破骨细胞分化抑制用肽及其用图
【技术领域】
[0001] 本专利申请针对2013年07月23日向韩国专利厅提出的韩国特许申请第 10-2013-0086939号主张优先权，上述专利申请的公开事项插入于本说明书作为参照。
[0002] 本发明涉及破骨细胞分化抑制用肽及其用途。
【背景技术】
[0003] 骨平衡性和骨骼的结构形状借助吸收骨的破骨细胞和形成骨的造骨细胞之间 的组织化的活性来维持。作为多核细胞的破骨细胞从造血干细胞分化[T. Miyamoto, 0.0 hneda，F.Arai，et al. ,Blood 98(2001)2544-2554.]，破骨细胞的分化通过从造骨细胞 和活性化的T淋巴细胞分泌的核因子kb受体活化因子（RANK)配体来调节[Y. Y. Kong，U. Feige，l.Sarosi，et al·，Nature 402(1999)304-309]。
[0004] 核因子 kb 受体活化因子配体（RANKL，receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand)与作为存在于破骨细胞前体的受体的核因子kb受体活化 因子相结合，当巨 细胞集落刺激因子（M-CSF，macr ophage-colony stimulating factor)存在时，诱导破骨细胞分化。核因子kb受体活化因子配体使调节破骨细胞 的形成和骨的吸收的信号传输路径活性化[J. Li, I. Sarosi，X. Q. Yan，et al.，Proc. Natl. Acad. Sci.USA 97(2000) 1566-1571.]。核因子kb受体活化因子不具有酪氨酸 激酶活性（tyrosine kinase activity)，通过已知的作为肿瘤坏死因子受体相关因 子（TRAFs， TNF receptor-associated factors)的接头蛋白质(adaptor protein) 诱导信号传输[L.Galibert，M.E. Tometsko，D.M. Anderson, et al.，J. Biol·, Ch em. 273(1998)34120-34127]。作为细胞内分子的一部分的肿瘤坏死因子受体相关蛋白 6(TRAF6)起到破骨细胞生成的重要作用，并使多种下位信号活性化[M.A.Lomaga，W. C.30Yeh，l. Sarosi, et al·，Genes Dev. 13 (1999) 1015-1024]。肿瘤坏死因子受体相关 蛋白6与核因子kb受体活化因子的细胞质的结构域相结合后，使核因子κ B (NF- κ B) 和激活蛋白-1(AP_1，activator protein-1)活性化[S.L. Teitelbaum, J. Clin. Invest. 114(2004)463-465]。
[0005] 肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor)-a作为肿瘤坏死因子配体系列蛋白 质，从包含单核细胞/巨噬细胞或破骨细胞的多种细胞分泌，通过被称为肿瘤坏死因子Rl、 肿瘤坏死因子R2(已知为肿瘤坏死因子R p55和肿瘤坏死因子R p75)的2个细胞膜受 体来诱导多种生物学反应，肿瘤坏死因子Rl和肿瘤坏死因子R2均诱导可促进作为核因 子κ B的细胞质内抑制剂的I κ B的蛋白质水解的细胞内信号[Verma, I. M.，Stevenson, J. Κ·，Schwarz, Ε· Μ·，Van Antwerp, D.，and Miyamoto, S. (1995)Genes Dev. 9, 2723-2735J]〇
[0006] 肿瘤坏死因子-a调节炎症反应、免疫调节、细胞增殖及分化、细胞自杀 等的多种范围的反应[Ledgerwood, E. C.，Pober, J. S.，and Bradley, J. R. (1999) Lab. Invest. 79, 1041-1050]。并且，肿瘤坏死因子-α在体外及体内促进骨的吸收 [Bertolini, D. R. , Nedwin, G. E. , Bringman, T. S. , Smith, D. D. , and Mundy, G. R. (1986) Nature 319, 516-518]，且可在造骨细胞中诱导核因子kb受体活化因子配体的分 泌[Hofbauer, L. C. , Lacey, D. L. , Dunstan, C. R. , Spelsberg, T. C. , Riggs, B. L. , and Khosla，S.