专利名称：具有美白皮肤作用的药物组合物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种药物组合物及其制备方法，特别是ー种具有美白皮肤作用的化妆品用药物组合物及其制备方法和应用，适用添加于膏类、霜类、乳类、液类(香水除外)的化妆品。
背景技术：
俗话说“一白遮三丑”，花容月貌、面白如玉，自古为人们所向往。东方女性历来崇尚白皙的肌肤，美白肌肤是每个女孩子所追求的，欧美人虽不追求美白，但热衷于对各种色斑的去除。美白化妆品的市场日趋活跃，其产品销售与日俱增，已成为护肤化妆品的主流品种之一。美白化学物是指通过作用于皮肤黑色素的形成、代谢途径的某个阶段，控制、抑制黑色素生成，从而降低皮肤色度或减轻色素沉着，以达到皮肤美白为目的的天然或人工合成的化学物。目前国内外用于化妆品的美白化学物主要为氢醌、曲酸、果酸、熊果苷和维生素C衍生物等，氢醌和汞盐能达到迅速美白效果，但其毒副作用大，长期使用会造成皮肤永久脱色和接触性皮炎。长期使用曲酸具有细胞毒作用，并可增加卵巣细胞染色体互換及染色体畸变的发生率，但曲酸衍生物美白作用更强，且毒副作用更小，目前的美白化妆品多以此为有效成分；熊果苷作用温和，但使用剂量过大有和曲酸相似的毒副作用。维生素C衍生物则有稳定性差和价格昂贵等缺点。(Nerya 0, Musa R, Khatib s, etal.unalcones 00 potent tyrosinase inhioitors:the effect of nydroxyl positionsand numbers[J].Phytochemistry,2004,65:1389-1395)植物美白依其纯天然性，来源的广泛性，品种丰富无毒、无副作用的优点，越来越多的受到广大消费者的关注。(Smit N,Vicanova J,Pavel S.The hunt for natural skinwhitening agents[J]. 1ht J Mol Sci,2009,10(12):5326-5349 ;Kamakshi R.Fairnessvia formulations:a review ofcosmetic skin-丄ightening ingredients[J].J CosmetSci,2012,63(1):43-54)中药美容已有ニ千年历史，积累了丰富的经验，目前，在日本含天然中草药的化妆品已占整个化妆品市场的50%以上。因此，寻找开发高效且对人体无副作用或副作用小的天然中草药皮肤美白祛斑制剂已成为目前化妆品领域研发的热点。(舒树苗、肖峰、潘勤.美白中药与植物药的研究进展.国外医药 植物药分册，2007，22 (6):252-255)如专利200810024411.9，该专利公开了ー种具有美白功能的中药组合物及其应用，该中药组合物由黄芩、虎杖、丹皮提取物复配而成。如专利200910192274.4，该专利公开了一种美白祛斑霜及其制备方法，活性成分为中药提取液，中药由如下中药百分数的组分组成:手參5 55 %、人参花15 35%、合欢花5 15%、金银花5 15%、玫瑰花15 20%、菊花5 10%。如专利201010261392.9，该专利公开了ー种用于美白皮肤的组合物、植物萃取美白组合物与具有美白功能的组合物，该组合物包括有效量的亚精胺衍生物，以及美容或药理学上可接受的媒介物
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供ー种具有美白皮肤作用的药物组合物及制备方法和用途。本发明所述的具有美白皮肤作用的药物组合物，是以火棘果实、甘草、桑椹、当归和虎耳草为原料制备的，且是以如下重量份数的原料制备的:火棘果实I 60份甘草I 60份桑堪I 60份当归I 60份虎耳草I 60份优选的，所述具有美白皮肤作用的药物组合物，是以如下重量份数的原料制备的:火棘果实I 50份甘草I 50份桑堪I 50份当归I 50份虎耳草I 50份
优选的，所述具有美白皮肤作用的药物组合物，是以如下重量份数的原料制备的:火棘果实I 40份甘草I 40份桑椹I 40份当归I 40份虎耳草I 40份优选的，所述具有美白皮肤作用的药物组合物，是以如下重量份数的原料制备的:火棘果实2 35份甘草2 35份桑椹2 35份当归2 35份虎耳草2 35份优选的，所述具有美白皮肤作用的药物组合物，是以如下重量份数的原料制备的:火棘果实8 30份甘草8 30份桑椹8 30份当归10 30份虎耳草10 3O份最优选的，是以如下重量份数的原料制备的:火棘果实10份
