专利名称：一种十七肽的医药用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种十七肽的医药用途，特别是涉及该十七肽用于治疗神经元退行性变的新用途。
所述十七肽是体内存在的称为β-淀粉样肽前体蛋白肽链中第319-335位的肽段，由17个氨基酸组成，其序列是丙氨酸-赖氨酸-谷氨酸-精氨酸-亮氨酸-谷氨酸-丙氨酸-赖氨酸-组氨酸-精氨酸-谷氨酸-精氨酸-蛋氨酸-丝氨酸-谷氨酰胺-缬氨酸-蛋氨酸。(AKERLEAKHRERMSQVM)。国外在90年代中期发现APP17肽具有神经营养作用，包括促进轴突生长、增加突触密度、能保护缺血引起的神经元损伤，但未见有关APP17肽治疗神经元退行性变的报道。
神经元退行性变包括一类原因不明的疾病，如老年性痴呆、帕金森氏病、运动元疾病和其它一些疾病。另一类为病因较明确的疾病引起神经元退变，如糖尿病和脑血管疾病。但无论病因明确与否，目前的临床上无针对神经元退行性变的药物。例如对老年性痴呆应用胆碱酯酶抑制剂，帕金森氏病给以多巴胺等或控制原发病变(控制糖尿病和改善供血)为主要手段，因此现有的药物不能真正有助于神经元退行性变的恢复。当前，国际上研究治疗神经元退行性变，主要着眼于神经生长因子和神经营养因子的开发，应用一些研究表明这些因子可能对外周神经病变有一定效果，但因不能通过血脑屏障而对中枢神经退行性变缺乏治疗效果。
本发明是目的是要开发一种新的治疗神经元退行性变的药物。近年来我们对APP17肽进行了进一步的研究。我们的研究证实APP17肽在体外能增加神经母细胞瘤细胞胞体面积和轴突生长的长度。我们研究工作主要应用三种神经元退行性变的模型(糖尿病小鼠、去卵巢大鼠和半乳糖老化小鼠)，观察模型动物的行为学(水迷宫)、海马神经元超微结构和30多种与神经元退行性变有关的蛋白质的表达。研究表明这些动物模型存在海马神经元的退行性改变，表现为学习记忆障碍、神经元超微结构异常，蛋白质表达异常为tau蛋白过度磷酸化、Aβ增加、多种神经营养因子减少。APP17肽对这些改变具有明显的预防和治疗作用，无论在造模同时给药(皮下注射)或造模后若干星期给药均有同样效果。APP17肽对糖尿病外外周神经病变同样具有明显作用，在体外实验中，APP17肽可促进神经营养因子-3、神经丝蛋白和胰岛素降解酶的表达，并能使基因转染细胞Aβ的分泌减少。APP17肽还有保护谷氨酸和高糖对神经元的损伤作用。由于APP17肽分子量小，皮下给药能明显改善海马神经元退行性变。因而我们发现了APP17肽能治疗人神经元退行性疾病的新医药用途。
将APP17肽用于治疗神经元退行性疾病有如下优点1)它本身就是神经营养因子。
2)能使多种神经营养因子表达增加。
3)对不同病因(胰岛素和雌激素缺乏性神经系统病变、氧化应激神经元损伤)引起的神经元退变均有治疗作用，说明是一种“广谱”抗神经退变的多肽。
4)皮下注射能治疗脑神经元退行性变。
5)APP17肽是β-淀粉样肽前体蛋白N端中的一段17肽，所以它的序列存在于体内，而且分子量小(约1900)，不会引起过敏反应。
6)成本低、多肽质量有保证。
本发明APP17肽采用已知的肽合成方法固相合成法合成。固相肽合成的主要思想是先将所要合成肽链的羧基末端氨基酸的羧基以共价键的结构同一个不溶性的高分子化合物(树脂)相连接，然后以此结合在固相载体上的氨基酸作为氨基组份，经过脱去氨基保护基并同过量的活化羧基组份反应，接长肽链。这样的步骤可以反复地多次进行下去，最后达到所需要合成的肽链的长度。下式表示了这个合成过程。
