氨氯地平或氟桂利嗪联合氟康唑的抗真菌产品及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了氨氯地平或氟桂利嗪联合氟康唑的抗真菌产品及其应用，氨氯地平与氟康唑联合应用时的有效浓度配比：氟康唑：氨氯地平＝1:8(μg/ml)；氟桂利嗪与氟康唑联合应用时有效浓度配比氟康唑：氟桂利嗪＝1:16(μg/ml)。联合应用时氨氯地平与氟康唑的最低抑菌浓度分别为：8μg/ml、1μg/ml；氟桂利嗪与氟康唑的最低抑菌浓度分别为：16μg/ml、1μg/m。钙离子通道阻滞剂在临床上广泛应用，其对FLC抗真菌的增效作用，可扩大其应用范围，并且降低FLC的最低有效浓度，降低抗真菌药物的用药量，从而降低药物的不良反应的发生。
【专利说明】氨氯地平或氟桂利嗪联合氟康唑的抗真菌产品及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药【技术领域】，具体涉及氨氯地平或氟桂利嗪联合氟康唑的抗真菌产 品及其应用。
【背景技术】
[0002] 近年来，随着免疫力低下人群（恶性肿瘤、艾滋病、自身免疫病等患者）的增多， 导管插管和器官移植等技术的开展，广谱抗生素、皮质激素和免疫抑制剂的广泛使用，真 菌感染的发病率急剧上升（Odds FC. Pathogenesis of Candida infections. J Am Acad Dermatol. 1994, 31:S2-S5)。研究表明，AIDS(艾滋病）患者晚期遭受的真菌感染，其分 离菌超过三分之一表现出耐药现象，特别是对唑类药物，耐药率高达65% (Saltanat H，Li HjGeng XH et al. Clinical distribution and drug resistance of Candida infection. Journal of Xingjiang Medical University 2008,31(8):1058-1060)。
[0003] 新药研究与联合用药研究均是解决真菌耐药的途径。新药研究周期长，成本高，而 联合用药其前期投入少、效果显著，受到国内外的关注。联合用药研究包括两种抗真菌药联 合和非抗真菌药与抗真菌药联合。由于抗真菌药物品种有限，且新的具有抗真菌作用的药 物价格昂贵且副作用明显，使得非抗真菌药物与抗真菌药物的联合应用研究备受关注。氟 康唑（FLC)作为安全、有效、价格低廉的唑类抗真菌药物，临床应用非常广泛，同时也导致 真菌耐药率不断上升。因此，非抗真菌药与FLC联合应用对抗耐药真菌的作用成为研究的 执占。
[0004] 目前抗真菌的机制包括：抑制真菌细胞壁的合成；抑制真菌细胞膜主要成分麦角 甾醇的合成以及直接作用于麦角留醇的结构，作用于真菌核酸代谢等。除此之外，从其他方 面寻找新的抗真菌途径也成为研究者们持续关注的热点。
[0005] 中国专利CN102626415A，公开了一种四环素类药物联合应用氟康唑在制备抗真 菌产品中的应用及其产品。其内容为抗真菌类药物氟康唑与四环素类抗菌药物多西环 素（DOX)、米诺环素（MINO)联合应用可以产生协同抗真菌作用，非选择性钙通道阻滞剂贝 尼地平（BEN)、选择性L型钙通道阻滞剂硝苯地平（NIF)及钙离子螯合剂乙二胺四乙酸 (EDTA)对上述两种用药具有增效作用。上述专利研究发现BEN、NIF及EDTA均能够明显增 强FLC与D0X/MIN0对白色念珠菌的联合抗真菌作用，明显降低FLC、MINO和DOX联合用药 时的最低有效浓度，增强FLC与D0X/MIN0的联合作用，即三种药物联合对耐药白色念珠菌 有显著的杀伤作用。另外，已用于临床的药物中，很多例子表明同类药物不一定都具有同样 的作用。如青霉素类药物，品种繁多，但只有部分品种，如哌拉西林具有抗铜绿假单胞菌的 作用，而大部分品种对此菌无作用。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的就是为了提供一种氨氯地平或氟桂利嗪联合氟康唑的抗真菌产品 及其应用。
[0007] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
[0008] -种氨氯地平或氟桂利嗪联合氟康唑的抗真菌产品，氨氯地平与氟康唑联合应用 时的有效浓度配比：氟康唑：氨氯地平=l:8(i!g/ml);氟桂利嗪与氟康唑联合应用时有效 浓度配比氟康唑：氟桂利嗪=1:16 (ii g/ml)。
[0009] 联合应用时氨氯地平与氟康唑的最低抑菌浓度分别为：8li g/ml、l ii g/ml ;氟桂 利嗪与氟康唑的最低抑菌浓度分别为：16 y g/ml、l ii g/m。
[0010] 结果表明，大于g/ml氨氯地平与大于I y g/ml的氟康唑联合应用均有效；大于 16 ii g/ml氟桂利嗪与大于I ii g/ml的氟康唑联合应用均有效。
[0011] 所述真菌为白色念珠菌。
[0012] 上述产品在抗真菌中的应用。
[0013] 本发明的有益效果：
[0014] 本发明定量评价了临床常用的钙离子阻滞剂（氨氯地平和氟桂利嗪）与FLC的联 合抗真菌作用，分析了其对FLC的增敏效果，并进行了静态与动态的系统评价。
[0015] 本发明采用耐药白色念珠菌细胞进行研究，利用液体定量法，测定FLC与AML和 FNZ联合用药时最低有效浓度，并以FICI法选择最佳药物组合浓度及评价药物联合用药的 作用；本发明还采用时间-杀菌曲线法评价药物联用动态抗真菌作用。
