQ ID NO:272(HQPGGG) ；SEQ ID NO:275(ENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGS)、SEQ ID NO: 276 (KHVPGGG)、SEQ ID NO: 277 (HVPGGG)、SEQ IDNO:280(DNIKHVPGGGSVQIVYKPV), SEQ ID NO:281(HHKPGGG)、 SEQ ID NO:282(HKPGGG)和SEQ ID NO:283 (THVPGGG)。在其它实施方案中，肽选自 SEQ ID NO: 272 (HQPGGG)和 SEQ IDNO:277(HVPGGG)。
[0218]实施方案的其它目标和优势将部分地阐述于随后描述中，且部分地将根据描述显而易知，或可通过实施实施方案加以认识。实施方案的目标和优势将借助于随附权利要求中特别指出的要素和组合来实现和获得。
[0219]应了解上文一般性描述与下文详述两者均仅具有示例性和说明性且不限制如所要求的实施方案。
[0220]并入本说明书中且构成本说明书的一部分的【专利附图】

【附图说明】若干实施方案且连同描述一起用于说明实施方案的原理。本文论述的公布仅因其公开内容在本申请的提交日期之前而提供。它们都出于所有目的以引用的方式整体并入本文。本文中没有内容应解释为承认本发明由于先前发明而无权先于所述公布。此外，提供的公布日期可不同于可需要独立确认的实际公布日期。
[0221]附图简述
[0222]图1:人tau蛋白的六种亚型的示意图。
[0223]图2:人tau蛋白(2N4R)的示意性功能图。图2将“VQIINK”和“VQIVYK”分别公开为 SEQ ID NOl 16 和 115。
[0224]图3:DC8E8可变区的核苷酸和氨基酸序列及其与最密切小鼠生殖系序列的比对。所述图显示核苷酸(SEQ ID NO: 165) (A)和氨基酸(按照出现顺序分别是SEQ ID N0141(用于可变轻链)和117-119 (用于其CDR的各者，根据IMGT) ; (B) DC8E8的可变轻(VL)链区域的序列(比对按照出现顺序分别公开SEQ ID N0166和168);和(C)DC8E8的可变轻链V基因与最密切小鼠生殖系序列IGKV8-2f01的比对(比对按照出现顺序分别公开SEQ ID NO 166和167 ;随后是DC8E8的VL J基因(SEQ ID NO: 168)与最密切小鼠J基因IGKJ1*01 (SEQ IDNO: 169)的比对)。所述图显示DC8E8的可变重链的核苷酸(SEQ ID NO: 170)(在D中)和氨基酸序列及其三个CRD (按照出现顺序分别是SEQ ID N0171和120-122)序列。在(F)中显示DC8E8的以下比对:首先，DC8E8的可变重(VH)链V基因(SEQ ID N0172)与最密切小鼠生殖系序列IGHV1-81*01(SEQ ID N0172);其次，DC8E8的可变重(VH)链D基因(SEQ IDN0174)与最密切小鼠生殖系序列IGHD2-14*01(SEQ ID N0175);以及最后，DC8E8的可变重(VH)链J基因(SEQ ID N0176)与最密切小鼠生殖系序列IGHJ4*01 (SEQ ID N0177)。也显示DC8E8K轻链恒定区的序列(SEQ ID NO: 178) (G)和重链恒定区的序列(SEQ ID NO: 179)(H)。在蛋白质序列(B)和(E)中对互补决定区(CDR)加下划线且根据MGT编号系统加以鉴定。
[0225]图4:DC8E8可变轻(VL)链序列(分别是SEQ ID NO 166 (V基因)和168 (J基因))与最密切人生殖系VL基因(按照出现顺序分别是SEQ ID N0180-181)的比对。
[0226]图5:DC8E8可变重(V H)链序列(分别是用于V、D和J基因的SEQ ID N0172U74和176)与最密切人生殖系VH基因(按照出现顺序分别是SEQ ID N0182-183和185)的比对。
[0227]图6:使用ELISA通过tau蛋白缺失突变体对DC8E8的表位定位。(A)用于DC8E8表位定位的tau蛋白的示意图，和(B)它们的氨基酸序列(按照出现顺序分别是SEQ IDN0186-197、102、104 和 198-199)。(C)ELISA 读数。DC8E8 识别以下 tau 蛋白:Δ 358-441,Λ 421-441、Λ 134-168、Λ 1-220、Λ1_126、2N4R、2N3R、Δ (1-296 ；392-441)和 Δ (1-150 ；392-441)/4R。DC8E8 不识别以下 tau 蛋白:Λ 222-427、Λ 306-400、Λ 228-441、Λ 300-312、Λ 257-400、Λ 137-441、Λ 283-441。
[0228]图7:㈧和⑶分别是用于表位定位的合成肽(按照出现顺序分别是SEQ IDΝ0206、207、208、2、210、211、212、3、214、215、4、217、26、219、36、221、222、109 和 88)及其序列的示意图。(C)通过ELISA用合成肽对DC8E8的表位定位。⑶tau蛋白内DC8E8能够结合的表位的示意图。DC8E8能够结合四个单独结合区的的任一者，其中所述结合区各自是名为表位I至4的单独表位。四个表位各自分别位于tau蛋白的第I (I号表位)、第2 (2号表位)、第3 (3号表位)和第4 (4号表位)重复结构域内。如所不，四个DC8E8表位各自分别涵盖在以下氨基酸序列的各者之一内:分别是267-KHQPGGG-273(SEQ ID N0:98)(在tau蛋白的第I重复结构域内)、298-KHVPGGG-304(SEQ ID NO:99)(在tau蛋白的第2重复结构域内)、329-HHKPGGG-335(SEQ ID NO: 100)(在tau蛋白的第3重复结构域内)和
361-THVPGGG-367(SEQ ID NO: 101)(在 tau 蛋白的第 4 重复结构域内)。
[0229]图8: (A)人tau蛋白氨基酸序列(SEQ ID NO: 225)与来自其它物种的tau蛋白序列(按照出现顺序分别是SEQ ID N0226-245)的比对。全长人tau蛋白用于比对；仅显示来自比对的人tau蛋白的氨基酸265-368。对包含人tau蛋白和所比对序列上的四个单独DC8E8表位的区域加框且用粗体显示。(B)显示6种tau肽(按照出现顺序分别是SEQ ID N0201-205 和 200)与 tau Λ (1-150 ;392_441)/4R(SEQ ID NO: 199)竞争结合抗体DC8E8的能力的竞争ELISA，所述抗体DC8E8能够识别tau蛋白-tau蛋白聚集中涉及的至少一种 tau 表位，(C)显示 7 种 tau 肽(SEQ ID N0144、146、149、151、159、161 和 171)与tau Λ (1-150 ;392-441)/4R竞争结合抗体DC8E8的能力竞争ELISA，所述抗体DC8E8能够识别tau蛋白-tau蛋白聚集中涉及的至少一种tau表位。
[0230]图9:(A).用以表征DC8E8与tauΛ (1-150 ;392_441)/4R 和 2N4R 的结合的表面等离子体共振(SPR)。(B).用以表征DC8E8与tau Δ (1-150 ;392_441) /3R和2N3R的结合的表面等离子体共振(SPR)。
[0231]图10: (A).DC8E8 结合 tau Λ (1-150 ;392_441)/4R 和 tau 蛋白 2N4R 的缔合和解离速率，如通过 SPR 所测定。(B).DC8E8 结合 tau Λ (1-150 ;392_441)/3R 和 tau 蛋白 2N3R 的缔合和解离速率，如通过SPR所测定。用于测量中的浓度指示在图中，虚线是通过电脑程序BIA评估软件4.1 (Biacore AB)根据用于动力学参数计算的测量数据加以内插。
[0232]图11:单克隆抗体DC8E8能够区分临床前AD、临床初期AD和充分发展的末期AD。DC8E8显示对处于人临床前AD布拉克氏第I阶段的早期阶段(tau蛋白单体、二聚体)的病理性tau蛋白的染色。(A).抗体识别以下阶段:病理性tau蛋白寡聚物(箭号)和病理性tau蛋白聚合物(缠结)(箭头)。(B).在充分发展的阿尔茨海默病(末期-布拉克氏第VI阶段)中，DC8E8主要识别呈神经原纤维缠结(箭头)、神经炎斑块(在圆圈内部)和神经炎线(在五边形内部)形式的病理性tau蛋白聚合物(C).标尺:100 μ m。单克隆抗体DC8E8识别阿尔茨海默病中的所有发展阶段的缠结构造(D).DC8E8识别早期发展阶段的缠结构造-单体、二聚体和早期寡聚阶段(Dl)、和晚期寡聚缠结前阶段(D2)以及晚期发展阶段的病理性tau蛋白聚合物-细胞内(D3)和细胞外神经原纤维缠结(D4)。箭头指示在金字塔形海马神经元内部的小寡聚tau蛋白聚集体(Dl)。标尺:10μπι
[0233]图12: (A)单克隆抗体DC8E8识别转基因大鼠SHR72中的神经原纤维变性。DC8E8识别tau蛋白寡聚阶段(箭号)和缠结阶段(箭头)的tau蛋白神经变性。此外，抗体与位于轴索纤维中的错误折叠tau蛋白(在矩形内部)反应。(B)在年龄匹配的对照大鼠脑中，抗体不显示神经元内染色。标尺:20μπι。与人阿尔茨海默病中一样，DC8E8也识别转基因大鼠脑(SHR72)中的所有发展阶段的缠结构造。DC8E8识别早期发展阶段的缠结构造-单体、二聚体和早期寡聚阶段(C)、和晚期寡聚缠结前阶段(D)以及晚期发展阶段的病理性tau蛋白聚合物-细胞内(E)和细胞外神经原纤维缠结(丢失核)(F)。(C)中的箭头指示在神经元内部的小寡聚tau蛋白聚集体(A)。标尺:10μπι
[0234]图13: (A)DC8E8 对表达 tau Λ (1-150 ;392_441)/3R 的 SHR24转基因大鼠的皮质中的神经原纤维缠结的染色。(B)DC8E8识别表达tau Λ (1-150 ;392_441)/4R的转基因大鼠SHR72的脑干中的神经原纤维缠结。用甲基绿对组织切片进行对比染色。箭号-神经原纤维缠结。标尺:50μηι
[0235]图14:单克隆抗体DC8E8识别自转基因大鼠模型SHR24(同型皮质)和阿尔茨海默病患者(包括海马、内嗅和颞叶皮质的异型皮质组织)分离的脑样本中的可溶性tau蛋白⑷与不溶性tau蛋白⑶两者。箭头-人截短tau蛋白，箭号-大鼠内源性tau蛋白。对于可溶性tau蛋白部分,每个泳道装载15 μ g蛋白质。对于不溶性tau蛋白部分,将团块溶解于体积是IS的1/50的Ix十二烷基硫酸钠(SDS)样本装载缓冲液中，装载与在可溶性部分的情况下相同的体积。单克隆抗体DC8E8识别自阿尔茨海默病患者(包括海马、内嗅和颞叶皮质的异型皮质组织)(C)和自转基因大鼠模型SHR72(脑干)(D)分离的脑样本中的可溶性tau蛋白㈧与不溶性tau蛋白⑶两者。箭号-生理性人tau蛋白㈧和大鼠内源性ta u蛋白(B)，箭头-在SHR72大鼠的神经元中以转基因形式表达的人截短tau蛋白(tau Λ (1-150 ；392-441)/4R) (D)。对于可溶性tau蛋白部分，每个泳道装载15 μ g总蛋白。对于不溶性tau蛋白部分，将团块溶解于体积是IS的1/50的Ix十二烷基硫酸钠(SDS)样本装载缓冲液中，装载与在可溶性部分的情况下相同的体积
[0236]图15:DC8E8在基于荧光的tau蛋白纤维化测定中抑制病理性tau蛋白_tau蛋白相互作用。TauA (1-150 ;392_441)/4R(图 15A)或 tau Λ (1-296 ;392_441)/4R(图 15B)由肝素诱导来经受构象变化和纤维化，如通过硫代黄素T荧光所测量JHSmAb DC8E8、Rab50和DCll阻止病理性构象变化的能力。
[0237]图16:通过使用HRP缀合的mAb DC25进行免疫印迹来分析DC8E8阻止由截短tau蛋白tau Λ (1-296 ;392_441)/4R形成tau蛋白二聚体、三聚体和寡聚物的抑制潜力。
[0238]图17:由小神经胶质细胞BV2细胞对Tau Λ (1-150 ;392_441)/4R的摄取和降解。单独(I μ Μ)或与单克隆抗体 DC8E8(ly MtauA (1-150 ;392_441)/4R+1 μ MDC8E8)复合添加Tau Λ (1-150 ;392_441)/4R至小鼠BV2细胞中。在孵育各种时长(2、4、6和12小时)之后，用酸洗涤BV2细胞，提取细胞蛋白质且通过用全tau蛋白抗体DC25进行蛋白质印迹来分析内化tau蛋白的水平。对细胞溶解产物中(细胞内tau蛋白)(A)和细胞培养基中(细胞外tau蛋白)(B)的TauA (1-150 ;392_441)/4R进行免疫标记。用抗小鼠HRP缀合的抗体观察DC8E8抗体。每个泳道装载20 μ g蛋白质。
[0239]图18:如通过ELISA测试的DC8E8在37°C下的稳定性(保存期限)。在储存数月(1、2、3和4个月)之后，抗体识别tau Λ (1-150 ;392_441)/4R。棒条代表如所指示的抗体连续稀释度。一式三份进行测量。
[0240]图19:DC8E8识别且靶向人阿尔茨海默病的脑组织中的错误折叠(患病)tau蛋白。(A)用全tau蛋白DC25抗体进行的蛋白质印迹分析:
[0241]I)自人阿尔茨海默病的脑组织生物化学提取病理性tau蛋白(Greenberg和Davies, 1989)；
[0242]2)模拟抗体(Rab50)不识别tau蛋白；
[0243]3)DC8E8识别且靶向人阿尔茨海默病的脑组织中的错误折叠(患病)tau蛋白；以及
[0244](B)丽春红S染色:2)、3)用于实验中的抗体量(Rab50和DC8E8)的控制。
[0245]图20:DC8E8识别且靶向AD的SHR72大鼠模型的脑组织中的错误折叠(患病)tau蛋白。(A)用全tau蛋白DC25抗体进行的蛋白质印迹分析:
[0246]4)自人阿尔茨海默病的脑组织生物化学提取病理性tau蛋白(Greenberg和Davies, 1989)；
[0247]5)模拟抗体(Rab50)不识别tau蛋白；
[0248]6)DC8E8识别且靶向人阿尔茨海默病的脑组织中的错误折叠(患病)tau蛋白；以及
[0249](B)丽春红S染色:2)、3)用于实验中的抗体量(Rab50和DC8E8)的控制。
[0250] 图21:在体内，DC8E8靶向转基因大鼠(SHR72)的脑中的病理性形式的tau蛋白且将病理性tau蛋白自脑转运至外周血液中。(A)DC8E8处理的动物的血清中的DC8E8抗体的浓度分别达到466、200和273 μ g/ml。(B)观察到DC8E8_tau蛋白复合物自脑体内转运至外周血液中。病理性tau蛋白达到平均血清浓度350pg/ml。由DC8E8达成的tau蛋白主动转运消除来自脑的病理性tau蛋白。另一方面，在用识别狂犬病病毒的模拟抗体(Rab50) (Macikova等，1992)处理的动物的血清中未检测到tau蛋白。通过Innotest hTAUELISA (Innogenetics, Belgium)测定处理的动物的血清中的tau蛋白的浓度。图显示连同标准平均误差(SEM)的平均值。大鼠A-C的8个棒条各自指示不同连续血清稀释度(从左至右，自100倍至12，800倍)。
[0251]图22:DC8E8单克隆抗体自转基因大鼠(SHR72)的脑移除病理性tau蛋白。(A)相较于模拟处理的动物(右侧版面)，脑内施用DC8E8(左侧版面)自神经元移除(箭号)病理性tau蛋白。(B)对模拟处理的动物和DC8E8处理的动物的神经元中的病理性tau蛋白的量的定量显示用DC8E8处理的动物中的病理性tau蛋白的量根本性降低(p〈0.0001)。
