本发明涉及医药及保健食品领域，尤其涉及一种具有减肥和增强免疫力作用的组合物及其制备方法。
背景技术：
免疫是机体的一种特殊的保护性生理功能。通过免疫，机体能够识别“自我”、排除“异己”，以维持内环境的平衡和稳定。在人的一生中，免疫力始终与传染性疾病、非传染性疾病、肿瘤以及机体的衰老过程相抗衡。免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等)；处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。免疫力低下者，由于自身免疫系统不能有效防御病源微生物入侵和清除自身突变细胞，容易感染和罹患疾病。
免疫力低下同时还能导致肥胖。肥胖不单是形体变化的体征，它还能增加相关疾病如高血压、动脉硬化、脑血管意外、脂代谢异常、2型糖尿病、痛风、睡眠呼吸暂停、胆囊炎、胆石症、关节炎以及某些癌症的发病率和死亡率。因此，防治肥胖、增强机体免疫力，维护身体健康至关重要。
技术实现要素：
针对上述情况，本发明将提供一种具有减肥和增强免疫力作用的组合物，该组合物组方科学、配方得当，能够降低体重，减少脂肪量，提高机体免疫力，服用方便，安全有效。
本发明的另一个目的是提供一种具有减肥和增强免疫力作用的组合物的制备方法。
本发明还有一个目的是提供该组合物在制备减肥和增强免疫力的食品、保健品或药品中的用途。
本发明中所述一种具有减肥和增强免疫力作用的组合物，该组合物的原料及重量配比为：纳豆冻干粉10～30份、低聚木糖10～30份、川贝母5～15份。
优选地，所述一种具有减肥和增强免疫力作用的组合物，该组合物的原料及重量配比为：所述组合物的原料及重量配比为：纳豆冻干粉15～25份、低聚木糖10～20份、川贝母5～12份。
进一步优选地，所述一种具有减肥和增强免疫力作用的组合物，该组合物的原料及重量配比为：所述组合物的原料及重量配比为：纳豆冻干粉17～22份、低聚木糖13～19份、川贝母5～10份。
更加优选地，所述一种具有减肥和增强免疫力作用的组合物，该组合物的原料及重量配比为：所述组合物的原料及重量配比为：纳豆冻干粉18份、低聚木糖18份、川贝母9份。
本发明组合物是采用上述原料药，加入药学上可接受的辅料，按照常规方法，制备而成的制剂。
优选地，所述制剂为川贝母粉碎成细粉，纳豆冻干粉、低聚木糖直接入药制成。
进一步优选地，所述制剂为口服制剂。
更加优选地，所述制剂为颗粒剂、片剂、合剂、胶囊剂。
本发明还提供了该组合物的制备方法，包括如下步骤：按重量份称取纳豆冻干粉、低聚木糖、川贝母；将川贝母粉碎过筛，得川贝母细粉；将纳豆冻干粉、低聚木糖分别过筛，得纳豆冻干粉细粉和低聚木糖细粉；称取7～12份微晶纤维素、0.1～0.5份硬脂酸镁、0.1～0.8份二氧化硅分别过80目筛，备用；将川贝母细粉、纳豆冻干粉细粉、低聚木糖细粉与过筛后的微晶纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅混合均匀，压片，制得片剂。
本发明还提供了该组合物在制备减肥和增强免疫力的食品、保健品或药品中的用途。
本发明所提到的川贝母为百合科植物川贝母、暗紫贝母、甘肃贝母、梭砂贝母、太白贝母或瓦布贝母的干燥鳞茎加工而成，即《中国药典》(2015年版，一部)收载的川贝母。
本发明中所提到的药学上可接受的辅料，包括《药用赋型剂手册》(美国药学协会，1986年10月)、化学工业出版社出版的《药用辅料手册》(Handbook of Pharmaceutical Excipients，原著第四版)或《药剂辅料大全》(四川出版集团、四川科学技术出版社出版，2006年1月)所列的辅料，但并不局限于这些辅料。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明选用纳豆冻干粉、低聚木糖和川贝母作为原料药，通过科学组方、按一定的重量配比组成。三者配伍使用，从不同角度增加人体的免疫力、降低体重，减少脂肪量。经动物试验证明，增强免疫、降脂减重作用明确。
(2)本发明中的纳豆冻干粉、低聚木糖和川贝母都有长期的食用历史，安全性良好。
(3)本发明选用低聚木糖作为原料药，人体胃肠道内没有水解低聚木糖的酶，服用后直接进入大肠内优先为双歧杆菌所利用，避免了直接服用益生菌，在胃肠内被灭活而不能发挥作用的缺点。采用纳豆冻干粉作为原料，纳豆冻干粉是固体发酵的纳豆，经过冷冻干燥、粉碎，成为纳豆冻干粉，最大限度地保留了纳豆中的生理活性物质，保证了本发明减肥和增强免疫力的作用。