原料HMP resin(p-羟甲基苯氧甲基多聚乙烯树脂)Fmoc-AA(9-芴基甲氧羰酰基保护的氨基酸)NMP氮甲基吡咯烷DCM二氯甲烷甲醇哌啶DMAP二甲基氨基吡啶HOBt羟基苯并三唑DCC二环已基碳二亚胺TFA三氟乙酸EDT1,2-乙二硫醇硫代苯甲醚结晶苯酚乙腈仪器多肽自动合成仪(美国ABI431A型)旋转蒸发仪(日本Yamato,RE50)高效液相色谱仪(美国PE151A型)冷冻干燥机合成方法称取HMP树脂100mg，取代当量是1.0meq，即0.1mmol于美国ABI431A型多肽自动合成仪的反应腔内，由合成仪自动将特定的AA按不同的顺序连接起来，偶联率达99％反应如下1．氨基酸的活化(HOBt/DCC法) Fmoc保护的氨基酸 2．联接氨基酸到树脂上 HOBt活性酯3．脱去氨基酸的Fmoc保护基 4．氨基酸的活化(HOBt/DCC法) 5．偶联 新的偶联的肽-树脂
AKERLEAKHRERMSQVM-树脂450mg将肽链从树脂上切落用TFA(三氟乙酸)切割肽链，用EDT，硫代苯甲醚，H2O作清除剂，在室温下反应3.0小时，除去切割试剂，再用乙醚萃取，得到APP17肽的粗品为180mg，收率为85％。APP17肽的纯化高效液相色谱分离纯化条件 色谱柱 C810×100mm色谱仪 ABI 151A型 美国流动相 A-0.1％TFA(三氟乙酸)H2OB-0.1％TFA(三氟乙酸)于60％乙腈检测波长 214nm流速 4ml/分钟洗脱梯度 20-60％B于30分钟HPLC(高效液相色谱)分析色谱柱 C184.6×150mm流动相 A-0.1％TFA(三氟乙酸)H2OB-0.1％TFA(三氟乙酸)于乙腈检测波长 214nm流速 1ML/min洗脱梯度 0-60％B于30分钟HPLC分析结果见附图9．APP17肽的鉴定序列丙氨酸-赖氨酸-谷氨酸-精氨酸-亮氨酸-谷氨酸-丙氨酸-赖氨酸-组氨酸-精氨酸-谷氨酸-精氨酸-蛋氨酸-丝氨酸-谷氨酰胺-缬氨酸-蛋氨酸APP17肽氨基酸组份分析结果见附
图10。
以Ala做标准2.288
注1．Gln(谷氨酰胺)在酸解过程中被破坏变为Glu(谷氨酸)，所以Glu(谷氨酸)为4mol．2．Met(蛋氨酸)在酸解过程部分被破坏，所以量少。
氨基酸组份分析结果显示与目的肽的组份相符，证明合成是成功的。
APP17肽用于治疗神经元退行性变的可能性由下述药效学实验结果来证明。1．实验方法采用国际公认的实验方法，包括水迷宫试验、超微结构研究、免疫组化、免疫印迹法和神经细胞培养。2．材料APP17肽由发明人按上述方法合成。实验动物包括小鼠、大鼠，小鼠为昆明种属，体重32-37克，8周龄。大鼠为Wistar种属，250克左右，16周龄。3．三种动物模型制备和防治每种动物模型分对照组、模型组和治疗组。
表1动物模犁制各和给药
4．实验结果甲、体内实验A．糖尿病小鼠a．水迷宫试验表2:C组、DM组及17P+DM组水迷官试验游完全程结果比较
注与DM组比较，*P＜0.01表3出现错误次数比较
注与DM组比较，*P＜0.05与DM组比较，**P＜0.01应用APP17肽，可使病鼠游完全程所需时间缩短，错误反应次数减少，说明模型鼠的学习功能已恢复正常。b．超微结构光镜下C组小鼠海马CA1区神经元核仁明显，核膜清楚，胞浆淡染；DM组部分神经元胞浆深染，胞体增大；17P+DM组神经元与C组相似。