[0252]图23:在细菌中表达的单克隆抗体DC8E8的重组scFv片段(scDC8E8v)识别病理性错误无序tau Λ (1-150 ;392-441)/4R。(A)对对照BL21细菌和具有scDC8E8v表达质粒的细菌的通过10% SDS-PAGE加以分离的粗溶解产物的考马斯亮蓝染色:泳道1，对照BL21细菌的粗溶解产物；泳道2，表达scDC8E8v的BL21细菌的粗溶解产物；和泳道M，蛋白质分子量标记物(Page Ruller预先染色蛋白质阶梯#SM0672, Fermentas)。(B)丽春红S染色的含有tau蛋白的硝酸纤维素膜:泳道1，tauA (1-150 ;392_441)/4R，500ng ;泳道 2，tau Λ (1-150 ;392_441)/4R，250ng ;泳道 3，tau Δ (1-150 ;392_441)/4R，125ng ;泳道4tau Δ 228-441, 50ng ;和泳道M,蛋白质分子量标记物。(C)蛋白质印迹/含有tau蛋白的硝酸纤维素膜，所述tau蛋白如B)中加以装载，用来自表达scDC8E8v的细菌的溶解产物检测。⑶蛋白质印迹/含有tau蛋白的硝酸纤维素膜，所述tau蛋白如B)中加以装载，用阴性对照细菌溶解产物显色。
[0253]图24:单克隆抗体DC8E8的重组scFv片段(scDC8E8v)展现与DC8E8抗体-选择性识别tau Λ (1-150 ;392-441)/4R类似的tau蛋白结合性质。(A)通过SPR测定scDC8E8v结合AD tau Λ (1-150 ;392_441)/4R的动力学亲和力。⑶通过SPR测定scDCSESv结合tau蛋白2N4R的动力学亲和力。(C) scDC8E8v结合的速率常数(k缔合和k解离)和缔合平衡常数。
[0254] 图25:鉴定scDC8E8v结合位点中影响scDC8E8v/DC8E8识别错误无序tau蛋白的残基。(A)在自具有scDC8E8v表达质粒(wt)及其突变形式的BL21细菌的粗溶解产物分离蛋白质之后，聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝染色。各编号泳道对应于相应克隆编号(例如泳道2对应于2-VL-R33A)。表达的单链蛋白质由星号指示。对照细菌培养物不表达单链蛋白质。(B)丽春红S染色的含有tau蛋白的硝酸纤维素膜:泳道I, tau Δ (1-150 ；392-441)/4R，500ng ；泳道 2，tauΔ (1-150 ;392_441)/4R，250ng ；泳道 3，tauΔ (1-150 ；392-441)/4R, 125ng。(C)对含有tau蛋白的硝酸纤维素膜的蛋白质印迹,所述tau蛋白如B)中加以装载，用来自表达scDC8E8v(wt凝胶)或其一种突变形式(印迹1-VL-N31A至22-VH-G102A)的细菌的溶解产物检测。
[0255]图26: (A)在残基261与373之间的放大区域(SEQ ID N0.246)内具有阴影框中所示的分别为SEQ ID N098-101的四个DC8E8表位的tau蛋白2N4R(SEQ ID NO: 102)的示意图。(I)用作主动疫苗或用于纯化DC8E8抗体等的重叠tau蛋白源性肽免疫原的示意图，所述免疫原包含由DC8E8抗体识别的tau蛋白的四个区域的至少一者；(2)具有任选部分的其它修饰和设计肽和化合物的一般可能性。⑶对自用肽SEQ ID N01-8和108处理的转基因大鼠(3册72，表达七&11八(1-150 ；392-441)/4R)的脑干制备的不溶性tau蛋白的免疫印迹分析的概述。用各种mAb进行免疫印迹分析以确定具有以下AD相关表位的不溶性tau蛋白的降低:mAb DC25 (tau 蛋白 347-353)、mAb DC217 (tau 蛋白 pThr217)、mAb DC209 (tau 蛋白 pThr231)、mAb AT8 (tau 蛋白 pSer202/pThr205)和 mAb AT270 (tau 蛋白 pThrl81)。(C)对自用与佐剂组合的 tau 蛋白 251-PDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINK-280(SEQ ID NO:1)处理的大鼠和自用单独佐剂处理的对照大鼠的脑干制备的不溶性tau蛋白的密度计量免疫印迹分析。平均值与标准平均误差一起呈现。
[0256]图 27:对用 tau 蛋白 251-PDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINK-280 (SEQ ID NO:1)处理的模拟AD的转基因大鼠(SHR72)的神经行为评估。在第5剂免疫原之后10天，转基因大鼠用于行为测试。图代表平均值土SEM。所有统计数据都是使用非参数曼-惠特尼U检验获得。(A)横杆行走测试(3.5横杆)。(B)后肢滑动的次数(3.5横杆)。(C)神经量表。
[0257]图28:用tau肽SEQ ID NO:1对转基因大鼠SHR72疫苗接种导致神经原纤维缠结(NFT)载荷降低49%。抗体AT8用于评估转基因大鼠SHR72的脑组织中的NFT。
[0258]图 29:对自用 tau 蛋白 256-VKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLS-285 (SEQ IDNO:2)连同佐剂处理的转基因大鼠(SHR72)或用单独佐剂处理的对照大鼠的脑干制备的不溶性tau蛋白的定量免疫印迹分析。平均值与标准平均误差一起呈现。
[0259]图 30:对用 tau 蛋白 256-VKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLS-285 (SEQ ID NO: 2)处理的转基因大鼠(SHR72)的神经行为评估。所有统计数据都是使用非参数曼-惠特尼U检验获得。(A)横杆行走测试(3.5横杆)。(B)后肢滑动的次数(3.5横杆)。(C)神经量表。
[0260]图31:用tau肽SEQ ID NO: 2对转基因大鼠SHR72疫苗接种导致神经原纤维缠结(NFT)载荷降低60%。抗体AT8用于评估转基因大鼠SHR72的脑组织中的NFT。
[0261]图 32:对自用具有磷酸化 Ser262 的 tau 蛋白 256-VKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLS-285 (SEQ ID NO: 2)连同佐剂处理的转基因大鼠(SHR72)或用单独佐剂处理的对照大鼠的脑干制备的不溶性tau蛋白的定量免疫印迹分析。平均值与标准平均误差一起呈现。
[0262]图33:用tau肽SEQ ID NO:2/磷酸基对转基因大鼠SHR72疫苗接种导致神经原纤维缠结(NFT)载荷降低77%。抗体AT8用于评估转基因大鼠SHR72的脑组织中的NFT。
[0263]图 34:对自用 tau 蛋白 259-KIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQ-288 (SEQ IDNO:3)连同佐剂处理的转基因大鼠(SHR72)或用单独佐剂处理的对照大鼠的脑干制备的不溶性tau蛋白的定量免疫印迹分析。平均值与标准平均误差一起呈现。
[0264]图 35:对用 tau 蛋白 259-KIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQ-288 (SEQ ID NO: 3)处理的转基因大鼠(SHR72)的神经行为评估。所有统计数据都是使用非参数曼-惠特尼U检验获得。(A)横杆行走测试(3.5横杆)。(B)后肢滑动的次数(3.5横杆)。(C)神经量表。
[0265]图36:用tau肽SEQ ID NO: 3对转基因大鼠SHR72疫苗接种导致神经原纤维缠结(NFT)载荷降低58%。抗体AT8用于评估转基因大鼠SHR72的脑组织中的NFT。
[0266]图 37:对自用 tau 蛋白 275-VQIINKKLDL SNVQSKCGSKDNIKHVPGGG-304(SEQ IDNO:4)处理的转基因大鼠(SHR72)或用单独佐剂处理的对照大鼠的脑干制备的不溶性tau蛋白的定量免疫印迹分析。平均值与标准平均误差一起呈现。
[0267]图38.用tau肽SEQ ID N0:4对转基因大鼠SHR72疫苗接种显示神经行为参数中度提高。(A)横杆行走测试(3.5cm横杆)。(B)后肢滑动的次数(3.5cm横杆)。(C)神经量表。数据是以平均值连同标准平均误差一起的形式呈现。
[0268]图39:用tau肽SEQ ID N0:4对转基因大鼠SHR72疫苗接种导致神经原纤维缠结(NFT)载荷降低66%。抗体AT8用于评估转基因大鼠SHR72的脑组织中的NFT。
[0269]图 40:对自用 tau 蛋白 201-GSPGTPGSRSRTPSLPTPPT REPKKVAVVR-230/ 在位置 217处携带磷酸化苏氨酸(SEQ ID NO:5)连同佐剂免疫的转基因大鼠(SHR72)或用单独佐剂处理的对照大鼠的脑干制备的不溶性tau蛋白的免疫印迹分析。平均值与标准平均误差一起呈现。
[0270]图 41:对用 tau 蛋白 201-GSPGTPGSRSRTPSLPTPPT REPKKVAVVR-230/在位置 217 处携带磷酸化苏氨酸(SEQ ID NO:5)处理的转基因大鼠(SHR72)的神经行为评估。所有统计数据都是使用非参数曼-惠特尼U检验获得。(A)横杆行走测试(3.5横杆)。(B)后肢滑动的次数(3.5横杆)。(C)神经量表。
[0271]图42:用tau肽SEQ ID NO: 5对转基因大鼠SHR72疫苗接种显示对神经原纤维缠结(NFT)载荷无影响。抗体AT8用于评估转基因大鼠SHR72的脑组织中的NFT。
[0272]图43:对自用在位置396和404处携带磷酸化丝氨酸残基的tau蛋白379-RENAKAKTDHGAEIVYKSPff S⑶TSPRHL-408 (SEQ ID NO: 6)和佐剂免疫的转基因大鼠(SHR72)或用单独佐剂处理的对照大鼠的脑干制备的不溶性tau蛋白的免疫印迹分析。平均值与标准平均误差一起呈现。
[0273]图44:对用在Ser396/Ser404处磷酸化的tau蛋白SEQ ID NO:6处理的转基因大鼠(SHR72)的神经行为评估。所有统计数据都是使用非参数曼-惠特尼U检验获得。(A)横杆行走测试(3.5横杆)。(B)后肢滑动的次数(3.5横杆)。(C)神经量表。
[0274]图45:用tau肽SEQ ID N0:6对转基因大鼠SHR72疫苗接种显示神经原纤维缠结(NFT)载荷不降低。抗体AT8用于评估转基因大鼠SHR72的脑组织中的NFT。
[0275]图46:对自用携带在位置202处的磷酸化丝氨酸残基和在205处的磷酸化苏氨酸残基的 tau 蛋白 181-TPPSSGEPPKS⑶RSGYSSPGSPGTPGSRS-210(SEQ ID NO: 7)连同佐剂免疫的大鼠(SHR72)或用单独佐剂处理的对照大鼠的脑干制备的不溶性tau蛋白的免疫印迹分析。平均值与标准平均误差一起呈现。
[0276]图47:对用携带在位置202处的磷酸化丝氨酸残基和在205处的磷酸化苏氨酸残基的 tau 蛋白 181-TPPSSGEPPKS⑶RSGYSSPGSPGTPGSRS-210(SEQ ID NO:7)处理的 SHR72 大鼠的神经行为评估。所有统计数据都是使用非参数曼-惠特尼U检验获得。(A)横杆行走测试(3.5横杆)。(B)后肢滑动的次数(3.5横杆)。(C)神经量表。
[0277]图48:用tau肽SEQ ID NO: 7对转基因大鼠SHR72疫苗接种显示对神经原纤维缠结(NFT)载荷无影响。抗体AT8用于评估转基因大鼠SHR72的脑组织中的NFT。
[0278]图 49:对自用 tau 蛋白 300_VPGGGSVQIVYKPVDLSK_317 (SEQ ID NO:8)连同佐剂免疫的大鼠(SHR72)或用单独佐剂处理的对照大鼠的脑干制备的不溶性tau蛋白的免疫印迹分析。平均值与标准平均误差一起呈现。
[0279]图 50:对用 tau 蛋白 300_VPGGGSVQIVYKPVDLSK_317 (SEQ ID NO:8)处理的转基因AD大鼠(SHR72)的神经行为评估。所有统计数据都是使用非参数曼-惠特尼U检验获得。(A)横杆行走测试(3.5横杆)。(B)后肢滑动的次数(3.5横杆)。(C)神经量表。
[0280]图51:用tau肽SEQ ID N0:8对转基因大鼠SHR72疫苗接种显示神经原纤维缠结(NFT)载荷不降低。抗体AT8用于评估转基因大鼠SHR72的脑组织中的NFT。
[0281]图52:用tau肽(SEQ ID NO: 108)对转基因大鼠SHR72疫苗接种统计显著降低不溶性病理性tau蛋白(p〈0.001)。自用tau肽免疫的转基因大鼠SHR72的脑提取病理性不溶性tau蛋白且通过免疫印迹加以分析。平均值与标准平均误差一起呈现。
[0282]图53:用tau肽(SEQ ID NO: 108)对转基因大鼠SHR72疫苗接种统计显著提高神经行为参数(P〈0.05)。(A)横杆行走测试(3.5cm横杆)。(B)后肢滑动的次数(3.5cm横杆)。(C)神经量表。数据是以平均值连同标准平均误差一起的形式呈现。
[0283]图54:用tau肽(SEQ ID NO: 108)对转基因大鼠SHR72疫苗接种使神经原纤维缠结(NFT)载荷降低60%。抗体AT8用于评估转基因大鼠SHR72的脑组织中的NFT。
[0284]图 55:由用肽 tau 蛋白 275-VQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGG-304(SEQ IDNO: 4)免疫转基因大鼠(SHR72)产生的抗血清的ELISA显示在抗血清结合人病理性tau Λ (1-150 ;392-441)/4R和人生理性tau蛋白2N4R方面存在差异。
[0285]图56:用tau肽SEQ ID NO: 108对转基因大鼠SHR72疫苗接种诱导形成优先结合病理性tau蛋白的抗体。用ELISA测量的几何平均抗体效价显示由用tau肽SEQ IDNO: 108疫苗接种引发的抗体展现对免疫原(SEQ ID NO: 108肽)和对病理性tau Λ (1-150 ；392-441)/4R的最高结合活性。用作对照的生理性tau蛋白(tau2N4R)更微弱地被识别。
[0286]图57:用tau肽SEQ ID NO: 108对转基因大鼠SHR72疫苗接种优先诱导形成对病理性tau蛋白具有特异性的IgG抗体同种型。显示由tau肽SEQ ID N0:108诱导的抗体的同种型分布。1:800 稀释来自个别大鼠的血清且通过ELISA分析对病理性tauA (1-150 ；392-441)/4R的结合活性。
[0287]图 58:对由用肽 tau 蛋白 275-VQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGG-304 (SEQ IDNO: 4)免疫SHR72大鼠产生的抗血清结合人tau Λ (1-150 ;392_441)/4R和人tau蛋白2N4R的SPR亲和力测定。
[0288]图 59:用由用 tau 蛋白 275-VQIINKKLDL SNVQSKCGSKDNIKHVPGGG-304 (SEQ IDNO:4)免疫转基因大鼠(SHR72)产生的大鼠抗体对来自人AD患者的脑的免疫组织化学染色。(A)抗血清识别阿尔茨海默病脑海马中的神经原纤维病变。(B)较大放大倍数显示神经原纤维缠结。标尺:100 μ m(A)、10 μ m(B)。
[0289]图60:用tau肽SEQ ID NO: 108对转基因大鼠SHR72疫苗接种诱导识别来自人阿尔茨海默病脑组织的切片中的病理性tau蛋白的抗体。对3号(A)、5号(B)、6号(C)、7号(D)和8号(E)大鼠血清的代表性免疫染色显示所有测试的大鼠血清抗体都识别阿尔茨海默病患者的内嗅皮质的前α层中的神经原纤维缠结。来自仅用佐剂免疫的大鼠的汇合血清用作阴性对照(F)。使用来自内嗅皮质的连续脑组织切片。标尺:50μπι。
[0290]图61:用tau肽SEQ ID NO: 108对转基因大鼠SHR72疫苗接种诱导识别人阿尔茨海默病脑中以及转基因大鼠SHR72的脑中的病理性tau蛋白的特异性抗体。自人和大鼠脑组织提取病理性tau蛋白且通过用来自肽SEQ ID NO: 108免疫的转基因大鼠SHR72的汇合血清进行免疫印迹加以分析。血清抗体识别单体(I号、2号和3号泳道)和寡聚(2号和3号泳道)病理性tau蛋白，包括AD特征性A68病理性tau蛋白。