(4)本发明根据原料药的特性，采用科学、合理的制备方法，将川贝母打粉后入药，最大限度地保留了有效成分，制备出安全有效的制剂，使得服用效果更加稳定、可控。
(5)本发明采用了口服制剂，方便生产、储存、运输、携带和服用。
附图说明
图1为片剂生产工艺流程图。
具体实施方式
实施例1
组成：纳豆冻干粉200g、低聚木糖200g、川贝母100g、微晶纤维素100g、硬脂酸镁5g、二氧化硅5g。
制备方法：称取配方量的原辅料，将川贝母粉碎过80目筛，得川贝母细粉；将纳豆冻干粉、低聚木糖分别过80目筛，得纳豆冻干粉细粉和低聚木糖细粉；将微晶纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅分别过80目筛，备用；将川贝母细粉、纳豆冻干粉细粉、低聚木糖细粉与过筛后的微晶纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅混合均匀，压片，制得片剂。
实施例2
组成：纳豆冻干粉110g、低聚木糖120g、川贝母150g、微晶纤维素100g、硬脂酸镁5g、二氧化硅8g。
制备方法：称取配方量的原辅料，将川贝母粉碎过80目筛，得川贝母细粉；将纳豆冻干粉、低聚木糖分别过80目筛，得纳豆冻干粉细粉和低聚木糖细粉；将微晶纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅分别过80目筛，备用；将川贝母细粉、纳豆冻干粉细粉、低聚木糖细粉与过筛后的微晶纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅混合均匀，压片，制得片剂。
实施例3
组成：纳豆冻干粉150g、低聚木糖240g、川贝母120g、微晶纤维素70g、硬脂酸镁4g、二氧化硅6g。
制备方法：称取配方量的原辅料，将川贝母粉碎过80目筛，得川贝母细粉；将纳豆冻干粉、低聚木糖分别过80目筛，得纳豆冻干粉细粉和低聚木糖细粉；将微晶纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅分别过80目筛，备用；将川贝母细粉、纳豆冻干粉细粉、低聚木糖细粉与过筛后的微晶纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅混合均匀，压片，制得片剂。
实施例4
组成：纳豆冻干粉300g、低聚木糖200g、川贝母60g、微晶纤维素110g、硬脂酸镁6g、二氧化硅9g。
制备方法：称取配方量的原辅料，将川贝母粉碎过80目筛，得川贝母细粉；将纳豆冻干粉、低聚木糖分别过80目筛，得纳豆冻干粉细粉和低聚木糖细粉；将微晶纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅分别过80目筛，备用；将川贝母细粉、纳豆冻干粉细粉、低聚木糖细粉与过筛后的微晶纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅混合均匀，压片，制得片剂。
实施例5
组成：纳豆冻干粉220g、低聚木糖130g、川贝母80g、微晶纤维素90g、硬脂酸镁5g、二氧化硅7g。
制备方法：称取配方量的原辅料，将川贝母粉碎过80目筛，得川贝母细粉；将纳豆冻干粉、低聚木糖分别过80目筛，得纳豆冻干粉细粉和低聚木糖细粉；将微晶纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅分别过80目筛，备用；将川贝母细粉、纳豆冻干粉细粉、低聚木糖细粉与过筛后的微晶纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅混合均匀，压片，制得片剂。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
对本发明的进行的主要药效学实验及结果如下。
一、增强免疫力实验
(一)受试药
本发明制剂1：按实施例1制备得片剂，加水稀释制成混悬液；
本发明制剂2：按实施例2制备得片剂，加水稀释制成混悬液；
本发明制剂3：按实施例3制备得片剂，加水稀释制成混悬液；
本发明制剂4：按实施例4制备得片剂，加水稀释制成混悬液；
本发明制剂5：按实施例5制备得片剂，加水稀释制成混悬液；
阴性对照：蒸馏水。