甘草10份桑椹10份当归10份虎耳草10份最优选的，是以如下重量份数的原料制备的:火棘果实8份甘草8份桑椹12份当归12份虎耳草12份最优选的，是以如下重量份数的原料制备的:火棘果实8份甘草8份桑椹15份
当归15份虎耳草15份最优选的，是以如下重量份数的原料制备的:火棘果实10份甘草10份桑椹12份当归12份虎耳草12份最优选的，是以如下重量份数的原料制备的:火棘果实8份甘草8份桑椹10份当归10份虎耳草15份本发明所述的具有美白皮肤作用的药物组合物的制备方法，包括以下步骤:(I)将上述的各个原料置于体积浓度为20% 80%的こ醇中浸泡2 48小时，浸泡用的こ醇用量为各个原料总重量的10 200倍，过滤，得浸泡液；优选的，过滤残渣再用体积浓度为20% 80%的こ醇浸泡2 48小时，合并浸泡后的溶液，得浸泡液。(2)浸泡液浓缩至原重量的2 5%，浓缩液用大孔树脂吸附，再用体积浓度5 95%的こ醇多次洗脱，收集洗脱液，即为所述的具有美白皮肤作用的药物组合物；优选的，洗脱用こ醇的体积浓度为40% 95% ；所述大孔树脂采用日本三菱化学公司以聚苯こ烯一二こ烯基苯为基体的HP20型大孔树脂；浸泡液浓缩的方法为常规的减压浓縮。试验证明，本发明的具有美白皮肤作用的药物组合物，具有多重作用，能够用于制备美白皮肤保养的化妆品和皮肤的治疗性药物。本发明还涉及ー种皮肤保养化妆品，包括所述具有美白皮肤作用的药物组合物和化妆品领域使用的辅料。本发明还涉及ー种皮肤的治疗性药物，包括权利要求所述的具有美白皮肤作用的药物组合物和医学上可接受的载体。尤其可以用于制备皮肤护理化妆品，包括霜剂、乳液、化妆水、凝胶剂、面膜、涂搽剂或洗剂；制备皮肤护理化妆品时，可将制得的提取液组合物，经减压浓缩至原重量的10 % 50 %，得到组合物浓缩液，与已知的化妆品以及药品的基质或者辅料、载体、添加剂相混合，按照常规的方法进行制备，其中，所述组合物浓缩液占化妆品总重量的5% 10%。本发明根据中药理论，从大量的天然药物中，选用了火棘果实、甘草、桑椹、当归和虎耳草为原料，制备获得了所述的具有美白皮肤作用的组合物，其中，所述的火棘果实选用蔷薇科苹果亚科火棘属的常绿野生小灌木植物Pyracantha fortuneana(Maxim.) Li的果实；甘草选用豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根和根莖；桑椹选用桑科植物桑Morus albaL.的干燥果穗；虎耳草选用虎耳草科植物虎耳草Saxifiaggastolonifera Curt.的全草；当归选用伞科植物当归 Angelica sinensis (Oliv.) Diels 的干燥根。根据《中国药典》和文献记载:火棘果实为蔷薇科苹果亚科火棘属的常绿野生小灌木植物Pyracanthafortuneana (Maxim.)Li的果实,火棘果实又名赤阳子、火把果等，主要分布在我国东南、西南及西北等区域的山地及丘陵地帯。火棘果实可食用，性味甘酸，具有健脾消积、生津止渴等功效。火棘果实提取物富含芦丁和金丝桃苷等黄酮类化合物，此外也含有氨基酸、多种无机盐及微量元素等。国外曾报道火棘果实具有显著的美白作用，并以此为原料成功开发出美白化妆品。甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草 Glycyrrhizainflate Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根莖,甘草是临床最常用的中药，俗称“国之药老”，有“十方九草”之美誉，甘草性平，味甘，归十二经。有解毒、祛痰、止痛、解痉以至抗癌等药理作用。在中医上，甘草补脾益气，止咳润肺，缓急解毒，调和百药。临床应用分“生用”与“蜜炙”之别。生用主治咽喉肿痛，痛疽疮疡，胃肠道溃疡以及解药毒、食物中毒等；蜜炙主治脾胃功能減退，大便溏薄，乏カ发热以及咳嗽、心悸等。桑椹为桑科植物桑Morus alba L.的干燥果穗，中医认为桑葚味甘酸，性微寒，入心、肝、肾经，为滋补强壮、养心益智佳果。具有补血滋阴，生津止渴，润肠燥等功效，主治阴血不足而致的头晕目眩，耳鸣心悸，烦躁失眠，腰膝酸软，须发早白，消渴ロ干，大便干结等症。
