茜草科类型环肽用作为肿瘤转移抑制剂和其制备方法与应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供用茜草科类型环肽化合物RA‐V(1)及其配糖体RA‐XII(2)作为肿瘤转移抑制剂，以其为活性成分的药物组合物，此类化合物的制备方法及其在制备抗肿瘤转移药物中的应用。本发明的方法能快捷分离得到环肽，样品损失少，成本较低，操作方便，可控性和重现性好，溶剂可以反复回收利用，适用于工业生产。
【专利说明】茜草科类型环肽用作为肿瘤转移抑制剂和其制备方法与应
用
【技术领域】
[0001]本发明属于药物【技术领域】，具体地，涉及一类茜草科类型环肽用作为肿瘤转移抑制剂，以其为有效成分的药物组合物，其制备方法及其在制备抗肿瘤转移药物中的应用。
【背景技术】
[0002]肿瘤是机体在各种致瘤因素下，局部组织的细胞在基因水平上失去了对其生长的正常调控，导致细胞异常增生而形成的新生物。一般将肿瘤分为良性和恶性两大类。恶性肿瘤包括癌和肉瘤，是严重威胁人类生命健康的主要疾病之一。据世界卫生组织公布的统计数据，我国恶性肿瘤的发病率为299.12/10万，城市高于农村；死亡率为184.67/10万，农村高于城市；但无论城市还是农村，恶性肿瘤都是人类死亡的主要原因之一。因此，抗癌药物的研究已成为本世纪新药研发的重要方向。
[0003]肿瘤转移是恶性肿瘤的最本质的生物学行为，表现为肿瘤细胞从原发部位迁徙至新的场所并克隆性增生的过程，是一个高选择的系列事件动态变化的阶梯式生物过程，主要包括以下几个步骤:①原发瘤扩张性生长；②肿瘤细胞黏附，降解肿瘤细胞周围基底膜；③穿透血管进入循环系统，随血液到达靶部位并黏附外渗进入组织实质肿瘤细胞在继发位点存活和生长，形成转移灶。大多数癌症患者死于转移性癌而并非原发性癌。据统计，恶性肿瘤患者初次诊断时转移率达60%，临床上80-90%肿瘤患者因肿瘤发生转移而死，肿瘤转移已成为引起癌症患者死亡的首要因素。目前，虽有一些抗肿瘤转移药物在临床上应用，如阿瓦斯汀、恩度等，但毒副作用大、易产生耐药等问题而导致治疗效率降低；因此，开发抗肿瘤转移药物具有极为重要的现实意义。
[0004]现有技术中未见有茜草科类型环肽作为肿瘤转移抑制剂的报道。
[0005]茜草科类型环肽的分离纯化较为困难，具有一定的特点，主要是因为茜草属的植物富含蒽醌类色素且极性分布范围广，很难得到纯度较高的环肽类成分。在现有技术中，从茜草属植物中分离环肽类成分已公开发表若干种方法，这些方法普遍存在样品损失量大，溶剂成本高、可控性和重复性差等缺点，如Lee，J.E等报道，用甲醇提取茜草科茜草的根后，得甲醇浸膏，加水混悬后用氯仿萃取，氯仿部分依次用硅胶、氧化铝、氨丙基键和硅胶色谱柱层析得到环肽富集部分，重结晶富集环肽，再结合各种手段对结晶或母液进行分离纯化，得到一系列环肽，包括大量和微量环肽[Lee, J.E.et al.Structures of cytotoxicbicyclic hexapeptides，RA - XIX，-XX，- XXI，and - XXII，from Rubia cordifolia LTetrahedron.，2008, 64，4117 -4125]，其缺点在于样品损失量大，过程过于复杂，分离成本高且重结晶技术可控性和重现性不好。
【发明内容】