电镜观察神经组织超微结构显示C组小鼠神经原正常，粗面内质网丰富，表面有多聚核糖体附着，线粒体正常，核膜清楚，核仁明显，神经元轴突内微管排列整齐成束；DM组神经元固缩，深染，核膜凹陷，核内染色质溶解，线粒体电子密度高、脊断裂，核糖体解聚，神经原轴突内微管结构出现明显的断裂或溶解现象，部分微管变为无定型絮状物，血管周围星形细胞突起肿涨；给APP17肽的糖尿病小鼠神经元接近正常，胞浆内高尔基体丰富，线粒体轻度肿涨，粗面内质网丰富，表面有多聚核糖体附着，微管结构基本保持完好，排列整齐成束，只偶见断裂或溶解现象，星形细胞轻度肿涨。c．海马神经元免疫组织化学海马神经元与学习、记忆和认知关系密切，所以我们主要分析海马CA1区神经元的蛋白质表达情况。糖尿病小鼠海马神经元免疫组织化学研究结果见表4。
表4各种抗体阳性神经元数目比较
*与DM组相比P＜0.05表5各种抗体阳性神经元灰度比较
*与DM组相比P＜0.05表4，表5可见1)微管相关蛋白tau过度磷酸化2)Aβ(β-淀粉样肽)增加3)神经营养因子缺乏4)胆碱乙酰转移酶减少这些结果表明神经元代谢明显障碍，而所有这些异常均可被APP17肽恢复正常。d．免疫印迹(Western Blot)结果DM组小鼠199/202位点异常酸磷化的tau蛋白增多，用APP17肽后恢复至接近正常水平(图1)；糖尿病小鼠tubulin表达减少，用APP17肽后可使其表达增加(图2)；糖尿病小鼠APP表达增多，用APP17肽后有所降低(图1-3)。
e．坐骨神经传导速度和痛阈表6肌电诱发电位左侧大鼠坐骨神经传导速度
注与C组比较*P＜0.05与DM组比较#P＜0.05APP17肽可明显改善神经传导速度和缩短潜伏期。APP17肽持续应用7周，可改善病鼠痛阈。
f．对信号转导成份的影响。
脑神经元的胰岛素受体底物-1、胰岛素样生长因子-1受体Ⅰ型在糖尿病时增加，APP17肽应用后恢复正常。
g．对血糖和血糖调节激素的影响静脉大剂量注射APP17肽对血糖无影响。
表7三组大鼠血浆胰岛素、胰升糖素和C肽的比较
注与C组比较*P＜0.05B．去卵巢大鼠模型a．水迷宫试验表8游完水迷宫全程所需时间
*与OVX组比较P＜0.05
表9水迷宫测试错误反应次数
**与OVX组比较P＜0.01表8、表9说明APP17肽使模型鼠学习、记忆功能恢复正常。b．超微结构OVX组线粒体肿胀明显，嵴断裂、消失、溶解，粗面内质网有部分脱颗粒，毛细血管周围星形细胞足突肿胀明显。神经毡中突触的轴突侧有肿胀，内有突触小泡，树突侧变化不太明显。微管排列比较整齐，变化不明显，局部偶有断裂，但轴内线粒体存在明显肿胀。17P+OVX组线粒体未见肿胀，毛细血管周围星形细胞足突或正常或较OVX组明显减轻。神经毡也较OVX组好，突触前终末小泡密集，轴突终末未见肿胀。微管排列整齐。c．海马神经元免疫组化表10三组大鼠海马各种抗体阳性细胞数目比较
*与OVX组相比P＜0.05,**与OVX组相比P＜0.01表11三组大鼠海马各种抗体阳性细胞平均灰度比较
*与OVX组相比P＜0.05,*与OVXg组相比P＜0.05。
**与OVX组相比P＜0.01,**与OVX组相比P＜0.01表10、表11可见去卵巢大鼠tau蛋白过度磷酸化，Aβ增加和神经营养因子减少，但APP17肽可使之恢复正常。
d．对血雌激素浓度的影响表12三组大鼠血清雌激素水平比较
**与OVX组相比P＜0.05,**与OVX组相比P＜0.05。
表12说明APP17肽并不改变去卵巢大鼠血清雌激素水平。
C．半乳糖老化小鼠a．水迷宫试验表13水迷宫实验结果(游完全程所需时间秒)
*与D组比较，p＜0.05**与D组比较p＜0.01.
表14水迷宫实验结果(错误反应次数 次)
*与D组比较p＜0.05；**与D组比较p＜0.01.
