一种棘白菌素b的纯化方法
【技术领域】
[0001] 本发涉及药物化学技术领域，具体涉及药物中间体的分离纯化方法，更进一步的 涉及一种棘白菌素 B的纯化方法。
【背景技术】
[0002] 芬净类药物作为棘白菌素家族的重要成员，可以抑制真菌细胞壁β-α - 3) _ 葡聚糖合成，对于临床常见的念珠菌属及其他真菌有较强的抗菌活性。已上市的芬净类药 物阿尼芬净和米卡芬净都是由各自的前体在酰基水解酶作用下得到母核，再经过化学修饰 而得，棘白菌素 Β是转化生成棘白菌素 Β母核的关键底物，提1?棘白菌素 Β母核的转化广量 将提高合成产品阿尼芬净的产量，而目前棘白菌素 B主要是通过发酵而得，而高纯度的棘 白菌素 B将明显提高棘白菌素 B母核的转化效率和产量，因此，得到高纯度的棘白菌素 B就 在提高棘白菌素 B母核转化率上具有明显的优势。
[0003] 棘白菌素 B (Echinocandin B,简称 ECB)由构巢曲霉（Aspergilus nidulans)代 谢产生，是棘白菌素类中的一种，其结构如下：
[0004] 目前较少有将棘白菌素 B提纯到高纯度后再进行转化生成棘白菌素 B母核，而高 纯度的棘白菌素 B将明显提高棘白菌素 B母核的转化效率和产量。因此，找到一种高效的、 低成本的获得高纯度棘白菌素 B的方法具有可行的工业意义的。
【发明内容】
[0005] 本发明的主要目的是为了解决棘白菌素 B的纯化问题，并提供用于制备高纯度棘 白菌素 B。
[0006] 为了达到上述目的，本发明提供了一种高纯度的棘白菌素 B的制备方法，该方法 包括以下步骤： 将发酵液固液分离得到的粗品进行反相制备柱分离，可得高纯度棘白菌素 B，其色谱纯 度大于97%。
[0007] 其中，所述的反相制备柱为C1S柱，柱料的粒径为6μπι ~10μπι，优选8μπι;反相制 备柱上样方法为：用解析液将粗品溶解成浓度为90g/L~110g/L，优选100g/L，然后上样。
[0008] 所述反相制备柱的解析液为甲醇：水：乙腈=70:20:10 (V/V)。
[0009] 本发明所提供的方法具有工艺简单、收率高的优点，由本发明所述方法制备的棘 白菌素 B色谱纯度大于97%。
[0010]
【附图说明】： 图1显示的是由实施例1方法纯化后得到的棘白菌素 B的HPLC谱图，其中棘白菌素 B 的保留时间约为12. 177min。
[0011]
【具体实施方式】： 下面结合实施例对本发明进行更进一步详细说明，但不是对本发明的限定。另外，除非 另有说明，在本说明书中，一般操作均是在室温条件下进行的，室温是指25-30°C。棘白菌素 B粗品可参考US4288549、US6506726等现有技术公开的方法获得。 实施例
[0012] C1S反相柱填料（日本大曹公司）规格：Size :8 μ m。
[0013] C1S 柱规格：填料装量：200g ;Size :41. 4mmX 250mm。
[0014] 将lg棘白菌素 B粗品溶解于10ml解析液中，过滤得10ml滤液，对该滤液进行 HPLC分析，棘白菌素 B的含量为0. 51g，用甲醇：水：乙腈=70:20:10 (V/V)溶液平衡柱 子。上样完毕，用甲醇：水：乙腈=70:20:10(V/V)溶液进行洗脱，并通过UV检测器监测， 当棘白菌素 B峰峰高上升到0. 4AU开始收集，当棘白菌素 B峰峰高下降到0. 5AU停止收集， 合并收集液，得棘白菌素 B高纯度收集液243ml，对该收集液进行HPLC分析，棘白菌素 B的 含量为 0. 36g，HPLC 纯度 97. 3 %，收率 70. 6 %。
【主权项】
1. 一种棘白菌素B的纯化方法，包括如下步骤： 将发酵液固液分离得到的粗品进行反相制备柱分离，所述的反相制备柱为C1S柱，柱料 的粒径为8μm;反相制备柱上样方法为：用解析液将粗品溶解成浓度为90g/L~110g/L,然 后上样。2. 根据权利要求1所方法，其特征在于，所述反相制备柱的解析液为甲醇：水：乙腈 =70:20:10 (V/V)〇3. 根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，分离纯化后得到的棘白菌素B色谱纯度 大于97%。
【专利摘要】本发明提供了一种棘白菌素B的纯化方法，采用C18反相色谱柱进行分离纯化，以甲醇:水:乙腈＝70:20:10（V/V）为解吸液，本发明所提供的方法具有工艺简单、收率高的优点，由本发明所述方法制备的棘白菌素B色谱纯度大于97%。
【IPC分类】C07K7/56, C07K1/20
【公开号】CN105481951
【申请号】CN201410536786
【发明人】岳崇斌, 易中宏, 郭明, 刘亚军
【申请人】重庆乾泰生物医药有限公司
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年10月13日