[0291]图62:用tau肽SEQ ID NO: 109免疫小鼠诱导对病理性tau Λ (1-150 ；392-441)/4R的结合活性统计显著高于对生理性tau蛋白2N4R的结合活性的抗体(P =0.0115)。图代表对在1:800下稀释的个别血清的ELISA结果的统计评估。平均值与标准平均误差一起显示。
[0292]图63:用tau肽SEQ ID NO: 110免疫小鼠诱导展现对病理性tau Λ (1-150 ;392-441)/4R的结合活性统计显著高于对生理性tau蛋白2N4R的结合活性的抗体(P =0.0029)。图代表对在1:800下稀释的个别血清的ELISA结果的统计评估。平均值与标准平均误差一起显示。
[0293]图64:用tau肽SEQ ID NO: 111免疫小鼠诱导展现对病理性tau Δ (1-150 ；392-441)/4R的结合活性统计显著高于对生理性 tau蛋白2N4R的结合活性的抗体(P =0.0007)。图代表对在1:800下稀释的个别血清的ELISA结果的统计评估。平均值与标准平均误差一起显示。
[0294]图65:用tau肽SEQ ID NO: 112免疫小鼠诱导展现对病理性tau Λ (1-150 ;392-441) /4R的结合活性统计显著高于对生理性tau蛋白2N4R的结合活性的抗体(p〈0.001)。图代表对在1:800下稀释的个别血清的ELISA结果的统计评估。平均值与标准平均误差一起显示。
[0295]图 66:设计治疗表位 GWSIHSPGGGSC(SEQ ID NO: 250)和 SVFQHLPGGGSC (SEQ IDN0:251)与病理性 tauA (1-150 ;392_441) 4R 竞争结合抗体 DC8E8。
[0296]图 67:设计治疗表位 GWSIHSPGGGSC(SEQ ID NO: 250)和 SVFQHLPGGGSC (SEQ IDNO: 251)诱导产生统计显著区分病理性tau Λ (1-150 ;392_441) 4R与生理性tau蛋白2N4R的抗体，如通过ELISA所测定。通过ELISA测试来自用肽250和251之一免疫的小鼠的血清(在1:3200稀释度下)中对tau蛋白:病理性tauA (1-150 ;392-441)4R和生理性tau蛋白2N4R具有特异性的抗体。
[0297]图 68:用设计治疗表位 GWSIHSPGGGSC (SEQ ID NO:250)和 SVFQHLPGGGSC (SEQ IDNO:251)免疫诱导最强健产生IgGl同种型抗体。
[0298]图69:定量SPR (表面等离子体共振)测量结果显示由设计治疗表位
1(GWSIHSPGGGSC, SEQ ID NO: 250)(图 69A)和设计治疗表位 2 (SVFQHLPGGGSC, SEQID NO: 251)(图69B)诱导的抗体统计显著(分别p〈0.001和ρ〈0.01)区分病理性tau Λ (1-150 ;392-441)/4R 与生理性 2N4R tau 蛋白。
[0299]图70:用针对设计治疗表位I (GWSIHSPGGGSC，SEQ ID NO:250)和设计治疗表位
2(SVFQHLPGGGSC, SEQ ID NO: 251)产生的血清对人AD患病脑组织的免疫组织化学染色。(A)针对设计治疗表位I的抗血清识别AD患者的脑中的神经原纤维病变。(C)神经原纤维缠结和神经原纤维网线(箭号)的高倍放大。(B)针对设计治疗表位2的抗血清识别AD患者的脑中的神经原纤维病变。(D)染色的神经原纤维缠结和神经原纤维网线(箭号)的高倍放大。针对设计治疗表位I和设计治疗表位2的抗血清不识别对照人脑中的正常tau蛋白(E、F)。标尺:50ym(A、B、E、F)，20ym(C、D)。(G)针对设计治疗表位 2 (SVFQHLPGGGSC，SEQ ID N0:251)产生的血清识别转基因大鼠SHR72中的神经原纤维病变。(H)在年龄匹配的对照大鼠脑中，抗体不显示神经元内染色。血清识别寡聚缠结前阶段(I)以及细胞内阶段(J)。标尺:20ym(A、B)，10ym(C、D)。
[0300]图71:由设计治疗表位I (GWSIHSPGGGSC，SEQ ID NO: 250)和设计治疗表位2 (SVFQHLPGGGSC, SEQ ID NO: 251)诱导的抗体识别自人阿尔茨海默病脑组织分离的可溶性和肌氨酰不溶性病理性tau蛋白。
[0301 ] 图72:由设计治疗表位I (GWSIHSPGGGSC，SEQ ID NO: 250)和设计治疗表位2 (SVFQHLPGGGSC, SEQ ID NO: 251)诱导的抗体识别自阿尔茨海默病大鼠模型(SHR72)的脑分离的可溶性(泳道1、3、5)和不溶性(泳道2、4、6)病理性tau蛋白。
[0302]图73:用设计治疗表位2 (SVFQHLPGGGSC，SEQ ID NO: 251)的免疫疗法显示处理的SHR72大鼠的神经行为参数(神经量表)显著提高。(A)横杆行走测试。(B)后肢滑动的次数(p〈0.05)。(C)神经量表。用设计治疗表位2(SEQ ID N0:251)处理的大鼠相较于接受单独佐剂的转基因对照大鼠显示:a)横杆行走测试中的逃逸潜伏时间降低27%，b)后肢滑动的次数降低44% (p〈0.05)dPc)神经量表评分降低26%。所有统计数据都是使用非参数曼-惠特尼U检验获得。
[0303]图74:用设计治疗表位2 (SVFQHLPGGGSC, SEQ ID NO: 251)的免疫疗法显示免疫的阿茲海默转基因SHR72大鼠的脑中的病理性tau蛋白统计显著降低。相较于接受单独佐剂的对照转基因大鼠，免疫疗法统计显著(P〈0.05)降低免疫的动物中的病理性不溶性tau蛋白的量。在所有分析的tau表位下都观察到病理性不溶性tau蛋白降低(P〈0.05)。
[0304]图75: (A)用于进一步评估DC8E8的最小表位(治疗性核心单元)和免疫原性效能测定的合成肽的示意图和⑶它们的氨基酸序列。
[0305]图76:通过竞争性ELISA，使用合成肽测定DC8E8最小表位(治疗性核心单元)。10种含有DC8E8识别序列的至少6个氨基酸的tau肽(SEQ ID NO: 270、271、272、275、276、277、280、281、282 和 283)能够与病理性 tau Λ (1-150 ;392_441)/4R 竞争结合抗体 DC8E8。仅含有DC8E8识别序列的5个氨基酸的Tau肽(SEQ ID NO:273、274、278和279)不与tauA (1-150 ；392-441)/4R(SEQ ID NO: 199)竞争结合抗体 DC8E8。
[0306]图77:在用tau肽免疫C57BL小鼠之后，tau蛋白特异性抗体的诱导。(A) 12聚体、7聚体和6聚体肽(分别为SEQ ID N0:270、271和272)具有免疫原性。由免疫诱导的抗体展现对病理性tau Δ (1-150 ；392-441)/4R的结合活性统计显著高于对生理性tau蛋白2N4R 的结合活性(分别 ρ〈0.0079 ;ρ〈0.0052 ;ρ〈0.0079)。5 聚体肽 SEQ ID NO:273 和 274不具有免疫原性。(B) 42聚体、19聚体、7聚体和6聚体肽(分别SEQ ID NO: 275、280、276和277)具有免疫原性。由这些肽诱导的抗体统计显著(分别p〈0.0079、p〈0.0159、p〈0.0079和ρ〈0.0379)区分病理性tau Λ (1-150 ;392_441)/4R与生理性tau蛋白2N4R。5聚体肽SEQ ID NO:278和279不具有免疫原性。(C)7聚体肽(SEQ ID N0:281和283)具有免疫原性。针对这些肽的抗血清统计显著(分别P〈0.0379和p〈0.0286)区分病理性tau Λ (1-150 ；392-441)/4R与生理性tau蛋白2N4R。由6聚体肽SEQ ID NO:282诱导的针对病理性tau蛋白和生理性tau蛋白的抗体的水平极低。图代表对在1:800下稀释的个别血清的ELISA结果的统计评估。平均值与标准平均误差一起显示。
[0307] 图78:在用tau肽免疫C57BL小鼠之后，tau蛋白特异性抗体的几何平均抗体效价。用 tau 肽 SEQ ID NO: 270、271、272、275、276、277、280、281 和 283 对 C57BL 小鼠疫苗接种诱导形成tau蛋白特异性抗体。用ELISA测量的几何平均抗体效价显示通过用tau肽SEQ ID NO:270、271、272、275、276、277、280、281和283疫苗接种引发的抗体展现对病理性tauA (1-150 ;392-441)/4R的结合活性高于对生理性tau蛋白(tau2N4R)的结合活性。在用tau肽SEQ ID NO: 273、274、278、279和282免疫小鼠之后检测到tau蛋白特异性抗体的效价较低。
[0308]图79A和79B:显示由tau肽诱导的抗体的同种型分布。用携带最小DC8E8表位的tau肽免疫C57/BL小鼠优先诱导形成对病理性tau蛋白具有特异性的IgGl和IgG2b抗体同种型。1:800稀释来自个别小鼠的汇合血清且通过ELISA分析对病理性tau Λ (1-150 ；392-441)/4R的结合活性。
[0309]图80:对在用tau肽免疫的小鼠C75BL中诱导的抗体对tau Δ (1-150 ；392-441)/4R和2N4R的结合能力的定量评估。表面等离子体共振(SPR)测量结果显示针对 tau 肽 SEQ ID NO:270、271、272、275、276、277、280、281 和 283 的抗体统计显著(**...p〈0.001 和 *...ρ〈0.01)区分病理性 tau Δ (1-150 ;392_441) /4R 与生理性 2N4R tau蛋白。KA-缔合平衡结合常数。
[0310]图81:在蛋白质印迹中，在用tau肽免疫的小鼠中诱导的抗体识别病理性形式的tau 蛋白。用 tau 肽 SEQ ID NO: 270、271、272、275、276、277、280、281 和 283 对 C57BL 小鼠疫苗接种诱导识别自人阿尔茨海默病脑组织以及自转基因大鼠SHR72的脑干分离的病理性tau蛋白的特异性抗体。在用肽SEQ ID NO:273、274、278、279和282免疫小鼠之后的抗血清不识别病理性tau蛋白形式。
[0311]图82A-C:人AD脑组织中由tau肽诱导的抗体识别的神经原纤维缠结。用tau肽SEQ ID NO:270、271、272、275、276、277、280、281 和 283 对 C57BL 小鼠疫苗接种诱导识别阿尔茨海默病脑的海马中的神经原纤维病变的抗体。来自仅用佐剂免疫的小鼠的血清用作阴性对照。使用来自海马CA l的脑组织切片。标尺:100μπι。
[0312]图 83:用由用 tau 肽 SEQ ID NO:270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282和283免疫C57BL小鼠产生的血清抗体对来自人AD患者的脑组织的免疫组织化学染色(和相应相对强度)的概述。
[0313]发明详述
[0314]术语“抗体”是指遗传工程改造、天然或完全或部分合成或重组产生的免疫球蛋白。其维持抗原结合性质和至少一种根据本发明的tau蛋白相关特征性质的所有衍生物、部分及片段也包括在所述术语中。所述术语也涵盖具有与免疫球蛋白结合结构域同源或基本上同源的结合结构域的任何蛋白质。这些蛋白质可源于天然来源或部分或完全合成或重组产生。抗体可为单克隆或多克隆的。抗体可为包括任何人类别:IgG、IgM、IgA、IgD和IgE的任何免疫球蛋白类别的成员。在本发明的一些实施方案中，IgG类别的衍生物是优选的。
[0315]术语“分离的抗体”和“分离的肽”是指由cDNA来源、重组RNA来源或任何其它合成来源或其某一组合产生的蛋白质或肽；也指以下蛋白质和肽:根据它们的来源或衍生来源，(I)不与在自然界中所见的蛋白质缔合，(2)不含来自相同来源的其它蛋白质，例如不含鼠类蛋白质，(3)由来自不同物种的细胞表达，或(4)不存在于自然界中。
[0316]此外，根据本发明的抗体也包括具有不影响或改变根据本发明的抗体的以上提及的特征的“保守性序列修饰”，即核苷酸和氨基酸序列修饰的所述抗体。可通过本领域中已知的标准技术，如定点突变诱发和PCR介导的突变诱发引入修饰。保守性氨基酸取代包括氨基酸残基经具有类似侧链的氨基酸残基置换的取代。具有类似侧链的氨基酸残基的家族已在本领域中加以定义。这些家族包括具有碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β-分支侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)及芳族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，抗tau蛋白抗体中的预测非必需氨基酸残基可例如经来自同一侧链家族的另一氨基酸残基置换。
[0317]“抗体片段”和“抗体部分”包含全长抗体的一部分，通常至少是其抗原结合部分/结构域或可变区。抗体片段的实例包括双链抗体(diabody)、单链抗体分子、免疫毒素和由抗体片段形成的多特异性抗体。此外，抗体片段包括具有结合病理性tau蛋白的VH链的特征(即能够连同VL链一起装配)或结合病理性tau蛋白的VL链的特征(即能够连同VH链一起装配)以形成功能性抗原结合袋且由此提供结合病理性tau蛋白的性质的单链多肽。所述术语也包括本身不能提供效应子功能(例如ADCC/⑶C)，但在与适当抗体恒定结构域组合之后提供这个功能的片段。
[0318]术语“嵌合抗体”是指通常通过重组DNA技术制备的包含来自一种来源或物种的可变区(即结合区)和至少一部分源于不同来源或物种的恒定区的单克隆抗体。包含鼠类可变区和人恒定区的嵌合抗体是尤其优选的。所述鼠类/人嵌合抗体是表达的免疫球蛋白基因的产物，所述基因包含编码鼠类免疫球蛋白可变区的DNA区段和编码人免疫球蛋白恒定区的DNA区段。由本发明涵盖的其它形式的“嵌合抗体”是类别或子类已自原始抗体的类别或子类修改或改变的那些。所述“嵌合”抗体也称为“类别转变抗体”。用于产生嵌合抗体的方法涉及目前本领域中已知的常规重组DNA和基因转染技术。参见例如Morrison, S.L.等，Proc.Natl.Acad Sc1.USA81 (1984) 6851-6855 ;美国专利号 5，202，238和 5，204，244。
[0319]术语“人源化抗体”是指框架区(FR)和/或互补决定区(CDR)已被修饰来包含相较于亲本免疫球蛋白的特异性，具有不同特异性的免疫球蛋白的CDR的抗体。在一个实施方案中，鼠类CDR移植入人抗体的框架区中以制备“人源化抗体”。参见例如Riechmann, L.等，Nature332 (1988) 323-327 ;和 Neuberger, Μ.S.等，Nature314 (1985) 268-270。特别优选CDR对应于表不识别抗原和在本文中描述为tau蛋白上的“治疗表位”的表位的序列的那些。
[0320]如本文所用的术语“人抗体”意图包括具有源于人生殖系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。抗体的恒定区可为例如人IgGl类型的恒定区。所述区域可为异型的并由例如 Johnson, G.ffu, T.T., Nucleic Acids Res.28 (2000) 214-218 和其中提及的数据库所描述，且优先适用于一些实施方案，只要根据本发明的诱导ADCC和例如CDC的性质得以保留即可。
[0321]如本文所用的术语“重组人抗体”意图包括通过重组手段制备、表达、产生或分离的所有人抗体，如自如NSO或CHO细胞的宿主细胞或自转殖人免疫球蛋白基因的动物(例如小鼠，如XEN0M0USE，其为一种产生具有人抗体的氨基酸序列(例如人框架(FR)和人恒定区氨基酸序列)的抗体的遗传修饰小鼠)分离的抗体或使用转染至宿主细胞中的重组表达载体表达的抗体。所述重组人抗体具有呈重排形式的源于人生殖系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。根据本发明的重组人抗体已经受体内体细胞高度突变。因此，重组抗体的VH区和VL区的氨基酸序列是尽管源于且相关于人生殖系VH和VL序列，但不能天然体内存在于人抗体生殖系谱系内的序列。