表13、表14说明APP17肽可使模型小鼠的学习记忆恢复正常。b．超微结构光镜下D组和17p+D组小鼠海马CA1区神经元核仁明显，核膜清楚，胞浆淡染，无显著区别；电镜观察两组超微结构显示(2)D-gal组小鼠海马神经元轴索微管结构出现明显溶解；线粒体肥大增生肿胀并有空泡变性，电子密度增高；核糖体及粗面内质网明显减少；神经毡中突触稀疏，线粒体肥大增生肿胀并有空泡变性，电子密度增高，单位面积内线粒体数量多于APP17肽组，但差异不显著；海马神经原的结构未发现异常变化。(2)17p+D组小鼠海马神经元轴索中微管结构正常，微丝清晰；线粒体膜及结构正常，线粒体脊清晰；粗面内质网、核糖体丰富；神经毡中单位面积内突触数量明显多于半乳糖组P＜0.05，突触内可见大量清亮突触小泡。
表15:17p+D组、D组海马神经毡中突触数和线粒体数
*P＜0.05c．免疫组化表16:C组、D组及D+P组大脑海马NT-3及胆碱乙酰化酶阳性细胞数及灰度比较
注阳性细胞数为每高倍镜视野的细胞个数；与D组比较，*P＜0.05,**P＜0.01可见NT-3和胆碱乙酰转移酶在应用APP17肽后表达恢复正常。乙、体外实验应用SY5Y神经母细胞株A．APP17肽对SY5Y细胞的营养作用(1)APP17肽促进培养的SY5Y细胞轴突延伸，胞体面积增加。正常对照组轴突长度为42.22±22.07，加入APP17肽组轴突长度为89.09±38.11(p=0.00)。正常对照组胞体面积为749.69±207.65，加肽组为1056.71±326.68(p=0.000)。
(2)APP17肽促使SY5Y细胞NT-3、NF表达增加(图4、5)，胰岛素降解酶素(IDE)表达下降(图6)。B．APP17肽对高糖引起神经毒作用的影响(1)细胞计数结果显示从接种第6天始，APP17肽组细胞数增加，1μM组与对照组相比，P＜0.05,10μM组与对照组相比，P＜0.01；接种后第9天，APP17肽组细胞数仍高于对照组，有高度显著性差异。而高糖组细胞数从第3天始，明显低于对照组，二者相比P＜0.01，且一直持续至第9天；高糖加APP17肽组与高糖组相比，细胞数无显著性差异。
表17细胞计数观察APP17肽对SY5Y生长的影响
*与对照组相比 P＜0.05,**与对照组相比P＜0.01表18细胞计数观察高糖环境对SY5Y生长的影响平均细胞数±SD(n=8)
**与对照组相比P＜0.01(2)MTT代谢率测定结果显示APP17肽组OD值明显高于对照组，增加幅度为175％,P＜0.01。而高糖组OD明显低于对照组，降低幅度为26.15％,P＜0.01，高糖加APP17肽组OD值明显高于对照组，升高幅度为20.08％,P＜0.01。
(3)LDH漏出率测定结果显示APP17肽组LDH为254.3±44.1u，与对照组(306.3±71.8u)相比无显著性差异。高糖组LDH为1760.2±16.6u，明显高于对照组(503.5±78.6u),P＜0.01，高糖加APP17肽组LDH为1560±25.8u，低于岛糖组，P＜0.01C．APP17肽对谷氨酸引起神经毒作用的影响(1)MTT代谢率测定结果显示100uM、500uM、1mM谷氨酸组OD值明显低于对照组，且随着剂量增加，降低幅度分别为12.5％、21.8％和33.1％，与对照组相比P＜0.05，而50uM谷氨酸组OD值无明显改变，与对照组相比P＞0.05。谷氨酸100uM、500uM加APP17肽10uM组OD值明显高于谷氨酸组，升高幅度分别为14.0％、22.4％，两组相比P＜0.05，加肽组与对照组相比P＞0.05。
(2)细胞计数结果显示从接种后第4天起，谷氨酸500uM组细胞数低于对照组，P＜0.05。谷氨酸加APP17肽10uM组细胞数高于谷氨酸组，两组相比P＜0.05，与对照组相比P＞0.05。
表19细胞计数观察APP17肽对谷氨酸引起神经毒作用的影响平均细胞数±SD(n=8)
与对照组相比P＜0.05,**与*相比P＜0.01(3)LDH漏出率测定结果显示谷氨酸100uM、500uM组LDH漏出率明显高于对照组，两组相比P＜0.01。谷氨酸100uM、500uM加APP17肽组LDH漏出率低于谷氨酸组，但未完全恢复正常水平。
(4)免疫斑点结果显示谷氨酸组NT-3、NF表达低于对照组，而加入APP17肽后可使表达恢复正常(图7、8)。