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[0006]针对现有技术存在的上述不足之处，本发明的目的在于提供一类茜草科类型环肽化合物；提供制备该类化合物的方法，该方法能快捷分离得到环肽，样品损失少，成本较低，操作方便，可控性和重现性好，溶剂可以反复回收利用，也适用于工业生产；本发明的目的还在于提供以茜草科类型环肽化合物为有效成分的药物组合物；该类化合物及其组合物在制备抗肿瘤转移药物中的应用。
[0007]为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下技术方案:
[0008]以下述结构式所示的茜草科类型环肽RA - V(1)和RA - XII (2)或其药理学上容许
的盐为有效成分的肿瘤转移抑制剂，
[0009]
【权利要求】
1.以下述结构式所示的茜草科类型环肽RA-V(I)和RA-XII(2)或其药理学上容许的盐为有效成分的肿瘤转移抑制剂，
2.用权利要求1中的茜草科植物中的茜草科类型环肽RA-V(I)和RA-XII(2)作为肿瘤转移抑制剂。
3.抗肿瘤转移的药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的茜草科类型环肽或其药理学上容许的盐和药学上可接受的载体。
4.权利要求1所述的茜草科类型环肽或其药理学上容许的盐在制备肿瘤转移抑制剂中的应用。
5.权利要求1所述的茜草科类型环肽或其药理学上容许的盐在制备抗肿瘤转移药物中的应用。
6.制备权利要求1所述的茜草科类型环肽化合物的方法，取茜草属植物的根茎，经干燥、粉碎后，通过甲醇回流充分提取，得甲醇浸膏；结合环肽的TLC检测方法，利用硅胶、Sephadex LH - 20和HPLC等各种分离材料和技术进行分离纯化，即得到茜草科类型环肽。
7.制备权利要求1所述的茜草科类型环肽化合物RA- V(I)和RA - XII (2)的方法，取茜草科植物茜草(Rubia cordifolia L.)的根茎，经干燥、粉碎后，利用甲醇热回流提取3次，每次时间为3-4小时，提取液经减压浓缩得甲醇浸膏；甲醇浸膏经硅胶柱层析，用氯仿/甲醇(100:0，9:1，8:2，7:3，1:1，0:100)梯度洗脱，通过环肽TLC检测方法合并各馏分得总环肽部位；以下的每一步骤都须结合环肽TLC检测方法来进行分离纯化；总环肽部位经硅胶柱层析，用70:1-8:2的氯仿/甲醇梯度洗脱，根据环肽点的不同合并为三个组分Fr.1-Fr.3 ;对Fr.1组分经硅胶柱层析，用7:3-0:1石油醚/丙酮为洗脱剂分离得到三个亚组分Fr.1 -1 - Fr.1 - 3 ;其中Fr.1-3亚组分经Sephadex LH - 20凝胶柱层析，1:1的氯仿/甲醇为洗脱剂，所富集的含有环肽的部分再经硅胶柱层析，用1:1的石油醚/丙酮洗脱分离得到化合物RA-V (I) ;Fr.3组分经硅胶柱层析，10:1-8:2乙酸乙酯/甲醇进行梯度洗脱，合并得到四个亚组分Fr.4 -1 - Fr.4 - 4 ；Fr.4 - 3亚组分以1:1的氯仿/甲醇为洗脱剂直接经Sephadex LH - 20进行环肽富集；再经硅胶柱层析，95:5_0:1氯仿/甲醇梯度洗脱，合并得到三个亚组分Fr.4 - 3 -1 - Fr.4 - 3 - 3 ;利用HPLC对Fr.4 - 3 - 3亚组分进行分离，即可得到化合物RA-XII ⑵。
【文档编号】A61K38/12GK103880929SQ201410133237
【公开日】2014年6月25日 申请日期:2014年4月3日 优先权日:2014年4月3日
【发明者】谭宁华, 刘碧珊, 汪哲, 赵思蒙, 余嘉莉, 梁恺颖, 陈小强, 冯国培, 梁秉中 申请人:中国科学院昆明植物研究所, 香港中文大学中医中药研究所