[0322]术语“效应子功能”包括但不限于Clq结合；补体依赖性细胞毒性(CDC) ；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC);吞噬作用；和细胞表面受体(例如B细胞受体；BCR)的下调。
[0323]术语“表位”在此处用于指代由结合蛋白或抗体识别的结合位点。表位可为任何分子或其集合，包括但不限于氨基酸、氨基酸侧链、糖和脂质，且可具有特定三维结构或构象。因此，表位可包含tau肽/蛋白质分子的包括一级、二级、三级或四级结构的任何部分，因为那些术语通常在本领域中是已知的。“线性表位”由连续氨基酸残基序列构成。线性表位是存在于生理性tau蛋白上(例如存在于tau蛋白2N/4R中)的表位。“构象表位”是抗体或结合蛋白以构象特异性方式结合的表位。在基于蛋白质的表位的情况下，结合可取决于携带表位的蛋白质的二级、三级或四级结构。换句话说，抗体以结构特异性方式、三级结构特异性方式或四级结构特异性方式进行结合。构象表位是存在于病理性tau蛋白中(例如存在于 tau Λ (1-150 ；392-441)/4R 中)的表位。
[0324]术语“治疗表位”是指tau蛋白内在本文中鉴定且发现当呈某些构象(由DC8E8抗体识别)时会促进tau蛋白-tau蛋白聚集的区域。结合这些区域的一者或多者的抗体(和其它结合蛋白)抑制早期和晚期阶段的tau蛋白聚集，包括tau蛋白单体转化成二聚体以及转化成高等聚集体形式；亦即抗体抑制自生理性tau蛋白转化成病理性tau蛋白。tau蛋白内的这些区域可涉及于通过促进在tau蛋白的邻近区域内形成β折叠来促进tau蛋白纤维化成成对螺旋纤维(PHF)。治疗表位包含在267-KHQPGGG-273 (在tau蛋白的第I重复结构域内)、298-KHVPGGG-304 (在tau蛋白的第2重复结构域内)、329-HHKPGGG-335 (在tau蛋白的第3重复结构域内)和361-THVPGGG-367 (在tau蛋白的第4重复结构域内)内。在一些实施方案中，治疗表位各自分别包含在268-HQPGGG-273 (在tau蛋白的第I重复结构域内)、299-HVPGGG-304(在tau蛋白的第2重复结构域内)、330_HKPGGG_335 (在tau蛋白的第3重复结构域内)和362-HVPGGG-367内。
[0325] 术语“显示对病理性tau蛋白的亲和力高于对生理性tau蛋白的亲和力”是指抗体与至少一种形式的病理性tau蛋白之间的相互作用程度高于抗体与至少一种形式的生理性tau蛋白之间的相互作用程度。相互作用可通过例如如以下实施例中所述的ELISA或表面等离子体共振(SPR)来测量。
[0326]术语“特异性结合”与“对…具有特异性”可互换且意味抗体或其抗原结合片段(或其它结合蛋白)与在生理条件下相对稳定的抗原或表位形成复合物。特异性结合的特征可在于解离常数为约I Χ10-6Μ或更小，例如小于约ΙΟΟηΜ，且主要例如小于ΙΟηΜ。用于确定两个分子是否特异性结合的方法在本领域中是已知的且包括例如平衡透析、表面等离子体共振等。通常，由本发明提供的抗体或其抗原结合片段是结合抗原或表位的所述解离常数至少约I X KT6M或更小，但结合其它分子的解离常数不为所述解离常数的分子。
[0327]“优先结合”是指对病理性tau蛋白的亲和力高于对生理性tau蛋白的亲和力的结合，例如对tau Λ (1-150 ；392-441)/4R的亲和力高于对2N4R的亲和力的结合。
[0328]“通用T细胞表位”是选自流感血球凝集素:HA307-319 (PKYVKQNTLKLAT) (SEQ IDNO: 123) ；PADRE(AKXVAAffTLKAAA) (SEQ ID NO: 124);疟疾 CS:T3 表位(EKKIAKMEKASSVFNV)(SEQ ID NO: 125);乙型肝炎表面抗原:HBsA919_28 (FFLLTRILTI) (SEQ ID NO: 126)；热休克蛋白 65:hsp65153_171(DQSI⑶LIAEAMDKVGNEG)(SEQ ID NO:127);卡介苗(QVHFQPLPPAffKL) (SEQ ID NO: 128);破伤风类毒素:TI830_844(QYIKANSKFIGITEL) (SEQ IDNO: 129);破伤风类毒素:TI947-967(FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE) (SEQ ID NO: 130) JPHIVgpl20Tl (KQIINMWQEVGKAMYA) (SEQ ID NO: 131)的序列。
[0329]术语“固有无序tau蛋白”是指缺乏任何确定3D结构的正常/生理形式的tau蛋白O其存在于健康脑中(Kovacech等,2010)。
[0330]“错误无序tau蛋白”是指构象不同于正常/生理性固有无序tau蛋白，且不具有牢固/确定3D结构的tau蛋白形式。错误无序截短tau蛋白能够体内诱导神经原纤维变性。其不存在于健康脑中(Kovacech等，2010)。“错序tau蛋白”是指装配成形成NFT的PHF的聚合物的结构化病理性形式的tau蛋白。错序tau蛋白不存在于健康脑中(Kovacech等，2010)。
[0331]“SHR24”是指表达IIB型tau蛋白(151-391/R3)的转基因大鼠品系。转基因大鼠在皮质脑区域中显现进行性年龄依赖性神经原纤维变性。SHR24大鼠中的神经原纤维缠结(NFT)满足用于鉴定人阿尔茨海默病中的神经原纤维变性的若干关键组织学准则，包括嗜银性、刚果红双折射和硫代黄素S反应性。这些准则可用于分析接受本发明的任何实施方案的受试者中的神经原纤维变性。也用用于检测人脑中的病理性tau蛋白的抗体(包括识别异常tau蛋白构象的DC11)和对过度磷酸化形式的tau蛋白具有特异性的抗体鉴定神经原纤维缠结。此外，神经原纤维变性的特征在于广泛形成由大鼠内源性和截短tau蛋白种类组成的肌氨酰不溶性tau蛋白复合物(Filipcik等，2010)。
[0332]“SHR72”是指在若干脑区域和脊髓中表达根据国际专利申请PCT W02004/007547)的人截短tau Λ (1-150 ;392-441)/4R的转基因大鼠。这个大鼠品系的产生由Zilka等，2006加以描述,且tau蛋白病理学描述于Koson等，2008中。
[0333]“IA型Tau蛋白 ”是指N末端和C末端双重截短的tau蛋白，其截短含有4个重复序列的tau43的至少前236个N末端氨基酸和至少最后45个C末端氨基酸。所述分子可在阿尔茨海默病患病脑组织中检测而所述分子不可在正常健康脑组织中检测(W02004/007547A2)。
[0334]“IB型Tau蛋白”是指N末端和C末端双重截短的tau蛋白，其截短含有3个重复序列的tau44的至少前236个N末端氨基酸和至少最后45个C末端氨基酸。所述分子可在阿尔茨海默病患病脑组织中检测而所述分子不可在正常健康脑组织中检测(W02004/007547A2)。
[0335]“ IIA型Tau蛋白”是指N末端和C末端双重截短的tau蛋白，其截短含有4个重复序列的tau43的至少前68个N末端氨基酸和至少最后40个C末端氨基酸。所述分子可在阿尔茨海默病患病脑组织中检测而所述分子不可在正常健康脑组织中检测(W02004/007547A2)。
[0336]“IIB型Tau蛋白”是指N末端和C末端双重截短的tau蛋白，其截短含有3个重复序列的tau44的至少前68个N末端氨基酸和至少最后20个C末端氨基酸。所述分子可在阿尔茨海默病患病脑组织中检测而所述分子不可在正常健康脑组织中检测(W02004/007547A2)。
[0337]如本文所用，术语“治疗”等是指获得所需药理学和/或生理学作用。所述作用就完全或部分预防疾病或其症状而言可为防治性的和/或就部分或完全治愈疾病和/或可归因于所述疾病的不利影响而言可为治疗性的。如本文所用的“治疗”也涵盖对哺乳动物，特别是人的AD或相关tau蛋白病变的任何治疗,且包括:(a)预防疾病在可易患疾病或处于获得疾病的风险下但尚未诊断为患有所述疾病的受试者中发生；(b)抑制疾病，即遏止其发展；以及(C)减轻疾病，即导致疾病消退。以下进一步论述“治疗”的优选实施方案。在一些实施方案中，“治疗”是指向怀疑罹患或已罹患AD或另一 tau蛋白病变的患者施用治疗剂。其也可指减轻、消除或至少部分遏止疾病和/或与疾病和/或其并发症相关的一种或多种症状，也指对所述一种或多种症状施加任何有益作用。
[0338]“预防”是指向易感特定疾病或另外处于特定疾病的风险下的患者施用。总人口中的任何人都处于AD的风险下。一些个体具有增加的AD遗传风险。预防可消除或降低风险或延迟疾病发作。延迟发作或进展可基于类似群体或个体中的标准疾病进展时间加以测量。
[0339]“Tau蛋白病变”是指与形成病理性tau蛋白相关的疾病。
[0340]“生理性tau蛋白”是指正常人tau蛋白的6种亚型的任一者，即:
[0341]2N4R(SEQ ID NO: 102)
[0342]1N4R(SEQ ID NO: 103)
[0343]2N3R(SEQ ID NO: 104)
[0344]0N4R(SEQ ID NO: 105)
[0345]1N3R(SEQ ID NO: 106)
[0346]0N3R(SEQ ID NO: 107)
[0347]自这个定义排除携带与阿尔茨海默病和其它tau蛋白病变相关的任一磷酸化的那些tau蛋白。
[0348]“病理性tau蛋白”包括病理性tau蛋白构象异构体和结构且涵盖以下全部:IA、IB、IIA和IIB型Tau蛋白、错序tau蛋白、错误无序tau蛋白(单体、二聚体、三聚体、寡聚物)、错误无序可溶性tau蛋白、肌氨酰不溶性tau蛋白、细胞外tau蛋白沉积物、tau蛋白聚集体、成对螺旋纤维、神经原纤维病变(包括神经原纤维病变、缠结、线、纤维、轴突球状体)、高度磷酸化形式的截短tau蛋白和全长tau蛋白、或与AD或另一 tau蛋白病变相关的任何其它形式的tau蛋白。
[0349]“连接”是指某一部分连接于肽、抗体或化合物。所述部分可被偶合或复合或共价或非共价连接。所述部分可以与肽或抗体的融合物形式化学交联或表达或合成。
[0350]“部分”是指能够连接于肽、抗体或结合蛋白，但不是所要求保护的肽、抗体或结合蛋白自身的任何化合物、有机物、肽、蛋白质、核酸、载体、佐剂。
[0351]“免疫原性”是指可引发免疫反应的某些性质。免疫反应可由抗体或细胞或两者介导。
[0352]“佐剂”是指能够增加、增大或调节对伴随肽的免疫反应的物质。
[0353]“其它疗法”是指主题患者可接受的额外疗法。
[0354]“清除”是指降低病理性tau蛋白和/或病理性tau蛋白结构的水平或检测。清除不必使病理性tau蛋白完全消失，即病理性tau蛋白可为部分消失。
[0355]术语“促进”涵盖诱导、提高或增加。
[0356]“脑组织”是指例如来自脑、脑干和脊髓的任何神经元组织。
[0357]术语“特异性结合”和“高亲和力”分别指抗体结合预定抗原，即以上定义的tau表位。通常，抗体结合的解离常数(KD)是10_6M或更小，且结合预定抗原的KD比其结合除预定抗原以外的非特定抗原(例如BSA、酪蛋白或任何其它指定多肽)的KD小至少2倍。词语“识别抗原的抗体”和“对抗原具有特异性的抗体”在本文中可与术语“特异性结合抗原的抗体”互换使用。如本文所用，“高度特异性”结合意味抗体对错误无序tau蛋白的相对Kd比抗体对其它配体或正常全长tau蛋白的结合Kd小至少4倍。
[0358]术语“原核生物”意欲包括可用用于表达本发明抗体或一个或多个相应免疫球蛋白链的DNA或RNA分子转化或转染的所有细菌。原核宿主可包括革兰氏阴性以及革兰氏阳性细菌，例如像大肠杆菌(E.coli)、鼠沙门氏伤寒杆菌(S.typhimurium)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)和枯草芽抱杆菌(Bacillus subtilis)。术语“真核生物”意图包括酵母、高等植物、昆虫和例如哺乳动物细胞，主要例如HEK293、NSO和CHO细胞。
[0359]术语“化学衍生物”描述含有通常不是基础分子的一部分的额外化学部分的分子。所述部分可提高基础分子的溶解性、半衰期、吸收等。或者，所述部分可减弱基础分子的不合需要副作用或降低基础分子的毒性。
[0360]术语“核酸”、“核酸序列”、“聚核苷酸”、“寡核苷酸”、“聚核苷酸序列”和“核苷酸序列”在本说明书中可互换使用，且指修饰或未修饰的准确核苷酸序列，所述序列界定核酸的片段或区域，含有或不含有非天然核苷酸，且是双链DNA、单链DNA或所述DNA的转录产物。
[0361]如本文所用的术语“分离的聚核苷酸”或“分离的核酸”将意味基因组、cDNA或合成来源或其某一组合的聚核苷酸，所述聚核苷酸根据其来源(I)不与“分离的聚核苷酸”见于自然界中所处的聚核苷酸的全部或一部分缔合，(2)可操作地连接于其在自然界中不连接的聚核苷酸，或(3)不作为较大序列的一部分存在于自然界中。
[0362]用于诊断、被动免疫、药物递送和AD疗法的抗体
[0363]本文描述对一种或多种由病理性形式的tau蛋白显示的tau表位具有特异性的新型分离的抗体。这些表位位于tau蛋白的首次指定在病理性tau蛋白聚集中具有作用的区域内，即在以下内:267-KHQPGGG-273(SEQ ID NO: 98)(即I号表位位于属于tau蛋白的第I重复结构域的267-KHQPGGG-273 内)、298-KHVPGGG-304(SEQ ID NO:99) (2号表位，在tau蛋白的第2重复结构域内)、329-HHKPGGG-335(SEQ ID NO: 100) (3号表位，在tau蛋白的第3重复结构域内)和361-THVPGGG-367(SEQ ID NO: 101) (4号表位，在tau蛋白的第4重复结构域内)。这些抗体能够识别人AD脑中以及AD和相关tau蛋白病变的转基因大鼠模型中的错序和错误无序tau蛋白，所述大鼠模型表达人错误无序截短tau Λ (1-150 ;392_441)/3R或tau Λ (1-150 ;392-441)/4R。分离的抗体也能够干扰促进AD病变的多种tau蛋白介导的活性的一者或数者，所述活性包括:(i)自错序或自生理性tau蛋白转变成错误无序tau蛋白；(ii)形成“病理性tau蛋白”单体、二聚体、三聚体和其它tau蛋白多聚体；(iii)形成不溶性tau蛋白聚集体；和(iv)促进细胞外tau蛋白清除。
[0364] 本公开的发明是部分基于发现特异性结合tau蛋白的四个先前未鉴定功能区之一的抗体能够抑制病理性tau蛋白聚集体形成以及检测各种病理性形式的tau蛋白(其中一些是最早在疾病中形成的形式(例如病理性单体))，所述未鉴定功能区选自267-KHQPGGG-273 (SEQ ID NO: 98)(在tau蛋白的第I重复结构域内)、298-KHVPGGG-304(SEQ ID NO:99)(在tau蛋白的第2重复结构域内)、329-HHKPGGG-335(SEQ ID NO: 100)(在tau蛋白的第3重复结构域内)和361-THVPGGG-367(SEQID NO: 101)(在tau蛋白的第4重复结构域内)。通过免疫组织化学(IHC)与酶联免疫测定(ELISA)两者筛选能够产生对人PHF具有特异性的单克隆抗体的针对在本申请中也称为tauA (1-150 ;392-441)/4R的人错误无序tau蛋白II(151_391/4R)产生的杂交瘤。所得组包括具有IgGl子类的小鼠单克隆抗体(mAb)DC8E8。对DC8E8的表位定位揭示其结合人tau蛋白上的四个先前未鉴定的表位。此外，对DC8E8的进一步功能分析揭示各表位代表tau蛋白内的不同功能区。现在可描述为AD诊断和疗法的新型靶标，且因此称为“治疗表位”的这些区域包含在267-KHQPGGG-273(SEQ ID NO:98)(在tau蛋白的第I重复结构域内)、298-KHVPGGG-304 (SEQ ID NO: 99)(在tau蛋白的第2重复结构域内)、329-HHKPGGG-335(SEQ ID NO: 100)(在tau蛋白的第3重复结构域内)和361-THVPGGG-367(SEQ ID NO: 101)(在tau蛋白的第4重复结构域内)内。在一些实施方案中，治疗表位的一者或多者包含在268-HQPGGG-273(SEQ ID NO:223)(在tau蛋白的第I重复结构域内)、299-HVPGGG-304(SEQ ID NO: 154)(在tau蛋白的第2重复结构域内)、330-HKPGGG-335(SEQ ID NO: 224)(在tau蛋白的第3重复结构域内)和