附图简要说明附图1:AT-8免疫印迹染色●AT-8(1∶200)●a:C组●b:DM组●c:DM+17肽组附图2:tubulin抗体免疫印迹染色●tubulin抗体(1∶400)●a:C组●b:DM组●c:DM+17肽组附图3:Aβ1-16抗体免疫迹染色●Aβ1-16抗体(1∶2)●a:C组●b:DM组●c:DM+17肽组附图4:APP17肽对SY5Y细胞NT-3表达的影响1．空白对照组2．APP17肽10μmol/L处理组第1抗体抗NT-3抗体(1∶200稀释)附图5:APP17肽对SY5Y细胞NF表达的影响1．正常对照组2．APP17肽10μmol/L处理组第1抗体抗NT-3抗体(1∶200稀释)附图6:APP17肽对SY5Y细胞IDE表达的影响1．APP17肽10μmol/L处理组2．空白对照组第1抗体抗IDE抗体(1∶500稀释)附图7:APP17肽对谷氨酸引起SY5Y细胞毒作用的影响1．对照组2．谷氨酸500μM加APP17肽10μM组3．谷氨酸500μM组第1抗体抗NT-3抗体附图8:APP17肽对谷氨酸引起细胞毒伤作用的影响1．对照组2．谷氨酸500μM加APP17肽10μM组
3．谷氨酸500μM组第1抗体抗NT-3抗体附图9:APP17肽HPLC图附图10:APP17肽氨基酸组份分析结果D-285009/20/99 19:24SAMPLE: TAG: 102CH:1 VIAL: 2 PRO0-NO.:1HILE: 1 CALC-METHOD:EXT-STD TADLE: 1 CONC:AREANO. NAME RT HEIGHT AREAn mol ngRATIO2 5.82 156773346520.334 0.0 0.06 Ser8.22 388176505382.039214.3 94.67 Glu9.12 156591 27728649.854 1449.5 96.89 Ala12.90 83469 12969414.576407.7 98.010 Val14.08 434226160672.218260.0 99.511 Met15.44 408057750602.575384.2 99.613 Leu18.99 243466334402.216290.7 99.81520.38 2379 284310.028 0.0 0.01621.70233 109800.010 0.0 0.018 Lys23.32 100095 14052094.462652.3 100.519 NH324.64 42047 10005946.015102.2 100.620 His25.76 368126573142.193340.4 100.622 Arg30.25 66670 18190576.328 1102.3 99.3TOTAL656763 12001147 42.854 5204.1PEAK REJ: 10000SF : 1.000SAMP-AMT: 1.000INJ-VOL : 10.00国外研究证明APP17肽是具有神经营养作用物多肽，我们的工作还证明了下述几点1．APP17肽可能通过胰岛素受体底物-1发挥功能，通过信号转导途径之间的对话，可治疗胰岛素、雌激素缺乏以及氧化损伤引起的实验性神经元退行性变。
2．对神经元具有保护作用。
3．皮下给药具有治疗效果。
4．没有急性毒性反应。
从上述体内外实验表明，APP17肽能明显改善胰岛素、雌激素严重缺乏和氧化损伤引起的神经元退行性变。据我们研究，神经元退行性变的发生机理如图11。
因为神经元存活和功能的维持需要各种神经存活因子的支持，当各种原因引起神经存活因子减少和Aβ增加均可引起神经元功能降低和神经元退行性变。一种神经存活因子减少可诱发多种神经存活因子的减少，使突触后神经元受体后信号转导强度低于使神经元基因转录激活的强度，给予外源性APP17肽可通过信号转导而激活神经元功能，治疗神经元退变。
我们确信APP17肽将是针对治疗神经元退行性变疾病的有效药物，根据我们现有的研究结果，可预期APP17肽的治疗谱至少可包括1．轻、中度AD2．糖尿病神经病变3．绝经期综合症4．脑和外周神经损伤5．帕金森氏综合症6．脑缺血引起的神经元损伤APP17肽治疗神经元退行性变疾病的给药方法可以是在肽中加入少量人血清白蛋白或甘露醇作辅型剂。常规给药途径为皮下注射，每周二次。对重症病人如糖尿病外周神经病变可静滴每日一次，二周后改为皮下注射，三个月为一疗程。也可经微囊包裹口服。预期还可以经皮导入。
