本发明涉及透明质酸制品
技术领域：
，特别涉及一种透明质酸口腔护理膜，还涉及透明质酸口腔护理膜的制备方法和应用。
背景技术：
：口腔膜剂为药物与适宜的成膜材料经加工制成的膜状制剂，供口服或粘膜使用。通常由水溶性成膜材料、增塑剂、崩解剂、填充剂、矫味剂、药物等组成。成膜材料是速溶膜处方中占比重最大的辅料，可以占到膜剂干重的45％以上，其中羟丙甲纤维素，支链淀粉和明胶是最常用的成膜材料。其它常用的成膜材料还有聚卡波非，纤维素衍生物，普鲁兰多糖，黄原胶，海藻酸钠，壳聚糖，聚环氧乙烯，聚乙烯醇等。不同的成膜材料会显著影响膜剂的力学性质和使用感受。透明质酸是构成细胞外基质和细胞间质的主要成分之一，是人体的天然成分，具有卓越的保湿性、润滑性、黏弹性，并具有多种生物活性，已广泛应用于化妆品、保健品及医药领域。国内外多项研究表明透明质酸在口腔中是构成牙周组织细胞外基质的重要成分，人的唾液中也含有透明质酸，能够提高唾液的润滑性能及口腔疾病治愈性能，并协助保护口腔粘膜。Pirnazar等人的研究表明透明质酸对口腔内的伴放线放线杆菌(被公认为与牙周炎密切相关，是牙周炎细菌病因学中研究最多的细菌之一)、口普氏菌、金黄色葡萄球菌等均有抑制作用，且不同分子量透明质酸的抑菌效果不同。因此，唾液中透明质酸含量的变异与口腔内细菌数量以及是否有牙龈病或牙周病有关。透明质酸的口腔护理作用表现为，拔牙及种植手术后创面的抗炎、抗感染、抗水肿、抑制细菌生长作用；促进牙周组织创伤愈合、修复的作用；加快口腔粘膜疾病的治愈过程，缓解疼痛；解决由于口干症及粘膜灼热带来的不适等。此外，透明质酸还广泛用于牙膏产品中。锌离子具有明显的消炎和抗菌作用，同时能加速上皮再生速度，降低炎性反应。透明质酸锌由透明质酸钠通过锌离子置换反应得到。透明质酸锌在生物活性方面，除了具有透明质酸钠的作用外，还具有锌离子的作用，因此具有更强的抑菌和消炎效果，可用于辅助治疗细菌和真菌感染。涉及透明质酸的口腔护理产品，主要为液体剂型。CN103405470A公开了一种溶液剂型的透明质酸组合物，用于治疗和缓解口腔干燥。CN105056219A公开一种含有0.5mg/ml透明质酸的人工唾液。CN103462847A公开了一种口腔护理用漱口液。专利CN103211801A公开了一种口腔中快速溶解的膜剂，由水溶性成膜材料30％-90％，增塑剂2％-20％，崩解剂0％-5％，及药物活性成分0.1％-70％组成。所用成膜材料为羟丙甲基纤维素和透明质酸的混合物，重量配比为20～80:1，透明质酸用量极低，不足5％。但上述现有技术中记载的透明质酸类产品使用的均为普通的透明质酸钠，而且添加量比较低，需要加入其他活性成分才具有抑菌、保健等功效，对口腔细胞损伤修复，也需要额外添加细胞修复剂，限制其推广使用。技术实现要素：为了解决以上现有技术中透明质酸类产品在口腔保健中存在的功能单一、不利于推广的问题，本申请提供了一种具有抑菌、修复细胞损伤等功效的透明质酸口腔护理膜。该膜的特点是以透明质酸及其衍生物为全部成膜材料，同时也是主要的活性成分，发挥口腔抑菌、抗炎、修复、保湿等作用，赋予薄膜口腔和咽喉部日常保健、治疗预防疾病的功效。根据需要，还含有润湿剂、其它活性成分。根据使用方法和用途分为口腔或牙齿贴膜及口腔溶膜。本发明还提供了所述透明质酸口腔护理膜的制备方法。本发明是通过以下步骤得到的：一种透明质酸口腔护理膜，干膜中含有如下重量百分含量的成分：透明质酸钠10％-50％，透明质酸锌10％-40％，水解透明质酸钠10％-40％。所述的透明质酸口腔护理膜，干膜中含有如下重量百分含量的成分：透明质酸钠10％-30％，透明质酸锌10％-20％，水解透明质酸钠20％-30％。所述的透明质酸口腔护理膜，干膜中含有如下重量百分含量的成分：透明质酸钠10％-20％或20％-30％，透明质酸锌10％-15％或15％-20％，水解透明质酸钠20％-25％或25％-30％。