362-HVPGGG-367(SEQ IDNO: 154)(在tau蛋白的第4重复结构域内)内。在一些实施方案中，至少一个治疗表位包含在299-HVPGGG-304(SEQ ID NO: 154)(在tau蛋白的第2重复结构域内)内。在一些实施方案中，治疗表位的一者或多者是299-HVPGGG-304(SEQ IDNO:154)。
[0365]实际上，DC8E8能够区分病理性tau蛋白与正常tau蛋白，表明这四种表位的至少一者是构象表位。换句话说，DC8E8揭示由四种治疗表位各自涵盖的区域的至少一者在病理性tau蛋白中显示不同于其在固有无序tau蛋白(正常tau蛋白)中采用的形状的构象。DC8E8能够感知或检测变化，因为其结合病理性tau蛋白的亲和力高于其结合生理性tau蛋白的亲和力。此外，结合tau蛋白的DC8E8能够抑制导致形成病理性tau蛋白聚集体的tau蛋白-tau蛋白相互作用，如通过DC8E8能够体外抑制不溶性tau蛋白聚集体形成所衡量。举例而言，结合正常tau 蛋白的DC8E8能够防止涵盖治疗表位的区域的一种或多种以上论述的构象/形状变化。
[0366]此外，DC8E8在这些区域或治疗表位的一者或多者处结合正常tau蛋白会在分子中其它地方阻碍为产生病理性tau蛋白所需的某些其它构象变化。在不受任何特定机理束缚下，意图tau蛋白内由DC8E8识别的这些表位/区域的一者或多者在tau蛋白内充当tau蛋白-tau蛋白聚集的促进剂。举例而言，这些表位的一者或多者的结构/形状/构象会影响邻近区域的结构，以使通过DC8E8与其结合来固定其在tau蛋白分子内的形状会干扰邻近区域(例如274-281)形成β折叠的能力或趋势，其中形成β折叠为tau蛋白-tau蛋白聚集所需。因此，意图DC8E8与正常tau蛋白内的这四个区域之一结合能够防止tau蛋白中迄今为止鉴定的一个最早病理性变化:即为促进在tau蛋白内形成β折叠所需或其自身促进或允许在tau蛋白内形成β折叠的变化。此外，也意图DC8E8与错误无序/病理性tau蛋白内的这四个区域之一结合(即在四个区域的一者或多者已变成病理性构象之后)仍然能够抑制病理性tau蛋白-tau蛋白聚集,至少因为其仍然抑制β折叠形成、阻断tau蛋白-tau蛋白物理相互作用，或两者。
[0367]因此，使用DC8E8作为鉴定tau蛋白内的新型靶标或功能区的工具，指定tau蛋白上的四个特定DC8E8结合位点在阿尔茨海默病中具有作用。这是通过认识到这些tau蛋白位点的一者或多者至少因为DC8E8与它们中的一者或多者结合能够抑制那些过程而涉及于病理性tau蛋白单体和多聚体的形成中来进行。此外，结合这些治疗表位的一者或多者的抗体(例如DC8E8)能够促进病理性tau蛋白自细胞外环境清除，至少因为它们能够体外介导由小神经胶质细胞对病理性tau蛋白的摄取和降解；体内降低脑中的细胞外和细胞内tau蛋白；或两者。换句话说，这些抗体能够帮助降低所述病理性形式的tau蛋白对脑引起的损伤。
[0368]因此，本文描述特异性结合tau蛋白上的一种或多种治疗表位的抗体，其中所述治疗表位各自分别位于氨基酸残基267-KHQPGGG-273(SEQ ID NO:98) (I号表位，在tau蛋白的第I重复结构域内)、298-KHVPGGG-304(SEQ ID NO:99) (2号表位，在tau蛋白的第2重复结构域内)、329-HHKPGGG-335(SEQ ID NO: 100) (3号表位，在tau蛋白的第3重复结构域内)和361-THVPGGG-367(SEQ ID NO: 101) (4号表位，在tau蛋白的第4重复结构域内)内。在一些实施方案中，I至4号治疗表位包含在268-HQPGGG-273(SEQ ID NO:223)(在tau蛋白的第I重复结构域内)、299-HV PGGG-304(SEQ ID NO: 154)(在tau蛋白的第2重复结构域内)、330-HKPGGG-335(SEQ ID NO:224)(在tau蛋白的第3重复结构域内)和
362-HVPGGG-367 (SEQ ID NO: 154)(在tau蛋白的第4重复结构域内)内。抗体可为单克隆或多克隆的。也包括抗原结合抗体部分、抗体片段、抗体变体、工程改造蛋白质和聚合物骨架。这些包括包含免疫球蛋白分子的至少一部分的任何蛋白质或含肽分子，所述至少一部分如但不限于至少一个重链或轻链互补决定区(CDR)或其配体结合部分、重链或轻链可变区、重链或轻链恒定区、框架区或其任何部分。
[0369]作为一非限制性实例，如由本发明提供的适合抗体、抗体部分、片段或变体可结合至少一种所述治疗表位。术语“抗体”也包括抗体消化片段、指定抗体部分及其变体，包括抗体模拟物或模拟抗体或其指定片段或部分的结构和/或功能的抗体的部分，包括单链抗体及其片段。功能性片段包括结合一种或多种治疗表位的抗原结合片段。举例而言，能够结合治疗表位的抗体片段包括但不限于由本发明提供的Fab (例如通过木瓜蛋白酶消化获得)、Fab’ (例如通过胃蛋白酶消化和部分还原获得)和F(ab’)2(例如通过胃蛋白酶消化获得)、facb(例如通过血纤维蛋白溶酶消化获得)、pFc’(例如通过胃蛋白酶或血纤维蛋白溶酶消化获得)、Fd(例如通过胃蛋白酶消化、部分还原和再聚集获得)、Fv或scFv (例如通过分子生物学技术获得)片段。也参见William Ε.Paul (编)Fundamental Immunology,第6版，Lippincott ffilliams&ffilkins, NY, N.Y.(2008)，所述参考书目整体并入本文。某些片段可通过如本领域中常规已知或如本文提供的酶促裂解、合成或重组技术产生。亦可使用已在天然终止位点的上游引入一个或多个终止密码子的抗体基因以多种截短形式产生抗体。举例而言，编码F(ab’)2重链部分的组合基因可被设计来包括编码重链的CHl结构域和/或铰链区的DNA序列。抗体的各种部分可通过常规技术以化学方式接合在一起，或可使用常规遗传工程技术制备成邻接蛋白质。
[0370]已知基本抗体结构单位包含四聚体。各四聚体主要由两对相同多肽链组成，各对具有一个“轻”链(约25kDa)和一个“重”链(约50-70kDa)。各链的氨基末端部分包括具有约100至110个或更多个氨基酸的主要负责抗原识别的可变区。各链的羧基末端部分界定主要负责效应子功能的恒定区。人轻链分类为K和λ轻链。重链分类为μ、δ、Υ、α或ε，且将抗体的同种型分别定义为IgM、IgD、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区与恒定区是通过具有约12个或更多个氨基酸的“J”区加以接合，其中重链也包括具有另外约10个氨基酸的“D”区。大体上参见Fundamental Immunology第7章(Paul, W.编，第2版Raven Press, N.Y.(1989))(出于所有目的以引用的方式整体并入本文)。各轻链/重链对的可变区形成抗体结合位点。因此，完整抗体具有两个结合位点。除在双功能或双特异性抗体中之外，两个结合位点相同。所有链都展现相对保守的框架区(FR)由三个高变区(也称为互补决定区或CDR)接合的相同一般性结构。来自各对的两个链的CDR通过框架区对准，从而使得能够结合特定表位。自N末端至C末端，轻链与重链两者均包含结构域FRUCDR1、FR2、⑶R2、FR3、⑶R3和FR4。对各结构域指定氨基酸是根据MGT的定义。替代性定义也为本领域普通技术人员所知。参见例如Kabat Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest(Nat1nal Institutes of Health, Bethesda, Md.(1987 和 1991))或 Chothia和Lesk J.Mol.B1l.196:901-917(1987) ;Chothia 等 Nature342:878-883(1989)。
[0371]在一些实施方案中，主题抗体包含包括与SEQ ID NO: 141、143、152和153的任一者具有至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约98%或至少约99%氨基酸序列同一性的氨基酸序列的轻链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括与SEQ IDNO: 141、143、152和153的任一者仅有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸不同的氨基酸序列的轻链。本领域普通技术人员可确定轻链可变区中的哪些氨基酸可被改变。举例而言，通过比较具有相同特异性的抗体的轻链可变区的氨基酸序列，本领域技术人员可确定哪些氨基酸可被改变而不改变特异性。对于示例性DC8E8抗体轻链的CDR氨基酸序列的比较，参见实施例。此外，可使用抗原结合测定来确定特异性是否改变。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ ID N0:141、143、152和153的任一者中所述的氨基酸序列的轻链。
[0372]在一些实施方案中，主题抗体包含包括与SEQ ID NO: 138、140、147和148的任一者具有至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约98%或至少约99%氨基酸序列同一'I"生的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括与SEQ IDNO: 138、140、147和148的任一者仅有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸不同的氨基酸序列的重链。本领域普通技术人员可确定重链可变区中的哪些氨基酸可被改变。举例而言，通过比较具有相同特异性的抗体的重链可变区的氨基酸序列，本领域技术人员可确定哪些氨基酸可被改变而不改变特异性。对于示例性DC8E8抗体重链的CDR氨基酸序列的比较，参见例如图3E和25B。此外，可使用抗原结合测定来确定特异性是否改变。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ ID NO: 138、140、147和148的任一者中所述的氨基酸序列的重链。
[0373] 在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ ID NO: 141中所述的氨基酸序列的轻链和包括如SEQ ID NO: 138中所述的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ ID NO: 141中所述的氨基酸序列的轻链和包括如SEQ ID NO: 140中所述的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ ID NO: 141中所述的氨基酸序列的轻链和包括如SEQ ID NO: 147中所述的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ ID NO: 141中所述的氨基酸序列的轻链和包括如SEQ ID NO: 148中所述的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ ID NO: 143中所述的氨基酸序列的轻链和包括如SEQ ID NO: 138中所述的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ ID NO: 143中所述的氨基酸序列的轻链和包括如SEQID NO: 140中所述的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ IDNO: 143中所述的氨基酸序列的轻链和包括如SEQ ID NO: 147中所述的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ ID NO: 143中所述的氨基酸序列的轻链和包括如SEQ ID NO: 148中所述的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ ID NO: 152中所述的氨基酸序列的轻链和包括如SEQ ID NO: 138中所述的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ ID NO: 152中所述的氨基酸序列的轻链和包括如SEQ ID NO: 140中所述的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ ID NO: 152中所述的氨基酸序列的轻链和包括如SEQ ID NO: 147中所述的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ ID NO:152中所述的氨基酸序列的轻链和包括如SEQ ID NO: 148中所述的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ ID NO: 153中所述的氨基酸序列的轻链和包括如SEQ ID NO: 138中所述的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ ID NO: 153中所述的氨基酸序列的轻链和包括如SEQ ID NO: 140中所述的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ ID NO: 153中所述的氨基酸序列的轻链和包括如SEQID NO: 147中所述的氨基酸序列的重链。在一些实施方案中，主题抗体包含包括如SEQ IDNO: 153中所述的氨基酸序列的轻链和包括如SEQ ID NO: 148中所述的氨基酸序列的重链。
[0374]在一些实施方案中，主题抗体包含包括至少一个、至少两个、或三个选自SEQ IDN0.117-119的⑶R的轻链可变区。在一些实施方案中，主题抗体包含包括至少一个、至少两个、或三个选自SEQ ID N0.120-122的⑶R的重链可变区。也提供这六个⑶R的任一者如实施例14中所述加以改变的实施方案。在一些实施方案中，轻链中至少一个改变的CDR选自用于 CDRl 的 SEQ ID NO: 247、用于 CDR2 的 SEQ ID NO: 253、和用于 CDR3 的 SEQ ID NO: 255、257、258、259和260的任一者。在一些实施方案中，重链中至少一个改变的⑶R选自用于CDRl 的 SEQ ID NO: 261 或 SEQ ID NO: 262、用于 CDR2 的 SEQ ID NO: 264 或 SEQ ID NO: 265、 和用于 CDR3 的 SEQ ID NO: 266、SEQ ID NO: 267 或 SEQ ID NO: 269。
[0375]双特异性或双功能抗体是具有两对不同重链/轻链和两个不同结合位点的人工杂交抗体。可通过包括杂交瘤融合或连接Fab’片段的多种方法产生双特异性抗体。参见例如 Songsivilai 和 Lachmann Clin.Exp.1mmunol.79:315-321 (1990)、Kostelny 等J.1mmunol.148:1547-1553(1992)。相较于产生常规抗体，产生双特异性抗体可为一种相对劳动密集型过程，且双特异性抗体的产率和纯度通常较低。双特异性抗体不以具有单一结合位点的片段(例如Fab、Fab’和Fv)形式存在。