国外有关APP17肽的参考文献1．Jin L.N et al:Peptides containing the RERMS sequence of amyloid beta/A4 proteinprecursor bind cell surface and promote neurite extensionJ.Neurosci 14:5461 1994β/A4淀粉样肽前体蛋白中含有RERMS序列的肽段结合至细胞表面，并促进轴突延长神经科学杂志2．Bowes MP,et al:Reduction of Neurological damage by a peptide segment of theamyloid beta/A4 protein precursor in a rabbit spinal cord ischemia modelExp Neurol 129:112 1994在兔骨髓损伤模型中，β/A4淀粉样肽前体蛋白的肽段减轻神经损伤 神经科学进展。3．Yamamoto K et al:The survival of rat cerebral cortical neurons in the presence oftrophic APP peptideJ.Neurobiol 22:585 1994在营养性APP肽段存在条件下，大鼠大脑皮层神经元可存活神经生物学杂志4．Roch JM et al:Increase of synaptic density and memory retention by a peptiderepresenting the trophic domain of amyloid beta/A4 peptide precursorProc Natl Acad Sci USA 91:7450 1994β/A4淀粉样肽前体蛋白中表现出营养作用的肽段部位可增加突触密度和记忆保留功能 美国自然科学进展5．Milward EA et al:The amyloid protein precursor of Alzheimer′s disease is a mediatorof the effects of nerve growth factor on neurite outgrowthNeuron 9:129 1992老年性痴呆的淀粉样蛋白前体是作用于轴突延伸的神经营养因子的调节物 神经元杂志6．Ninomiya H et al:Amino Acrd sequence RERMS represents the active dimain ofamyloid β/A4 protein precursor that promotes fibroblast growthJ.Cell Biol 121:879 1993β/A4淀粉样肽前体蛋白中RERMS氨基酸序列表现出促进纤维母细胞生长的活性细胞生物学杂志7．Saitoh T et al:Induction of signal-transducting pathways by APP Binding to the CellSurface Receptorin″Research Advances in Alzheimer′s Disease and related disorders″ed.by K.Iqbal etal c 1995 John wiley & Sons Ltd通过APP结合至细胞表面受体，发现信号传导途径 老年性痴呆及其相关疾病研究进展国内有关APP17肽的参考文献1．糖尿病小鼠脑组织超磷酸化及其机理研究赵咏梅 姬志娟 赵志炜 钱玉英 晋志高 裴进京 盛树力中华内分泌代谢杂志15(1):38 19992．β淀粉样肽前体蛋白和β淀粉样肽研究进展盛树力老年医学与保健5(1):4 19993．糖尿病大鼠认知功能障碍与脑形态学改变关系的研究马学毅 盛树力 胡景胜 赵咏梅 赵志炜 钱玉英中国糖尿病杂志7(3):150 19994．糖尿病大鼠脑组织钙调神经磷酸酶研究吴燕川 艾厚喜 盛树力 高清山 石太平 魏群中国糖尿病杂志7(4):222 19995．APP17肽对糖尿病小鼠微管结构和tau蛋白磷酸化有关酶类的影响赵咏梅 赵志炜 姬志娟 钱玉英 孙异临 晋志高 盛树力中华老年医学杂志18(5):306 19996．APP17肽对糖尿病小鼠学习、记忆功能及海马NT-3、胆碱乙酰化酶神经元表达的影响钱玉英 赵咏梅 姬志娟 赵志炜 盛树力中华老年医学杂志18(6):19997．孟艳等APP17肽对β-淀粉样肽及有关蛋白质表达的影响8．张人玲等APP17肽对糖尿病大鼠外周神经损伤的防治作用中华内分泌代谢杂志(已修回)9．