当归为伞科植物当归Angelicasinensis (Oliv.)Diels的干燥根。当归味甘、辛，性温。能补血，活血，调经，止痛，润肠。用于血虚，面色萎黄，眩晕心悸；血虚，或兼有瘀滞的月经不调、经闭、痛经；虚寒性腹痛、冠心病心绞痛、风湿痹痛、跌打损伤等痛证；肠燥便秘；久咳气喘。近年来，医学家对中国唐代孙思邈著的《千金翼方》中抗老消斑、美容健肤的“妇人面药”进行了科学验证，从中筛选出使用频率最高的药物，结果表明，当归的水溶液抑制酪氨酸酶活性的功能很强，因而能抑制黑色素的形成，对治疗黄褐斑、雀斑等色素性皮肤病收效良好，具有抗衰老和美容作用，有助于使人青春常驻。将当归添加到美容霜、祛斑霜中，以及胶囊雪菲中以求得营养皮肤，防止皮肤粗糙，防治粉刺、黄褐斑、雀斑等作用，经观察无任何副作用。当归还能促进头发生长，用当归制成的护发素、洗发膏，能使头发柔软发亮，易于梳理。虎耳草为虎耳草科植物虎耳草Saxifiagga stolonifera Curt.的全草。微苦、辛、寒、有小毒，祛风，清热，凉血解毒。治风疹，湿疹，中耳炎，丹毒，咳嗽，吐血，肺痈，崩漏，痔疾。近年来，人们发现虎耳草花中富含熊果苷，能有效抑制黑色素母细胞的活跃程度，就像给黑色素催眠一祥，有美白，淡斑的功效。目前，国内外尚未见将火棘果实、甘草、桑椹、当归和虎耳草提取物的组合物用于具有美白皮肤作用的相关报道。综上所述，本发明人阅读了大量文献，依据皮肤美白剂的基本原理，利用细胞模型进行高通量筛选，终于发现具有显著肌肤美白作用的药物组合物。本发明的药物组合物经临床试验证实效果显著，安全性好。所涉及的成分具有效果明确、安全性好、无任何副作用和在化妆品配方中稳定的特点；与现有同类产品相比，具有效果显著的特点，是ー种新型具有美白皮肤作用的有效天然药物提取物的组合物。
具体实施例方式实施例1在室温下，取火棘果实、甘草、桑椹、当归和虎耳草各10公斤(共50公斤)，用体积浓度70%的こ醇600公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度70%的こ醇600公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合并，经过200目的滤网过滤后，减压浓缩20倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度50%的こ醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。实施例2在室温下，取火棘果实8公斤、甘草8公斤、桑椹12公斤、当归12公斤和虎耳草12公斤(共52公斤)，用体积浓度50%的こ醇1200公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度50%的こ醇1200公斤浸泡24小时提取，然后将浸泡后的溶液合井，经过200目的滤网过滤后，减压浓缩40倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度40%的こ醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。实施例3在室温下，取火棘果实8公斤、甘草8公斤、桑椹15公斤、当归15公斤和虎耳草15公斤(共61公斤)，用体积浓度80%的こ醇1000公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度80%的こ醇1000公斤浸泡24小时提取,然后将浸泡后的溶液合并,经过200目的滤网过滤后浓缩25倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度60%的こ醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。