[0376]本发明不涉及呈天然形式的抗体，即它们不取自它们的天然环境而是通过纯化自天然来源分离和获得，或通过遗传重组或化学合成获得，且因此它们可携带非天然氨基酸。因此，如本文所用，20种常规氨基酸及其缩写遵循常规用法。参见Immunology-ASynthesis (第 2 版，Ε.S.Golub 和 D.R.Gren 编,Sinauer Associates, Sunderland, Mass.(1991))，其以引用的方式并入本文。20种常规氨基酸的立体异构体(例如D-氨基酸Nle、、0^、0111、!116、0^、此11或他10、非天然氨基酸(如α-，α -双取代氨基酸、N-烷基氨基酸)、乳酸和其它非常规氨基酸也可为适于本发明多肽的组分。非常规氨基酸的实例包括(即不限于)4_羟脯氨酸、Y-羧基谷氨酸、ε-N，N，N-三甲基赖氨酸、ε-Ν-乙酰赖氨酸、O-磷酸丝氨酸、N-乙酰丝氨酸、N-甲酰甲硫氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟基赖氨酸、σ -N-甲基精氨酸和其它类似氨基酸和亚氨基酸(例如4-羟脯氨酸)。在本文使用的多肽记法中，根据标准用法和惯例，左手方向是氨基末端方向且右手方向是羧基末端方向。
[0377]类似地，本公开不涉及在其天然染色体环境中，即呈天然状态的核苷酸序列。本发明序列已经分离和纯化，即它们直接或例如通过拷贝间接被取样，其中它们的环境已至少部分被改动。也提供例如借助于宿主细胞利用重组遗传学获得或通过化学合成获得的分离的核酸。
[0378]关于本公开，两个核酸或氨基酸序列之间的“同一性百分比”意味在最优比对之后获得的在待比较的两个序列之间相同的核苷酸或氨基酸残基的百分比，其中这个百分比仅为统计性的且两个序列之间的差异是沿其长度随机分布的。传统上通过在使两个核酸或氨基酸序列最优对准之后比较序列来进行两个核酸或氨基酸序列的比较，其中所述比较能够通过分段或通过使用“比对窗”来进行。除手工比较之外，供比较的序列的最优比对可借助于Smith和Waterman(1981) [Ad.App.Math.2:482]的局部同源性算法、借助于Neddleman和Wunsch(1970) [J.Mol.B1l.48:443]的局部同源性算法、借助于Pearson 和 Lipman (1988) [Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:2444]的类似性搜索法或借助于使用这些算法的电脑软件(Wisconsin Genetics Software Package (Genetics ComputerGroup, 575Science Dr.,Madison, WI)中的 GAP、BESTFIT、FASTA 和 TFASTA，或通过比较软件BLAST NR 或 BLAST P)来进行。
[0379]通过比较两个最优对准序列来确定两个核酸或氨基酸序列之间的同一性百分比，其中待比较的核酸或氨基酸序列相较于参照序列可具有添加或缺失以达成两个序列之间的最优比对。通过确定在两个序列之间，例如在两个完全序列之间相同的氨基酸或核苷酸残基所处的位置的数目，用比对窗中的位置的总数目除相同位置的数目且用100乘以结果以获得两个序列之间的同一性百分比来计算同一性百分比。
[0380]举例而言，可在站点http://www.ncb1.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html 获得的BLAST 程序 “BLAST2sequences”(Tatusova 等，“Blast2sequences_a new tool forcomparing protein and nucleotide sequences，，，FEMS Microb1l., 1999, Lett.174:247-250)可以缺省参数(特别是针对参数“开放空位罚分”:5和“延伸空位罚分”:2;所选矩阵例如是由程序推荐的“BL0SUM62”矩阵)加以使用；待比较的两个序列之间的同一性百分比由程序直接计算。
[0381]对于展现与参照氨基酸序列至少80%，例如85%、90%、95%和98%同一性的氨基酸序列，优选实例包括含有参照序列、某些修饰(特别是缺失、添加或取代至少一个氨基酸)、截短部分或延伸部分的那些。在取代一个或多个连续或非连续氨基酸的情况下，取代的氨基酸经“等效”氨基酸置换的取代是优选的。此处，表述“等效氨基酸”意图指示可能取代一个结构氨基酸，然而不改变相应抗体和以下定义的那些特定实例的生物活性的任何氨基酸。
[0382]等效氨基酸可根据其与其所取代的氨基酸的结构同源性或根据在可能产生的各种抗体之间进行的生物活性的比较测试的结果来确定。作为一非限制性实例，下表概述可能进行而不导致显著改变相应修饰的抗体的生物活性的可能取代；在相同条件下反向取代是天然可能的。
[0383]
【权利要求】
1.一种分离的抗体，其中所述抗体结合一种或多种tau表位且能够展现两种或更多种以下性质: a)显示对病理性tau蛋白的亲和力高于对生理性tau蛋白的亲和力； b)抑制tau蛋白-tau蛋白聚集；以及 c)介导由小神经胶质细胞对病理性tau蛋白的摄取和降解；且其中各tau表位包含tau蛋白的聚集促进区。
2.如权利要求1所述的分离的抗体，其中所述一种或多种表位各自独立地选自以下位置内的表位: i.相对于tau441 的位置 267-273 或残基 KHQPGGG(SEQ ID NO:98)； i1.相对于tau441 的位置 298-304 或残基 KHVPGGG(SEQ ID NO:99) ii1.相对于tau441 的位置 329-335 或残基 HH KPGGG(SEQ ID NO: 100);和 iv.相对于tau441 的位置 361-367 或残基 THVPGGG(SEQ ID NO: 101)。
3.如权利要求2所述的分离的抗体，其中所述一种或多种表位各自独立地选自以下位置内的表位: 1.相对于tau441 的位置 268-273 或残基 HQPGGG (SEQ ID NO:223)； i1.相对于tau441 的位置 299-304 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154) ii1.相对于tau441 的位置 330-335 或残基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和 iv.相对于tau441 的位置 362-367 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
4.如权利要求1至3中的一项所述的分离的抗体，其中所述抗体能够结合选自以下的一种或多种形式的病理性tau蛋白:人阿尔茨海默病患者的脑活检中、来自阿尔茨海默病的动物模型的脑样本中、或两者中的错序tau蛋白、错误无序tau蛋白、肌氨酰不溶性tau蛋白、神经原纤维缠结、神经原纤维网线和神经炎斑块。
5.如权利要求1至4中的一项所述的分离的抗体，其中所述表位的至少一者是构象表位。
6.一种以构象特异性方式结合tau蛋白上的一种或多种表位的分离的抗体，其中: a)所述一种或多种表位各自独立地选自以下位置内的表位: i.相对于tau441 的位置 267-273 或残基 KHQPGGG (SEQ ID NO: 98)； i1.相对于tau441 的位置 298-304 或残基 KHVPGGG (SEQ ID NO: 99) ii1.相对于tau441 的位置 329-335 或残基 HHKPGGG (SEQ ID NO: 100);和 iv.相对于tau441 的位置 361-367 或残基 THVPGGG (SEQ ID NO: 101)； b)所述表位的零者、一者、两者或三者是线性表位；以及 c)所述表位的一者、两者、三者或四者是构象表位。
7.一种以构象特异性方式结合tau蛋白上的一种或多种表位的分离的抗体，其中: a)所述一种或多种表位各自独立地选自以下位置内的表位: i.相对于tau441 的位置 268-273 或残基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)； i1.相对于tau441 的位置 299-304 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154) ii1.相对于tau441 的位置 330-335 或残基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和 iv.相对于tau441 的位置 362-367 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。 b)所述表位的零者、一者、两者或三者是线性表位；以及C)所述表位的一者、两者、三者或四者是构象表位。
8.如权利要求1和6中的一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是DC8E8，且其中DC8E8是一种由在美国典型培养物保藏中心专利保藏号PTA-11994下保藏的杂交瘤产生的抗体。
9.如权利要求1至7中的一项所述的分离的抗体，其中所述抗体结合tau蛋白上与由DC8E8结合的那些表位相同的表位的一者或多者。
10.如权利要求1至7中的一项所述的分离的抗体，其中所述抗体与单克隆抗体DC8E8竞争结合tau蛋白。
11.一种分离的抗体，所述抗体在其表位结合结构域中包含一种或多种选自以下的互补决定区(CDR)序列:
i.QSLLNSRTRKNY(SEQ ID NO:117)
i1.WAS(SEQ ID NO:118)
ii1.KQSFYLRT(SEQ ID NO:119)
iv.GYIFTDYVIS(SEQID NO:120)
v.1FPRSGST(SEQ ID NO: 121);和
v1.ARDYYGTSFAMDY(SEQ ID NO:122)。
12.如权利要求1至7中的一项所述的分离的抗体，所述抗体在其表位结合结构域中包含一种或多种选自以下的CDR序列:
i.QSLLNSRTRKNY(SEQID NO:117)
i1.WAS(SEQ ID NO:118)
ii1.KQSFYLRT(SEQID NO:119)
iv.GYIFTDYVIS(SEQ ID NO:120)
v.1FPRSGST (SEQ ID NO: 121);和
v1.ARDYYGTSFAMDY(SEQ ID NO:122)。
13.如权利要求11和12中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含: a)抗体轻链可变区，所述抗体轻链可变区包含:
i.用于CDRl 的 QSLLNSRTRKNY (SEQ ID NO: 117)或 SEQ ID NO: 247 ；
i1.用于CDR2 的 WAS (SEQ ID NO: 118)或 SEQ ID NO: 253 ;和
ii1.用于CDR3 的 KQSFYLRT(SEQ ID NO: 119)或 SEQ ID NO:255、257、258、259 和 260的任一者；以及 b)抗体重链可变区，所述抗体重链可变区包含:
i.用于CDRl 的 GYIFTDYVIS(SEQ ID NO: 120)、SEQ ID NO:261 或 SEQ ID NO:262 ；
i1.用于CDR2 的 IFPRSGST (SEQ ID NO: 121)、SEQ ID NO: 264 或 SEQ ID NO: 265;和
ii1.用于CDR3 的 ARDYYGTSFAMDY(SEQ ID NO: 122)、SEQ ID NO:266, SEQ ID NO:267或 SEQ ID NO:269。
14.如权利要求11和12中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含: a)抗体轻链可变区，所述抗体轻链可变区包含:
i.用于CDRl 的 QSLLNSRTRKNY (SEQ ID NO: 117)；
i1.用于CDR2的WAS(SEQ ID NO: 118);和ii1.用于CDR3 的 KQSFYLRT(SEQ ID NO: 119);以及 b)抗体重链可变区，所述抗体重链可变区包含:
iv.用于CDRl 的 GYIFTDYVIS(SEQ ID NO: 120)
V.用于 CDR2 的 IFPRSGST (SEQ ID NO: 121);和
v1.用于 CDRl 的 ARDYYGTSFAMDY(SEQ ID NO: 122)。
15.如权利要求1至7中的一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含: a)一种或多种来自所述单克隆抗体DC8E8的轻链CDR的序列或一种或多种在与这些轻链⑶R之一最优比对之后具有至少80%同一性的序列；和 b)一种或多种来自所述单克隆抗体DC8E8的重链CDR的序列或一种或多种在与这些重链⑶R之一最优比对之后具有至少80%同一性的序列； 且其中: 1.所述轻链CDR 包含选自 QSLLNSRTRKNY (SEQ ID NO: 117)、WAS (SEQ ID NO: 118)KQSFYLRT (SEQ ID NO: 119)的序列；以及
i1.所述重链CDR 包含选自 GYIFTDYVIS(SEQ ID NO: 120), IFPRSGST (SEQ ID NO: 121)和 ARDYYGTSFAMDY (SEQ ID NO: 122)的序列。
16.如权利要求1至7中的一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含: a) 一种或多种来自所述单克隆抗体DC8E8的轻链CDR的序列或一种或多种在与这些轻链⑶R之一最优比对之后具有至少80%同一性的序列；和 a)一种或多种来自所述单克隆抗体DC8E8的重链CDR的序列或一种或多种在与这些重链⑶R之一最优比对之后具有至少80%同一性的序列； 且其中: 1.所述轻链CDR 包含选自 QSLLNSRTRKNY (SEQ ID NO: 117)、WAS (SEQ ID NO: 118),KQSFYLRT (SEQ ID NO: 119), SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 253, SEQ ID NO: 255, SEQ IDNO: 257、SEQ ID NO: 258、SEQ ID NO: 259 和 SEQ ID NO: 260 的序列；以及
i1.所述重链CDR 包含选自 GYIFTDYVIS(SEQ ID NO: 120)、IFPRSGST (SEQ ID NO: 121)、ARDYYGTSFAMDY(SEQ ID NO:122) ；SEQ ID NO:261、SEQ ID NO:262、SEQ ID NO:264、SEQ IDNO:265, SEQ ID NO:266, SEQ ID NO:267 和 SEQ ID NO:269 的序列。
17.一种分离的抗体，其中所述抗体是: Fab、Fab’、F(ab’)2、Fabc、Fv片段、或任何其它抗原结合片段；或抗原结合抗体部分；且 其中所述抗体具有如权利要求1至7中的一项所述的抗体的一种或多种免疫结合特征。
18.一种分离的抗体，所述抗体与如权利要求1至17中的一项所述的分离的抗体竞争结合tau蛋白。
19.一种分离的抗体，所述抗体与如权利要求6所述的分离的DC8E8抗体竞争结合tau蛋白。
20. 如权利要求1至7和10至19中的一项所述的分离的抗体，其中所述抗体选自: a)单克隆抗体； b)多克隆抗体； c)重组抗体；d)嵌合抗体； e)人源化抗体； f)人抗体；和 g)(a)至(f)的任一者的抗原结合片段或抗原结合部分。
21.如权利要求1至7和9至20中的一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是在哺乳动物中产生。
