本发明属于生物医药领域，涉及枸橼酸乙胺嗪的新用途，具体涉及枸橼酸乙胺嗪的药物组合物及其在生物医药中的应用。
背景技术：
枸橼酸乙胺嗪为一种驱虫药，对丝虫成虫(除盘尾丝虫外)及微丝蚴均有杀灭作用，对易感微丝蚴有两种作用一为抑制肌肉活动，使虫体固定不动，此可能为本药哌嗪部分的过度极化作用，促进虫体由其寄居处脱开所致；二为改变微丝蚴体表膜，使之更易遭受宿主防御功能的攻击和破坏。
迄今为止，尚未见枸橼酸乙胺嗪及其药物组合物与糖尿病合并牙周炎的相关性报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种枸橼酸乙胺嗪的药物组合物，该药物组合物中含有枸橼酸乙胺嗪和一种结构新颖的天然产物，枸橼酸乙胺嗪和该天然产物可协同治疗糖尿病合并牙周炎。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
一种具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，
一种枸橼酸乙胺嗪的药物组合物，包括枸橼酸乙胺嗪、如权利要求1所述的化合物(Ⅰ)和药学上可以接受的载体，制备成需要的剂型。
进一步地，药学上可以接受的载体包括稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体或润滑剂。
进一步地，所述剂型包括片剂、胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、喷雾剂、滴剂或贴剂。
上述化合物(Ⅰ)的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将龙胆粉碎，用85～95％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用8％乙醇洗脱10个柱体积，再用70％乙醇洗脱12个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩得70％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中70％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75％的甲醇水溶液等度洗脱，收集8～14个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)。
进一步地，化合物(Ⅰ)的制备方法中，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
上述化合物(Ⅰ)在制备治疗糖尿病合并牙周炎的药物中的应用。
上述枸橼酸乙胺嗪的药物组合物在制备治疗糖尿病合并牙周炎的药物中的应用。
本发明的优点：
本发明提供的枸橼酸乙胺嗪的药物组合物中含有枸橼酸乙胺嗪和一种结构新颖的天然产物，枸橼酸乙胺嗪、化合物(Ⅰ)单独作用时，对糖尿病合并牙周炎具有治疗作用；枸橼酸乙胺嗪和化合物(Ⅰ)联合作用时，对糖尿病合并牙周炎的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗糖尿病合并牙周炎的药物。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范围。
实施例1：化合物(Ⅰ)分离制备及结构确证
试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
分离方法：(a)将龙胆(2kg)粉碎，用90％乙醇热回流提取(20L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味(4L)，依次用石油醚(4L×3次)、乙酸乙酯(4L×3次)和水饱和的正丁醇(4L×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用8％乙醇洗脱10个柱体积，再用70％乙醇洗脱12个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩得70％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中70％