一种动物双歧杆菌及其组合物的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种动物双歧杆菌及其组合物，属于微生物应用【技术领域】。本发明所提供的动物双歧杆菌的保藏号为CGMCC No.4521，于2010年12月29日，保藏在位于北京的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本发明所提供的动物双歧杆菌与干酪乳杆菌、粪链球菌和蜡样芽胞杆菌具有协同生长作用，并且对对喹诺酮类、氨基糖苷类和单环β-内酰胺类抗生素具有耐受性，适用于食品、药品和/或保健品中。
CGMCC NO.4521
20101229
【专利说明】一种动物双歧杆菌及其组合物
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种动物双歧杆菌及其组合物，属于微生物应用【技术领域】。 技术背景
[0002] 动物双歧杆菌是人类最早发现的生理性细菌，是人体肠道内典型的有益菌。动物 双歧杆菌是定植于人体肠道内的益生菌，它的存在可有效降低人体内系统的PH，改变肠道 内菌群，优化肠道微生态，抑制和杀灭病原菌，从而增强人体免疫力，提高机体抗病能力，同 时，动物双歧杆菌在肠道内还可合成多种维生素。此外，动物双歧杆菌还具有润肠通便，降 低胆固醇和甘油三酯，抑制癌细胞，抗衰老等作用。因此，人体内动物双歧杆菌的数量和质 量已成为衡量人体肠道健康的重要标准之一。
[0003] 动物双歧杆菌是一类专性厌氧菌，对氧的环境及营养要求较高。当菌体耐酸，耐胆 盐能力不足是进不到肠道，就会失去它的作用。因此，要发挥益生作用，菌体首先应能耐受 人体肠道的消化过程，能够抵御胃酸和胆汁对其的杀灭作用。目前报道能够耐受人体胃酸 和胆盐的动物双歧杆菌的获取方法主要有三种，分为为从自然界中筛选，从自然发酵食品 中筛选以及对现有菌种进行驯化。但是，现有动物双歧杆菌菌株之间差异较大，往往无法在 具备耐酸耐胆盐的功能下，能够长时间在室温下存活，同时具备抑菌并与乳酸菌复配等多 种优点。
[0004] 双歧杆菌等微生态制品具有保健以及预防和治疗疾病的作用，主要依赖制品的功 能活菌的存在，而如何提高发酵生产的活菌数，以及保持产品的存活稳定性，对于制品的作 用效果来说是一个非常关键的问题。由于双歧杆菌是专性厌氧菌，对空气和温度十分敏感， 因此在实际应用中也出现一些问题。菌种在生产、运输和保藏过程中，容易失活。为了使产 品的活菌数保持在一定的水平，国内外的研究人员做了大量关于基因改造、微胶囊技术、菌 体包埋技术等方面的研究，但从目前来看，产品常常被要求在低温下保存，绝大多数含双歧 杆菌的产品都没有解决常温保存的问题。
【发明内容】
[0005] 为解决上述问题，本发明提供了一种动物双歧杆菌，所采取的技术方案如下：
[0006] 本发明的目的在于提供一种动物双歧杆菌，该动物双歧杆菌对喹诺酮类、氨基糖 苷类和单环内酰胺类抗生素具有耐受性。
[0007] 所述动物双歧杆菌的保藏号为CGMCC No. 4521，分类命名为Bifidobacterium animalis，于2010年12月29日，保藏在位于北京的中国微生物菌种保藏管理委员会普通 微生物中心。
[0008] 所述喹诺酮类抗生素为环丙沙星、氧氟沙星和诺氟沙星。
[0009] 所述氨基糖苷类抗生素为庆大霉素和卡那霉素。
[0010] 所述单环β -内酰胺类抗生素为氨曲南。
[0011] 本发明的另一目的在于提供一种含有所述动物双歧杆菌的组合物，该组合物含有 动物双歧杆菌和载体。
[0012] 所述载体由脱脂乳、海藻糖、麦芽糖糊精、L-谷氨酸钠和低聚异麦芽糖组成。
[0013] 所述载体组成如下：10%脱脂乳、4%海藻糖、4%麦芽糖糊精、4% L-谷氨酸钠和 4%低聚异麦芽糖。
[0014] 所述组合物含有动物双歧杆菌的活菌数在I X 105CFU/g-l X 10nCFU/g。
[0015] 所述组合物剂型为粉剂，片剂，胶囊或颗粒剂。
[0016] 本发明有益效果如下：
[0017] 1.本发明根据人体肠胃的生理条件，从健康儿童的肠道内筛选出一种动物双歧杆 菌，经鉴定为动物双歧杆菌动物双歧杆菌乳酸亚种。本发明所提供的动物双歧杆菌可以在 人体内定植，发挥益生作用。对酶活化剂的利用性很好，更增强机体免疫力；该菌具有促进 B细胞分裂、活化吞噬细胞的免疫激活作用；对肠道内的有害菌群有较好的抑制作用，从而 起到调节肠道微生物菌群的作用。