(1999)Bone 25,255-259]。并且，肿瘤坏死因子-α不仅对在风湿性关节 炎中发生的骨和关节破坏的原因起到重要作用，已知在牙周炎、整形外科的移植后分 离、慢性炎症性骨吸收的各种形态中，还起到其原因的功能。肿瘤坏死因子-α由借 助脂多糖（lipopoly saccharide)来刺激的破骨细胞介导[Abu-Amer, Υ.，Ross, F. Ρ·，Edwards, J.，and Teitelbaum, S. L. (1997) I. Clin. Invest. 100, 1557-1565]。肿瘤坏 死因子-α在闭经后出现的骨质疏松症中，对雌激素缺乏带来的骨质流失起到重要的 作用[Cenci, S. , ffeitzmann, M. N. , Roggia, C. , Namba, N. , Novack, D. , ffoodring, J. , and Pacifici, R. (2000) J. Clin. Invest. 106, 1229-1237] 〇
[0007] 作为主要通过活性化的T淋巴细胞分泌的细胞因子的白细胞介 素（IL，interleukin)-3可用作免疫与造血干细胞系统之间的纽带[J. W. S chrader,Interleukin-3, in:A. ff. Thomson, Μ. Τ. Lotze(Eds. ), Academic Press,London ，UK，2003, pp. 201-225]。白细胞介素-3不仅直接作用于小鼠破骨细胞前体，还向巨噬 细胞一侧促进细胞分化，来抑制通过核因子kb受体活化因子配体诱导的破骨细胞分化 [S. M. Khapli, L. S. Mangashetti, S. D. Yogesha, M. R. ffani, J. Immunol. 171 (2003) 142-151] 〇 在破骨细胞前体中，白细胞介素-3抑制I κ B的磷酸化和分解，从而妨碍向由核因子kb受 体活化因子配体诱导的核因子κΒ的核移动。并且，抑制由核因子kb受体活化因子配体诱 导的c-Jun氨基端激酶（JNK，c-Jun N-terminal kinase)的活性，向下调节c-Fos、小鼠激 活T-细胞核因子I(NFATcl)转录因子的表达。确认到白细胞介素-3在转录后步骤中，抑 制核因子kb受体活化因子的表达，不能通过利用小鼠的体内实验返回到上述过程。
[0008] 本说明书全文中，参照了多篇论文及专利文献，并表示了其引用。所引用的论文及 专利文献的公开内容全部插入于本说明书作为参照，从而更加明确说明本发明所属的技术 领域的水平及本发明的内容。
【发明内容】
[0009] 要解决的问题
[0010] 本发明人努力开发维持与白细胞介素_3(Interleukin 3)相同的功能或类似的 功能，并与天然的白细胞介素-3蛋白质相比，活性及稳定性优秀的物质。其结果，本发明人 在很多肽候选物质中选择具有优秀的生理活性（例如，破骨细胞分化抑制能力、骨分化促 进能力等）的来源于白细胞介素-3的肽，从而完成了本发明。
[0011] 因此，本发明的目的在于，提供由序列表中序列1或序列表中序列2的氨基酸序列 形成的肽。
[0012] 本发明的再一目的在于，提供骨疾病改善或治疗用药剂学组合物。
[0013] 本发明的另一目的在于，提供骨分化促进用组合物。
[0014] 本发明的还一目的在于，提供骨疾病改善或治疗方法。
[0015] 本发明的又一目的在于，提供骨分化促进方法。
[0016] 以下发明的详细说明、发明要求保护范围及附图更加明确本发明的其他目的及优 点。
[0017] 解决问题的手段
[0018] 根据本发明的一实施方式，本发明提供由序列表中序列1或序列表中序列2的氨 基酸序列形成的肽。
[0019] 本发明人努力开发维持与白细胞介素_3相同的功能或类似的功能，并与天然的 白细胞介素_3蛋白质相比，活性及稳定性优秀的物质。其结果，本发明人在很多肽候选物 质中选择了具有优秀的生理活性（例如，破骨细胞分化抑制能力、骨分化促进能力等）的来 源于白细胞介素_3的肽。
[0020] 本发明人以与人体白细胞介素_3的功能有关的部位为基础合成了表示上述特性 的来源于多个白细胞介素-3的肽。更详细地，任意部分合成白细胞介素_3蛋白质的多个 部分来第一次探索受体蛋白质的可结合部位后，最优化所预测部位的氨基酸序列来选择性 地制备本发明的肽，并从这些多个候