专利名称：一种高纯度棘白菌素b的制备方法
技术领域：
本发明属于工业微生物技术领域，具体涉及一种高纯度棘白菌素B的制备方法。
背景技术：
棘白菌素类是近年来新上市的一种抗真菌药物。棘白菌素类药作为新一代全身性抗真菌药，不经过肝代谢和肾清除，使联合用药以及肝、肾功能不良患者无需调整剂量成为可能。它们能够抑制真菌细胞中1，3-β-D葡聚糖的合成，具有毒性低和良好的动力学性质。其独特的作用靶点和确切显著的疗效，必将使其很快替代三唑类药成为医生和患者抗真菌药物的首选。目前进入临床研究的此类药物有三种卡泊芬净、米卡芬净和阿尼芬净。阿尼芬净是第三代棘白菌素类的半合成抗真菌药，对治疗念珠菌和霉曲菌引起的严重感染具有广阔 的前景。2006年2月21日，由辉瑞公司生产的阿尼芬净通过了美国FDA认证，用于治疗食管感染和其他形式的念珠菌感染。阿尼芬净以发酵产物棘白菌素B(EchinocandinB)为原料，经犹他游动放线菌(Actinoplanes utahensis)产生的酰化酶作用脱去侧链亚油酰基,然后在DMF中与活性中间体4” -戊氧基- [1，I’，4’，I” ]三苯基-4-甲酸-2，4，5-三氯-苯基酯反应制得。Echinocandin B是曲霉菌属(Aspergillus sp.)的发酵代谢产物,结构式如下
权利要求
1.一种高纯度棘白菌素B的制备方法，包括下述步骤 1)棘白菌素B发酵液固液分离，得到固形发酵培养物； 2)在固形发酵培养物中加入极性溶剂浸泡； 3)浸泡液固液分离，得到棘白菌素B提取液； 4)将提取液极性溶剂浓度调低，导入大孔吸附树脂进行富集； 5)吸附完毕，用极性溶剂洗涤树脂，然后用解吸剂进行解吸； 6)加入脱色物质对解吸液脱色，搅拌均匀后过滤； 7)脱色液浓缩、加入极性溶剂萃取、结晶得棘白菌素B粗提物； 8)粗提物经FracliteSOO层析分离，利用层析溶剂洗脱，得到棘白菌素B湿粉； 9)棘白菌素B湿粉经真空干燥，得到高纯度的棘白菌素B产品。
2.根据权利要求I所述的方法，其中步骤2)极性溶剂为乙醇或甲醇，浓度为70-90%，加入量为每千克固形发酵培养物2-6升。
3.根据权利要求I所述的方法，其中步骤4)极性溶剂浓度调低至30-40%。
4.根据权利要求I所述的方法，其中步骤4)大孔吸附树脂为HZ816、HZ830、DA201树脂中的一种，树脂的用量为棘白菌素B提取液体积的1/10-1/33。
5.根据权利要求I所述的方法，其中步骤5)中极性溶剂为30-50%的乙醇，解吸剂为70-90%的乙醇。
6.根据权利要求I所述的方法，其中步骤6)中脱色物质为活性炭，加入量为解吸液体积的 O. 5-2%。
7.根据权利要求I所述的方法，其中步骤7)萃取所用极性溶剂为乙酸乙酯。
8.根据权利要求I所述的方法，其中步骤7)的结晶用极性溶剂为丙酮、异丙醇或石油醚中的一种。
9.根据权利要求I所述的方法，其中步骤8)中的层析分离时层析溶剂为甲醇-水、乙醇-水或丙酮-水中的一种。
10.根据权利要求I所述的方法，其中步骤9)中真空干燥条件为在40-50°C条件下干燥24小时。
全文摘要
本发明公开了一种利用曲霉属(Aspergillus sp.)发酵代谢产物制备棘白菌素B(Echinocandin B)的方法。该方法经过曲霉属发酵代谢产物浸提、大孔树脂吸附、解吸、脱色、结晶等步骤，得到棘白菌素B粗提物，再借助Fracl ite800树脂对粗提物进行层析分离，得到高纯度的棘白菌素B产品。本发明的优点在于采用大孔吸附树脂提取分离棘白菌素B，工艺简单易行，适宜于工业化生产；并首次将Fraclite800用于棘白菌素B的层析分离，可以制备高纯度的产品。
文档编号C07K1/16GK102952180SQ201110244359
公开日2013年3月6日 申请日期2011年8月24日 优先权日2011年8月24日
发明者林毅, 张雪霞, 李晓露, 李宁, 任风芝, 王海燕, 张金娟, 张丽, 林旸, 陈书红, 张艳立, 成晓迅, 高月麒, 王宁, 蒋沁, 段宝玲 申请人:华北制药集团新药研究开发有限责任公司