所述的透明质酸口腔护理膜，还含有润湿剂：1％-30％，除透明质酸外的其他活性成分：0-20％。本发明中的水解透明质酸或其盐，为华熙福瑞达生物医药公司自主研发并生产的产品，以芽孢杆菌A50CGMCCNO.5744发酵培养得到的芽孢杆菌透明质酸酶对透明质酸或其盐进行降解得到的酶切寡聚透明质酸或其盐。降解条件温和、操作简单、无环境污染，并且得到的产品结构完整，生物活性更高，分子量为2～20kDa，优选8kDa。所述的透明质酸口腔护理膜，透明质酸钠和透明质酸锌的分子量为100～2000kDa，优选800kDa。该口腔护理膜可根据需要加入不同的口腔护理活性组分，以赋予薄膜不同的口腔护理功效，活性组分包括口气清新剂、抗牙斑剂、抗菌剂、牙周活性剂、脱敏剂、止痛剂、唾液刺激剂、牙齿增白剂、防龋剂、牙结石控制剂、营养剂等，及其组合。所述的透明质酸口腔护理膜，活性成分为葡萄籽提取物、茶多酚、维生素B2、柠檬酸、柠檬酸钠、木糖醇和薄荷醇中的一种以上。所述的透明质酸口腔护理膜，所述润湿剂为甘油、丙二醇、丁二醇中的一种以上。所述的透明质酸口腔护理膜的制备方法，将透明质酸钠、透明质酸锌及水解透明质酸钠加入水中，搅拌条件下加热至60～65℃，继续搅拌使其充分溶解，然后，加入其余成分，搅拌溶解混匀后，涂布于不锈钢板上，厚度0.01-2mm，于45～50℃低温干燥成膜，控制干膜中残留水分为5％-15％。本发明口腔薄膜的用途为口腔日常保健、口腔疾病预防及治疗，包括口气清新、口臭预防或减轻、口干预防或减轻、口腔粘膜损伤愈合、牙斑预防或减轻、牙周炎及牙龈炎预防或减轻、牙齿增白、牙石控制、牙齿过敏预防或减轻等。此外还有咽喉部护理，如咽炎等。根据使用方法和用途分为口腔或牙齿贴膜及口腔溶膜。透明质酸或盐具有抑制口腔细菌、抗炎、粘膜损伤修复、保湿等作用。具体表现为，拔牙及种植手术后创面的抗炎、抗感染、抗水肿、抑制细菌生长作用；促进牙周组织创伤愈合、修复的作用；加快口腔粘膜疾病的治愈过程，缓解疼痛；解决由于口干症及粘膜灼热带来的不适等。在缓解口腔干燥症方面，透明质酸作为一种重要的保湿剂，已被认为是代替口腔干燥患者唾液的候选物质。分子量为2～50kDa的水解小分子透明质酸或其盐具有更显著的修复、抗炎、清除自由基等生物活性。本发明的有益效果：(1)以透明质酸及其衍生物为口腔薄膜的成膜材料，显著改善膜的机械性能，增强柔韧性，不易破碎；(2)以透明质酸及其衍生物为口腔薄膜的主要成分，具有多种生物活性，且透明质酸对于加入的其它活性成分具有缓释、促进吸收、协同增效的作用；(3)透明质酸的锌盐除具有透明质酸钠盐的生理生物活性外，具有更强的抑菌和消炎作用，更有助于口腔粘膜疾病、牙龈炎、牙菌斑、牙齿过敏等症状的减轻；(4)透明质酸也是一种重要的保健品原料(为CFDA批准的新食品原料)，具有补充皮肤水分、抗氧化等美容保健功效，显著改善皮肤干燥，使皮肤光滑润泽；还具有关节保健作用，改善关节功能，减轻关节炎症，提高关节润滑能力，减轻关节疼痛。本发明产品除发挥口腔护理保健作用外，经口吸收后还可发挥全身保健作用；(5)相比纤维素类、聚乙二醇或聚环氧乙烷、淀粉等成膜材料，透明质酸是人体内的天然生物分子，也存在于唾液和牙周组织细胞外基质中，安全性更高；(6)溶液、喷雾、凝胶等剂型的口腔护理产品，在贮存过程中需要加入防腐剂以防止微生物污染。而口腔膜剂由于水分含量极低，无需防腐剂，提高了使用安全性；(7)本发明产品轻盈、体积小，携带及运输方便。附图说明图1各实施例护理膜对损伤细胞的修复作用图。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明：1.实施例配方组成注：表中数值为各组分在干膜中所占的重量百分比。2.实施例的制备工艺：各实施例分别配制100g溶液。先将透明质酸钠和(或)透明质酸锌，及水解透明质酸钠加入相应量的水中，搅拌条件下加热至60～65℃，继续搅拌使其充分溶解。