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为40:1(8个柱体积)、20:1(8个柱体积)、10:1(8个柱体积)和5:1(10个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为8:1(8个柱体积)、5:1(10个柱体积)和2:1(5个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75％的甲醇水溶液等度洗脱，收集8～14个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)(纯度大于98％)。
结构确证：无定型固体，HR-ESI-MS显示[M+H]+为m/z 303.1559，结合核磁特征可得分子式为C18H22O4，不饱和度为8。核磁共振氢谱数据δH(ppm，CDCl3，500MHz)：H-1(5.64，d，J＝9.3Hz)，H-2(5.41，dd，J＝9.3，2.8Hz)，H-3(5.86，m)，H-6(6.03，d，J＝4.4Hz)，H-7(2.71，ddd，J＝4.4，13.1，4.6Hz)，H-8α(1.74，m)，H-8β(1.82，ddt，J＝13.5，4.2，13.2Hz)，H-9α(1.45，dt，J＝3.2，13.2Hz)，H-9β(1.59，ddd，J＝13.2，4.2，2.7Hz)，H-13(6.29，d，J＝3.3Hz)，H-13(5.76，d，J＝3.3Hz)，H-14(0.92，s)，H-15(5.17，s)，H-15(4.97，s)，3-OAc(2.12，s)，12-OMe(3.77，s)；核磁共振碳谱数据δC(ppm，CDCl3，125MHz)：142.5(CH，1-C)，123.4(CH，2-C)，79.2(CH，3-C)，152.1(C，4-C)，143.2(C，5-C)，123.7(CH，6-C)，41.4(CH，7-C)，25.8(CH2，8-C)，35.2(CH2，9-C)，42.7(C，10-C)，144.6(C，11-C)，167.3(C，12-C)，124.9(CH2，13-C)，20.3(CH3，14-C)，105.6(CH2，15-C)，171.5(C，3-OAc)，21.7(CH3，3-OAc)，52.4(CH3，12-OMe)。13C-NMR、DEPT和HSQC谱中显示有18个碳信号，包括三个甲基(一个甲氧基和一个乙酰甲基)，四个亚甲基(两个烯烃碳)，五个次甲基(一个连氧碳和三个烯烃碳)，以及六个季碳(三个烯烃碳和两个羰基碳)。以上功能结构再结合不饱和数表明该化合物为两环结构。1H-NMR谱结合HSQC谱显示三个甲基质子信号δH 0.92(3H，s)、2.12(3H，s)与3.77(3H，s)，两对端烯烃质子信号δH 6.29(1H，d，J＝3.3Hz)与5.76(1H，d，J＝3.3Hz)，5.17(1H，s)与4.97(1H，s)，一个连氧次甲基质子信号δH 5.86(1H，m)，三个烯烃次甲基质子信号δH 5.64(1H，d，J＝9.3Hz)，5.41(1H，dd，J＝9.3，2.8Hz)和6.03(1H，d，J＝4.4Hz)。NMR谱数据δH3.77(3H，s)与δC 52.4可知该化合物中存在甲氧基，HMBC谱中OMe与C-12的相关信号表明了甲氧基连接在C-12位。此外，NMR谱数据δH 2.12(3H，s)与δC 171.5、21.7可知该化合物中存在乙酰基，HMBC谱中OAc与C-3的相关信号表明了乙酰基连接在C-3位。通过1H-1H COSY谱中H-1/H-2/H-3与H-6/H-7/H-8/H-9相关信号，以及HMBC谱中显示的H-1与C-2、C-3和C-10，H-2与C-1和C-3，H-3与C-1、C-2、C-4和C-5，H-6与C-5、C-7、C-8和C-11，H-7与C-6、C-11、C-12和C-13，H-13与C-7、C-11和C-12，H-14与C-10相关信号，可以构建该化合物的连接方式，并且上述波谱数据表明该化合物为桉叶烷型倍半萜。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。该化合物化学式及碳原子编号如下：
实施例2：药理作用