王蓉等APP17肽对高糖环境引起神经毒作用的影响中国糖尿病杂志(已修回)10．王蓉等APP17肽对谷氨酸引起神经毒作用的影响(已修回)11．王蓉等APPN端多肽片段的神经营养作用(已修回)12．王冬娜等APP17肽对去卵巢大鼠学习、记忆功能及海马神经元NT-3、NF表达的影响(已修回)13．王晶等APP17肽对D-半乳糖脑老化模型小鼠海马超微结构的影响中国药理学通报(已修回)14．赵咏梅等实验性糖尿病脑病海马神经原的β淀粉样肽及结合蛋白的表达及APP17肽的作用中华内分泌代谢杂志15．晋志高等APP17肽对糖尿病小鼠前脑内NT-3表达的调节16．王昕等APP17肽对糖尿病大鼠坐骨神经中钠钾-ATP酶的影响17．王昕等APP17肽对糖尿病大鼠坐骨神经中cAMP、cGMP的影响18．王逢文等APP17肽对Tau蛋白超磷酸化表达的影响19．杨芳等APP17肽对去卵巢大鼠学习、记忆功能及海马神经元超微结构改变和一些蛋白质表达的影响20．王晶等APP17肽对D-半乳糖脑老化模型小鼠学习、记忆功能及海马神经NT-3、NGF表达的影响 中华病理生理杂志21．盛树力等老年性痴呆-最难治的疾病22．盛树力等APP17肽对实验性脑病的防治作用23．赵志炜等APP17肽对糖尿病小鼠脑Tau蛋白的影响研究方法的主要参考文献1．Fuller SJ,Storey E,et al.Intracellular production of βA4 Amyloid of Alzheimer’sDisease:Modulation by phosphoralytion and lack of coupling to the secretion of theAmyloid precursor protein.1995,34,8091-8098,Biochemistry细胞内产生老年性痴呆的βA4淀粉样肽通过磷酸化调节和缺乏淀粉样肽前体蛋白分泌的偶合生物化学杂志2．Ostrerova N,Petrucelli L,et al.α-Synuclein shares physical and functionalhomology with 14-3-3 proteins.The Journal of Neurosci.1999,19(14):5782-5791α-共核蛋白与14-3-3蛋白在生理功能上有同源性神经科学杂志3．Faircloth GT, Stewart D,Clement JJ.A simple screening procedure for thequantitative measurement of cytotoxicity to resting primary lymphocyte cultures.Journal of Tissue Culture Methods.1988,11(4):201-205原代淋巴细胞培养中细胞毒性定量，测定的单纯筛查步骤组织培养法杂志4．赵咏梅，赵志炜，姬志娟等。APP17肽对糖尿病小鼠微管结构和tau蛋白磷酸化有关酶类的影响 中华老年医学杂志18(5):306 1999钱玉英 赵咏梅等。APP17肽对糖尿病小鼠学习、记忆功能及海马NT-3、胆碱乙酰化酶神经元表达的影响 中华老年医学杂志18(6):1999
权利要求
1．氨基酸序列为丙氨酸-赖氨酸-谷氨酸-精氨酸-亮氨酸-谷氨酸-丙氨酸-赖氨酸-组氨酸-精氨酸-谷氨酸-精氨酸-蛋氨酸-丝氨酸-谷氨酰胺-缬氨酸-蛋氨酸(AKERLEAKHRERMSQVM)的十七肽在制备治疗神经元退行性变疾病的药物中的应用。
2．一种治疗神经元退行性变的药物组合物，其特征在于它含有有效量的序列为丙氨酸-赖氨酸-谷氨酸-精氨酸-亮氨酸-谷氨酸-丙氨酸-赖氨酸-组氨酸-精氨酸-谷氨酸-精氨酸-蛋氨酸-丝氨酸-谷氨酰胺-缬氨酸-蛋氨酸(AKERLEAKHRERMSQVM)的十七肽及可接受的辅剂。
全文摘要
本发明提供一种其序列为丙氨酸－赖氨酸－谷氨酸－精氨酸－亮氨酸－谷氨酸－丙氨酸－赖氨酸－组氨酸－精氨酸－谷氨酸－精氨酸－蛋氨酸－丝氨酸－谷氨酰胺－缬氨酸－蛋氨酸(AKERLEAKHRERMSQVM)的十七肽的新用途，它具有神经营养作用，本发明提示了它的治疗神经元退行性变疾病的新医药用途。
文档编号A61K38/10GK1317341SQ00105798
公开日2001年10月17日 申请日期2000年4月11日 优先权日2000年4月11日
发明者盛树力, 姬志娟, 赵咏梅, 王蓉, 赵志炜, 张景艳, 艾厚喜, 孟艳 申请人:首都医科大学宣武医院