(二)试验动物：昆明种小鼠，全雌性，体重18-22g，由成都生物制品研究所实验动物中心提供。
(三)试验数据采用SPSS 10.0 for Windows软件包处理。对照组与剂量组的数据经方差齐性检验，方差齐，进行方差分析，如P值小于0.05，则用Dunnett法进行两两比较；若方差不齐，则进行数据转换，仍不齐，改用秩和检验，如P值小于0.05，则用Dunnett's T3法进行两两比较。
(四)试验方法及结果
1对小鼠体液免疫的影响
1.1对小鼠抗体生成细胞的影响
1.1.1试验方法：抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)
每只小鼠腹腔注射2％压积SRBC0.2ml，将免疫5天后的小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏放在盛有Hank’s的平皿内，磨碎脾脏，制成细胞悬液，经200目筛网过滤，离心(1000r/min)10min，用Hank’s液洗2遍，最后将细胞悬浮在5mlRPMI1640培养液中，台酚兰染色计数(应在95％以上)，并将细胞浓度调整为5×106个/ml，制成脾细胞悬液。将琼脂糖配制成1％水溶液，水浴煮30分钟，与等量双倍浓度Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加10％(用SA缓冲液配制)压积SRBC 50μl，脾细胞悬液各20μl做两个平行样，迅速混匀后，倾倒于琼脂糖薄层玻片上，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中孵育1.5h，然后将补体加入到玻片架凹槽内，继续温育1.5h，计数溶血空斑数。补体制备是采集豚鼠血，分离出血清(至少5只豚鼠的混合血清)，将1ml压积SRBC加入到5ml豚鼠血清中，4℃冰箱放置30min，经常振荡，离心取上清液，分装，-70℃保存。用时以SA缓冲液按1:1.5稀释。
1.1.2试验结果，见表1。
表1对小鼠抗体生成细胞的影响
由表1可见，连续灌胃30天后，本发明制剂1～5组动物的溶血空斑数与阴性对照组相比，经统计学处理，均有显著性差异(P<0.05)。
1.2对小鼠血清溶血素的影响
1.2.1试验方法：血清溶血素测定(血凝法)
每只小鼠腹腔注射2％SRBC0.2ml免疫，继续灌胃5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置1小时，剥离，2000r/min离心10分钟，收集血清，用生理盐水将血清作倍比稀释，每份稀释12孔，将不同稀释度的血清置于血凝板中，每孔100μl，再加入0.5％SRBC悬液100μl，混匀，置湿盒37℃3小时后观察结果，记录每孔的凝集程度。计算抗体积数。
1.2.2试验结果，见表2。
表2对小鼠血清溶血素的影响
由表2可知，连续灌胃30天后，本发明制剂1～5组动物的抗体积数与阴性对照组相比，经统计学处理，均有显著性差异(P<0.05)。
1.3结论
表1、表2的结果表明，本发明对小鼠体液免疫试验结果呈阳性。
2对小鼠NK细胞活性的影响
2.1试验方法：NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶LDH测定法)
颈椎脱臼处死动物，取出脾脏，撕碎，过200目筛网后，用Hank’s液洗3次，每次1000r/min离心10min，取细胞浆，灭菌水裂解红细胞，台酚兰染色计数(应在95％以上)，用完全1640培养液配成2x107个/ml细胞悬液。将各只小鼠的细胞悬液取300μl分置于96孔培养板中，每孔100μl，每孔加靶细胞(YAC-1细胞，4x105个/m)100μl，同时做靶细胞自然释放孔(靶细胞100μl，培养液100μl)及最大释放孔(靶细胞100μ+2.5％Triton 100μl)各3孔，37℃5％CO2培养4小时，取出1500r/min离心5min。将各孔上清液100μl置于另一培养板中，每孔加入100μl基质，10分钟后加1mol/LHCL30μl终止反应，在490nm处测定OD值，计算NK细胞活性率。
2.2试验结果，见表3。
表3对小鼠NK细胞活性的影响
由表3可见，连续灌胃30天后，本发明制剂1～5组动物的NK细胞活性与阴性对照组相比，经统计学处理，均有显著性差异(P<0.05)。
2.3结论
表3的结果表明，本发明对小鼠NK细胞活性试验结果阳性。
3对小鼠单核－巨噬细胞吞噬功能的影响
