一种含氮杂环六肽前体的组合物及其制备方法和用图
【技术领域】
[0001 ]本发明属于医药制备和药物分析领域，涉及一种卡泊芬净前体化合物纽莫康定B0 与结构类似物的组合物及其制备方法，以及利用该组合物制备卡泊芬净的方法。
【背景技术】
[0002] 纽莫康定B0，如式I所示，是由微生物发酵产生的次级代谢产物，具有环状的六肽 结构，一般用于作为合成卡泊芬净(式m所示）的原料，其制备方法公开于若干文献中，如美 国专利 US5194377、US5202309 和 US6610822。
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[0005] 按照纽莫康定结构中脯氨酸上取代基的不同，主要分为三类:Α0、Β0、和C0』0苏氨 酸上取代基的不同，又会形成与其结构极为相似的丝氨酸类似物，式II化合物。
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[0007] 在发酵制备式I化合物过程中，相应会产生纽莫康定A0、C0和丝氨酸类似物(结构 如式Π 所示)等一些杂质。纽莫康定A0、C0通过萃取、沉淀、大孔吸附树脂层析、制备型正相 色谱等方法进行分离纯化，其专利冊200404235(^2，10022061841，10 200506632341等对分 离纯化方法进行了描述。
[0008] W00008197A1和美国专利US5378804对式Π 化合物及其分离方法进行了描述。
[0009]式II化合物通过现有的分离纯化方法能够得到一定程度的去除，例如利用制备型 正相色谱，但是效果并不很理想，最终获得的产物中式II化合物的含量依然很高U 2.5 % )。而且此方法有机溶剂使用量大，对环境污染严重，生产成本高，生产效率低，很难实 现工业化大规模生产。
[0010] 工业微生物和生物技术期刊（Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology)第26期第216-211页(2001)描述了纽莫康定B0中含有的丝氨酸类似物式II 杂质在后续的制备过程中会转化为卡泊芬净丝氨酸类似物杂质，从而导致终产物卡泊芬净 的纯度降低。
[0011] 在合成式III化合物的过程中，纽莫康定B0中所含的式II化合物可以通过例如下 面反应转化为卡泊芬净丝氨酸类似物(式IV所示）：
[0013] J.0rg.Chem.2007,72,2335-2343 233中也有相关描述。
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[0015] CN102076707A中描述了利用中高压反相制备层析柱分离纯化含有式IV化合物的 醋酸卡泊芬净，其中描述使用RP C18为填料，乙腈/醋酸溶液为流动相制备式IV化合物(丝 氨酸类似物醋酸卡泊芬净)含量低的醋酸卡泊芬净。此工艺使用大量有毒有害的乙腈，生产 成本昂贵，无法用于规模化工业生产。
[0016] CN102947327A中记载了在卡泊芬净中间体阶段利用正相硅胶制备层析柱分离去 除中间体中含有的丝氨酸类似物。此纯化工艺需要使用大量溶剂、生产成本高，基本上不具 备工业化生产价值。
[0017] 杂质是指在任何活性药物成分（也称原料药，API)中不需要的，并且在极端情况 下，甚至可能对正在接收含API的剂型治疗的患者有害的成分。
[0018] 最终生产的API的纯度是其能否实现商品化的关键。美国食品药品监督管理局 (Π )Α)明确要求API生产过程杂质必须控制在规定界限以下。在ICH Q7A指南中，FDA指定了 可使用的原材料的质量，以及可接受的工艺条件例如温度、压力、时间和化学计量比，包括 纯化步骤例如结晶、蒸馏和液-液萃取。（参见ICH关于活性药物成分的药品生产质量管理规 范ICH Good Manufacturing Practice Guide for Active Pharmaceutial Ingredients， Q7A)。化学反应的产物很少为具有足够纯度而符合药品标准的单一化合物，反应的副产物 和副产品以及用于反应的辅助剂在大多数情况下也将存在于产物中。在加工API期间的某 些阶段中，必须分析其纯度，通常通过高效液相色谱法或薄层色谱法，以确定其是否适于继 续加工，并最终用于药物产品中。FDA要求API尽可能无杂质，使得其在临床应用时尽可能地 安全。例如，FDA推荐某些杂质的量限制在少于0.1个百分比，（参见ICH关于活性药物成分的 药品生产质量管理规范，Q7A)。