实施例4 在室温下，取火棘果实10公斤、甘草10公斤、桑椹12公斤、当归12公斤和虎耳草12公斤(共56公斤)，用体积浓度30%的こ醇2000公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残洛再用体积浓度30%的こ醇2000公斤浸泡24小时提取,然后将浸泡后的溶液合并,经过200目的滤网过滤后浓缩50倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度50%的こ醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。实施例5在室温下，取火棘果实8公斤、甘草8公斤、桑椹10公斤、当归10公斤和虎耳草15公斤(共51公斤)，用体积浓度60%的こ醇1200公斤浸泡提取，浸泡时间为24小时，残渣再用体积浓度60%的こ醇1200公斤浸泡24小时提取,然后将浸泡后的溶液合并,经过200目的滤网过滤后浓缩30倍，再将浓缩液上大孔树脂，用体积浓度80%的こ醇洗脱，收集的洗脱液中含有本发明组方中所需要的有效成分，即药物组合物。实施例6将实施例1所获得的液体采用减压浓缩，浓缩至原重量的10% 50%，得药物组合物浓缩液，用于制备具有美白皮肤作用的精华液，组分的重量百分比如下:
原料比例(％)供应商
A相
单硬脂酸甘酯6.0广州华化
丙ニ醇5.5广州华化
硬脂酸4.0广州华化
三乙醇胺0.7无明化工
白色矿物油10.0广州华化
尼泊尔金甲酯1.5锐谷生物科技
肉豆蔻酸异丙酯10.0浙江物美
聚ニ甲基硅氧烧2.0无明化工
B相
药物组合物浓缩液 1.0自制
去离子水59.3自制生产エ艺:搅拌下将A和B相分别加热至70°C，至全部溶解混合均匀，然后在70°C条件下将B相加入A相中，至形成W/Q型乳剤。搅拌均匀后，冷却至室温即得。实施例1 药物组合物具有美白皮肤作用的细胞实验研究报告:下述实验中，所用的药物提取物的组合物为实施例1的药物组合物。I材料与方法1.1试剂与仪器RPMI1640，Gibco公司产品；胎牛血清(FBS)，杭州四季青公司产品；B-16小鼠黑素瘤细胞，中科院细胞所提供，维生素C由北京贝丽莱斯生物化学公司提供，符合化妆品原料药标准；左旋谷氨酰胺、左旋多巴(L-Dopa)、ニ甲基亚砜(DMSO)、胰蛋白酶，TritonX-100，均为Sigma产品，噻唑兰(MTT)，Serva产品；C02培养箱，美国Bamstead公司；TDL-40B离心机，上海安亭科学仪器厂；细胞培养板，美国Greiner产品；DG5031酶联免疫检测仪，华东电子管厂产品。1.2 方法1.2.1细胞培养B-16黑素瘤细胞株购于中科院细胞所，待细胞生长至融合状态，经0.25%胰蛋白酶消化传代，接种于25cm2培养瓶中，用RPMI1640培养液置于37°C CO2培养箱，5% CO2饱和湿度环境进行培养。每一次实验取自同一传代细胞，初始接种细胞浓度为IO5左右。细胞接种6h后，添加受试美白剂，各设5个剂量组，于第2天更换相同的含药培养液，连续培养3d后收获细胞，用苔盼蓝染色计数细胞总数，然后将细胞用于以下实验中。1.2.2试剂配制与实验分组取本发明的美白提取物0.5g先用ImlDMSO溶解，加新鲜配制的1640培养液稀释至终浓度为5、0.5,0.05,0.005,0.0005g/L，DMSO的终浓度低于
1%。维生素C 直接加入培养液稀释至终浓度，稀释浓度分别为10' 10_2、10' 10_4、IO-5Hi0I/し空白对照组仅加入稀释药物所用的相应溶媒。1.2.3酪氨酸酶活性抑制率检测以L-Dopa为底物，參考Maeda等的方法测定细胞酪氨酸酶活性。调整黑素细胞密度，以IO4个/孔接种于96孔板，6h后换液，每孔加A 200 u I的药物溶液，每个浓度设置4个复孔，对照组加入新鲜培养液代替药物溶液，5% CO2, 37 °C孵育3d后(中间换液一次)，弃去上清液，PBS洗3次，每孔加45 y kl %TritonX-100溶液,震荡IOmin以溶解细胞,姆孔加0.01mol/L的L-Dopa, 37°C孵育60min,于450nm波长处比色，以空白孔调零，在酶联免疫检测仪测各孔吸光度值，每ー实验重复3次。酪氨酸酶活性抑制率=(1-各浓度平均吸光度值+对照组平均吸光度值)X 100%，使用SPSS13.0进行曲线拟合和计算IC5tl值。