然后，加入其余成分，搅拌溶解混匀后，涂布于不锈钢板上，厚度0.3mm，于45～50℃低温干燥成膜(控制干膜中残留水分均为9％)。3.膜的机械性能测试方法：采用万能材料试验机，对各实施例样品进行拉伸测试，膜宽度裁剪至2.0cm，夹具间距为3.0cm，拉伸速度5mm/min，对膜材料进行纵向拉伸，直至膜断裂，从仪器上读取膜的拉伸强度，并计算延长百分比。耐折度测试，由同一测试人员，将各样品膜片反复对折，直至膜表面出现裂缝，该对折次数即为其耐折度。结果：测试结果见表1。测试结果表明，实施例9的各项参数均显著优于其他各组，拉伸强度表现最明显，表明透明质酸钠、透明质酸锌和水解透明质酸钠三者复合时膜的机械性能最佳。表1膜的机械性能测试结果拉伸强度(MPa)延长百分比(％)耐折度(次)实施例163.153.921实施例279.774.331实施例386.434.736实施例483.154.532实施例587.484.732实施例677.654.330实施例780.824.432实施例882.114.431实施例991.265.639实施例1086.714.738实施例1189.354.944实施例1290.635.142实施例1374.234.221实施例1466.164.020实施例1545.63.0244.膜的抑菌活性菌株：牙龈卟啉单胞菌(ATCC33277)、伴放线放线杆菌(ATCC29523)、中间普雷沃菌(ATCC25611)。抑菌片制备：取3cm×3cm同样大小的各实施例口腔薄膜溶于10mL无菌蒸馏水中。取无菌并干燥的5mm直径滤纸片，每片滴加膜溶液20μL，干燥后备用。试验菌接种、培养：采用常规方法接种，菌密度为1×106cfu/mL。将抑菌片贴放到染菌平板，培养48h后，用游标卡尺测量抑菌圈大小。结果：抑菌活性结果见表2。结果表明，实施例8、9、10、11、12的抑菌效果较强，其次是实施例2、3、4、6、7。表2膜的抑菌活性测试结果(抑菌圈直径，mm)牙龈卟啉单胞菌伴放线放线杆菌中间普雷沃菌实施例1555实施例2777实施例3877实施例4766实施例5544实施例6888实施例7999实施例811109实施例9121111实施例10121212实施例11111111实施例12111010实施例13222实施例14544实施例153335.膜的细胞损伤修复活性1)测试样品制备：将各实施例样品裁剪成3cm×3cm尺寸，分别用10mL的磷酸缓冲液(pH7.2)溶解，过滤除菌，即为测试样品。2)铺板：取处于对数生长期的牙龈成纤维细胞(HGF-1细胞)，按照5×105/mL的细胞密度接种于96孔细胞培养板，每孔100μL细胞悬液，置二氧化碳培养箱37℃、5％CO2常规培养过夜。3)造模：采用7.2J/cm2UVA加126mJ/cm2UVB照射成纤维细胞细胞，设照射实验组(照射后加入实施例样品溶液)，照射对照组和正常对照组(无照射)。照射实验组照射后，弃去培养液，加入100μL不同的实施例样品溶液，照射对照组和正常对照组加入等量的培养基，放入培养箱中继续培养。继续培养24h后，每孔加入10μLMTT，放入细胞培养箱中继续孵育4h。弃去培养液，每孔加入100μLDMSO，避光震荡10min，于490nm波长处用酶标仪测定光吸收值。4)计算细胞增殖率(RGR)：RGR(%)=AcAc,0×100%]]>式中，Ac为样品吸光度，Ac，0为正常对照组吸光度。结果：实施例9、10、11、12组的细胞增殖率最高，表明对损伤细胞的修复作用最强；其次是实施例2、3、4组和实施例6、7、8组。上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受实施例的限制，其它任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、组合、替代、简化均应为等效替换方式，都包含在本发明的保护范围之内。当前第1页1 2 3