本实施例使用腹腔注射链脲佐菌素，并以直径0.20mm的丝线结扎大鼠双侧上颌第二磨牙颈部制备治疗糖尿病合并牙周炎大鼠模型，观察药物降低牙齿松动度，提高大鼠外周血白细胞介素-2(IL-2)含量、降低白细胞介素-1β(IL-1β)等方面的抗糖尿病合并牙周炎作用。
1、材料与方法
1.1动物
选用10月龄SD大鼠，体重(400±50)g，雌雄各半，由四川省医学科学院实验动物研究所提供。实验动物设施条件：成都中医药大学药学院动物观察室。
1.2试剂与样品
枸橼酸乙胺嗪购自中国药品生物制品检定所。化合物(Ⅰ)自制，制备方法见实施例1。
1.3大鼠分组及模型制备
大鼠随机分为5组，每组12只，分别为正常对照组、模型对照组、枸橼酸乙胺嗪组(180mg·kg-1)、化合物(Ⅰ)组(180mg·kg-1)、枸橼酸乙胺嗪与化合物(Ⅰ)组合物组【90mg·kg-1枸橼酸乙胺嗪+90mg·kg-1化合物(Ⅰ)】。各组大鼠均以软食饲养，按60mg/kg腹腔注射链脲佐菌素溶液，72h后测空腹血糖，高于16.7mmol/L为糖尿病模型建立成功。糖尿病模型建立成功1周后，开始建立糖尿病合并牙周炎模型，除正常对照组外，其余组大鼠均用2％戊巴比妥钠30mg/kg全麻下，以直径0.20mm的丝线结扎大鼠双侧上颌第二磨牙颈部，制造牙周炎动物模型。正常对照组不造模，各给药组造模后开始药物干预，按照上述剂量连续灌胃给药7d，正常对照组与模型对照组大鼠灌胃给予纯化水。给药结束后，测定相关指标。
1.4牙齿松动度测定实验
每只大鼠造模各2颗牙齿，颊舌向松动者计1分，颊舌向、近中远中向均松动者计2分；颊舌向、近中远中向和垂直向均松动者计3分。
1.5IL-2、IL-1β测定实验
5％水合氯醛全麻各大鼠，将全部大鼠经腹主动脉取血5ml(加肝素钠抗凝)，1000r/min离心10min，吸取上清液0.5ml，装管标记后，用IL-2、IL-1β试剂盒测定其浓度。
1.6统计学方法
实验数据用均数±标准差(x±s)表示，应用SPSS18.0版统计软件进行单因素方差分析和t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2、实验结果
2.1对糖尿病合并牙周炎模型大鼠牙齿松动度的影响
与正常对照组比较，模型对照组大鼠牙齿松动度评分明显增加(P＜0.01)；与模型对照组比较，枸橼酸乙胺嗪与化合物(Ⅰ)组合物组大鼠牙齿松动度评分明显减小(P＜0.01)；与模型对照组比较，枸橼酸乙胺嗪组、化合物(Ⅰ)组牙齿松动度评分减小(P＜0.05)。结果见表1。
2.2对糖尿病合并牙周炎模型大鼠外周血中IL-2、IL-1β含量的影响
与正常对照组比较，模型对照组大鼠的IL-2明显降低(P＜0.01)，、IL-1β含量明显升高(P＜0.01)。与模型对照组比较，枸橼酸乙胺嗪与化合物(Ⅰ)组合物组IL-2明显升高(P＜0.01)，IL-1β含量明显降低(P＜0.01)；与模型对照组比较，枸橼酸乙胺嗪组、化合物(Ⅰ)组IL-2升高(P＜0.05)，IL-1β含量降低(P＜0.05)。结果见表1。
表1对糖尿病合并牙周炎模型大鼠牙齿松动度和外周血中IL-2、IL-1β含量的影响
早在1928年，William等通过研究认为，糖尿病患者与非糖尿病患者的牙周炎具有不同特征，因此提出了“糖尿病性牙周炎”的概念。糖尿病患者因牙周组织中糖分解代谢、蛋白质和脂肪合成代谢减弱，对局部致病因子敏感性增高，且多合并微循环障碍，导致牙周组织细菌繁殖加速，牙周炎已经成为糖尿病继神经病变、视网膜病变、血管病变、肾病及伤口愈合不良之后的第六并发症。
近年来，众多研究显示牙周炎的发病过程与细胞因子的分泌异常导致促炎/抑炎平衡失调有密切关系，多表现为Th1细胞功能相对亢进，Th2细胞功能不足。IL-2、IL-1β等是细胞免疫应答中的关键因子，IL-2是引起T细胞增殖的主要细胞因子，能促进T细胞的增殖和活化，抑制T细胞的凋亡、刺激NK细胞的生长和增强其杀伤功能、激发B细胞生长及抗体产生，已经有部分学者通过实验证明其与牙周炎免疫状态有关；IL-1β则在牙周炎的骨破坏过程中还发挥着重要作用，IL-1β可促进骨吸收，且其水平与牙周附着丧失显著相关。
上述结果表明，枸橼酸乙胺嗪、化合物(Ⅰ)单独作用时，对糖尿病合并牙周炎具有治疗作用；枸橼酸乙胺嗪和化合物(Ⅰ)联合作用时，对糖尿病合并牙周炎的治疗效果进一步提高，可以开发成治疗糖尿病合并牙周炎的药物。
上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。