[0016] 本发明为临床提供了联合用药作为治疗耐药真菌感染的治疗方案。另外，不同类 型的钙通道阻滞剂对氟康唑的增效作用，揭示其协同作用机制可能与细胞内钙离子有关， 为研究抗真菌药物作用的新靶点提供思路。
[0017] 本发明表明，FLC与AML或FNZ联用时，可以产生协同抗真菌作用。对氟康唑耐药 的白色念珠菌菌株（MIC1P512 i! g/ml)，联合用药可使其最低抑菌浓度明显降低，8 i! g/ml 的AML或16 ii g/ml的FNZ与I ii g/ml FLC合用均可以杀灭80%以上的真菌，浓度再增大， 效果更强。
[0018] 本发明表明，破坏细胞内钙平衡可能是联合抗真菌作用的机制，为新药的开发及 老药新用提供可能的研究方向。
[0019] 本发明表明，钙离子通道阻滞剂在临床上广泛应用，其对FLC抗真菌的增效作用， 可扩大其应用范围，并且降低FLC的最低有效浓度，降低抗真菌药物的用药量，从而降低药 物的不良反应的发生。
【专利附图】
【附图说明】
[0020] 图1为氟康唑联合氨氯地平应用时的抗真菌时间-杀菌曲线；
[0021] 图2为氟康唑联合氟桂利嗪应用时的抗真菌时间-杀菌曲线。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合实施例对本发明作进一步说明。
[0023] 实施例I FLC与CCB联合抗真菌作用测定
[0024] 1 ?材料
[0025] I. 1药品与试剂
[0026] 氟康唑（fluconazole, FLC)，山东诚创医药科技发展有限公司；
[0027] 氨氯地平（minocycline, AML)，美仑生物有限公司；
[0028] 氟桂利嗪（flunarizine hydrochloride, FNZ)，中国食品药品检定研究院；
[0029] 科玛嘉念珠菌显色培养基，郑州博赛生物工程有限公司；
[0030] TTC-沙保罗琼脂，杭州天和微生物试剂有限公司；
[0031] 氢氧化钠，国营山东单县有机化工厂,批号940420 ;
[0032] 磷酸二氢钾，上海新宝精细化工厂，批号200602132 ;
[0033] 二甲基亚砜（DMSO)，天津市广成化学试剂有限公司；
[0034] RPMI 1640原料药粉，美国GIBCO公司；
[0035] 3-(N-吗啉代）丙磺酸（MOPS)，济南朋远生物技术有限公司；
[0036] 甲萘醌（Menadione)，美国 Sigma 公司；
[0037] XTT (二甲氧唑黄），南京旋光科技有限公司；
[0038] 乳酸林格氏液（复方氯化钠溶液），山东鲁抗辰欣药业有限公司；
[0039] 丙酮，上海振兴化工一厂，批号200209510 ;
[0040] XTT(3,3'-[l-(苯氨酰基）-3,4_四氮唑]-二（4-甲氧基-6-硝基）苯磺酸钠）-甲 萘醌溶液的配制：取XTT粉末0. 0500g，溶解于IOOrnl已灭菌的林格氏液配成0. 5mg/ml的 溶液，用0.22 滤膜滤过灭菌；加入IOiU的lOmmol/L的甲萘醌丙酮溶液（取甲萘醌 0. 0860g溶解于5ml丙酮），使其终浓度为I ii mol/L，摇匀，2°C?8°C避光保存。
[0041] 药物溶液：氟康唑用无菌蒸馏水溶解，其他药物用二甲基亚砜溶解，分别配成 2560 ii g/ml的储备液，过滤（0. 22 ii m)分装。所有药液于-20°C冰箱保存，备用。
[0042] PBS (磷酸盐缓冲液）：用北京鼎国昌盛生物技术有限公司的PBS磷酸盐缓冲剂 (粉剂），小包装一袋溶于IL蒸馏水中，即配成0. 01M，PH7. 4的PBS磷酸盐缓冲液，121 °C高 温高压湿热灭菌20min，冷却备用。
[0043] RPMI (Roswell Park Memorial Institute) 1640 液体培养液：取 RPMI 1640 (含 L-谷氨酰胺，不含碳酸氢钠）粉末2. 08g，加入10 %葡萄糖溶液40ml (含糖终浓度2%)及 M0PS(3-(N-吗啉基）丙磺酸）粉6. 906g，加蒸馏水至200ml，混合均匀后在22°C用lmol/L 的NaOH溶液调pH为7. 0±0. 1，临用前用0. 22 ii m混合纤维膜过滤灭菌。
[0044] 1.2 仪器
[0045]
【权利要求】
1. 一种氨氯地平联合氟康唑的抗真菌产品，其特征在于，氨氯地平与氟康唑联合应用 时的有效浓度配比：氟康唑：氨氯地平=1:8〇 g/ml)。
2. 如权利要求1所述的抗真菌产品，其特征在于，联合应用时氨氯地平与氟康唑的最 低抑菌浓度分别为：8 ii g/ml、l y g/ml。
3. -种氟桂利嗪联合氟康唑的抗真菌产品，其特征在于，氟桂利嗪与氟康唑联合应用 时有效浓度配比氟康唑：氟桂利嗪=1:16 (ii g/ml)。
4. 如权利要求3所述的抗真菌产品，其特征在于，氟桂利嗪与氟康唑的最低抑菌浓度 分别为：16 ii g/ml、l y g/m。
5. 如权利要求1-4所述抗真菌产品，其特征在于，所述真菌为白色念珠菌。
6. 如权利要求1-5任一所述的产品在抗真菌中的应用。
【文档编号】A61P31/10GK104382901SQ201410682301
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年11月24日 优先权日:2014年11月24日
【发明者】孙淑娟, 刘书源, 刘卫国, 时海燕, 时银萍 申请人:山东省千佛山医院