22.如权利要求1至7和9至20中的一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是由重组动物或由重组宿主细胞产生。
23.如权利要求1至22中的一项所述的分离的抗体，其中所述抗体用一种或多种标记剂可检测地标记。
24.如权利要求23所述的分离的抗体，其中至少一种标记剂选自酶、放射性同位素、荧光团、核磁共振标记物和重金属。
25.如权利要求1至24中的一项所述的抗体，所述抗体进一步包含至少一种连接于所述抗体的药物。
26.一种分离的核酸，所述核酸至少编码如权利要求1至7和9至20中的一项所述的抗体的免疫球蛋白链的所述结合结构域或可变区。
27.—种分离的载体，所述载体包含如权利要求21所述的核酸。
28.一种分离的宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求26所述的分离的核酸和/或如权利要求27所述的载体。
29.—种分离的细胞系，所述细胞系表达如权利要求1至7和9至20中的一项所述的分离的抗体。
30.如权利要求29所述的分离的细胞系，其中所述细胞系是杂交瘤。
31.如权利要求30所述的分离的细胞系，其中所述细胞系是自其产生单克隆抗体DC8E8的杂交瘤。
32.如权利要求1至7和9至20中的一项所述的分离的抗体，所述抗体用作药物或用于制造药剂以诊断、预防或治疗阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变。
33.如权利要求26所述的分离的核酸，所述核酸用作药物或用于制造药剂以治疗阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变。
34.一种医药组合物，所述医药组合物包含如权利要求1至25中的一项所述的抗体和药学上可接受的载体和/或稀释剂。
35.一种包含抗体和药学上可接受的载体和/或稀释剂的组合的医药组合物，其中所述组合包含至少两种不同抗体，且其中所述抗体各自独立地选自如权利要求1至25中的一项所述的抗体。
36.一种组合物，所述组合物包含至少一种如权利要求1至25所述的抗体和稀释剂或载体。
37. 如权利要求36所述的组合物，所述组合物进一步包含至少一种选自以下的化合物或试剂:可检测标记、匙孔血蓝蛋白、破伤风类毒素或源于其它病原细菌的类毒素、血清白蛋白、牛血清白蛋白、免疫球蛋白分子或其片段、甲状腺球蛋白、卵球蛋白、通用T细胞表位、细胞因子、趋化因子、IL-1 a、IL-1 β、IL-2、IL-10、IFN- y、GM-CSF, MI Fla、M I F I β 和 RANTES。
38.一种供医药或诊断使用的制品，所述制品包括包装材料和容器，所述容器包括冻干形式的如权利要求1至25中的一项所述的抗体的溶液。
39.如权利要求39所述的制品，其中所述容器是用于向受试者递送所述抗体的装置或系统的组成部分。
40.一种包括如权利要求1至25中的一项所述的抗体的医学装置，其中所述装置适于通过至少一种选自以下的模式接触或施用所述抗体:胃肠外、皮下、肌肉内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内、脑室内、鞘内、结肠内、子宫颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、病灶内、推注、经阴道、经直肠、经颊、舌下、鼻内和经皮。
41.一种治疗受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变或预防其进展的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的至少一种如权利要求1至25中的一项所述的抗体。
42.如权利要求41所述的方法，其中所述方法能够减轻运动损伤、提高运动功能、减轻认知损伤、提高认知功能或能够实现其组合效果。
43.一种改善至少一种与受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变相关的症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的至少一种如权利要求1至25中的一项所述的抗体。
44.一种针对受试者中存在阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变，或针对确定受试者显现阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的风险来诊断或筛选受试者的方法，所述方法包括: a)使所述受试者或所述受试者的细胞、组织、器官、流体或任何其它样本与有效量的至少一种如权利要求1至25中的一项所述的抗体接触；以及 b)确定包含病理性tau蛋白和所述抗体的复合物的存在，其中存在所述复合物是对与存在病理性tau蛋白相关的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的诊断。
45.一种针对受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的存在、进展、消退或稳定化，或针对确定受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的阶段来监测受试者的方法，所述方法包括: a)使所述受试者或所述受试者的细胞、组织、器官、流体或任何其它样本与有效量的至少一种如权利要求1至25中的一项所述的抗体接触；以及 b)确定包含病理性tau蛋白和所述抗体的复合物的存在，其中存在所述复合物是对与存在病理性tau蛋白相关的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的诊断。
46.如权利要求41至45中的一项所述的方法，其中所述抗体是静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、鼻内、脑室内、鞘内或以气雾剂形式施用。
47.如权利要求41至45中的一项所述的方法，其中各抗体的每剂所述有效量是所述受试者的每kg体重对应至少Img。
48.如权利要求41至45中的一项所述的方法，其中各抗体的每剂所述有效量是所述受试者的每kg体重对应至少10mg。
49.如权利要求41至48中的一项所述的方法，其中历经至少6个月的时期以多次剂量施用所述抗体的至少一者。
50.如权利要求41至49中的一项所述的方法，其中向人受试者外周施用所述抗体以施加其有益作用。
51.如权利要求50所述的方法，其中在向人受试者外周施用时，所述抗体结合可溶性tau蛋白、肌氨酰不溶性tau蛋白或两者。
52.如权利要求50所述的方法，其中在向人受试者外周施用时，所述抗体结合tau蛋白，其中tau蛋白呈一种或多种选自以下的病理性形式:人阿尔茨海默病患者的脑活检中、来自阿尔茨海默病的动物模型的脑样本中的错序tau蛋白、错误无序tau蛋白、肌氨酰不溶性tau蛋白、神经原纤维缠结、神经原纤维网线和神经炎斑块。
53.如权利要求50至52中的一项所述的方法，其中在向人受试者外周施用时，所述抗体施加一种或多种效应子功能介导的对所述受试者的有益作用。
54.如权利要求1至25中任 一项所述的抗体或如权利要求26所述的核酸，所述抗体或所述核酸用于治疗或诊断选自阿尔茨海默病和相关tau蛋白病变的疾病。
55.—种包含如权利要求1至25中任一项所述的抗体或如权利要求26所述的核酸的组合物，所述组合物用于治疗或诊断选自阿尔茨海默病和相关tau蛋白病变的疾病。
56.—种分离的肽，其中: a)所述分离的肽是tau蛋白的长度是至少6个氨基酸残基、长度是至少7个氨基酸残基、长度是至少9个氨基酸残基、长度是至少10个氨基酸残基、长度是至少12个氨基酸残基或长度是30个氨基酸残基的片段；且其中 b)所述分离的肽包含至少一种tau蛋白治疗表位。
57.如权利要求56所述的分离的肽，其中所述治疗表位包括选自以下位置内的那些的治疗表位: 1.相对于tau441 的位置 267-273 或残基 KHQPGGG (SEQ ID NO: 98)； i1.相对于tau441 的位置 298-304 或残基 KHVPGGG (SEQ ID NO: 99) ii1.相对于tau441 的位置 329-335 或残基 HHKPGGG (SEQ ID NO: 100);和 iv.相对于tau441 的位置 361-367 或残基 THVPGGG (SEQ ID NO: 101)。
58.如权利要求56所述的分离的肽，其中所述治疗表位包括选自以下位置内的那些的治疗表位: 1.相对于tau441 的位置 268-273 或残基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)； i1.相对于tau441 的位置 299-304 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154) ii1.相对于tau441 的位置 330-335 或残基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和 iv.相对于tau441 的位置 362-367 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
59.如权利要求56至58中的一项所述的分离的肽，其中所述肽氨基酸序列是选自以下的序列:SEQ ID NO: 1-4,SEQ ID N0:9_101、SEQ ID NO: 108-112,SEQ ID NO: 154,SEQ IDNO:223-224、NIKAVPGGGS(SEQ ID NO:200)、NIKHVPGGGS(SEQ ID NO:201)、IKHVPGGGS(SEQID NO: 202), KHVPGGGSV (SEQ ID NO:203), HVPGGGSVQ (SEQ ID NO: 204)、VPGGGSVQ (SEQID NO:205) , GffSIHSPGGGSC(SEQ ID NO:250)、SVFQHLPGGGSC(SEQ ID NO:251)、ANIKHVPGGGS (SEQ ID NO: 144)、DAIKHVPGGGS (SEQ ID NO: 146)、DNAKHVPGGGS (SEQ IDNO:149),DNIAHVPGGGS(SEQ ID NO:151)、DNIKAVPGGGS(SEQ ID NO:159)、DNIKHAPGGGS(SEQID NO:161)和 DNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:171)。
60.如权利要求56至59中的一项所述的分离的肽，其中所述肽在至少一种选自测量所述肽的以下能力的测定的测定中具有活性: a)与tau蛋白竞争结合所述单克隆抗体DC8E8的能力； b)体内降低肌氨酰不溶性tau蛋白的水平的能力； c)体内促进tau蛋白自脑清除的能力； d)体内降低AD的至少一种生物化学标记物的水平的能力； e)体内降低神经原纤维缠结(NFT)载荷的能力； f)体内提高至少一种神经行为参数的能力； g)有益改进受试者的AD的过程的能力； h)降低脑中、脑脊髓液中或两者中的tau蛋白的水平的能力； i)在制备能够与单克隆DC8E8竞争结合tau蛋白的抗体中充当免疫原的能力。
61.一种化合物,所述化合物包含如权利要求56至60中的一项所述的分离的肽和部分。
62.如权利要求61所述的化合物，其中所述部分在所述肽的N末端、C末端或连接于内部氨基酸，且其中所述部分选自以下一者或多者:半胱氨酸残基、磷酸基团、匙孔血蓝蛋白、破伤风类毒素或源于其它病原细菌的类毒素、血清白蛋白、牛血清白蛋白、免疫球蛋白分子或其片段、甲状腺球蛋白、卵球蛋白、通用T细胞表位、细胞因子、趋化因子、IL-1a、IL-1 β、IL-2、IL-10、IFN- Y、GM-CSF, ΜΙΡ1α、ΜΙΡ1β 和 RANTES。
63.一种医药组合物，所述医药组合物包含如权利要求56至60中的一项所述的分离的肽和药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或佐剂。
64.一种医药组合物，所述医药组合物包含如权利要求61至62中的一项所述的化合物和药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或佐剂。
65.如权利要求63和64中的一项所述的医药组合物，所述医药组合物适合于提供每剂剂量在Ing与1mg之间的所述肽或所述化合物。
66.如权利要求63和64中的一项所述的医药组合物，所述医药组合物适合于提供每剂剂量大于10微克的所述肽或所述化合物。
67.一种供医药或诊断使用的制品，所述制品包括包装材料和容器，所述容器包括冻干形式的如权利要求56至60中的一项所述的肽或如权利要求61至62中的一项所述的化合物的溶液。
68.如权利要求67所述的制品，其中所述容器是用于向受试者递送所述肽或所述化合物的装置或系统的组成部分。
69.—种包括如权利要求56至60中的一项所述的肽或如权利要求61至62中的一项所述的化合物的医学装置，其中所述装置适于通过至少一种选自以下的模式接触或施用所述抗体:胃肠外、皮下、肌肉内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内、脑室内、鞘内、结肠内、子宫颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、病灶内、推注、经阴道、经直肠、经颊、舌下、鼻内和经皮。
70. 一种治疗受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变或预防其进展的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的至少一种如权利要求56至60中的一项所述的肽和/或至少一种如权利要求61至62中的一项所述的化合物。
71.如权利要求70所述的方法，其中所述方法能够减轻运动损伤、提高运动功能、减轻认知损伤、提高认知功能或能够实现其组合效果。
72.—种改善至少一种与受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变相关的症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的至少一种如权利要求56至60中的一项所述的肽和/或至少一种如权利要求61至62中的一项所述的化合物。
73.如权利要求70至72中的一项所述的方法，所述方法包括向人患者施用如权利要求56至60中的一项所述的肽和/或如权利要求61至62中的一项所述的化合物和/或增大免疫反应的佐剂，所述方法实现包含针对病理性tau蛋白的抗体的免疫反应，由此治疗至少一种与所述人患者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变相关的症状、预防其进展或改善所述至少一种症状。
74.—种产生能够与DC8E8竞争结合tau蛋白的抗体的方法，所述方法包括用如权利要求56至60中的一项所述的肽和/或用如 权利要求61至62中的一项所述的化合物免疫受试者。
75.一种分离DC8E8或分离能够与DC8E8竞争结合tau蛋白的抗体的方法，所述方法包括使DC8E8或所述抗体与如权利要求56至60中的一项所述的肽和/或与如权利要求61至62中的一项所述的化合物接触。
76.—种针对受试者中存在阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变，或针对确定受试者显现阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的风险来诊断或筛选受试者的方法，所述方法包括: a)使所述受试者或所述受试者的细胞、组织、器官、流体或任何其它样本与有效量的至少一种如权利要求74所述的抗体接触；以及 b)确定包含病理性tau蛋白和所述抗体的复合物的存在，其中存在所述复合物是对与存在病理性tau蛋白相关的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的诊断。