[0018] 2.本发明所提供的动物双歧杆菌，与其他益生菌具有良好的协同生长作用，复配 效果较好。尤其是与干酪乳杆菌、粪链球菌和蜡样芽胞杆菌，适用于制备多联益生菌制剂。 所制备的益生菌制剂的活菌数高，可达I X l〇nCFU/g。
[0019] 3.本发明所提供的动物双歧杆菌对对喹诺酮类、氨基糖苷类和单环β -内酰胺类 抗生素具有耐受性。
【专利附图】
【附图说明】
[0020] 图1为实施例2中动物双歧杆菌的显微镜图；
[0021] (放大倍数为100倍）。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明不受实施例的限制。
[0023] 以下实施例中所述方法，未经特殊说明，均为常规方法。
[0024] 以下实施例中所述试剂和仪器，未经特殊说明，均为本领域中常规试剂和仪器可 从商业渠道获取。
[0025] 实施例1菌株的获得
[0026] 动物双歧杆菌，为分离自杭州市江干区健康人体肠道，筛选出适合人体的菌株，动 物双歧杆菌已于2010年12月29日，在中国科学院微生物研究所普通微生物中心保藏，保 藏号为 CGMCC No. 4521。
[0027] 动物双歧杆菌采自杭州市江干区20名2-6岁的健康儿童，男女各10名，均无胃肠 病史，采样前两周内均未服用任何抗菌类药物。采样时用无菌玻璃棒挑取自然排出的新鲜 粪便4-10g，置于无菌平皿中，迅速放入厌氧罐中，带回实验室分离。
[0028] 实施例2菌株的鉴定和培养
[0029] 2.1采用稀释涂布的方法，分别对采集的菌株样品进行分离纯化。纯化培养后观 察菌落形态，取新鲜培养物，接种糖发酵试管，鉴定菌株的生化反应特性。同时取待测菌株 的新鲜培养物，采用法国梅里埃公司的API 20A生化鉴定条，参照梅里埃公司的生化判定 数据库对待测菌株进行API生化鉴定。同时将提取分离纯化号菌株的16S rRNA，并测定序 列，并将测序结果与NCBI的GeneBank已有的序列进行比对。分离纯化好的菌种于2-8°C下 保存。
[0030] 经过鉴定，待测菌株的菌落特征为淡黄色，圆形，边缘整齐，稍隆起，湿润。菌株形 态为：革兰氏阳性，无芽孢、无荚膜、短杆菌，一端稍膨大或呈Y或V型弯相菌等多形态，栅栏 状排列或不规则单一排列。菌株的生化反应特性见表1。
[0031] 表1待测菌株的生化反应特性
[0032]
【权利要求】
1. 一种动物双歧杆菌，其特征在于，对喹诺酮类、氨基糖苷类和单环3 -内酰胺类抗生 素具有耐受性。
2. 权利要求1所述动物双歧杆菌，其特征在于，保藏号为CGMCC No. 4521，于2010年12 月29日，保藏在位于北京的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
3. 权利要求1所述动物双歧杆菌，其特征在于，所述喹诺酮类抗生素为环丙沙星、氧氟 沙星和诺氟沙星。
4. 权利要求1所述动物双歧杆菌，其特征在于，所述氨基糖苷类抗生素为庆大霉素和 卡那霉素。
5. 权利要求1所述动物双歧杆菌，其特征在于，所述单环P -内酰胺类抗生素为氨曲 南。
6. -种含有权利要求1所述动物双歧杆菌的组合物，其特征在于，含有动物双歧杆菌 和载体。
7. 权利要求你6所述组合物，其特征在于，所述载体由脱脂乳、海藻糖、麦芽糖糊精、 L-谷氨酸钠和低聚异麦芽糖组成。
8. 权利要求你6所述组合物，其特征在于，所述载体组成如下：10%脱脂乳、4%海藻 糖、4%麦芽糖糊精、4% L-谷氨酸钠和4%低聚异麦芽糖。
9. 权利要求6所述组合物，其特征在于，含有动物双歧杆菌的活菌数在1 x 10 5CFU/ g-1 x 10nCFU/g。
10. 权利要求6所述组合物，其特征在于，剂型为粉剂，片剂，胶囊或颗粒剂。
【文档编号】A61P1/14GK104498401SQ201410789834
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月18日 优先权日:2014年12月18日
【发明者】曹勇, 闫天文 申请人:杭州龙达新科生物制药有限公司