[0019] 根据上述对于API中杂质限量的严格要求，如何尽可能的提高API的纯度，降低杂 质的含量成为工艺开发的关键。如果最终药物产品的纯化难度太高，通常可以考虑通过提 高其药物中间体的纯度来提高其纯度。因此，在式III化合物的制备工艺中，作为中间体的 式I化合物纯度越高，经化学修饰得到的式m化合物纯度也会越高。如果经化学修饰得到的 式m化合物纯度高，那么就可以极大程度地减轻式m化合物纯化步骤的工艺压力，利用简 便的纯化工艺得到高纯度的最终药物产品。因此，就要求式II化合物的含量尽可能低。
[0020] 因此发明人急切的希望在纽莫康定bo阶段，利用特定的纯化手段，获得式II化合 物含量极低的纽莫康定B0。
【发明内容】
[0021] 最初，发明人试图采用常规的结晶方法，即希望通过获得式I化合物的晶体将式II 化合物杂质去除。然而在经过大量实验后发现采用常规的结晶手段，加入反溶剂通过过饱 和度的方式使式I化合物析出，获得式I化合物晶体中，式II化合物的含量并没有降低，换言 之，常规的结晶析出过程对式II化合物没有任何去除效果。
[0022] 发明人在整理大量结晶实验过程时却意外发现，在一些实验中，加入有机溶剂后 溶液会发生浑浊，明显有固体颗粒析出，但与结晶不同，固体颗粒并不沉淀下来，而是悬浮 在混合液中。发明人将固体颗粒从混合液中分离出来，进一步分析后，惊喜地发现，固体颗 粒为非结晶态的式I化合物，而且杂质式II化合物的含量非常低，经过多次实验反复证实了 上述结果，由此得出结论，通过得到上述悬浮状态的体系，可以有效去除杂质式II化合物。 发明人在进一步研究上述体系后明确:上述悬浮液实际是式I化合物与水、溶剂形成了一种 粗分散体系的悬浮液(参考《胶体与界面化学》书籍，高等教育出版社），即式I化合物与水、 溶剂形成一种特殊的状态，粒子直径大于o.lum，在此状态下，式I化合物既没有溶于溶剂中 形成溶液，也没有以沉淀或晶体的形式析出，而是以一种颗粒的状态悬浮于溶剂中。而式II 化合物却大量溶解于溶剂中，通过过滤或离心分离的方式，将固体颗粒和溶剂分离，就获得 了纯度更高的式I化合物，而大量的式II化合物却留在了溶剂里，因此可以非常有效地去除 式I化合物中的杂质式π化合物。
[0023] 为了确定获得上述粗分散体系的悬浮液的方法，发明人又开展了大量实验研究， 最终发现：当控制溶剂体系中水分含量在8%_30%体积百分比时，可以获得粗分散体系的 悬浮液。当水分含量大于30%时，由于水分含量过高，在加入非极性的反溶剂时，通常会使 反溶剂使用量过大或者使得整个体系分相，最终无法获得所述的粗分散体系的悬浮液。
[0024] 此外，根据实验数据统计，每进行一遍上述操作，杂质式II化合物的含量可以降低 40%至60%，而式I化合物的损失仅2%以下。通过重复上述方法，可以确保将式I化合物中 杂质式II化合物的含量降到2.0%，优选0.49%以下;更优为0.2%以下;最优为0.1%以下。
[0025] 进一步地，通过将杂质式II化合物含量极低的式I化合物作为制备卡泊芬净的原 料合成卡泊芬净中间体或醋酸卡泊芬净，通常情况下，所获得的卡泊芬净(式III化合物)产 品中卡泊芬净丝氨酸类似物杂质（式IV化合物)可以控制在0.1%下。可以大大减轻卡泊芬 净产品纯化阶段的工艺压力。
[0026] 制备含有式I和式II所示化合物的组合物的方法及用该方法制备获得的组合物A 和B
[0027] 本发明提供了一种制备含有式I和式II所示化合物的组合物的方法，所述的方法 包括步骤：
[0028] (a)将式I化合物粗品溶解在有机溶剂(i)的水性溶液中；
[0029] (b)通过降温和/或添加有机溶剂（?? )，使固体从溶解液中析出，得到含式I化合物 的悬浮液；
[0030] (c)通过离心或过滤，得到含有式I和式II所示化合物的组合物A。
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[0032] 在另一优选例中，步骤(a)中，所述有机溶剂（i)的水性溶液中，水的体积百分比 为8%-30%，优选10%-25%，更优选12%-22%，最优选16%-22%。。
[0033]在另一优选例中，步骤(a)中，所述有机溶剂(i)选自：甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、 异丁醇、正丁醇、丙酮中的一种或多种的混合物。
[0034]在另一优选例中，步骤(b)中，所述有机溶剂（??)选自：C3--7酯、己烷、正庚烷、正戊 烷、二氯甲烷中的一种或多种的混合物;优选自：乙酸乙酯、乙酸异丙脂、正己烷中的一种或 多种的混合物。
[0035] 在另一优选例中，所述步骤(a)-(c)可以重复一次或一次以上。
[0036] 本发明还提供了一种由上述的制备方法所获得的含有式I化合物的悬浮液，所述 悬浮液中固体颗粒直径大于等于〇. lum