77.—种针对受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的存在、进展、消退或稳定化，或针对确定受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的阶段来监测受试者的方法，所述方法包括: a)使所述受试者或所述受试者的细胞、组织、器官、流体或任何其它样本与有效量的至少一种如权利要求74所述的抗体接触；以及 b)确定包含病理性tau蛋白和所述抗体的复合物的存在，其中存在所述复合物是对与存在病理性tau蛋白相关的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变的诊断。
78.如权利要求76至77中的一项所述的方法，其中所述肽和/或化合物是静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、鼻内、脑室内、鞘内或以气雾剂形式施用。
79.如权利要求76至78中的一项所述的方法，其中各肽和/或化合物的所述有效量是每剂至少I μ g、每剂至少10 μ g、每剂至少100 μ g。
80.如权利要求79所述的方法，其中各肽和/或化合物的所述有效量是在佐剂存在下每剂至少10 V- g，且在不存在佐剂下每剂至少100 V- go
81.如权利要求70至73和76至80中的一项所述的方法，其中历经至少6个月的时期以多次剂量施用至少一种肽或化合物。
82.—种治疗受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变或预防其进展的方法，所述方法包括与至少一种选自以下的组合药剂组合向所述受试者施用有效量的至少一种如权利要求I至25中的一项所述的抗体和/或至少一种如权利要求56至60中的一项所述的肽和/或至少一种如权利要求61至62中的一项所述的化合物:乙酰胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂、过渡金属螯合剂、生长因子、激素、非类固醇消炎药物(NSAID)、抗氧化剂、脂质降低剂、选择性磷酸二酯酶抑制剂、tau蛋白聚集抑制剂、蛋白质激酶抑制剂、热休克蛋白抑制剂、抗淀粉状蛋白被动和主动免疫试剂、抗淀粉状蛋白聚集抑制剂和分泌酶抑制剂。
83.如权利要求82所述的方法，其中所述方法能够减轻运动损伤、提高运动功能、减轻认知损伤、提高认知功能或能够实现其组合效果。
84.一种改善至少一种与受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变相关的症状的方法，所述方法包括与至少一种选自以下的组合药剂组合向所述受试者施用有效量的至少一种如权利要求1至25中的一项所述的抗体和/或至少一种如权利要求56至60中的一项所述的肽和/或至少一种如权利要求61至62中的一项所述的化合物:乙酰胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂、过渡金属螯合剂、生长因子、激素、非类固醇消炎药物(NSAID)、抗氧化剂、脂质降低剂、选择性磷酸二酯酶抑制剂、tau蛋白聚集抑制剂、蛋白质激酶抑制剂、热休克蛋白抑制剂、抗淀粉状蛋白被动和主动免疫试剂、抗淀粉状蛋白聚集抑制剂和分泌酶抑制剂。
85.如权利要求83至84中的一项所述的方法，所述方法包括与至少一种选自以下的组合药剂组合向人患者施用有效量的至少一种如权利要求1至25中的一项所述的抗体、一种如权利要求56至60中的一项所述的肽和/或至少一种如权利要求61至62中的一项所述的化合物和/或增大免疫反应的佐剂:乙酰胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂、过渡金属螯合剂、生长因子、激素、非类固醇消炎药物(NSAID)、抗氧化剂、脂质降低剂、选择性磷酸二酯酶抑制剂、tau蛋白聚集抑制剂、蛋白质激酶抑制剂、热休克蛋白抑制剂、抗淀粉状蛋白被动和主动免疫试剂、抗淀粉状蛋白聚集抑制剂和分泌酶抑制剂；其中所述方法实现包含针对病理性tau蛋白的抗体的免疫反应，由此治疗至少一种与所述人患者的AD相关的症状、预防其进展或改善所述至少一种症状。
86.如权利要求83至85中的一项所述的方法，其中所述组合药剂是在施用如权利要求1至25中的一项所述的抗体、如权利要求56至60中的一项所述的肽和/或如权利要求61至62中的一项所述的化合物之前、与之同时、或之后施用。
87.—种医药组合物，所述医药组合物包含药学上可接受的载体和/或稀释剂；和 a)如权利要求1至25中的一项所述的抗体；和/或 b)如权利要求56至60中的一项所述的肽；和/或 c)如权利要求61至62中的一项所述的化合物； 以及至少一种选自以下的组合药剂:乙酰胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂、过渡金属螯合剂、生长因子、激素、非类固醇消炎药物(NSAID)、抗氧化剂、脂质降低剂、选择性磷酸二酯酶抑制剂、tau蛋白聚集抑制剂、蛋白质激酶抑制剂、热休克蛋白抑制剂、抗淀粉状蛋白被动和主动免疫试剂、抗淀粉状蛋白聚集抑制剂和分泌酶抑制剂。
88.一种分离的肽，其中: a)所述分离的肽是tau蛋白的长度是6个氨基酸残基的片段且其中 b)所述分离的肽包含至少一种tau蛋白治疗表位。
89.如权利要求88所述的分离的肽，其中所述治疗表位包括选自以下的治疗表位: I.相对于tau441 的位置 268-273 或残基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)； i1.相对于tau441 的位置 299-304 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154) ii1.相对于tau441 的位置 330-335 或残基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和 iv.相对于tau441 的位置 362-367 或残基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
90.如权利要求88至89中的一项所述的分离的肽，其中所述分离的肽选自HQPGGG(SEQID NO:223)、HVPGGG(SEQ ID NO: 154)、HKPGGG(SEQID NO:224)和HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
91.如权利要求88至90中的一项所述的分离的肽，其中所述肽在至少一种选自测量所述肽的以下能力的测定的测定中具有活性: j)与tau蛋白竞争结合所述单克隆抗体DC8E8的能力； k)体内降低肌氨酰不溶性tau蛋白的水平的能力； I)体内促进tau蛋白自脑清除的能力； m)体内降低AD的至少一种生物化学标记物的水平的能力； η)体内降低神经原纤维缠结(NFT)载荷的能力； ο)体内提高至少一种神经行为参数的能力； P)有益改进受试者的AD的过程的能力； q)降低脑中、脑脊髓液中或两者中的tau蛋白的水平的能力； r)在制备能够与单克隆DC8E8竞争结合tau蛋白的抗体中充当免疫原的能力。
92.一种化合物，所述化合物包含如权利要求88至91中的一项所述的分离的肽和部分。
93.如权利要求92所述的化合物，其中所述部分在所述肽的N末端、C末端或连接于内部氨基酸，且其中所述部分选自以下一者或多者:半胱氨酸残基、磷酸基团、匙孔血蓝蛋白、破伤风类毒素或源于其它病原细菌的类毒素、血清白蛋白、牛血清白蛋白、免疫球蛋白分子或其片段、甲状腺球蛋白、卵球蛋白、通用T细胞表位、细胞因子、趋化因子、IL-1a、IL-1 β、IL-2、IL-10、IFN- Y、GM-CSF, ΜΙΡ1α、ΜΙΡ1β 和 RANTES。
94.一种医药组合物，所述医药组合物包含如权利要求88至91中的一项所述的分离的肽和药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或佐剂。
95.一种医药组合物，所述医药组合物包含如权利要求92至93中的一项所述的化合物和药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或佐剂。
96.如权利要求94和95中的一项所述的医药组合物，所述医药组合物适合于提供每剂剂量在Ing与1mg之间的所述肽或所述化合物。
97.如权利要求94和95中的一项所述的医药组合物，所述医药组合物适合于提供每剂剂量大于10微克的所述肽或所述化合物。
98.一种供医药或诊断使用的制品，所述制品包括包装材料和容器，所述容器包括冻干形式的如权利要求88至91中的一项所述的肽或如权利要求92至93中的一项所述的化合物的溶液。
99.如权利要求98所述的制品，其中所述容器是用于向受试者递送所述肽或所述化合物的装置或系统的组成部分。
100.—种包括如权利要求88至91中的一项所述的肽或如权利要求92至93中的一项所述的化合物的医学装置，其中所述装置适于通过至少一种选自以下的模式接触或施用所述肽和/或所述化合物:胃肠外、皮下、肌肉内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内、脑室内、鞘内、结肠内、子宫颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、病灶内、推注、经阴道、经直肠、经颊、舌下、鼻内和经皮。
101.一种治疗受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变或预防其进展的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的至少一种如权利要求88至91中的一项所述的肽和/或至少一种如权利要求92至93中的一项所述的化合物。
102.如权利要求101所述的方法，其中所述方法能够减轻运动损伤、提高运动功能、减轻认知损伤、提高认知功能或能够实现其组合效果。
103.一种改善至少一种与受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变相关的症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的至少一种如权利要求88至91中的一项所述的肽和/或至少一种如权利要求92至93中的一项所述的化合物。
104.如权利要求101至103中的一项所述的方法，所述方法包括向人患者施用如权利要求88至91中的一项所述的肽和/或如权利要求92至93中的一项所述的化合物和/或增大免疫反应的佐剂，所述方法实现包含针对病理性tau蛋白的抗体的免疫反应，由此治疗至少一种与所述人患者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变相关的症状、预防其进展或改善所述至少一种症状。
105.—种产生能够与DC8E8竞争结合tau蛋白的抗体的方法，所述方法包括用如权利要求88至91中的一项所述的肽和/或用如权利要求92至93中的一项所述的化合物免疫受试者。
106.—种分离DC8E8或分离能够与DC8E8竞争结合tau蛋白的抗体的方法，所述方法包括使DC8E8或所述抗体与如权利要求88至91中的一项所述的肽和/或与如权利要求92至93中的一项所述的化合物接触。
107.如权利要求101至104中的一项所述的方法，其中所述肽和/或化合物是静脉内、肌肉内、皮下、腹膜内、鼻内、脑室内、鞘内或以气雾剂形式施用。
108.如权利要求101至104和107中的一项所述的方法，其中各肽和/或化合物的所述有效量是每剂至少I μ g、每剂至少?ο μ g、每剂至少100 μ g。
109.如权利要求108所述的方法，其中各肽和/或化合物的所述有效量是在佐剂存在下每剂至少10 V- g，且在不存在佐剂下每剂至少100 V- go
110.如权利要求101至104和107至109中的一项所述的方法，其中历经至少6个月的时期以多次剂量施用至少一种肽或化合物。
111.一种治疗受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变或预防其进展的方法，所述方法包括与至少一种选自以下的组合药剂组合向所述受试者施用有效量的至少一种如权利要求I至25中的一项所述的抗体和/或至少一种如权利要求88至91中的一项所述的肽和/或至少一种如权利要求92至93中的一项所述的化合物:乙酰胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂、过渡金属螯合剂、生长因子、激素、非类固醇消炎药物(NSAID)、抗氧化剂、脂质降低剂、选择性磷酸二酯酶抑制剂、tau蛋白聚集抑制剂、蛋白质激酶抑制剂、热休克蛋白抑制剂、抗淀粉状蛋白被动和主动免疫试剂、抗淀粉状蛋白聚集抑制剂和分泌酶抑制剂。
112.如权利要求111所述的方法，其中所述方法能够减轻运动损伤、提高运动功能、减轻认知损伤、提高认知功能或能够实现其组合效果。
113.—种改善至少一种与受试者的阿尔茨海默病或相关tau蛋白病变相关的症状的方法，所述方法包括与至少一种选自以下的组合药剂组合向所述受试者施用有效量的至少一种如权利要求1至25中的一项所述的抗体和/或至少一种如权利要求88至91中的一项所述的肽和/或至少一种如权利要求92至93中的一项所述的化合物:乙酰胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂、过渡金属螯合剂、生长因子、激素、非类固醇消炎药物(NSAID)、抗氧化剂、脂质降低剂、选择性磷酸二酯酶抑制剂、tau蛋白聚集抑制剂、蛋白质激酶抑制剂、热休克蛋白抑制剂、抗淀粉状蛋白被动和主动免疫试剂、抗淀粉状蛋白聚集抑制剂和分泌酶抑制剂。
114.如权利要求111至113中的一项所述的方法，所述方法包括与至少一种选自以下的组合药剂组合向人患者施用有效量的至少一种如权利要求1至25中的一项所述的抗体、一种如权利要求88至91中的一项所述的肽和/或至少一种如权利要求92至93中的一项所述的化合物和/或增大免疫反应的佐剂:乙酰胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂、过渡金属螯合剂、生长因子、激素、非类固醇消炎药物(NSAID)、抗氧化剂、脂质降低剂、选择性磷酸二酯酶抑制剂、tau蛋白聚集抑制剂、蛋白质激酶抑制剂、热休克蛋白抑制剂、抗淀粉状蛋白被动和主动免疫试剂、抗淀粉状蛋白聚集抑制剂和分泌酶抑制剂；其中所述方法实现包含针对病理性tau蛋白的抗体的免疫反应，由此治疗至少一种与所述人患者的AD相关的症状、预防其进展或改善所述至少一种症状。
115.如权利要求111至114中的一项所述的方法，其中所述组合药剂是在施用如权利要求I至25中的一项所述的抗体、如权利要求88至91中的一项所述的肽和/或如权利要求92至93中的一项所述的化合物之前、与之同时、或之后施用。
116.一种医药组合物，所述医药组合物包含药学上可接受的载体和/或稀释剂；和 d)如权利要求1至25中的一项所述的抗体；和/或 e)如权利要求88至91中的一项所述的肽；和/或 f)如权利要求92至93中的一项所述的化合物； 以及至少一种选自以下的组合药剂:乙酰胆碱酯酶抑制剂、NMDA受体拮抗剂、过渡金属螯合剂、生长因子、激素、非类固醇消炎药物(NSAID)、抗氧化剂、脂质降低剂、选择性磷酸二酯酶抑制剂、tau蛋白聚集抑制剂、蛋白质激酶抑制剂、热休克蛋白抑制剂、抗淀粉状蛋白被动和主动免疫试剂、抗淀粉状蛋白聚集抑制剂和分泌酶抑制剂。
【文档编号】A61P25/28GK104185640SQ201280056856
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2012年9月14日 优先权日:2011年9月19日
【发明者】M.诺瓦克, E.康特塞科瓦, B.科瓦塞克, N.奇尔卡 申请人:阿克松神经系统科学公司