3.1对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响
3.1.1试验方法：小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(半体内法)
连续灌胃30天后，每只小鼠腹腔注射20％鸡红细胞悬液1ml，30分种后，颈椎脱臼处死，将其固定在鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2ml，转动鼠板1分钟，吸出腹腔洗液1ml，平均滴于2张载玻片上，置湿盒37℃30分钟，取出在生理盐水漂洗、晾干、固定、4％GiemsaPBS染色3分钟，蒸馏水漂洗凉干，镜检。计算吞噬百分率及吞噬指数。
3.1.2试验结果：见表4。
表4对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响
由表4可见，连续灌胃30天后，本发明制剂1～5组动物的吞噬率和吞噬指数都明显升高，与阴性对照组相比较，都有显著性差异(P<0.05)。
3.2对小鼠单核－巨噬细胞碳廓清功能的影响
3.2.1试验方法：小鼠碳廓清试验
连续灌胃30天后，于小鼠尾静脉注射用4倍生理盐水稀释的印度墨汁，按0.1ml/10g墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2、10min分别从内眦静脉处取血20μl，加到2ml Na2CO3溶液作空白对照，用723分光光度计在600nm处测定光密度值。取血后将小鼠处死，取肝、脾称重，计算吞噬指数。
表5对小鼠单核－巨噬细胞碳廓清功能的影响
可见，连续灌胃30天后，本发明制剂1～5组动物的碳廓清能力与阴性对照组相比较均有显著性差异(P<0.05)。
3.3结论
由表4、表5的结果表明，本发明对小鼠的单核－巨噬细胞吞噬功能试验结果呈阳性。
综上，本发明对小鼠体液免疫试验结果呈阳性、对小鼠NK细胞活性试验结果呈阳性，对小鼠的单核－巨噬细胞吞噬功能试验结果呈阳性。本发明具有增强免疫力的作用。
二、减肥作用实验
(一)受试药：
本发明制剂1：按实施例1制备得片剂，加水制成混悬液。
本发明制剂2：按实施例2制备得片剂，加水制成混悬液。
本发明制剂3：按实施例3制备得片剂，加水制成混悬液。
本发明制剂4：按实施例4制备得片剂，加水制成混悬液。
本发明制剂5：按实施例5制备得片剂，加水制成混悬液。
阴性对照：生理盐水。
(二)试验动物：雄性Wistar大鼠，体重约220±10g，，由四川省医学科学院实验动物研究所提供。
(三)试验数据采用SPSS 10.0 for Windows软件包处理。对照组与剂量组的数据经方差齐性检验，方差齐，进行方差分析，如P值小于0.05，则用Dunnett法进行两两比较；若方差不齐，则进行数据转换，仍不齐，改用秩和检验，如P值小于0.05，则用Dunnett's T3法进行两两比较。
(四)试验方法及结果
1.建立食源性肥胖大鼠模型：
用营养饲料喂养大鼠45天，与标准全价鼠饲料喂养的同龄大鼠相比，体重增加，有显著性差异。营养饲料为标准全价鼠饲料60％、猪油10％、蔗糖6％、奶粉6％、花生5％、鸡蛋10％、麻油1％、食盐2％。
2.连续喂养30天，定期称重，记录摄食量。实验结束，称重，处死大鼠，取肩胛下项后脂肪(棕色脂肪)称重；取肾周腹壁脂肪和附睾脂肪(白色脂肪)，以两者之和代表体内脂肪量。
3.试验结果表明，连续灌胃30天后，本发明制剂1～5组动物摄食量与对阴性对照组无显著差异。对大鼠体重及脂肪量的影响见表6、表7。
表6对大鼠体重的影响
由表6可见，连续灌胃30天后，本发明制剂1～5组动物体重明显降低，与阴性对照组相比较，有显著性差异(P<0.05)。
表7对大鼠脂肪量的影响
由表7可见，连续灌胃30天后，本发明制剂1～5组动物脂肪量与阴性对照组相比较，有显著性差异(P<0.05)。
4.结论
由表7、表8的结果表明，本发明对大鼠的减肥试验结果呈阳性。
综上所述，本发明组合物的原料及重量配比为：纳豆冻干粉10～30份、低聚木糖10～30份、川贝母5～15份，优选原料及重量配比为纳豆冻干粉15～25份、低聚木糖10～20份、川贝母5～12份，进一步优选原料及重量配比为纳豆冻干粉17～22份、低聚木糖13～19份、川贝母5～10份，更加优选原料及重量配比为纳豆冻干粉18份、低聚木糖18份、川贝母9份。应用本发明提供的组合物均具有减肥和增强免疫力的作用。