1.2.4黑素合成抑制率检测黑素含量采用Victoria的方法測定，调整黑素细胞密度，以5 X IO5个/孔接种于6孔板，6h后换液，每孔加入Iml的药物溶液，每个浓度设置3个复孔，对照组加入新鲜培养液代替药物溶液，5% C02，37°C孵育3d后(中间换液一次)，弃去上清液，每孔加入0.25%胰酶Iml于室温下消化2min，加入4ml培养液中止消化，吹打成单细胞悬液，取20 u I作细胞计数，其余细胞悬液1500r/min离心5min，弃上清液，加入ImllNNaOH溶液，震荡5min，80°C水浴加热Ih后，转移至96孔板，每孔加100 yl，选择405nm波长，以空白孔调零，在酶联免疫检测仪上测吸光度值，每ー实验重复3次。黑素合成抑制率(% ) = [1-(药物孔吸光度值+药物孔L细胞密度)+ (对照孔吸光度值+对照孔细胞密度)]X 100 %，使用SPSS13.0进行曲线拟合和计算IC5tl值。1.2.5MTT比色法检测细胞增值抑制率取指数生长期的B_16细胞，经消化分散制备单细胞悬液，调整细胞浓度，将细胞接种至96孔细胞培养板，初始细胞接种浓度为IO5个/孔，液体量200 u I/孔，孵育6h待细胞贴壁后，吸去培养液，加入含有不同浓度药物培养液，每个浓度设置6复孔，继续培养3d(中间换液一次)。测定细胞增殖率吋，向每孔加入
0.5% MTT贮液20 yl，置CO2孵箱继续培养4h。此时MTT经线粒体膜琥珀酸脱氢酶转化为甲替(formazan)，显微镜下可见细胞内外有大量紫红色针状结晶，小心吸取培养液，每孔加A 200 u I DMSO,培养板振摇lOmin，使甲替结晶完全溶解。立即置酶标仪于570nm测光吸收值，每ー实验重复3次，用下列公式计算各组细胞増殖抑制率。细胞増殖抑制率(％)=(1-实验组570/对照组570) X 100%，使用SPSS13.0进行曲线拟合和计算IC5tl值。
1.2.6统计分析对各组中的IC5tl值采用SPSS进行方差分析，进行样本均数间的比较。结果表I药物组合物对美白作用的体外评价(J 土 S)
权利要求
1.种具有美白皮肤作用的药物组合物，其特征在于:是由下述重量配比的原料制成的: 火棘果实1 60份 甘草1 60份 桑椹1 60份 当归1 60份 虎耳草1 60份
2.据权利要求1所述的具有美白皮肤作用的药物组合物，其特征在于:是由下述重量配比的原料制成的: 火棘果实1 50份 甘草1 50份 桑椹1 50份 当归1 50份 虎耳草1 50份
3.据权利要求1-2所述的具有美白皮肤作用的药物组合物的制备方法，其特征在于:包括以下步骤: 第一歩:将上述中药组方用体积浓度为20% 80%的こ醇浸泡，浸泡用的こ醇用量为中药组方总重量的10 200倍，得浸泡液； 第二步:浸泡液经过滤后浓缩至原重量的2 5%，浓缩液用大孔树脂吸附，再用体积浓度5% 95%的こ醇多次洗脱，收集洗脱液，洗脱液中包括中药提取物的组合物。
4.据权利要求3所述的具有美自皮肤作用的药物组合物的制备方法，其特征在于:第一歩中，所述的こ醇浸泡时间为2 48小时；或中药组方先用こ醇浸泡2 48小时，残洛再用こ醇浸泡2 48小时,合并浸泡后的溶液,得浸泡液。
5.据权利要求3所述的具有美白皮肤作用的药物组合物的制备方法，其特征在于:第二步中，所述洗脱用こ醇的体积浓度为40% 95%。
6.据权利要求3-5所述方法制得的具有美白皮肤作用的药物组合物的用途，其特征在干:用于制备皮肤护理化妆品，包括霜剂、乳液、化妆水、凝胶剂、面膜、涂搽剂和洗剤。
7.据权利要求6所述的具有美白皮肤作用的药物组合物的用途，其特征在于:将制得的药物组合物经减压浓缩至原重量的10% 50%，得到组合物浓缩液，用于制备皮肤护理化妆品，其中，所述组合物浓缩液占化妆品总重量的5% 10%。
全文摘要
本发明提供了一种具有美白皮肤作用的药物组合物及其制备方法和应用，所述具有美白皮肤作用的药物组合物是由下述重量配比的原料制成的火棘果实1～60份、甘草1～60份、桑椹1～60份、当归1～60份、虎耳草1～60份。本发明具有美白皮肤作用效果显著，安全，对皮肤无刺激性和致敏性。
文档编号A61K8/97GK103083210SQ20131002961
公开日2013年5月8日 申请日期2013年1月25日 优先权日2013年1月25日
发明者王恩瀚 申请人:王恩瀚